全 文 ：植物生理学通讯 第41卷 第5期，2005年10月622
不同类型葡萄无菌培养体系建立的影响因素
张宗勤* 贺燕
西北农林科技大学林学院, 陕西杨凌712100
收稿 2004-11-10 修定 　 2005-03-20　
*E-mail: zzq315@163.com
本文以欧洲葡萄(Vitis vinifera L.)无核栽培品
种“无核白”(Thompson Seedless)和“杨格尔”
(Youngle) 、欧山杂种(V. vinifera L. cv. Muscat
Hamburg × V. amurensis Rupr)有核品种“北醇”、
野生类型华东葡萄 (V. pseudoreticulata W. T. Wang)
品系“白-35-1”等为材料(均取自本校葡萄种质
资源圃)，进行了以下研究：(1)取材时期。分季
节 6 次采样，常规清洗后用 75% 乙醇(V/V)浸泡
15 s，0.1% HgCl2 消毒 8 min，无菌水冲洗4次，
无菌剪切成单芽茎段，接种到大量元素含量减半
的MS+IBA 0.1 mg·L-1(单位下同)的培养基上。50 mL
三角瓶接种1个芽，每处理最少40瓶。(25±1)℃，
40 mmol·m-2·s-1光照培养12 h·d-1。观察生长状况，
记录污染与褐变情况。污染率(%)=(未褐化绿芽被
污染外植体数/未褐变的绿色外植体数)×100；褐
变率(%)=(褐变的外植体数/ 接种的外植体数)×
100。数据经 ANOVA 软件处理。(2)取材部位。取
枝条顶芽、梢部 1~3 节、4~6 节为外植体，按上
述方法消毒后培养，观察并记录污染、褐变与生
长情况。(3)消毒与外植体处理方法。取葡萄嫩枝
梢1~3节，常规清洗，采用5种方法处理后接种：
①75% 乙醇 10 s，0.1% HgCl2 3 min，无菌水冲
洗2次后，用CA/AA 溶液(抗坏血酸 100 mg 溶解
于 1 000 mL 的 15% 柠檬酸水溶液中，高压灭菌)
浸泡 3 h，再用 0.1% HgCl2 消毒 6 min，无菌水
冲洗4 次，每处理接种 12 瓶，每瓶 4 个外植体；
②75%乙醇1 min，其它同①；③方法①沥干CA/
AA 液后，150 mL 三角瓶接种约 30 个茎段，重
复2次，培养室预培养48 h 后，再按方法①第2
步处理后接种；④将③法中预培养时间改为72 h；
⑤以实验(1)的方法处理为对照。接种后30 d，统
计计算接种效率[(绿色外植体数/ 总外植体数)×
1 0 0 ] 和污染率。( 4 ) 适宜培养基的筛选。以
NN69、1/2MS 为基本培养基，分别附加不同浓度
IBA、6-BA，正交表 L4(23)设计。获得如下主要
表1 消毒及外植体处理方法对无菌培养建立的影响
　 处理方法　　 污染率/% 褐变率/% 接种效率/%
① 14.29b 30 60B
② 7.41a 46 50B
③ 4.25a 6 90A
④ 17.78b 10 74B
⑤ 6.06a 34 62B
　　大小写字母分别示 a=0.01 和 a=0.05 时的差异显著性。
结 果 ：
1. 取材时期对无菌培养建立的影响具有显著
性差异。不同类型品种(系)具有相似的趋势，4~5
月间为各种类型葡萄取材的最佳时期(图 1)。
2. 葡萄枝顶1~3节为适宜的外植体材料，4~6
节材料次之，顶芽不适宜于作为外植体的材料，
平均褐变率分别为 30%、40% 与 66.6%，接种效
率分别为 6 2 %、3 2 % 与 2 2 %。
3. 5种处理方法得到了具有明显差异的绿苗率
和污染率(表1)。二次间歇式消毒方法③表现出最
佳接种效果。
4. 通过正交试验分析，适宜培养基为1/2MS+
6-BA 1.0+IBA 0.1 mg·L-1 (资料未列出)。
图1 不同取样日期的污染率
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