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东南景天的组织培养和快速繁殖



全 文 :植物生理学通讯 第 43卷 第 3期,2007年 6月514
收稿 2007-03-05 修定  2007-05-15
资助 污染环境修复与生态健康教育部重点实验室开放基金
(050004)和浙江省教育厅一般项目(20050 929)。
* 通讯作者(E-ma i l:xya ng@zju .edu .cn;T el:0 57 1 -
8 6 9 7 1 9 0 7 )。
东南景天的组织培养和快速繁殖
刘勇军,冯英,杨肖娥 *
浙江大学环境与资源学院,污染环境修复与生态健康教育部重点实验室,杭州 310029
Tissue Culture and Rapid Propagation of Sedum alfredii Hance
LIU Yong-Jun, FENG Ying, YANG Xiao-E*
Ministry of Education Key Laboratory of Polluted Environmental Remediation and Ecological Health, College of Environmental and
Resources Science, Zhejiang University, Hangzhou 310029, China
1 植物名称 东南景天(Sedum alfredii Hance)。
2 材料类别 幼嫩叶片。
3 培养条件 基本培养基为MS。(1)愈伤组织诱导
培养基:MS+6-BA 0.1 mg·L-1 (单位下同)+2,4-D
1.0~3.0;(2)愈伤组织继代培养基:MS+6-BA 0.1+
2,4-D 1.0+VC 2.0+1.0 g·L-1活性炭;(3)分化培养
基:MS+6-BA 2.0+2,4-D 1.0+AgNO4 2.0;(4)壮
苗培养基:MS+6-BA 0.1+GA3 2.0;(5)生根培养
基:1/3MS+NAA 1.0。以上培养基中均加入 12
g·L-1琼脂、30 g·L-1蔗糖,pH 5.6~5.8,在智能
型光照培养箱(MGC-300B型,上海一恒科技有限
公司)内培养。光照时间 16 h·d- 1,光照强度为
40~60 µmol·m-2·s-1,培养温度为(25±1) ℃。
4 生长与分化情况
4.1 无菌材料的获得 取东南景天幼叶作为外植体,
经流水冲洗 20 min后,用 75%的乙醇浸泡杀菌60
s,再置于 0.1%的 HgC12消毒 5 min,用无菌水
冲洗 4 ~5 次后,将其平放在高压灭菌过的滤纸
上,用无菌手术刀将叶片切成 0.5 cm×0.5 cm小
块,然后接入培养基( 1 )上。
4.2 愈伤组织的诱导与继代培养 14 d后,切口边
缘开始形成白色颗粒状的愈伤组织。继续培养
14 d后,整个切口表面密集生长迅速的愈伤组织
颗粒,诱导率可达到 49.5%。将愈伤组织转移到
培养基(2)进行继代培养。每 20 d继代 1次,继
代 2 次后,可得到蓬松的愈伤组织。
4.3 芽的分化 选取生长迅速、表面湿润的愈伤组
织接种于培养基(3)中,14 d后可见有绿色芽点萌
动,30 d后愈伤组织表面形成许多的绿色芽点,
再继续培养 21 d可形成许多丛生芽头。分化率可
达到 50% 以上,平均分化丛生芽 7~8个。
4.4 壮苗培养 在超净工作台上,用镊子选取簇生
芽中较大的芽头,转接到培养基(4)上,30 d左右
可长成 3~4 cm高的东南景天无根苗。
4.5 生根与移栽 在培养基(5)上培养 14 d左右,
从芽头基部切口处产生 2~3条根,每苗生根 6~9
条,生根率 100%,根长达 1 cm左右,可进行移
栽。移栽前,先打开瓶塞,置于室温下锻炼 2 d,
洗去根部的琼脂,移入事先消过毒的珍珠岩中,
置于人工气候室内,温度控制在(25±1) ℃,湿度
在 70%左右,光照时间 14 h·d-1,光照强度 30~40
µmol·m-2·s-1。20 d后,移栽入大田,成活率可
达 85 % 以上。
5 意义与进展 东南景天属景天科景天属多年生草
本植物,可以无性繁殖,有许多分枝,花黄色,
生命力较强,广泛分布于我国华中、华南和华东
地区,是我国新发现的一种镉 /锌超积累与铅富集
植物,具有生物量大、适应性广、多年生和一
年内可多次收割等优点,在重金属污染环境的植
物修复中有广泛的应用价值。与东南景天同属的
八宝景天(Sedum spetabile)组培与快繁技术已有报
道,而作为野生植物的东南景天,其组培与快繁
技术尚未见报道。本文采用东南景天叶片为外植
体,诱导愈伤组织并再生完整植株,为东南景天
的快速繁殖及种质资源保存开拓了新途径,为进
一步建立东南景天转基因技术体系奠定了基础。