全 文 :植物生理学通讯 第42卷 第6期,2006年12月 1133
收稿 2006-07-20 修定 2006-09-11
资助 辽宁师范大学教改项目(20050101123)。
* 通讯作者(E-mail: changyangjiang@126.com, Tel: 0411-
84258983)。
神香草的组织培养及植株再生
王玉国 盖建东 许宝定 姜长阳*
辽宁师范大学生命科学学院,辽宁大连 116029
Tissue Culture and Plantlet Regeneration of Hyssopus officinalis Linn.
WANG Yu-Guo, GAI Jian-Dong, XU Bao-Ding, JIANG Chang-Yang*
College of Life Science, Liaoning Normal University, Dalian, Liaoning 116029, China
1 植物名称 神香草(Hyssopus officinalis Linn.)。
2 材料类别 嫩茎。
3 培养条件 培养基:(1) MS+6-BA 0.2 mg·L-1 (单
位下同)+NAA 0.2 +La(NO3)3 1.0;(2) MS+6-BA
0.4+NAA 0.4+La(NO3)3 1.2;(3) MS+6-BA 0.6+
NAA 0.6+La(NO3)3 1.4;(4) MS+6-BA 0.8+NAA
0.8+La(NO3)3 1.6;(5) MS+6-BA 0.8+NAA 0.8+
La(NO3)3 1.8;(6) MS+6-BA 0.2+IAA 0.2;(7) MS+6-
BA 0.4+ IAA 0.4;(8) MS+6-BA 0.6+IAA 0.6;(9)
MS+6-BA 0.8+IAA 0.8;(10) MS+6-BA 1+NAA 1;
(11) MS+6-BA 1.2+NAA 1.2;(12) MS+6-BA 0.1+
IAA 0.6;(13) 1/3MS+IAA 0.5;(14) 1/3MS+IAA
1.2。上述 MS 培养基中加 30 g·L-1 蔗糖,1/3MS
培养基中加10 g·L-1蔗糖。所有琼脂固体培养基的
胨力强度均为180 g·cm-2 (姜长阳1992),pH 5.8~
6.0。光强为40~60 µmol·m-2·s-1,光照时间为12
h·d-1;培养温度 18~26℃。愈伤组织分化时,培
养光强为60~80 µmol·m-2·s-1,光照时间为10~11
h·d-1,培养温度为 14~27℃。
4 生长与分化情况
4.1 无菌材料的获得 将长5~7 cm、生长旺盛的神
香草嫩茎放入250 mL的磨口广口瓶中,用自来水
振荡洗涤30 min后,加0.05%的安利洗涤液振荡
洗涤 4 min,再用自来水洗涤 5 次;移至超净台
上,用70%的乙醇灭菌10~20 s后,迅速用无菌水
清洗3次,接着用0.05%的HgCl2溶液振荡灭菌14
min,再用无菌水振荡清洗 5 次,即获得无菌材
料。
4.2 愈伤组织的诱导 用解剖刀将无菌嫩茎切成0.4
cm 左右的茎段,接种到培养基(1)~(5)上,进行
愈伤组织的诱导培养。45 d时,培养基(1)~(3)上
的未形成愈伤组织,(4)、(5)上的开始形成愈伤组
织。90 d 时,培养基(4)、(5)上的嫩茎愈伤组织
诱导率分别为 78 % 和 8 6 %。观察表明,在培养
基(4)、(5)上诱导的愈伤组织,初期为淡黄色的块
状,后来逐渐变为绿色的颗粒状;把这种愈伤组
织在培养基(4)、(5)上进行继代培养。连续培养
12 代,除了愈伤组织的生长速度提高约 1 倍外,
其色泽和其他外部性状保持不变。一般认为,这
种愈伤组织为具有分化能力的愈伤组织。
4.3 分化培养 将在培养基(4)、(5)上培养的愈伤组
织接种到培养基(6)~(11)上进行分化培养。接种培
养前40 d左右,所有培养基上的愈伤组织都没有
发生明显的变化;随后,在培养基(6)、(7)上培
养的愈伤组织表面颗粒逐渐形成绿色的芽点,培
养到80 d时,整个愈伤组织的表面都布满了绿色
的不定芽;把这种具有很多不定芽的愈伤组织
块,分成大小为0.2~0.4 cm、具有十几个不定芽
的小块,接种到培养基(12)上,经过30 d左右的
培养,就会生长为高 1~2 cm 的丛生不定芽。
4.4 试管苗的生根 将高2 cm以上的不定芽从基部
剪下后,转接至培养基(13)、(14)上进行生根培
养。在培养基(14)上,7 d 左右形成可见的根原
基,随后植株缓慢生长;在培养基(13)上,9 d形
成可见的根原基,随后根系和全株迅速生长。观
察表明,从根的数量与生长情况看,培养基(13)
好于(14)。培养到 30 d 时,培养基(13)上,生
根率为 96%,平均每株试管苗生根 6.6 条,根长
3 cm 左右,生根试管苗生长较为旺盛。
4.5 试管苗的移栽 将培养生根试管苗的三角瓶打
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开,在80~100 µmol·m-2·s-1的光照下炼苗3 d,用
镊子取出,在净水中洗去根部培养基后,分别移
栽到装有炉灰渣和河沙2种基质的温室内花盆中。
在保持温度 20~29℃、湿度 90%~100% 和没有直
射光的条件下,10 d 左右恢复正常的日光温室条
件进行管理,3 0 d 时的成活率分别为 8 7 % 和
91%。移栽试管苗的长势与同期播种的实生苗基
本一致,但试管苗长势整齐,根系相当于实生苗
的2 倍。
5 意义与进展 神香草又称海索草,属于唇形科海
索草属多年生常绿亚灌木。嫩茎叶和花可食,属
于芳香蔬菜,也可以作为辛辣调料使用,近年来
人们从叶中提取精油,用于制造香水或药用;另
外,由于神香草花色繁多,容易栽培,近年来
也作为绿化植物栽培。但由于其种子较少等原
因,自然有性繁殖的种苗不能满足生产的需要,
又难以进行人工无性繁殖。而其组织培养及无性
系建立的成功,为神香草的快速繁殖,满足人们
的需要提供了可能。尽管唇形科中有些物种的组
织培养已有成功的报道(黄海帆等2003),但迄今
尚未见神香草组织培养及无性系建立的报道。
参考文献
黄海帆, 李萍, 贺爱利(2003). 彩叶草的组织培养. 植物生理学通
讯, 39 (4): 339
姜长阳(1992). 培养基琼脂用量的商榷. 植物生理学通讯, 28 (2):
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