全 文 ：第 23 卷 第 3 期 植 物 研 究 2003年 7 月
Vol.23 No.3 BULLETIN OF BOTANICAL RESEARCH July , 2003
猕猴桃属植物叶绿体基因 PCR-RFLP 分析
李健仔 李思光 罗玉萍 陈少风
(南昌大学生物科学工程系 ,南昌 330047)
摘 要 分别用 2个不同限制性内切酶对猕猴桃属 27个种和 15个栽培品种的叶绿体基因(rbcL
基因和 psbA基因)的 PCR扩增产物进行酶切分析 ,共得到 25个限制性位点 ,其中 24个具有多态
性。确立了该属植物的单元型分布 ,对该属植物的系统发育方式和部分重要种类的亲缘关系进行
了探讨 ,拓展了可用于该属植物分子系统学研究的遗传信息 。
关键词 猕猴桃属;叶绿体基因;系统发育
PCR-RFLP ANALYSIS ON CHLOROPLAST DNAOF ACTINIDIA
LI Jian-Zi LI Si-Guang LUO Yu-Ping CHEN Shao-Feng
(Department of Biological Science and Technolog y , Nanchang University , Nanchang 330047)
Abstract Twentyseven species and f if teen variat ions of Act inidia were investigated through PCR-
RFLP analysis of tw o chloroplast DNA fragments , including rbcL gene and psbA gene.The two
chloroplast gene f ragments were digested by two restriction endonucleasea respectively , which yielded
tw entyf ive restriction sites and tw entyfour of them were polymorphic.Haplotype of Act inidia was
geographically established.Pattern of phy logene in Actinidia and relations between some important
species w ere explo red.Genetic information of molecular sy stematics in Actinidia was expanded by
above all.
Key words Aceinidia;chloroplast DNA;phylogene
猕猴桃属(Act inidia)全世界共有 66个种 ,约
118个种下分类单位(变种 、变型),我国有 62个
种 ,占全世界总种数的 93.7%[ 1] 。 Actinidia 的系
统分类学主要建立在形态学特征上 ,依据果实表面
绒毛的多少和皮孔的有无将该属分为四个组型 。
猕猴桃属植物表型特征的变化很大 ,一些分布广泛
的种类分布在气候条件显著不同的各个区域 ,由于
野外经常发生种群之间的自然杂交 ,常导致种的错
误鉴定。此外 ,有许多最近确定的种类只有干燥的
标本而没有在野外找到 ,但细微的形态学差异在干
标本上是无法观察得到。因此 ,该属属下分类系统
比较混乱。高等植物中 , 叶绿体基因(chloroplast
DNA , cpDNA)相对保守 ,它即不像核基因组那样
有较多的重复序列 ,也不像线粒体基因组那样重排
事件频繁发生 ,因而被广泛应用于植物分子系统学
的研究中。本研究对猕猴桃属 27个种和 15个栽
培品种的叶绿体基因——— rbcL 基因和 psbA 基因
进行 PCR-RFLP 分析 ,利用 cpDNA 限制性片段长
度多态性确立了该属植物的单元型分布 ,并对该属
的系统发育方式和部分重要种类的亲缘关系进行
了探讨 ,拓展了可用于猕猴桃属植物分子系统学研
究的遗传信息 。
基金项目:国家自然科学基金资助项目(39960007);江西省自然科学基金资助项目(0230001)。第一作者简介:李健仔(1977-),男 ,南昌大学在读硕士研究生 ,主要从事生物化学及分子生物学研究。＊通讯作者:李思光(1962-),男 ,博士 ,教授 ,主要从事生物化学与分子生物学研究。
1 材料和方法
本实验的研究材料共有猕猴桃属 27 个种和
15个栽培品种。27个种均于 2001年 4月中旬采
自武汉中科院植物所猕猴桃种质资源圃(资源圃所
保育的所有材料均取自各物种自然分布区 ,具体见
表 1),随机选取植株摘取当年嫩叶 ,用变色硅胶干
燥后 ,置于-4℃冰箱保存 。15个栽培品种:武植 2
号 、武植 3号 、武植 5号 、武植 6号 、通山 5号 、三峡
1号 、米良 1号(以上材料于 2001年 4月中旬采自
武汉中科院植物所),魁蜜 、怡香 、早鲜 、金丰 、江园
一号 、秦美 、金魁 、海瓦德(以上材料于 2001年 4月
中旬采自江西省农科院园艺所猕猴桃基地)。其
中 ,武植 2号 、武植 3号 、武植 5号 、武植 6号 、通山
5号 、魁蜜 、怡香 、早鲜 、金丰 、江园一号共计 10个
品种属于中华猕猴桃 ,秦美 、金魁 、海瓦德 、三峡 1
号 、米良 1号共计 5个品种属于美味猕猴桃。
采用 CTAB方法从干燥一年的叶片中提取植
物总基因组 DNA 。PCR 扩增反应在 PE 公司的
9600型 PCR仪上进行 。反应总体积为 50 μL ,内
含 50 mmol/L 的 T ris-HCl(pH8.3), 0.25 g/ L 的
BSA ,2.5 mmol/ L 的 MgCl2 ,2 U 的 TaqDNA 聚合
酶 ,dATP 、dGTP 、 dCTP 、dTTP 各 250 μmol/ L ,相
应的引物对 0.2 μmol/L ,总 DNA 200 ng 。rbcL 基
因和 psbA 基因的引物是根据烟草相应的基因序
列设计的 , rbcL 基因的扩增采用引物对 rbcL-1 和
rbcL-2。 rbcL-1 的序列为 5 -TTGGCAGCAT TC-
CGAG TAA-3 , rbcL-2 的 序列 为 5 -TGTCC-
TAAAGT TCCTCCAC-3 ,扩增长度为 1 120 bp。
psbA基因的扩增采用引物对 psbA-1和 psbA-2 ,
psbA-1 的 序 列 为 5 -CCATGACTG-
CAATTT TAGAG-3 , psbA-2 的 序 列 为 5 -
ACTTCCATACCAAGGTTAGC-3 , 扩增长度为
990 bp[ 2] 。两个基因的扩增程序相同:94℃ 3 min
※94℃1 min , 50℃1 min , 72℃ 2.5 min , 40 个循
环※72℃8 min。选用 AluⅠ 、Mse Ⅰ 两种限制性
内切酶对 rbcL 扩增片段进行酶切 ,选用 Rsa Ⅰ 、
HinfⅠ两种限制性内切酶对 psbA基因的扩增片段
进行酶切。酶解反应体积为 15 μL ,内含 5 ～ 8
μLPCR产物 , 5 ～ 8U 限制性内切酶和 1×限制性
内切酶反应 buffer ,酶解反应时间为 2 ～ 3 h ,反应
温度为限制性内切酶的最适反应温度 。取 5 μL 酶
切反应产物经 2%琼脂糖电泳检测并照相 。
表 1 实验材料
Table 1 The origins of ma terials
物种名称 Taxon 自然分布区 Dist ribut ion
毛叶硬齿 A.cal losa 浙江 、江西 、湖南 、湖北、安徽 、广东
安息香 A.styraci f lia 湖南 、福建
绵毛 A.fulvicoma var.lanata 湖南 、福建
葛枣 A.polygam a 东北 、甘肃 、陕西 、山东、河南 、湖南 、浙江
大籽 A.macrosperma 江西 、江苏 、安徽 、浙江、湖北 、广东
异色 A.cal losa var.d icolar 浙江 、安徽 、福建 、江西、湖南 、云南 、贵州
漓江 A.l ij iangensis 广西
桂林 A.gui linensis 广西桂林
金花 A.chrysan tha 广西 、广东 、云南
繁花 A.persicina 福建
黑蕊 A.melanandra 浙江 、江西 、福建 、湖北、四川 、甘肃 、陕西
对萼 A.valvata 浙江 、江西 、湖南 、湖北、安徽 、广东
黄毛 A.fulvicoma 湖南 、福建
阔叶 A.la ti fol ia 浙江 、江西 、湖南 、贵州、安徽 、广东 、云南 、广西
中华 A.chinensi s 浙江 、江西 、湖南 、河南、安徽 、广东 、江苏 、广西 、福建
美味 A.deliciosa 云南 、广西 、甘肃 、湖北、湖南 、四川 、贵州
长叶 A.hemsleyana 浙江 、福建 、江西
京梨 A.cal losa var.henryi 云南 、广西 、湖北 、湖南、安徽 、福建
网脉 A.cylindrica var.reticulata 广西 、贵州
山梨 A.rufa 原产日本
清风藤 A.sabiaefolia 湖南 、安徽 、福建 、江西
绿果 A.deliciosa var.ch lorocarpa 云南 、广西 、贵州 、湖北、湖南
浙江 A.zhej ianggensis 浙江 、江西
湖北 A.hubeigensis 湖北
革叶 A.rubricauli s var.cor iacea 云南 、广西 、贵州 、浙江
毛花 A.eria ntha 福建 、浙江
3293 期 李健仔等:猕猴桃属植物叶绿体基因 PCR-RFLP分析
2 结果
2.1 PCR扩增和酶切结果
猕猴桃属 27 个种 、15 个品种都扩增出长 1
120 bp rbcL 基因和 990 bp pabA 基因 ,扩增片段
长度没有多态性。rbcL 基因的 Mse Ⅰ和 Alu Ⅰ酶
切 , psbA 基因的 Rsa Ⅰ和 Hinf Ⅰ的酶切均产生了
限制性片段长度多态性 , 2个基因的酶切结果共得
到 25个限制性位点(见表 2),其中 24个具有多态
性。研究发现猕猴桃属 cpDNA多数是由于碱基的
插入或缺失而造成限制性片段长度变异 ,也有少数
限制性识别位点发生点突变。
表 2 猕猴桃叶绿体基因限制性酶切位点的分布
Table 2 Distribution of ristriction sites in Actinidia
性状
Character number
叶绿体基因
cpDNA
限制性内切酶
Rest rction enzyme
位置(bp)
Posit ion
1 psbA Hinf 350
2 psbA Hinf 630
3 psbA Hinf 810
4 psbA Hinf 530
5 psbA Hinf 420
6 psbA Hinf 720
7 psbA RsaI 530
8 psbA RsaI 410
9 psbA RsaI 770
10 psbA RsaI 880
11 rbcL MseI 420
12 rbcL MseI 840
13 rbcL MseI 980
14 rbcL MseI 700
15 rbcL MseI 810
16 rbcL MseI 950
17 rbcL MseI 1 090
18 rbcL AluI 650
19 rbcL AluI 930
20 rbcL AluI 1 060
21 rbcL AluI 780
22 rbcL AluI 270
23 rbcL AluI 540
24 rbcL AluI 810
25 rbcL AluI 940
2.2 猕猴桃属单元型构建
本研究发现的猕猴桃属 cpDNA 限制性片段长
度多态性 , 能用于猕猴桃属单元型的构建(见表
3),并可进一步探讨物种形成不同单元型的原因;
可用于探讨某些物种之间的亲缘关系 ,证实近缘种
之间具有相同的限制性酶切片段 。
2.3 种内聚类
根据 cpDNA 酶切片段长度多态性的结果 ,对
中华猕猴桃和美味猕猴桃进行种内聚类 ,猕猴桃
cpDNA为严格的父性遗传[ 2] ,故根据 cpDNA 酶切
片段长度多态性可判断它们的父本 ,为品种的改良
和培育提供理论依据。结果见表 4和表 5。
表 3 猕猴桃属单元型构建
Table 3 Construction of haplo type in Actinidia
单元型
Haplotype
猕猴桃种类
Species
限制性位点性状
Characters of rest riction site
1 毛叶
漓江
繁花
1 , 2 , 3 , 7 , 11 , 12 , 13 , 14 , 18 ,
19 , 20
2
安息香
桂林
金花
黄毛
阔叶
长叶
网脉
山梨
绿果
1 , 2 , 3 , 7 , 11 , 12 , 18 , 19 , 20
3
绵毛
葛枣
大籽
异色
中华
美味
京梨
浙江
1 , 2 , 3 , 7 , 11 , 12 , 13 , 18 , 19 , 20
4 黑蕊 3 , 4 , 11 , 12 , 13 , 20 , 21
5 对萼 1 , 2 , 3 , 7 , 11 , 15 , 16 , 17 , 18 ,
19 , 20
6 湖北 1 , 2 , 3 , 11 , 13 , 14 , 18 , 19 , 20
7 软枣 5 , 6 , 8 , 9 , 11 , 12 , 13 , 21 , 22
8 清风藤 1 , 2 , 3 , 11 , 12 , 13 , 18 , 19 , 20
330 植 物 研 究 23 卷
图 1 MseⅠ对猕猴桃属植物 rbcL基因酶切分析
Fig 1 MseⅠ digested the PCR-amplified chloroplast gene rbcL in Actinidia
泳道 1～ 8分别为:绵毛(A.fu lvicoma var.lanata);大籽(A.polygama);葛枣(A.macrosperma);金梨(A.cal losa var.henryi);安息香
(A.str yraci f l ia);魁蜜(A.chinensis);长叶(A.hemsleyana);武植二号(A.chinensis)
▲表示两条分子量相同的酶切条带;M:DNA 分子量标记
▲ presents two fragmen ts of similar length;M :DNA marker.
表 4 中华猕猴桃种内分型
Table 4 Types of ten variations of A.chinensis
类型
Type
中华猕猴桃栽培种
Variat ions of A.chinensi s
限制性位点性状
Caracters of rest riction si te
1 武植 1号 ,武植 3号,江园 1号 1, 2,3 ,7,11,12,13,14 ,18 ,19 ,20
2 武植 2号 ,武植 6号,魁蜜,早鲜 1, 2,3 ,7,11,12,18,19 ,20
3 金丰,通山 5号 1, 2,3 ,7,11,12,13,14 ,18 ,19 ,20
4 武植 5号 1, 2,3 ,11, 12, 13, 18,19,20
表 5 美味猕猴桃种内分型
Table 5 Types o f fiv e variations of A.deliciosa
类型
Type
美味猕猴桃栽培种
Variations of A.chinensis
限制性位点性状
Caracters of res trict ion site
1 海瓦德 ,米良 1号 1, 2,3 ,7, 11,12,13,14,18 ,19 ,20
2 秦美 1, 2,3 ,11 ,12, 13, 14, 18,19,20
3 金魁 1, 2,3 ,7, 10,11,12,13,14 ,18 ,19 ,20
4 三峡 1号 1, 2,3 ,7, 11,12,18,19,20
表 6 种质鉴定的 RFLP标记
Table 6 RFLP marks in species identification
种或品种
Species or variation
叶绿体基因
cpDNA
限制性内切酶
Rest riction enzyme
RFLP标记
Marks of RFLP
湖北 rbcL Alu I 18, 19 , 20
软枣 psbA Hinf I 5 , 6
软枣 psbA Rsa I 8 , 9
对萼 rbcL Mse I 11 , 15 , 16 , 17
黑蕊 psbA Hinf I 3 , 4
金魁 psbA Rsa I 7 , 10
2.4 种质鉴定的 RFLP 标记
猕猴桃属植物种类繁多 ,且发展了许多人工栽
培品种 ,仅靠传统的形态特征来辨别种和品种是很
困难的。本研究中发现了一些种和品种的特异性
RFLP 分子标记(具体结果见表 6),这在理论和实
践都很有意义 。
3 讨论
3.1 猕猴桃属植物单元型分布
对猕猴桃属植物的 27个种群进行单元型归
类 ,共得到 8 个单元型。高等植物之间的种类变
异 、cpDNA 变异和地理分布之间有密切的关系 。
从地理分布上对这 8个单元型的形成原因做进一
步的讨论:湖北猕猴桃只分布在湖北省 ,具有明显
的地域性;对萼 、黑蕊 、软枣同属于净果组 ,是该属
植物最原始的类群 ,含有相当浓厚的东亚植物区系
的特征 ,它们 cpDNA限制性位点性状和猕猴桃属
其它种群间差异显著 ,它们之间相比较也是如此 ,
进一步证实该区系植物在进化上的原始性;毛叶 、
繁花 、漓江猕猴桃主要分布在福建和广西 ,而广西
和福建的地理环境和气候条件非常相似;单元型 2
和 3是拥有猕猴桃种类最多的两个单元型 ,两个单
元型的 cpDNA限制性位点性状高度相似 ,只有一
个限制性位点性状的差异 ,这是由于这两个单元型
的猕猴桃种群广泛分布在气候条件显著不同的各
个区域 ,地理分布的重叠 、种群之间的自然杂交 、天
然群居之间的渐渗现象 ,使得这些种群的 cpDNA
演化呈现趋同性 。猕猴桃属植物是一个复杂的大
群体 ,且是还在分化中的大群体 ,已经或者正在产
3313 期 李健仔等:猕猴桃属植物叶绿体基因 PCR-RFLP分析
生一些新种 ,各个种之间的差异使得它们各自独立
于大群体之中 ,但各个种之间又保持着一定的共性
与亲缘 。如要根据 cpDNA 的变异程度 ,从植物地
理学上来讨论该属植物的系统发育 ,则还需进一步
了解其种间的 cpDNA 变异程度以获得更多的信
息 ,还要利用其它的信息 ,诸如 ,传统分类学 ,包括
形态分类学 、细胞分类学和化学分类学 。
3.2 猕猴桃属植物系统发育方式
本研究结果表明一些种类形态特征差异明显 ,
cpDNA的酶切结果却一致或接近 。例如 ,毛花猕
猴桃和阔叶猕猴桃形态特征迥异 ,黄酮类化合物和
同工酶分析结果也不一致[ 3] ,但二者 rbcL 和 psbA
基因的酶切分析结果却一致 。Liang 依据形态学
特征把 A.f ulcicoma 、A .glaucophy lla 分在不同
的组中[ 4] , Cipiriani对它们的 cpDNA 酶切分析结
果却相同[ 5] 。形态特征和生化标记主要取决于核
基因组的基因表达和调控 ,因此受双亲基因组遗传
信息的影响 ,同时也受环境因子的选择作用。猕猴
桃属 cpDNA 是严格的父性遗传 ,且高度保守 ,所以
上述例子最可能的解释就是它们是同一父系的杂
交种 ,这与 Ferguso提出的猕猴桃属存在自然杂交
种的说法一致[ 6] , 表明猕猴桃属有可能是复杂的
网状发育 。
3.3 猕猴桃种间及种内亲缘关系分析
中华和美味猕猴桃是主要的栽培种 ,搞清楚两
者的亲缘关系将为品种的改良和新品种的定向选
育提供依据。两个种的形态学特征很相似 ,常认为
美味是中华猕猴桃的变种 。美味猕猴桃在减数分
裂时形成二价体 ,这表明其起源于异源多倍体[ 7] 。
二倍体基因型中华猕猴桃的十个酶位点分析结果
显示双亲遗传[ 8] 。Gardner 的杂交结果表明中华
是美味父母本中的一方[ 9] 。Webby 对叶片黄酮类
化合物的分析结果也支持这种说法[ 3] 。本研究中
中华和美味的 cpDNA酶切分析结果一致 ,由于猕
猴桃属 cpDNA 是父性遗传 ,故确认中华猕猴桃是
美味猕猴桃的父本。李瑞高等发现绿果猕猴桃雄
花花冠的大小 、花丝的多少 、长度等介于中华猕猴
桃和美味猕猴桃之间 ,且在中华和美味混杂的地区
出现了绿果猕猴桃 ,从而推测绿果是中华和美味的
自然杂交种[ 10] 。本研究发现绿果猕猴桃 cpDNA
限制性位点性状和中华 、美味之间有一个位点性状
的差异 ,根据 cpDNA单性遗传的方式 ,排除中华和
美味为其亲本的可能性 ,所以绿果应为中华或美味
的一个变种 ,且绿果猕猴桃还在分化之中。绵毛猕
猴桃认为是黄毛猕猴桃的变种 ,两者 cpDNA 酶切
结果只有一个位点的差异 ,说明绵毛猕猴桃已经呈
现一定程度的分化 。在湖北和清风藤之间 ,清风藤
只由于点突变而缺少了一个限制性位点 ,两者应有
较近的亲缘关系 ,有可能为同一种的不同变种。
山梨猕猴桃是来自日本的一个种 ,故 Liang 在
1984年对猕猴桃属系统分类关系进行修改时未能
将其考虑在内 ,通常认为它和软枣猕猴桃的亲缘关
系较为接近 ,但 cpDNA 酶切结果表明二者共享的
限制性位点不多 ,Webby 对其生化分析的结果也
说明两者的亲缘关系较远[ 3] , 本研究中它与单元
型 2中的种群有相同的 cpDNA 酶切位点 ,说明它
们为同一父系家族 ,但其具体的祖先和系统分类位
置有待进一步的实验论证。在传统的分类方法中 ,
软枣 、大籽 、对萼 、葛枣 、黑蕊同属于净果组 ,这种分
法从它们分布的地理区系和 cpDNA 进化原始性的
角度来看有一定的合理性 ,但从它们的彼此的亲缘
关系来看则缺少有力的证据 。软枣在果肉颜色 、果
面颜色 、种子状况 、风味等形态学特征方面与其它
几个种差异明显 ,陈万秋的 RAPD 分析也表明软
枣与所分析的其它猕猴桃种群之间的遗传距离甚
远[ 11] ,且软枣的倍性变异最大 ,它有猕猴桃属中唯
一的八倍体[ 1] ,本实验结果也发现其 cpDNA 酶切
产生多个特异限制性位点 ,故建议将软枣猕猴桃设
为单独的一个组 ,其组内和组下单位有待于材料的
进一步收集和对已有材料的进一步研究。大籽 、葛
枣与单元型 2中的猕猴桃种群有较近的亲缘关系 ,
为同一父系家族。
桂林和阔叶猕猴桃都属于猕猴桃科星毛组 ,原
产地也均在广西。桂林猕猴桃果实形状为球形 ,果
肉绿色 ,果面无毛但果点明显 ,种子较大而明显 ,酸
且多汁;阔叶猕猴桃的果实呈圆柱形 ,果肉褐绿色 ,
同样果面无毛但果点明显 ,种子较大而明显 ,酸且
多汁 。从形态学角度看 ,两者有诸多相似之处。陈
万秋的 RAPD分析也显示桂林和阔叶在所分析的
28个猕猴桃种群中 ,它们的片段共享度最大 。本
研究中它们的 cpDNA 酶切分析也得到一致的结
果。因此 ,提示二者可归于同一种类下的两个亚
种。
中华猕猴桃的 10个栽培品种和美味猕猴桃的
5个栽培品种中 ,只有武植 2号 、武植 6号 、魁蜜 、
怡香 、早鲜 、三峡 1号的 cpDNA 酶切结果和中华猕
猴桃一致。说明种内的 cpDNA 变异程度十分明
显 ,甚至大于种间的变异程度 ,这有可能是在人为
332 植 物 研 究 23 卷
选择作用下 , cpDNA本身发生变异 ,从而导致限制
性酶切位点的改变 ,但由于 cpDNA相当保守 、进化
速率低下 ,因此这种可能性存在的概率很小。另一
种可能则是这些 cpDNA发生变异的栽培品种是种
间杂交种 。人们在选育过程中 ,往往将具有优良性
状的父母本进行杂交以期望得到同时具有父母优
良性状的后代;也有可能是在选育过程中 ,由于花
粉在不同种群之间的自然传播 ,导致收获的种子发
生种质变化。因此 ,武植 1号 、武植 3号 、江园 1号
是以中华猕猴桃作为母本 ,以单元型 2中的某个种
作为父本进行杂交而得到种间杂交种;金丰 、通山
5号 、海瓦德 、米良 1号则是以单元型 1 中的某个
种作为父本 ,具体父本的确定有待于进一步的研
究。武植 5 号相对与中华猕猴桃只有 psbA 基因
的 Rsa1 的酶切位点发生改变 ,这可能是强大的人
工选择作用所造成的变异。秦美和金魁的 cpDNA
的酶切结果与美味猕猴桃相差很远 ,在所分析的
27个种未能找到与其相一致的 ,说明它们的父本
可能是我们未收集到的某个种 。
目前对猕猴桃属植物进行系统重建还存在诸
多困难:只能得到有限的种类使得某些组的代表种
类很少;猕猴桃集中的植物园中 ,尽管远缘类群之
间的杂交种已被确认 ,但花粉仍会在它们之间进行
传播 ,使收获种子的种质发生改变。因此 ,要对猕
猴桃属进行系统重建的话 ,必须从野外采集到更多
的种类 ,并鉴定原始种使之与自然种间杂交种区分
开来。对猕猴桃的 cpDNA 和 mtDNA的分析可为
确定猕猴桃属的父性家系和母性家系提供证据 ,选
择更多的 cpDNA片段并用大量的限制性内切酶进
行分析 ,将会产生更丰富的性状 ,可为猕猴桃属植
物的系统重建提供更多的信息位点 。
参 考 文 献
1.黄宏文 ,龚俊杰 , 王圣梅 ,等.猕猴桃属(Actinidia)植物的
遗传多样性.生物多样性 , 2000 , 8(1):1 ～ 12
2.Guido cipriani , Raffaece Testolin , Michele Morgante.Pater-
nal inheritance of plastids in inter specific hybrids of the
genus Actinidia revealed by PCR-amplification of chlo ro-
plast DNA fragments.Mo Gen Genet , 1995 , 247:693～ 697
3.Webby R F , Wilson R D , Ferguson A R.Leaf flavonoids
of Actinidia.Biochem Syst Ecol , 1994 , 22:277～ 286
4.Liang C F.Actinidia.I n:Feng K M ed.F lora reipublicae
popularis sinicae.Beijing:Science press , 1984.196 ～ 268 ,
309～ 324
5.Ciprini G , Testolin R, Garder R.Restriction-site variation
of PCR-amplified chloroplast DNA regions and its implica-
tio n for the evolution and taxonomy of Actinidia.Thero
Appl Genet , 1998 , 96:389 ～ 396
6.Ferguson A R.Kiw ifruit(Actinidia).In:Moore J N
Balling ton , Jr J R , eds.Genetic resources of temperate fruit
and nut crops.The Netherlands:Wageningeen , 1990.603～
653
7.McNeilage M A , Considine J A.Chromosome studies in
some Actidnidia taxa and implications for breeding.N Z J
Bot , 1989 , 27:71～ 81
8.Huang H W , Dane F , Wang Z Z , et al.Isozyme inheri-
tance and variation in Actinidia.Heredity , 1997 , 78:328
～ 336
9.Hudson K R , Gardner R C.Organization of the chlo roplast
genome of kiw ifruit(Actinidia deliciosa).Curr Genet ,
1988 , 13:339 ～ 342
10.李瑞高 , 梁木源 ,李洁维.猕猴桃属植物生物学特征特性
观测.广西植物 , 1996 , 3:265～ 272
11.陈万秋.猕猴桃属植物随机扩增多态性 DNA 研究:[ 硕
士学位论文] .南昌:南昌大学生物科学工程系 , 2000
3333 期 李健仔等:猕猴桃属植物叶绿体基因 PCR-RFLP分析