全 文 ：HPLC法测定维药神香草及混淆品大苞荆芥中齐墩果酸与熊果酸
帕丽达·阿不力孜， 阿提坎木·瓦合甫， 丛媛媛， 米仁沙·牙库甫， 李新霞， 热娜·卡斯木*
(新疆医科大学药学院，新疆 乌鲁木齐 830011 )
收稿日期:2013-12-03
基金项目:新疆维吾尔自治区“十二五”重大科技专项 (201130105)
作者简介:帕丽达·阿不力孜(1962—)，女，博士，教授，研究方向:维药生药学及质量控制。Tel: (0991)4363345
* 通信作者:热娜·卡斯木(1962—) ，女，教授，博士生导师，研究方向:新疆特色药材资源的开发利用。Tel: (0991)4362473
摘要:目的 建立维药神香草及习用品大苞荆芥中主要活性成分齐墩果酸和熊果酸定量测定方法。方法 采用 HPLC
法，色谱柱为 YMC-ODS-A C18 (4. 6 mm × 250 mm，5 μm) ;流动相为甲醇 － 0. 05 mol /L 乙酸铵 (85 ∶ 15) ，体积流量
1. 0 mL /min;检测波长 210 nm;柱温 45 ℃。结果 神香草中熊果酸与齐墩果酸在 80 ～ 480 μg (r = 0. 999 7)、3. 5 ～
51. 8 μg (r = 0. 999 5)范围内，大苞荆芥中在 5 ～ 100 μg (r = 0. 999 7)、2 ～ 64 μg (r = 0. 999 8)范围内两者均有良
好的线性关系，平均回收率与 ＲSD均符合要求。结论 该方法简单、快捷、准确可靠，可为神香草及混淆品药材的
质量控制提供依据。
关键词:神香草;大苞荆芥;齐墩果酸;熊果酸;高效液相色谱法
中图分类号:Ｒ284. 1 文献标志码:A 文章编号:1001-1528(2014)12-2570-04
doi:10. 3969 / j． issn． 1001-1528. 2014. 12. 028
Determination of oleanolic acid and ursolic acid in Uygur medicine Hyssopus cus-
pidatus Boriss． and its adulterant Nepeta bracteata Benth． by HPLC
PALIDA·Abulizi， ATIKANMU·Wahefu， CONG Yuan-yuan， MIＲENSHA·Yakufu， LI Xin-xia，
ＲENA·Ksimu*
(College of Pharmacy，Xinjiang Medical University ，Urumqi 830011，China)
KEY WOＲDS:Hyssopus cuspidatus Boriss．;Nepeta bracteata Benth．;oleanolic acid;ursolic acid;HPLC
维药神香草为唇形科植物硬尖神香草 Hyssopus
cuspidatus Boriss． 的干燥地上部分，分布于我国新
疆北部、前苏联、蒙古 ［1-2］。在我国新疆地区神香
草作为维吾尔族民间习用草药，维吾尔语名为
“祖发”，被维医广泛用于治疗咳嗽、气喘、支气
管炎、外伤和风湿等症［3］。具有清除异常黏液质、
温肺平喘、祛寒止咳、燥湿祛痰、发汗解毒、消炎
退肿的功能［4］，主治湿寒性和黏液质性呼吸器官
疾病，如寒性哮喘、咳嗽感冒、湿性痰多、胸膜
炎、气管炎、肺炎及水肿等病［5-9］。全草含有黄酮
类、三萜类、烷烃类、甾体类和挥发油等成
分［10-13］。维药市场上有时由于神香草货源短缺，
于是出现了其混淆品，主要为大苞荆芥。大苞荆芥
为唇形科植物大苞荆芥 Nepeta bracteata Benth． 的
干燥全草，维吾尔语名也称 “祖发”，为新疆维吾
尔医院的一种进口药材，具有镇咳平喘、清热利湿
的作用，用于治疗气管炎症见咳嗽气喘、感冒发
烧、小便不利［14］。由于 2 种药材维语名称相同，
极易引起混用。但两者是同科不同属植物，而且化
学成分和药性各不相同。为确保临床用药安全、有
效，本实验建立了同时测定神香草及混淆品大苞荆
芥中齐墩果酸与熊果酸的 HPLC方法。研究结果将
为神香草及混淆品大苞荆芥药材的鉴定质量评价提
供科学依据。
1 仪器与试药
日本岛津 LC- 20AB 高效液相色谱仪，SPD-
20A紫外双波长检测器;KQ-700DE 型数控超声波
清洗器 (昆明市超声仪器有限公司);梅特勒
AL104 电子分析天平。
神香草药材采自新疆阿勒泰地区，大苞荆芥购
自新疆维吾尔医医院，由新疆农业大学林学院王兵
教授鉴定，均为唇形科植物硬尖神香草 Hyssopus
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第 36 卷 第 12 期
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Chinese Traditional Patent Medicine
December 2014
Vol． 36 No． 12
cuspidatus Boriss． 和 大 苞 荆 芥 Nepeta bracteata
Benth．。齐墩果酸 (批号 110709-201206) ，熊果酸
(批号 110742-201220)购自中国药品生物制品检定
所。甲醇、乙腈均为色谱纯 (SIGMA-ALDＲICH)。
2 方法与结果
2. 1 色谱条件 YMC-ODS-A C18 色谱柱 (4. 6
mm ×250 mm，5 μm)，柱温 45 ℃;流动相为甲
醇-0. 05 mol /L 乙酸铵 (85 ∶ 15) ，体积流量 1. 0
mL /min;检测波长 210 nm;进样体积 20 μL。
2. 2 对照品混合溶液的制备 分别精密称取齐墩
果酸对照品 13. 31 mg与熊果酸对照品 15. 1 mg，置
同一 10 mL量瓶中，用甲醇定容至刻度，摇匀，即
得齐墩果酸与熊果酸对照品混合贮备液。
2. 3 供试品溶液的制备 分别精密称取神香草药
材粉末 0. 3 g (过 30 目筛)(编号 HcB1) ，大苞荆
芥 0. 5 g (过 30 目筛) (编号 NbB1) ，分别置于具
塞锥形瓶中，各自加入 15 mL甲醇，称定质量，超
声 (700 W，40 kHz)提取 20 min，放冷，再称定
质量，用甲醇补足减失的质量，摇匀，0. 22 μm微
孔滤膜过滤，取续滤液作为供试品溶液。
2. 4 线性关系试验 神香草:精密量取 “2. 2”
项下对照品混合贮备液 0. 8、1. 2、1. 8、2. 3、
2. 9、3. 6 mL，分别置于 10 mL 量瓶中，甲醇定容
至刻度，摇匀，即得到不同质量浓度的对照品混合
溶液。大苞荆芥:精密量取 “2. 2”项下对照品贮
备液 0. 04、0. 08、0. 2、0. 3、0. 8mL 分别置于
10 mL量瓶中，甲醇定容至刻度，摇匀，即得不同
质量浓度的对照品混合溶液。分别精密吸取上述两
种药材不同质量浓度的对照品混合溶液各 20 μL，
按照上述色谱条件，分别进样，测定峰面积，以对
照品齐墩果酸与熊果酸的质量浓度 X 为横坐标，
峰面积 Y 为纵坐标，进行线性回归分析，得神香
草药材齐墩果酸与熊果酸回归方程分别为 Y =
13 500 874. 491 7X + 647 559. 091 4 (r = 0. 999 5)，
Y = 8 856 200X + 658 719. 33 (r = 0. 999 7) ，线性
范围为 3. 5 ～ 51. 8 μg，80 ～ 480 μg。大苞荆芥药材
齐墩 果 酸 与 熊 果 酸 回 归 方 程 分 别 为 Y =
28 667 780. 890 8X + 174 775. 020 4 (r = 0. 999 8)，
Y = 16 514 436. 458 3X + 472 226. 432 3 (r =
0. 999 7) ，线性范围为 2 ～ 64 μg，5 ～ 100 μg。
2. 5 精密度试验 分别精密取 “2. 2”项下制备
的对照品混合溶液 20 μL，连续进样 6 次，分别测
得峰面积值，计算出神香草齐墩果酸与熊果酸
ＲSD分别为 2. 2%和 2. 7%;大苞荆芥 ＲSD 分别为
2. 6%和 2. 4%，表明仪器性能良好。
2. 6 重复性试验 分别精密称取神香草 (HcB1)
与大苞荆芥 (NbB5)同一样品 6 份，按 “2. 3”
项下方法制备供试品溶液，按 “2. 1”项色谱条件
进行测定，结果神香草样品中齐墩果酸与熊果酸含
有量均值为0. 001 6% (ＲSD 为2. 6%)和0. 018 1%
(ＲSD为 1. 3 %);大苞荆芥中齐墩果酸与熊果酸含
有量均值为 0. 000 4% (ＲSD为 3. 5%)和0. 000 2%
(ＲSD为 3. 3%)。
2. 7 稳定性试验 分别取同一神香草与大苞荆芥
供试品溶液，分别于 0、2、6、8、12、24、48 h
进样测定，神香草 ＲSD 分别为 1. 6%和 2. 4%;大
苞荆芥 ＲSD为 3. 6%和 4. 3%，结果表明该供试品
溶液稳定性良好。
2. 8 系统适用性试验 精密量取神香草与大苞荆
芥供试品溶液与对照品混合溶液各 20 μL，按上述
色谱条件，分别进样，记录色谱图，结果见图 1。
齐墩果酸与熊果酸达到基线分离，分离度均大于
1. 5，两者理论塔板数都大于 8 000，拖尾因子小
于 1. 5。
2. 9 加样回收试验 分别精密称取已测知齐墩果
酸与熊果酸剂量的样品神香草 (HcB1)约 0. 3 g，
大苞荆芥 (NbB5)0. 5 g共 3 份，按低、中、高质
量浓度分别加入齐墩果酸与熊果酸对照品贮备液，
按供试品溶液的制备方法及色谱条件项下操作，计
算回收率，结果见表 1 和 2。
表 1 神香草加样回收试验结果
Tab. 1 Ｒesults of recovery tests for Hyssopus cuspidatus
成分
称样量 /
g
原有量 /
mg
加入量 /
mg
测得量 /
mg
回收率 /
%
ＲSD /
%
齐墩果酸 0. 300 1 0. 016 0. 012 1 0. 027 7 100. 8
0. 300 2 0. 017 0. 012 1 0. 028 6 100. 0 0. 46
0. 300 0 0. 016 0. 012 1 0. 027 6 100. 0
0. 300 1 0. 017 0. 014 9 0. 031 3 98. 7
0. 300 2 0. 016 0. 014 9 0. 030 3 96. 6 1. 09
0. 300 3 0. 015 0. 014 9 0. 030 0 98. 0
0. 300 1 0. 016 0. 017 9 0. 032 8 96. 6
0. 300 1 0. 016 0. 017 9 0. 033 3 97. 8 1. 18
0. 300 0 0. 016 0. 017 9 0. 033 4 98. 9
熊果酸 0. 300 1 0. 175 0. 139 3 0. 311 6 98. 1
0. 300 2 0. 178 0. 139 3 0. 312 6 96. 6 1. 18
0. 300 0 0. 182 0. 139 3 0. 319 8 98. 9
0. 300 1 0. 181 0. 182 3 0. 363 7 100. 2
0. 300 2 0. 175 0. 182 3 0. 362 9 103. 0 2. 45
0. 300 3 0. 174 0. 182 3 0. 365 9 105. 3
0. 300 1 0. 169 0. 214 8 0. 387 6 101. 8
0. 300 1 0. 183 0. 214 8 0. 393 5 98. 0 2. 01
0. 300 0 0. 173 0. 214 8 0. 385 0 98. 7
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1． 齐墩果酸 2． 熊果酸
1． oleanolic acid 2． ursolic acid
图 1 溶剂空白 (a)，对照品 (b)，神香草供试品 (c)，大苞荆芥供试品 (d)色谱图
Fig. 1 HPLC chromatograms of blank solvet (a)，reference substances (b)，Hyssopus cuspidatus (c)，and Nepe-
ta bracteata (d)
表 2 大苞荆芥加样回收率试验结果
Tab. 2 Ｒesults of recovery tests for Nepeta bracteata
成分
称样量 /
g
原有量 /
mg
加入量 /
mg
测得量 /
mg
回收率 /
%
ＲSD /
%
齐墩果酸 0. 500 1 0. 002 2 0. 002 1 0. 004 4 104. 80
0. 500 2 0. 002 7 0. 002 1 0. 004 8 100. 00 4. 80
0. 500 3 0. 002 8 0. 002 1 0. 004 8 95. 20
0. 500 2 0. 003 0 0. 003 1 0. 006 1 100. 00
0. 500 1 0. 002 9 0. 003 1 0. 006 1 103. 20 3. 15
0. 500 0 0. 002 1 0. 003 1 0. 005 4 106. 50
0. 500 1 0. 003 1 0. 004 2 0. 007 1 95. 20
0. 500 3 0. 003 2 0. 004 2 0. 007 3 97. 60 3. 73
0. 500 2 0. 002 5 0. 004 2 0. 006 8 102. 40
熊果酸 0. 500 1 0. 008 0 0. 006 2 0. 014 3 101. 60
0. 500 2 0. 011 0 0. 006 2 0. 017 0 96. 80 2. 47
0. 500 3 0. 012 0 0. 006 2 0. 018 1 98. 40
0. 500 2 0. 009 0 0. 008 1 0. 017 0 98. 80
0. 500 1 0. 008 9 0. 008 1 0. 017 2 102. 50 1. 88
0. 500 0 0. 008 7 0. 008 1 0. 016 8 100. 00
0. 500 1 0. 012 0 0. 010 1 0. 022 2 101. 00
0. 500 3 0. 010 0 0. 010 1 0. 020 3 102. 00 0. 99
0. 500 2 0. 009 8 0. 010 1 0. 019 9 100. 00
2. 10 样品测定 取不同产地的神香草药材 0. 3 g
和大苞荆芥药材 0. 5 g，按 “2. 3”项下的供试品
溶液制备方法进行样品前处理，按 “2. 1”项色谱
条件进样测定，按标准曲线法分别计算样品中齐墩
果酸与熊果酸的量。结果见表 3。
3 讨论
本实验建立了测定神香草与习用品大苞荆芥药
材中齐墩果酸和熊果酸 HPLC方法，该方法操作简
单，具有较好的重复性和稳定性。神香草药材中齐
墩果酸平均总质量分数 0. 103 3%，熊果酸的平均
表 3 样品测定结果
Tab. 3 Determination results
编号 产地
质量分数平均值
齐墩果酸 /% 熊果酸 /%
HcB1 阿勒泰冲库尔乡 0. 044 0. 651
HcB2 阿勒泰阿山 0. 083 0. 953
HcB3 哈萨克医院 0. 229 1. 397
HcB4 阿勒泰禾木草原 0. 131 1. 077
HcB5 阿勒泰市郊小东沟 0. 089 0. 867
HcB6 塔城地区 0. 083 0. 852
HcB7 博尔塔拉地州 0. 091 0. 840
HcB8 新疆维吾尔自治区维吾尔医院 0. 098 0. 865
HcB9 吐鲁番地区 0. 077 0. 856
HcB10 阿勒泰五指泉山区 0. 108 0. 991
NbB1 喀什维吾尔医院 0. 014 0. 025
NbB2 哈密维吾尔医院 0. 012 0. 028
NbB3 巴基斯坦 0. 015 0. 036
NbB4 伊朗 0. 014 0. 019
NbB5 和田维吾尔医院 0. 008 0. 011
NbB6 吐鲁番维吾尔医院 0. 013 0. 089
NbB7 和田药材市场 0. 029 0. 052
NbB8 阿克苏维吾尔医院 0. 027 0. 073
NbB9 伊利维吾尔医院 0. 012 0. 026
NbB10 新疆自治区维吾尔医院 0. 012 0. 017
总质量分数 0. 934 9%，习用品大苞荆芥中齐墩果
酸平均总质量分数 0. 015 6%和熊果酸的总质量分
数 0. 037 6%，结果显示神香草中齐墩果酸、熊果
酸量高于大苞荆芥中齐墩果酸、熊果酸量。因此，
可用于神香草及其习用品大苞荆芥药材的鉴定以及
质量控制。
本实验参考 《中国药典》2010 年版，考察了
乙腈-甲醇-0. 5%醋酸铵 (67 ∶ 12 ∶ 21)、甲醇-水-
冰醋酸-三乙胺 (265 ∶ 35 ∶ 0. 1 ∶ 0. 05)、甲醇-0. 1
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mol /L乙酸铵 (85 ∶ 15)以及甲醇-0. 05 mol /L 乙
酸铵 (85 ∶ 15)的流动相，结果以甲醇-0. 05
mol /L乙酸铵 (85 ∶ 15)时，神香草与大苞荆芥样
品分离度和峰形都达到实验要求，出峰时间也比较
适宜，为最佳色谱条件。
在提取溶剂中考察了乙醇、甲醇、乙酸乙酯对
神香草和大苞荆芥中齐墩果酸和熊果酸的提取率，
结果发现乙酸乙酯提取物中熊果酸与齐墩果酸量比
甲醇、乙醇高，不过峰形差、分离度不好，因此选
择了甲醇为提取溶剂。
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222-226．
HPLC法检测不同地区野生槐花花蕾中芦丁与槲皮素
张俊鹏， 张宝婵， 李瑞明* ， 林 颖， 刘 怡， 林银奎， 陈小陆
(中山大学附属第一医院，广东 广州 510080)
收稿日期:2013-11-21
基金项目:广东省中医药局科研项目 (20121145)
作者简介:张俊鹏，主管药师，研究方向:医院药学。E-mail:871105760@ QQ． com
* 通信作者:李瑞明，主管药师，研究方向:医院制剂。E-mail:liruiming321@ 163． com
摘要:目的 建立 HPLC法测定不同产地的野生槐花花蕾中芦丁与槲皮素的量。方法 采用碱水提取法提取槐花花蕾
中的芦丁和槲皮素。采用 Agilient HC-C18 (4. 6 mm × 250 mm，5 μm)色谱柱，以甲醇-0. 4%磷酸水溶液 (52 ∶ 48)为
流动相，体积流量为 0. 9 mL /min;检测波长为 360 nm;柱温为 25 ℃。结果 芦丁在 2. 5 ～ 80 μg /mL范围内，槲皮素
在 0. 625 ～ 20 μg /mL范围内线性关系良好;平均回收率分别为 100. 2%和 99. 1%;ＲSD 分别为 2. 1%和 1. 1% (n =
6)。来自 10 个产地的槐花花蕾中芦丁的量在 21. 48% ～ 28. 21%之间，槲皮素的量在 1. 15% ～ 1. 74%之间。结论 不
同产地槐花花蕾中芦丁和槲皮素存在一定差异，其中以河南新郑的槐花花蕾中芦丁与槲皮素含有量最高。
关键词:槐花花蕾;芦丁;槲皮素
中图分类号:Ｒ284. 1 文献标志码:A 文章编号:1001-1528(2014)11-2573-04
doi:10. 3969 / j． issn． 1001-1528. 2014. 11. 029
Analysis of rutin and quercetin in flower buds of wild Sophora japonica L． from
different habitats by HPLC
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2014 年 11 月
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Vol． 36 No． 11