全 文 ：植物保护学报 Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｌａｎｔ Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ， ２０１６， ４３（２）： ２４８ － ２５４ ＤＯＩ： １０􀆰 １３８０２ ／ ｊ． ｃｎｋｉ． ｚｗｂｈｘｂ． ２０１６􀆰 ０２􀆰 ０１０
基金项目：江苏省农业科技自主创新资金项目（ＣＸ（１４）２１０１），江苏省农业科学院基本科研业务专项 ６００３
∗通讯作者（Ａｕｔｈｏｒ ｆｏｒ ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｅｎｃｅ）， Ｅ⁃ｍａｉｌ： ｓｈｉｔｏｕｒｅｎ８８８８８＠ １６３． ｃｏｍ
收稿日期： ２０１４ － １１ － ０４
一株戴尔福特菌 ＮＦ８３⁃１ 的鉴定及评价
梁雪杰１ 　 郭殿豪２ 　 刘邮洲１∗　 唐永清３ 　 乔俊卿１ 　 杜　 艳１
（１．江苏省农业科学院植物保护研究所， 南京 ２１００１４； ２．南京农业大学植物保护学院， 南京 ２１００９５；
３．新疆生产建设兵团农四师农业科学研究所， 伊犁 ８３５００４）
摘要： 为研究拮抗菌株 ＮＦ８３⁃１ 的分类与生物学特性以及评价其生防能力，通过生理生化特征和
１６Ｓ ｒＲＮＡ基因序列分析对菌株 ＮＦ８３⁃１ 进行种属鉴定，以选择性培养基检测其分泌的多种胞外酶，
以结晶紫染色法检测其生物膜的形成，采用室内平板对峙生长法测定其抑菌活性，室外盆栽法测定
其对番茄立枯病的防效。 结果表明，菌株 ＮＦ８３⁃１ 被鉴定为戴尔福特菌 Ｄｅｌｆｔｉａ ｔｓｕｒｕｈａｔｅｎｓｉｓ；菌株
ＮＦ８３⁃１ 能产生纤维素酶和嗜铁素，且能在管壁形成较厚的生物膜。 菌株 ＮＦ８３⁃１ 对立枯丝核菌
Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ ｓｏｌａｎｉ、甘蓝黑斑病菌 Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ｂｒａｓｓｉｃａｅ、油菜菌核病菌 Ｓｃｌｅｒｏｔｉｎｉａ ｓｃｌｅｒｏｔｉｏｒｕｍ、梨胶孢炭
疽病菌 Ｃｏｌｌｅｔｏｔｒｉｃｈｕｍ ｇｌｏｅｏｓｐｏｒｉｏｉｄｅｓ 等病原真菌，梨火疫病菌 Ｅｒｗｉｎｉａ ａｍｙｌｏｖｏｒａ、番茄青枯病菌
Ｒａｌｓｔｏｎｉａ ｓｏｌａｎａｃｅａｒｕｍ、水稻细菌性条斑病菌 Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ ｏｒｙｚａｅ ｐｖ． ｏｒｙｚｉｃｏｌａ 等革兰氏阴性病原细
菌及革兰氏阳性细菌巨大芽胞杆菌 Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｍｅｇａｔｅｒｉｕｍ 都具有明显的抑制作用；菌株 ＮＦ８３⁃１ 发酵
液原液和 １００ 倍稀释液对番茄立枯病的防效分别为 ４８􀆰 ７８％ ～ ５７􀆰 ６９％和 ２６􀆰 ８３％ ～ ３６􀆰 ５４％ 。 研
究表明，菌株 ＮＦ８３⁃１ 是一株具有较好生防应用潜力的拮抗菌株。
关键词： 戴尔福特菌； 种属鉴定； 拮抗能力； 胞外酶； 生物膜
Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｏｆ Ｄｅｌｆｔｉａ ｔｓｕｒｕｈａｔｅｎｓｉｓ ｓｔｒａｉｎ ＮＦ８３⁃１
Ｌｉａｎｇ Ｘｕｅｊｉｅ１ 　 Ｇｕｏ Ｄｉａｎｈａｏ２ 　 Ｌｉｕ Ｙｏｕｚｈｏｕ１∗ 　 Ｔａｎｇ Ｙｏｎｇｑｉｎｇ３ 　 Ｑｉａｏ Ｊｕｎｑｉｎｇ１ 　 Ｄｕ Ｙａｎ１
（１． Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｐｌａｎｔ Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ， Ｊｉａｎｇｓｕ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ， Ｎａｎｊｉｎｇ ２１００１４， Ｊｉａｎｇｓｕ Ｐｒｏｖｉｎｃｅ， Ｃｈｉｎａ；
２． Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｐｌａｎｔ Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ， Ｎａｎｊｉｎｇ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ， Ｎａｎｊｉｎｇ ２１００９５， Ｊｉａｎｇｓｕ Ｐｒｏｖｉｎｃｅ， Ｃｈｉｎａ；
３． Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｘｉｎｊｉａｎｇ Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ Ｃｏｒｐｓ， Ｄｉｖｉｓｉｏｎ Ｆｏｕｒ，
Ｙｉｌｉ ８３５００４， Ｘｉｎｊｉａｎｇ Ｕｙｇｕｒ Ａｕｔｏｎｏｍｏｕｓ Ｒｅｇｉｏｎ， Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ｉｎ ｏｒｄｅｒ ｔｏ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ ｔｈｅ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ ａｎｄ ｅｖａｌｕａｔｅ ｔｈｅ ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｉｃ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ｔｈｅ
ｓｔｒａｉｎ ＮＦ８３⁃１， ｔｈｅ ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ ａｎｄ ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ ａｎｄ １６Ｓ ｒＲＮＡ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｗｅｒｅ ｕｓｅｄ ｔｏ
ｉｄｅｎｔｉｆｙ ｔｈｅ ｓｐｅｃｉｅｓ， ａｎｄ ｔｈｅ ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ ｍｅｄｉｕｍ ａｎｄ ｃｒｙｓｔａｌ ｖｉｏｌｅｔ ｓｔａｉｎｉｎｇ ｍｅｔｈｏｄ ｗｅｒｅ ｕｓｅｄ ｔｏ ｄｅｔｅｃｔ ｔｈｅ
ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ ｅｎｚｙｍｅｓ ａｎｄ ｂｉｏｆｉｌｍ ｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｓｔｒａｉｎ ＮＦ８３⁃１． Ｔｈｅ ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｉｃ ｅｘａｍｉｎａｔｉｏｎ ｉｎ ｖｉｔｒｏ
ａｎｄ ｃｏｎｔｒｏｌ ｏｆ ｔｏｍａｔｏ ｓｅｅｄｌｉｎｇ ｄａｍｐｉｎｇ ｏｆｆ ｉｎ ｐｏｔ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ ｗｉｔｈ ｓｔｒａｉｎ ＮＦ８３⁃１ ｗｅｒｅ ｔｅｓｔｅｄ ｉｎ ｔｈｉｓ ｓｔｕｄｙ．
Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｓｔｒａｉｎ ＮＦ８３⁃１ ｗａｓ ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ ａｓ Ｄｅｌｆｔｉａ ｔｓｕｒｕｈａｔｅｎｓｉｓ． Ｓｔｒａｉｎ ＮＦ８３⁃１ ｈａｄ ｔｈｅ
ａｂｉｌｉｔｙ ｔｏ ｐｒｏｄｕｃｅ ｃｅｌｌｕｌａｓｅ ａｎｄ ｓｉｄｅｒｏｐｈｏｒｅ． Ｓｔｒａｉｎ ＮＦ８３⁃１ ｃｏｕｌｄ ｆｏｒｍ ａｎｄ ｒｅｔａｉｎ ａ ｔｈｉｃｋ ｂｉｏｆｉｌｍ ｏｎ ｔｈｅ
ｔｕｂｅ ｗａｌｌ ｏｒ ｗｅｌｌ ｗａｌｌ． Ｓｔｒａｉｎ ＮＦ８３⁃１ ｈａｄ ａ ｓｔｒｏｎｇ ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｉｃ ａｃｔｉｖｉｔｙ ａｇａｉｎｓｔ ｔｈｅ ｇｒｏｗｔｈ ｏｆ ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ
ｆｕｎｇｉ ｓｕｃｈ ａｓ Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ ｓｏｌａｎｉ， Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ｂｒａｓｓｉｃａｅ， Ｓｃｌｅｒｏｔｉｎｉａ ｓｃｌｅｒｏｔｉｏｒｕｍ， Ｃｏｌｌｅｔｏｔｒｉｃｈｕｍ
ｇｌｏｅｏｓｐｏｒｉｏｉｄｅｓ， ａｎｄ ｂａｃｔｅｒｉａ ｓｕｃｈ ａｓ Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ ｏｒｙｚａｅ ｐｖ． ｏｒｙｚｉｃｏｌａ， Ｅｒｗｉｎｉａ ａｍｙｌｏｖｏｒａ， Ｒａｌｓｔｏｎｉａ
ｓｏｌａｎａｃｅａｒｕｍ ａｎｄ Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｍｅｇａｔｅｒｉｕｍ． Ｔｈｅ ｆｅｒｍｅｎｔｅｄ ｌｉｑｕｉｄ ａｎｄ １００ ｔｉｍｅｓ ｄｉｌｕｔｉｏｎ ｏｆ ｓｔｒａｉｎ ＮＦ８３⁃１
ｃｏｕｌｄ ｃｏｎｔｒｏｌ ｔｏｍａｔｏ ｓｅｅｄｌｉｎｇ ｄａｍｐｉｎｇ ｏｆｆ ｅｆｆｅｃｔｉｖｅｌｙ ｗｉｔｈ ａ ｃｏｎｔｒｏｌ ｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙ ｏｆ ４８􀆰 ７８％ － ５７􀆰 ６９％ ａｎｄ
２６􀆰 ８３％ －３６􀆰 ５４％ ． Ｔｈｅｒｅｆｏｒｅ， ｔｈｅ ｓｔｒａｉｎ ＮＦ８３⁃１ ｗａｓ ａ ｖｅｒｙ ｐｒｏｍｉｓｉｎｇ ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｉｃ ｂａｃｔｅｒｉｕｍ．
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： Ｄｅｌｆｔｉａ ｔｓｕｒｕｈａｔｅｎｓｉｓ； ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ； ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｉｃ ａｃｔｉｖｉｔｙ； ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ ｅｎｚｙｍｅ； ｂｉｏｆｉｌｍ
　 　 植物病害生物防治是利用有益微生物及其代谢
产物对植物病害进行有效的防治，其中有益微生物
主要有细菌、真菌、放线菌等（邱德文，２０１０）。 生防
细菌具有生长速度快、易培养等特点，目前研究和应
用较多的种类主要包括芽胞杆菌属 Ｂａｃｉｌｌｕｓ（齐爱勇
等，２０１１ ）、假单胞菌属 Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ （ Ｙｉｎ ｅｔ ａｌ． ，
２０１３）、溶杆菌属 Ｌｙｓｏｂａｃｔｅｒ（Ｑｉａｎ ｅｔ ａｌ． ，２００９）等。
戴尔福特菌属 Ｄｅｌｆｔｉａ 是 １９９９ 年由澳大利亚学者
Ｗｅｎ ｅｔ ａｌ． （１９９９）在 １６Ｓ ｒＲＮＡ基因序列分析的基础
上建立的一个新菌属，也具有一定的生防潜力。 秦
磊等（２００２）分离鉴定的拮抗细菌食酸戴尔福特菌
Ｄ． ａｃｉｄｏｖｏｒａｎｓ ＳＴＲ Ａ可显著抑制玉米小斑病菌 Ｃｏ⁃
ｃｈｌｉｏｂｏｌｕｓ ｈｅｔｅｒｏｓｔｒｏｐｈｕｓ 和水稻恶苗病菌 Ｇｉｂｂｅｒｅｌｌａ
ｆｕｊｉｋｕｒｏｉ的生长。 Ｈａｎ ｅｔ ａｌ． （２００５）报道的一株水稻
内生的戴尔福特菌 Ｄ． ｔｓｕｒｕｈａｔｅｎｓｉｓ ＨＲ４ 可抑制多种
病原菌的生长，包括水稻纹枯病菌 Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ ｓｏｌａ⁃
ｎｉ、稻瘟病菌 Ｐｙｒｉｃｕｌａｒｉａ ｇｒｉｓｅａ 和水稻白叶枯病菌
Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ ｏｒｙｚａｅ ｐｖ． ｏｒｙｚａｅ 以及黄瓜枯萎病菌
Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｏｘｙｓｐｏｒｉｕｍ、辣椒炭疽病菌 Ｃｏｌｌｅｔｏｔｒｉｃｈｕｍ
ｃａｐｓｉｃｉ 和黄瓜疫霉病菌 Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｍｅｌｏｎｉｓ 等。
Ａｍéｌｉｅ ｅｔ ａｌ． （２００７）研究发现，在马铃薯根围的几种
戴尔福特菌均可以降解马铃薯黑胫病菌 Ｐｅｃｔｏｂａｃｔｅ⁃
ｒｉｕｍ ａｔｒｏｓｅｐｔｉｃｕｍ的致病信号分子，干扰病原菌的致
病信号传导，减少马铃薯黑胫病的发生。
菌株 ＮＦ８３⁃１ 是一株分离自新疆自治区伊犁州
薰衣草根际土壤中的拮抗菌，本课题组前期研究结
果表明，菌株 ＮＦ８３⁃１ 属于戴尔福特菌 Ｄｅｌｆｔｉａ ｓｐ． ，且
在室内平板试验中对立枯丝核菌 Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ ｓｏｌａｎｉ、
甘蓝黑斑病菌 Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ｂｒａｓｓｉｃａｅ 等病原真菌具有
较好的拮抗作用。 本研究对菌株 ＮＦ８３⁃１ 进行种属
鉴定，通过检测该菌株产生胞外酶的种类及生物膜
的形成变化，初步探究其生防机理；并通过室内平板
试验测定菌株 ＮＦ８３⁃１ 对多种植物病原真菌及细菌
的抑菌活性，室外盆栽试验测定其对番茄立枯病的
防治效果，评价该菌株的生防能力，以期为菌株
ＮＦ８３⁃１ 的生防应用提供理论基础。
１ 材料与方法
１􀆰 １ 材料
供试菌株及植物：菌株 ＮＦ８３⁃１ 由本试验室分离
获得；梨胶孢炭疽病菌 Ｃ． ｇｌｏｅｏｓｐｏｒｉｏｉｄｅｓ、水稻纹枯
病菌、甘蓝黑斑病菌、油菜菌核病菌 Ｓｃｌｅｒｏｔｉｎｉａ ｓｃｌｅ⁃
ｒｏｔｉｏｒｕｍ、革兰氏阴性病原细菌有梨火疫病菌 Ｅｒｗｉｎ⁃
ｉａ ａｍｙｌｏｖｏｒａ、水稻细菌性条斑病菌 Ｘ． ｏｒｙｚａｅ ｐｖ．
ｏｒｙｚｉｃｏｌａ、番茄青枯病菌 Ｒａｌｓｔｏｎｉａ ｓｏｌａｎａｃｅａｒｕｍ、革兰
氏阳性细菌巨大芽胞杆菌 Ｂ． ｍｅｇａｔｅｒｉｕｍ 均由本实
验室保存并提供。 番茄品种江蔬 １ 号，由江苏省农
业科学院蔬菜研究所提供。
培养基：马铃薯葡萄糖琼脂 （ ｐｏｔａｔｏ ｄｅｘｔｒｏｓｅ
ａｇａｒ，ＰＤＡ）培养基：马铃薯 ２００ ｇ、葡萄糖 ２０ ｇ、琼脂
粉 ２０ ｇ、蒸馏水 １ ０００ ｍＬ； ＬＢ（Ｌｕｒｉａ⁃Ｂｅｒｔａｎｉ）培养
基：胰蛋白胨 １０ ｇ、酵母粉 ５ ｇ、ＮａＣｌ １０ ｇ、蒸馏水
１ ０００ ｍＬ；蛋白酶检测培养基：脱脂奶粉 １００ ｇ、琼脂
２０ ｇ、蒸馏水１ ０００ ｍＬ；几丁质酶检测培养基：胶状
几丁质 １５ ｇ、ＭｇＳＯ４·７Ｈ２Ｏ ０􀆰 ５ ｇ、ＦｅＳＯ４·７Ｈ２Ｏ ０􀆰 ０１
ｇ、Ｋ２ＨＰＯ４ ０􀆰 ７ ｇ、ＫＨ２ＰＯ４ ０􀆰 ３ ｇ、琼脂 ２０ ｇ、蒸馏水
１ ０００ ｍＬ；纤维素酶检测培养基：蛋白胨 １０ ｇ、酵母
粉 １０ ｇ、羧甲基纤维素钠 １０ ｇ、ＮａＣｌ ５ ｇ、ＫＨ２ＰＯ４ １ ｇ、
琼脂 ２０ ｇ、蒸馏水 １ ０００ ｍＬ；嗜铁素检测培养基：
ＣＡＳ ６０􀆰 ５ ｍｇ、ＦｅＣｌ·６Ｈ２Ｏ ０􀆰 ２７ ｇ、ＨＤＴＭＡ ７２􀆰 ９ ｍｇ、
琼脂 ２０ ｇ、蒸馏水 １ ０００ ｍＬ；ＭＳｇｇ 培养基：磷酸钾 ５
ｍｍｏｌ ／ Ｌ、 Ｍｏｐｓ （ ｐＨ ＝ ７􀆰 ０ ） １００ ｍｍｏｌ ／ Ｌ、 ＭｇＣｌ２ ２
ｍｍｏｌ ／ Ｌ、ＣａＣｌ２ ７００ μｍｏｌ ／ Ｌ、ＦｅＣｌ３ ５０ μｍｏｌ ／ Ｌ、ＭｎＣｌ２
５０ μｍｏｌ ／ Ｌ、ＺｎＣｌ２ １ μｍｏｌ ／ Ｌ、硫胺素 ２ μｍｏｌ ／ Ｌ、甘油
０􀆰 ５％ 、谷氨酸 ５ ｇ ／ Ｌ、色氨酸 ５０ ｍｇ ／ Ｌ、苯丙氨酸 ５０
ｍｇ ／ Ｌ）（Ｂｒａｎｄａ ｅｔ ａｌ． ，２００１）。
试剂：ＤＮＡ Ｍａｒｋｅｒ、Ｔａｑ聚合酶，宝生物工程（大
连） 有限公司；细菌基因组 ＤＮＡ 提取试剂盒
（ＥａｓｙＰｕｒｅ Ｇｅｎｏｍｉｃ ＤＮＡ Ｋｉｔ），北京全式金生物技术
有限公司；其它试剂均为国产分析纯。
仪器：Ｈｉｔａｃｈｉ⁃７６５０ 透射电子显微镜，日立高新
技术（上海）国际贸易有限公司；Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ
ＭＫⅢ酶标仪，赛默飞世尔（上海）仪器有限公司；
ＤＹＹ⁃６Ｃ型电泳仪，北京市六一仪器厂。
１􀆰 ２ 方法
１􀆰 ２􀆰 １ 菌株 ＮＦ８３⁃１ 的种属鉴定
菌株 ＮＦ８３⁃１ 形态及生理生化特征测定：以划线
分离法在 ＬＢ 平板上划出菌株 ＮＦ８３⁃１ 单菌落，观察
单菌落的形态特征，以透射电子显微镜观察菌株
ＮＦ８３⁃１ 的菌体细胞形态特征，参照《伯杰氏细菌鉴
定手册》（Ｊｏｈｎ ｅｔ ａｌ． ，１９９４）进行生化活性测定。
菌株 ＮＦ８３⁃１的 １６Ｓ ｒＲＮＡ 基因序列分析：以分子
９４２２ 期 梁雪杰等： 一株戴尔福特菌 ＮＦ８３⁃１ 的鉴定及评价
试剂盒提取的菌株 ＮＦ８３⁃１ 基因组 ＤＮＡ为模板，用细
菌通用引物扩增 １６Ｓ ｒＲＮＡ 基因序列。 引物 ＢＳＦ（２７
Ｆ）：５′⁃ＡＧＡＧＴＴＴＧＡＴＣＣＴＧＧＣＴＣＡＧ⁃３′；ＢＳＲ （１４９２ Ｒ）：
５′⁃ＴＡＣＧＧＹＴＡＣＣＴＴＧＴＴＡＣＧＡＣＴＴ⁃３′。 ＰＣＲ 反应条件：
９５℃ ４ ｍｉｎ；９４℃ ４０ ｓ，５５℃ ４５ ｓ，７２℃ １ ｍｉｎ，２５个循环；
７２℃ ５ ｍｉｎ；ＰＣＲ产物经１％琼脂糖凝胶电泳验证后，送
上海生工生物工程技术服务有限公司测序，所得 １６Ｓ
ｒＲＮＡ基因序列在 ＮＣＢＩ 核酸数据库中采用 ＢＬＡＳＴ 程
序进行同源性搜索。 测序结果递交 ＧｅｎＢａｎｋ获取登录
号，并通过软件 ＣｌｕｓｔａｌＸ和ＭＥＧＡ ４􀆰 １采用邻接法构建
系统进化树。
１􀆰 ２􀆰 ２ 菌株 ＮＦ８３⁃１ 分泌的胞外酶检测
参考方中达（２００７）的方法制备菌株 ＮＦ８３⁃１ 菌
液：挑取一环 ＮＦ８３⁃１ 菌苔接种于 １００ ｍＬ ＬＢ液体培
养基中，２８℃、１５０ ｒ ／ ｍｉｎ摇培 ２４ ｈ，ＮＦ８３⁃１菌液菌含
量为 １０８ ＣＦＵ ／ ｍＬ。 在蛋白酶、几丁质酶、纤维素酶
和嗜铁素检测平板中心点分别接 ５ μＬ ＮＦ８３⁃１菌液，
２８℃培养 ２ ～ ７ ｄ，观察蛋白酶、几丁质酶、纤维素酶
检测平板有无透明圈产生，嗜铁素检测平板有无黄
色晕圈产生。 每处理重复 ３ 次。
１􀆰 ２􀆰 ３ 菌株 ＮＦ８３⁃１ 生物膜形成能力检测
试管染色法：在试管中加入 ＭＳｇｇ培养基 １ ｍＬ，
按 １％接种量第 ２ 天接种 ＮＦ８３⁃１ 菌液，２８℃静置培
养，获得培养 １、２、３、４、５、６、７、８ ｄ 的菌液，同时细菌
在试管壁上形成生物膜。 弃去试管内培养液，以无
菌水冲洗，加入 １􀆰 ５ ｍＬ ０􀆰 １％结晶紫溶液染色 ４５
ｍｉｎ；弃去染液，再以无菌水洗 ３ 次，晾干。 ３ 次重
复，无菌水为空白对照。 观测不同培养时间生物膜
的染色情况。
９６ 孔板染色法：在 ９６ 孔板中加入 ＭＳｇｇ 培养基
１００ μＬ，接种量及培养方法同试管染色法，６ 次重
复。 弃去孔内培养液，无菌水洗 ２ 次。 每孔加入
２００ μＬ固定液（甲醇 ∶乙酸 ＝ ３ ∶ １）固定 ５ ｍｉｎ，弃去
液体，晾干。 然后每孔加入 ２００ μＬ结晶紫溶液染色
４５ ｍｉｎ；弃去染液，并以无菌水洗 ３ 次，晾干。 最后
每孔加入 ３００ μＬ ９５％乙醇去染色，静置 ２ ｈ，在酶标
仪 ５９０ ｎｍ测吸光度。 以不同培养天数为横坐标，以
ＯＤ５９０为纵坐标，绘制生物膜形成量的变化曲线。
１􀆰 ２􀆰 ４ 菌株 ＮＦ８３⁃１ 对供试菌株的拮抗性能测定
采用对峙生长法测定菌株 ＮＦ８３⁃１ 对供试病原
真菌的抑制作用（方中达，２００７）。 病原真菌梨胶孢
炭疽病菌、立枯丝核菌、甘蓝黑斑病菌和油菜菌核病
菌分别在 ＰＤＡ平板 ２８℃培养 ３ ～ ５ ｄ，沿菌落边缘以
６ ｍｍ灭菌打孔器打出菌饼。 将各病原真菌菌饼置
于空白 ＰＤＡ平板中心，在距平板中心 １ ／ ２ 半径处呈
十字形位置点接 ５ μＬ ＮＦ８３⁃１ 菌液，２８℃恒温培养，
设清水对照。 每处理重复 ３ 次。 待对照平板菌落将
长满时测量各处理病原菌菌落直径，计算抑制率。
抑制率 ＝ （对照病原菌菌落直径 －处理病原菌菌落
直径） ／对照病原菌菌落直径 × １００％ 。
各挑取一环梨火疫病菌、水稻细菌性条斑病菌、
番茄青枯病菌和巨大芽胞杆菌的菌苔接种于 １００
ｍＬ ＬＢ液体培养基中，２８℃、１５０ ｒ ／ ｍｉｎ摇培 ２４ ｈ，用
无菌水稀释至菌含量为 １０８ ＣＦＵ ／ ｍＬ。 吸取 ＮＦ８３⁃１
菌液 ５ μＬ点接在 ＬＢ平板中央，２８℃培养 ２４ ｈ。 每
处理重复 ３ 次。 用供试细菌的菌液瞬间喷雾后，
２８℃过夜培养，测定抑菌圈直径。
１􀆰 ２􀆰 ５ 菌株 ＮＦ８３⁃１ 对番茄立枯病的盆栽防效测定
将培养 ３ ｄ的立枯丝核菌菌饼与营养土以 １∶ ２５
和 １∶ ５０ 体积比混匀，分别制成重病土和轻病土，以
不加病菌菌饼的营养土为对照。 将 ３ 种土壤分别平
铺于秧盘（３０ ｃｍ × ２０ ｃｍ × ５ ｃｍ）中，每种土壤平
铺 ６ 秧盘，共计 １８ 秧盘。 每种土壤进行 ３ 种灌根处
理：ＮＦ８３⁃１ 发酵液原液（２８℃、１５０ ｒ ／ ｍｉｎ摇培 ２ ｄ）、
ＮＦ８３⁃１ 发酵液 １００ 倍稀释液、无菌水，每种灌根处
理重复 ２ 秧盘。 每秧盘播种 ５０ 粒番茄种子，播种后
灌根，浇灌量为 ２００ ｍＬ ／盘。 常规管理，待对照出苗
完全后调查各处理的出苗率，并计算防效。 出苗
率 ＝出苗数 ／播种总数 × １００％ ；防效 ＝ （处理出苗
率 －对照出苗率） ／对照出苗率 × １００％ 。
１􀆰 ３ 数据分析
采用 ＤＰＳ ７􀆰 ０５ 软件进行统计分析，应用 Ｄｕｎ⁃
ｃａｎ氏新复极差法进行差异显著性检验。
２ 结果与分析
２􀆰 １ 菌株 ＮＦ８３⁃１ 的种属鉴定
ＬＢ固体培养基上 ＮＦ８３⁃１ 菌落为乳白色，表面
光滑，菌落中间较厚，边缘不规则、较薄、似水渍状向
外弥散（图 １⁃ａ）。 透射电镜下菌体呈杆状，大小为
０􀆰 ９ ～ １􀆰 ２ μｍ ×２􀆰 ２ ～ ３􀆰 ４ μｍ，有鞭毛，无荚膜，无芽
孢（图 １⁃ｂ）。 菌株 ＮＦ８３⁃１ 为革兰氏阴性菌，氧化
酶、过氧化氢酶、接触酶、脂肪酶反应为阳性，不能产
生精氨酸双水解酶；能利用甘油、Ｄ⁃果糖、甘露糖
醇、Ｄ⁃色氨酸和 Ｌ⁃色氨酸等，不能利用 Ｄ⁃葡萄糖、乳
糖、淀粉、蔗糖、Ｌ⁃丝氨酸和 Ｌ⁃缬氨酸等；能够还原硝
酸盐，但不能进行反硝化作用。
　 　 测序获得菌株 ＮＦ８３⁃１ 的 １６Ｓ ｒＲＮＡ 基因序列，
片段大小为 １ ４４２ ｂｐ，递交至 ＧｅｎＢａｎｋ 获得的序列
０５２ 植　 物　 保　 护　 学　 报 ４３ 卷
图 １ 菌株 ＮＦ８３⁃１ 的菌落和菌体形态
Ｆｉｇ． １ Ｔｈｅ ｃｏｌｏｎｙ ａｎｄ ｃｅｌｌ ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ ｏｆ ｓｔｒａｉｎ ＮＦ８３⁃１
ａ： 菌株 ＮＦ８３⁃１ 菌落形态； ｂ： 透射电镜下观察菌株
ＮＦ８３⁃１ 细胞形态。 ａ： Ｔｈｅ ｃｏｌｏｎｙ ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ ｏｆ ｓｔｒａｉｎ
ＮＦ８３⁃１； ｂ： ｔｈｅ ｃｅｌｌ ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ ｏｆ ｓｔｒａｉｎ ＮＦ８３⁃１ ｕｎｄｅｒ ｔｈｅ
ｔｒａｎｓｍｉｓｓｉｏｎ ｅｌｅｃｔｒｏｎ ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ．
　
登录号为 ＫＪ４８９４２５。 将菌株 ＮＦ８３⁃１ 的 １６Ｓ ｒＲＮＡ
基因序列与 Ｄ． ｔｓｕｒｕｈａｔｅｎｓｉｓ Ｔ７、 Ｄ． ａｃｉｄｏｖｏｒａｎｓ
　 　 　 　 　 　
ＩＡＭ１２４０９、Ｄ． ｌｉｔｏｐｅｎａｅｉ ｗｓｗ⁃７ 等菌株的 １６Ｓ ｒＲＮＡ
基因序列进行同源性分析，并构建系统发育树（图
２），菌株 ＮＦ８３⁃１ 与 ３ 株 Ｄ． ｔｓｕｒｕｈａｔｅｎｓｉｓ菌株共同聚
成一个分支，其它的模式菌株则在各自的分支上，菌
株 ＮＦ８３⁃１ 与 Ｄ． ｔｓｕｒｕｈａｔｅｎｓｉｓ 菌株的同源性高达
９９％ 。 根据菌株 ＮＦ８３⁃１ 的细胞形态、生理生化特征
和 １６Ｓ ｒＲＮＡ 基因序列等综合分析，将菌株 ＮＦ８３⁃１
鉴定为戴尔福特菌 Ｄ． ｔｓｕｒｕｈａｔｅｎｓｉｓ。
２􀆰 ２ 菌株 ＮＦ８３⁃１ 分泌胞外酶的检测结果
在纤维素酶检测培养基上 ＮＦ８３⁃１ 菌落周围形
成透明圈（图 ３⁃ａ），在嗜铁素检测培养基上 ＮＦ８３⁃１
菌落周围形成黄色晕圈（图 ３⁃ｂ），说明菌株 ＮＦ８３⁃１
能分泌纤维素酶和嗜铁素。 菌株 ＮＦ８３⁃１ 在蛋白酶
和几丁质酶检测培养基上没有形成透明圈，说明菌
株 ＮＦ８３⁃１ 不能分泌蛋白酶和几丁质酶。
图 ２ 基于 １６Ｓ ｒＲＮＡ基因序列的菌株 ＮＦ８３⁃１ 及相关菌株的系统进化树
Ｆｉｇ． ２ Ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃ ｔｒｅｅ ｏｆ ｓｔｒａｉｎ ＮＦ８３⁃１ ａｎｄ ｒｅｌａｔｅｄ ｓｔｒａｉｎｓ ｂａｓｅｄ ｏｎ １６Ｓ ｒＲＮＡ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｎａｌｙｓｉｓ
　
图 ３ 菌株 ＮＦ８３⁃１ 分泌的胞外酶检测结果
Ｆｉｇ． ３ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ ｅｎｚｙｍｅｓ ｐｒｏｄｕｃｅｄ
ｂｙ ｓｔｒａｉｎ ＮＦ８３⁃１
ａ： 纤维素酶检测； ｂ： 嗜铁素检测。 ａ： Ｃｅｌｌｕｌａｓｅ
ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ； ｂ： ｓｉｄｅｒｏｐｈｏｒｅ ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ．
　
２􀆰 ３ 菌株 ＮＦ８３⁃１ 生物膜的形成能力
试管染色法结果表明，培养 １ ｄ 的菌液已能观
测到微量的生物膜，且生物膜的形成量随培养天数
的增加而增加，在培养 ４、５、６ ｄ 时能看到较厚的生
物膜，第 ６ 天生物膜的形成量达到最大，７、８ ｄ 时生
物膜形成量减少（图 ４）。
　 　 ９６ 孔板染色法的结果表明，培养 １ ｄ时 ＯＤ５９０为
０􀆰 １０３３，且 ＯＤ５９０随着培养天数增加呈快速上升趋
势。 培养 ４ ｄ 时，ＯＤ５９０出现缓慢增长，ＯＤ５９０值最大
值出现在第 ６ 天，为 ０􀆰 １５５２，随后 ＯＤ５９０开始显著下
降。 ＯＤ５９０变化趋势与试管中生物膜形成量的变化
趋势一致（图 ５）。
２􀆰 ４ 菌株 ＮＦ８３⁃１ 对供试菌株的拮抗性能
菌株 ＮＦ８３⁃１ 对立枯丝核菌、甘蓝黑斑病菌和油
菜菌核病菌有较强的抑制作用，抑制率分别为
５８􀆰 ２５％ 、５４􀆰 ３３％和 ５１􀆰 １２％ ，可以形成明显的抑菌
带；而对梨胶孢炭疽病菌的抑制作用相对较弱，抑制
１５２２ 期 梁雪杰等： 一株戴尔福特菌 ＮＦ８３⁃１ 的鉴定及评价
图 ４ 试管结晶紫染色法检测菌株 ＮＦ８３⁃１ 生物膜的形成
Ｆｉｇ． ４ Ｔｈｅ ｂｉｏｆｉｌｍ ｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｏｆ ｓｔｒａｉｎ ＮＦ８３⁃１ ｗｉｔｈ ｃｒｙｓｔａｌ ｖｉｏｌｅｔ ｓｔａｉｎｉｎｇ ｍｅｔｈｏｄ ｉｎ ｔｅｓｔ ｔｕｂｅｓ
ａ： 结晶紫染色前； ｂ： 结晶紫染色后。 ａ： Ｂｅｆｏｒｅ ｓｔａｉｎｉｎｇ； ｂ： ａｆｔｅｒ ｓｔａｉｎｉｎｇ．
　
率为 ４２􀆰 ３８％ （表 １）。
菌株 ＮＦ８３⁃１ 对 ４ 种供试细菌均有抑制作用，可
形成明显的抑菌圈，其中对水稻细菌性条斑病菌的
抑制作用最强，抑菌圈直径为 ２８􀆰 ０３ ｍｍ，其次对革
兰氏阳性细菌巨大芽胞杆菌也具有较好的抑制作
用，抑菌圈直径为 ２２􀆰 ００ ｍｍ（表 １）。
２􀆰 ５ 菌株 ＮＦ８３⁃１ 对番茄立枯病的盆栽防效
轻病土、重病土处理中番茄种子的出苗率均明显
小于无病土处理，土壤中接种立枯丝核菌菌块对番茄
种子有致病性，显著影响其出苗率。 菌株 ＮＦ８３⁃１ 发
酵液对番茄立枯病有明显的防治作用，轻病土处理和
重病土处理中发酵液原液比 １００ 倍稀释液的防效好。
菌株 ＮＦ８３⁃１发酵液原液和 １００ 倍稀释液在轻病土处
理中的防效分别为 ５７􀆰 ６９％和 ３６􀆰 ５４％，在重病土处
理中的防效分别为 ４８􀆰 ７８％和 ２６􀆰 ８３％，在无病土处
理中则能促进种子出苗（表 ２）。
图 ５ 以 ９６ 孔板染色法测定菌株 ＮＦ８３⁃１ 生物膜
的形成量变化
Ｆｉｇ． ５ Ｔｈｅ ｂｉｏｆｉｌｍ ｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｏｆ ｓｔｒａｉｎ ＮＦ８３⁃１
ｗｉｔｈ ｃｒｙｓｔａｌ ｖｉｏｌｅｔ ｓｔａｉｎｉｎｇ ｉｎ ９６⁃ｗｅｌｌ ｐｌａｔｅｓ
图中数据为平均数 ±标准差。 不同字母表示经 Ｄｕｎｃａｎ
氏新复极差法检验在 Ｐ ＜ ０􀆰 ０５ 水平差异显著。 Ｄａｔａ ａｒｅ
ｍｅａｎ ± ＳＤ． Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｌｅｔｔｅｒｓ ｉｎｄｉｃａｔｅ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ ａｔ Ｐ ＜
０􀆰 ０５ ｌｅｖｅｌ ｂｙ Ｄｕｎｃａｎ’ｓ ｎｅｗ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｒａｎｇ ｔｅｓｔ．
　
表 １ 菌株 ＮＦ８３⁃１ 对供试真菌和细菌的抑菌作用
Ｔａｂｌｅ １ Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙ ｏｆ ｓｔｒａｉｎ ＮＦ８３⁃１ ａｇａｉｎｓｔ ｔｈｅ ｔｅｓｔｅｄ ｆｕｎｇｉ ａｎｄ ｂａｃｔｅｒｉａ
　 　 供试真菌
　 　 Ｆｕｎｇｕｓ
菌落生长直径 （ｍｍ）
Ｄｉａｍｅｔｅｒ ｏｆ ｃｏｌｏｎｙ
抑菌率 （％ ）
Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｒａｔｅ
供试细菌
Ｂａｃｔｅｒｉｕｍ
抑菌圈直径 （ｍｍ）
Ｄｉａｍｅｔｅｒ ｏｆ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｚｏｎｅ
立枯丝核菌
Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ ｓｏｌａｎｉ
３３􀆰 １７ ± １􀆰 ０４ ａ ５８􀆰 ２５ ± １􀆰 ３１ ａ 水稻细菌性条斑病菌
Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ ｏｒｙｚａｅ ｐｖ． ｏｒｙｚｉｃｏｌａ
２８􀆰 ０３ ± ０􀆰 ５０ ａ
甘蓝黑斑病菌
Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ｂｒａｓｓｉｃａｅ
３５􀆰 ８７ ± １􀆰 ５８ ｂ ５４􀆰 ３３ ± ２􀆰 ０１ ｂ 梨火疫病菌
Ｅｒｗｉｎｉａ ａｍｙｌｏｖｏｒａ
２０􀆰 ８３ ± ０􀆰 ８５ ｂ
油菜菌核病菌
Ｓｃｌｅｒｏｔｉｎｉａ ｓｃｌｅｒｏｔｉｏｒｕｍ
３９􀆰 １３ ± １􀆰 ６１ ｃ ５１􀆰 １２ ± ２􀆰 ０１ ｃ 番茄青枯病菌
Ｒａｌｓｔｏｎｉａ ｓｏｌａｎａｃｅａｒｕｍ
１５􀆰 ６０ ± ０􀆰 ３６ ｃ
梨胶孢炭疽病菌
Ｃｏｌｌｅｔｏｔｒｉｃｈｕｍ ｇｌｏｅｏｓｐｏｒｉｏｉｄｅｓ
４５􀆰 ３７ ± ２􀆰 ０５ ｄ ４２􀆰 ３８ ± ２􀆰 ６０ ｄ 巨大芽胞杆菌
Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｍｅｇａｔｅｒｉｕｍ
２２􀆰 ００ ± ０􀆰 ８０ ｂ
　 　 表中数据为平均数 ±标准差。 同列不同字母表示经 Ｄｕｎｃａｎ 氏新复极差法检验在 Ｐ ＜ ０􀆰 ０５ 水平差异显著。 Ｄａｔａ ａｒｅ
ｍｅａｎ ± ＳＤ． Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｌｅｔｔｅｒｓ ｉｎ ｔｈｅ ｓａｍｅ ｃｏｌｕｍｎ ｉｎｄｉｃａｔｅ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ ａｔ Ｐ ＜ ０􀆰 ０５ ｌｅｖｅｌ ｂｙ Ｄｕｎｃａｎ’ｓ ｎｅｗ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｒａｎｇ ｔｅｓｔ．
３ 讨论
自 １９９９ 年建属以来，戴尔福特菌属已确立的种
有 Ｄ． ａｃｉｄｏｖｏｒａｎｓ（Ｗｅｎ ｅｔ ａｌ． ，１９９９）、Ｄ． ｔｓｕｒｕｈａｔｅｎ⁃
ｓｉｓ（Ｓｈｉｇｅｍａｔｓｕ ｅｔ ａｌ． ，２００３）、Ｄ． ｌａｃｕｓｔｒｉｓ（ Ｊｏｒｇｅｎｓｅｎ
ｅｔ ａｌ． ，２００９）和 Ｄ． ｌｉｔｏｐｅｎａｅｉ（Ｃｈｅｎ ｅｔ ａｌ． ，２０１２ａ），其
中 Ｄ． ａｃｉｄｏｖｏｒａｎｓ为模式种。 本研究根据生理生化
特征和 １６Ｓ ｒＲＮＡ基因序列分析将拮抗菌株 ＮＦ８３⁃１
２５２ 植　 物　 保　 护　 学　 报 ４３ 卷
　 　 　 表 ２ 菌株 ＮＦ８３⁃１ 对番茄立枯病的盆栽防效
Ｔａｂｌｅ ２ Ｃｏｎｔｒｏｌ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｉｃ ｓｔｒａｉｎ ＮＦ８３⁃１ ａｇａｉｎｓｔ Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ ｓｏｌａｎｉ ｉｎ ｐｏｔ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓ ％
处理
Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ
轻病土 Ｌｅｓｓ ｉｎｏｃｕｌａｔｉｏｎ ｓｏｉｌ 重病土 Ｈｅａｖｙ ｉｎｏｃｕｌａｔｉｏｎ ｓｏｉｌ 无病土 Ｈｅａｌｔｈｙ ｓｏｉｌ
出苗率
Ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｒａｔｅ
防效
Ｃｏｎｔｒｏｌ ｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙ
出苗率
Ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｒａｔｅ
防效
Ｃｏｎｔｒｏｌ ｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙ
出苗率
Ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｒａｔｅ
ＮＦ８３⁃１发酵液原液
ＮＦ８３⁃１ ｆｅｒｍｅｎｔｅｄ ｌｉｑｕｉｄ
８２􀆰 ０ ± ２􀆰 ８ ａ ５７􀆰 ６９ ± ５􀆰 ４４ ａ ６１􀆰 ０ ± １􀆰 ４ ａ ４８􀆰 ７８ ± ３􀆰 ４５ ａ ９１􀆰 ０ ± １􀆰 ４ ａ
ＮＦ８３⁃１发酵液 １００倍稀释液
ＮＦ８３⁃１ １００ ｔｉｍｅｓ ｄｉｌｕｔｉｏｎ
７１􀆰 ０ ± １􀆰 ４ ｂ ３６􀆰 ５４ ± ２􀆰 ７２ ｂ ５２􀆰 ０ ± ２􀆰 ８ ｂ ２６􀆰 ８３ ± ６􀆰 ９０ ｂ ９０􀆰 ０ ± ２􀆰 ８ ａ
清水 Ｗａｔｅｒ ５２􀆰 ０ ± ２􀆰 ８ ｃ — ４１􀆰 ０ ± １􀆰 ４ ｃ — ８２􀆰 ０ ± ２􀆰 ８ ｂ
　 　 表中数据为平均数 ±标准差。 同列数据后不同字母表示经 Ｄｕｎｃａｎ氏新复极差法检验在 Ｐ ＜ ０􀆰 ０５水平差异显著。 Ｄａｔａ ａｒｅ ｍｅａｎ ±
ＳＤ． Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｌｅｔｔｅｒｓ ｉｎ ｔｈｅ ｓａｍｅ ｃｏｌｕｍｎ ｉｎｄｉｃａｔｅ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ ａｔ Ｐ ＜ ０􀆰 ０５ ｌｅｖｅｌ ｂｙ Ｄｕｎｃａｎ’ｓ ｎｅｗ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｒａｎｇ ｔｅｓｔ．
鉴定为 Ｄ． ｔｓｕｒｕｈａｔｅｎｓｉｓ；通过选择性培养基检测到
菌株 ＮＦ８３⁃１ 能分泌纤维素酶和嗜铁素。 唐家斌等
（２００２）发现有较高纤维素酶活性的木霉、类木霉生
防菌对水稻纹枯病菌有较好的抑菌作用；谭周进等
（２００４）认为嗜铁素能特异地螯合铁离子，生防菌可
通过分泌嗜铁素与病原菌竞争铁离子从而抑制病原
菌的生长繁殖；Ｒａｎ ｅｔ ａｌ． （２００５）研究发现，假单胞
菌分泌的嗜铁素是抑制桉树灰霉病菌的重要因子，
且荧光假单胞菌 ＷＣＳ３７４ｒ 和恶臭假单胞菌
ＷＣＳ３５８ｒ 可通过对铁离子的竞争作用抑制灰霉病
菌的生长。 因此，检测菌株 ＮＦ８３⁃１ 胞外酶的产生和
分泌，有利于其生防机制的深入研究。
细菌生物膜的检测方法主要有染色法、菌体计
数法、荧光法及电子显微镜观察等方法（李京宝等，
２００７），其中试管结晶紫染色法和 ９６ 孔板染色法在
生物膜的研究中应用较多。 试管结晶紫染色法操作
简便，可快速直接定性观测到生物膜的形成变化。
９６ 孔板染色法比试管染色法操作更便捷且读数结
果准确。 本研究用上述 ２ 种染色方法测得的菌株
ＮＦ８３⁃１ 生物膜的变化趋势是一致的。 拮抗菌一般
可在植物根表或体表形成生物膜，从而具有较强的
定殖能力，保护植物抵抗病原菌侵染、促进植物生长
（Ｂａｉｓ ｅｔ ａｌ． ， ２００４）。 Ｃｈｅｎ ｅｔ ａｌ． （２０１２ｂ）构建了菌
株枯草芽胞杆菌 Ｂ． ｓｕｂｔｉｌｉｓ 的生物膜增强和减弱突
变体，并检测了突变体对青枯病菌的生防能力，发现
生物膜的形成能力与生防效果呈正相关。 本研究结
果显示菌株 ＮＦ８３⁃１ 形成生物膜的能力较强，研究其
在作物根围或组织的定殖能力以及定殖能力与生防
效果的相关性对其生防应用至关重要。
戴尔福特菌属菌株生防应用的报道中，秦磊等
（２００２）发现 Ｄ． ａｃｉｄｏｖｏｒａｎｓ ＳＴＲ Ａ 在室内平板试验
中对玉米小斑病菌和水稻恶苗病菌有较好的抑制作
用；Ｈａｎ ｅｔ ａｌ． （２００５）报道 Ｄ． ｔｓｕｒｕｈａｔｅｎｓｉｓ ＨＲ４ 在室
内平板试验中可抑制水稻纹枯病菌、稻瘟病菌、黄瓜
枯萎病菌等多种病原真菌的生长。 本研究室内平板
抑菌试验结果表明 Ｄ． ｔｓｕｒｕｈａｔｅｎｓｉｓ ＮＦ８３⁃１ 不仅能
抑制立枯丝核菌、甘蓝黑斑病菌及油菜菌核病菌等
病原真菌的生长，对水稻细菌性条斑病菌、梨火疫病
菌及番茄青枯病菌等多种病原细菌也有较好的抑制
作用，是一株具有广谱抑菌活性的拮抗菌，其中对立
枯丝核菌的抑制作用最强，抑制率达 ５８􀆰 ２５％。 本研
究盆栽试验也表明，菌株 ＮＦ８３⁃１ 对由立枯丝核菌引
起的番茄立枯病有较好的防效，在轻病土处理中，菌
株 ＮＦ８３⁃１发酵液原液对番茄立枯病的盆栽防效可达
５７􀆰 ６９％，在重病土处理中防效仍达到 ４８􀆰 ７８％。
已报道的戴尔福特菌属菌株多为苯胺等有害有
机物的降解菌（Ｚｈａｎｇ ｅｔ ａｌ． ，２０１０；Ｙａｎ ｅｔ ａｌ． ，２０１１；
Ｊｉｍｅｎｅｚ ｅｔ ａｌ． ，２０１２）。 此外，戴尔福特菌属的细菌
还可降解残留于土壤中的辛硫磷等农药（沈雨佳
等，２００７）。 本实验室前期研究也发现菌株 ＮＦ８３⁃１
对苯胺、高效氯氟氰菊酯等有害物质或农药有很强
的耐受性，耐受量均达 １ ０００ ｍｇ ／ ｍＬ 以上。 本试验
结果表明菌株 ＮＦ８３⁃１ 具有较好的生防潜力，如果还
能够生物降解有害物质或农药，改善土壤环境，将有
利于进一步拓宽其生防应用范围。
参 考 文 献 （Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅｓ）
Ａｍéｌｉｅ Ｃ， Ｓｔéｐｈａｎｉｅ Ｄ， Ｃａｒｏｌｉｎｅ Ｋ， Ｘａｖｉｅｒ Ｌ， Ｄｅｎｉｓ Ｆ． ２００７．
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３５２２ 期 梁雪杰等： 一株戴尔福特菌 ＮＦ８３⁃１ 的鉴定及评价
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（责任编辑：高　 峰）
４５２ 植　 物　 保　 护　 学　 报 ４３ 卷