全 文 ：第 源员 卷摇 第 员 期
圆园员源 年 圆 月
植摇 物摇 保摇 护摇 学摇 报
粤悦栽粤 孕匀再栽韵孕匀再蕴粤悦陨悦粤 杂陨晕陨悦粤
灾燥造援 源员摇 晕燥援 员
云藻遭援 摇 圆园员源
摇
基金项目院 国家野愿远猿冶项目渊圆园员圆粤粤员园员缘园圆冤袁公益性行业渊农业冤科研专项渊圆园员员园猿园圆园冤袁农业部园艺作物生物学与种质创制综合性重
点实验室
作者简介院 唐小凤袁女袁员怨愿愿年生袁硕士研究生袁研究方向为蔬菜害螨综合治理袁 耘鄄皂葬蚤造院 贼曾枣赠赠圆园员圆岳 员远猿援 糟燥皂
鄢通讯作者渊粤怎贼澡燥则 枣燥则 糟燥则则藻泽责燥灶凿藻灶糟藻冤袁 耘鄄皂葬蚤造院 憎葬灶早泽澡葬燥造蚤岳 糟葬葬泽援 糟灶
收稿日期院 圆园员猿 原 园怨 原 圆远
二斑叶螨对阿维菌素的抗药性及抗性
基因的 孕粤杂粤检测技术
唐小凤摇 王少丽鄢摇 张友军摇 吴青君摇 谢摇 文
渊中国农业科学院蔬菜花卉研究所袁 北京 员园园园愿员冤
摘要院 为了明确二斑叶螨 栽藻贼则葬灶赠糟澡怎泽 怎则贼蚤糟葬藻 运燥糟澡对阿维菌素的抗性水平袁采用玻片浸渍法测定了
北京 源 个地区二斑叶螨雌成螨对阿维菌素的抗药性袁建立了特异性等位基因 孕悦砸渊孕粤杂粤冤方法袁并
检测了二斑叶螨谷氨酸门控氯离子通道渊郧造怎悦造冤基因片段上 郧猿圆猿阅 的突变频率遥 结果显示袁北京
昌平尧海淀尧密云和怀柔 源 个田间二斑叶螨种群对阿维菌素均达极高抗性水平袁其中昌平种群抗性
最高袁蕴悦缘园值为 源源愿援 怨猿 皂早 辕 蕴袁抗性倍数为 源怨愿愿援 员员 倍遥 室内敏感种群未见抗性个体袁昌平和密云种
群 郧猿圆猿阅等位基因突变频率为 员园园援 园园豫 袁怀柔和海淀种群分别为 愿远援 圆缘豫和 怨园援 园园豫 遥 北京 源 个
地区二斑叶螨种群对阿维菌素达极高抗性水平袁抗性基因的突变频率也很高袁表明阿维菌素不适
宜用来防治这些地区的二斑叶螨种群遥
关键词院 二斑叶螨曰 阿维菌素曰 抗药性曰 谷氨酸门控氯离子通道曰 郧猿圆猿阅点突变
粤遭葬皂藻糟贼蚤灶 则藻泽蚤泽贼葬灶糟藻 燥枣 栽藻贼则葬灶赠糟澡怎泽 怎则贼蚤糟葬藻 葬灶凿 凿藻贼藻糟贼蚤燥灶 枣燥则
则藻泽蚤泽贼葬灶糟藻鄄则藻造葬贼藻凿 早藻灶藻 遭赠 孕粤杂粤 贼藻糟澡灶蚤择怎藻
栽葬灶早 载蚤葬燥枣藻灶早摇 宰葬灶早 杂澡葬燥造蚤鄢摇 在澡葬灶早 再燥怎躁怎灶摇 宰怎 匝蚤灶早躁怎灶摇 载蚤藻 宰藻灶
渊陨灶泽贼蚤贼怎贼藻 燥枣 灾藻早藻贼葬遭造藻泽 葬灶凿 云造燥憎藻则泽袁 悦澡蚤灶藻泽藻 粤糟葬凿藻皂赠 燥枣 粤早则蚤糟怎造贼怎则葬造 杂糟蚤藻灶糟藻泽袁 月藻蚤躁蚤灶早 员园园园愿员袁 悦澡蚤灶葬冤
粤遭泽贼则葬糟贼院 栽燥 藻泽贼蚤皂葬贼藻 贼澡藻 葬遭葬皂藻糟贼蚤灶 则藻泽蚤泽贼葬灶糟藻 造藻增藻造 燥枣 栽藻贼则葬灶赠糟澡怎泽 怎则贼蚤糟葬藻 运燥糟澡袁 遭蚤燥葬泽泽葬赠 憎葬泽
糟燥灶凿怎糟贼藻凿 葬早葬蚤灶泽贼 葬遭葬皂藻糟贼蚤灶 燥灶 贼澡藻 葬凿怎造贼 枣藻皂葬造藻泽 燥枣 栽援 怎则贼蚤糟葬藻 枣则燥皂 源 凿蚤泽贼则蚤糟贼泽 蚤灶 月藻蚤躁蚤灶早 葬则藻葬 怎泽蚤灶早 泽造蚤凿藻鄄
凿蚤责 皂藻贼澡燥凿援 栽澡藻 孕悦砸 葬皂责造蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶 燥枣 泽责藻糟蚤枣蚤糟 葬造造藻造藻泽 渊 孕粤杂粤冤 憎葬泽 凿藻增藻造燥责藻凿 贼燥 凿藻贼藻糟贼 贼澡藻 责燥蚤灶贼
皂怎贼葬贼蚤燥灶 枣则藻择怎藻灶糟赠 燥枣 郧猿圆猿阅 蚤灶 早造怎贼葬皂葬贼藻鄄早葬贼藻凿 糟澡造燥则蚤凿藻 糟澡葬灶灶藻造 渊郧造怎悦造冤 早藻灶藻援 栽澡藻 则藻泽怎造贼泽 泽澡燥憎藻凿 贼澡葬贼
贼澡藻 枣蚤藻造凿 责燥责怎造葬贼蚤燥灶泽 糟燥造造藻糟贼藻凿 枣则燥皂 悦澡葬灶早责蚤灶早袁 匀葬蚤凿蚤葬灶袁 酝蚤赠怎灶 葬灶凿 匀怎葬蚤则燥怎 蚤灶 月藻蚤躁蚤灶早 藻曾澡蚤遭蚤贼藻凿
藻曾贼则藻皂藻造赠 澡蚤早澡 则藻泽蚤泽贼葬灶糟藻 造藻增藻造援 耘泽责藻糟蚤葬造造赠 贼澡藻 悦澡葬灶早责蚤灶早 责燥责怎造葬贼蚤燥灶 憎葬泽 责则燥增藻凿 贼燥 遭藻 贼澡藻 澡蚤早澡藻泽贼
则藻泽蚤泽贼葬灶糟藻 贼燥 葬遭葬皂藻糟贼蚤灶 憎蚤贼澡 贼澡藻 蕴悦缘园 增葬造怎藻 燥枣 源源愿援 怨猿 皂早 辕 蕴袁 泽澡燥憎蚤灶早 源怨愿愿援 员员鄄枣燥造凿援 砸藻泽蚤泽贼葬灶糟藻 早藻灶燥贼赠责藻憎葬泽 灶燥贼 凿藻贼藻糟贼藻凿 蚤灶 贼澡藻 泽怎泽糟藻责贼蚤遭造藻 泽贼则葬蚤灶援 匀燥憎藻增藻则袁 贼澡藻 皂怎贼葬贼蚤燥灶 枣则藻择怎藻灶糟赠 蚤灶 悦澡葬灶早责蚤灶早 葬灶凿 酝蚤赠怎灶
责燥责怎造葬贼蚤燥灶泽 燥枣 郧猿圆猿阅 葬造造藻造藻 憎葬泽 员园园援 园园豫 袁 葬灶凿 贼澡燥泽藻 蚤灶 匀怎葬蚤则燥怎 葬灶凿 匀葬蚤凿蚤葬灶 责燥责怎造葬贼蚤燥灶泽 憎藻则藻 愿远援 圆缘豫
葬灶凿 怨园援 园园豫 援 粤遭葬皂藻糟贼蚤灶 蚤泽 灶燥贼 泽怎蚤贼葬遭造藻 枣燥则 糟燥灶贼则燥造造蚤灶早 栽援 怎则贼蚤糟葬藻 责燥责怎造葬贼蚤燥灶泽 蚤灶 贼澡藻 源 贼藻泽贼藻凿 葬则藻葬泽 蚤灶
月藻蚤躁蚤灶早 凿怎藻 贼燥 贼澡藻 藻曾贼则藻皂藻造赠 澡蚤早澡 则藻泽蚤泽贼葬灶糟藻 葬灶凿 澡蚤早澡 枣则藻择怎藻灶糟赠 燥枣 则藻泽蚤泽贼葬灶贼 早藻灶燥贼赠责藻援
运藻赠 憎燥则凿泽院 栽藻贼则葬灶赠糟澡怎泽 怎则贼蚤糟葬藻曰 葬遭葬皂藻糟贼蚤灶曰 蚤灶泽藻糟贼蚤糟蚤凿藻 则藻泽蚤泽贼葬灶糟藻曰 早造怎贼葬皂葬贼藻鄄早葬贼藻凿 糟澡造燥则蚤凿藻 糟澡葬灶灶藻造
渊郧造怎悦造冤曰 郧猿圆猿阅 责燥蚤灶贼 皂怎贼葬贼蚤燥灶
摇 摇 二斑叶螨 栽藻贼则葬灶赠糟澡怎泽 怎则贼蚤糟葬藻 运燥糟澡 属蛛形纲蜱
螨亚纲真螨目叶螨科袁是世界性的重要农业害螨袁
其食性杂袁寄主植物多达 员 员园园 多种咱员暂 遥 目前二斑
叶螨的防治主要依赖化学农药袁由于其体型微小尧
发生世代多尧繁殖速度快和发育历期短等特点袁该
螨极易产生抗药性袁现已对有机磷尧菊酯类和氨基
甲酸酯类杀虫剂和一些新型杀虫剂产生了不同程
度的抗药性咱圆暂 袁而监测二斑叶螨对不同杀虫剂的抗
药性是化学防控及抗药性治理的基础遥
阿维菌素是抗生素类杀虫杀螨剂袁通过刺激虫
体产生 酌鄄氨基丁酸袁阻断运动神经信息的传递袁导
致害虫麻痹尧拒食尧缓动或不动袁已成为防治害虫尧
害螨的理想药剂咱猿暂 遥 长期单一地使用势必使得害
虫产生抗药性袁室内抗性预测发现二斑叶螨对阿维
菌素产生抗药性的风险很高袁远园豫选择压筛选 圆园 代
后即有抗性纯合子出现咱源暂 遥 国外很早就报道了二
斑叶螨对阿维菌素的抗药性咱缘 原 苑暂 袁田间每年或者每
两年施用阿维菌素 猿 次袁二斑叶螨即对阿维菌素产
生了抗药性咱缘暂 遥 该螨于 圆园 世纪 愿园 年代中期入侵我
国袁圆园园园 年前后在部分地区出现二斑叶螨对阿维菌
素产生抗药性的报道咱愿暂 遥
害虫和害螨对阿维菌素的抗药性机制主要涉
及抗性叶螨种群中三大解毒酶系活性的增强咱怨 原 员园暂 袁
杂贼怎皂责枣 驭 晕葬怎藻灶咱怨暂研究发现二斑叶螨抗阿维菌素种
群中多功能氧化酶渊皂蚤曾藻凿 枣怎灶糟贼蚤燥灶 燥曾蚤凿葬泽藻泽袁酝云韵冤
孕源缘园 和谷胱甘肽 杂 转移酶渊 早造怎贼葬贼澡蚤燥灶藻 杂鄄贼则葬灶泽枣藻则葬鄄
泽藻泽袁郧杂栽冤活性分别增强了 员猿 倍和 员员 倍袁而韩国二
斑叶螨种群 酝云韵 和酯酶渊藻泽贼藻则葬泽藻袁耘泽贼冤活性升高与
阿维菌素的抗药性产生相关咱员员暂 遥 靶标抗性是另外
一种备受关注的重要抗性机制袁谷氨酸是脊椎动物
和无脊椎动物神经系统内重要的神经递质袁谷氨酸
与突触后受体结合后袁开启氯离子通道袁称为谷氨
酸门控氯离子通道 渊 早造怎贼葬皂葬贼藻鄄早葬贼藻凿 糟澡造燥则蚤凿藻 糟澡葬灶鄄
灶藻造袁郧造怎悦造冤遥 有研究表明袁郧造怎悦造 是阿维菌素类杀虫
剂的作用靶标之一袁郧造怎悦造 受体 琢 亚基出现点突变
渊孕圆怨怨杂冤可能与黑腹果蝇 阅则燥泽燥责澡蚤造葬 皂藻造葬灶燥早葬泽贼藻则 对
伊维菌素的抗药性产生相关咱员圆暂 袁肿孔古柏线虫
悦燥燥责藻则蚤葬 燥灶糟燥责澡燥则葬的阿维菌素抗性种群中也发现了
郧造怎悦造受体 琢猿 和 茁 亚基的突变咱员猿暂 遥 运憎燥灶 等咱员源暂研
究表明袁二斑叶螨抗性种群中 郧造怎悦造 基因的第 猿 跨
膜区出现点突变渊郧猿圆猿阅冤是导致二斑叶螨对阿维
菌素产生抗药性的重要分子机制遥 基于害虫抗性
基因点突变基础上开发的特异性等位基因 孕悦砸 扩
增技术渊孕悦砸 葬皂责造蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶 燥枣 泽责藻糟蚤枣蚤糟 葬造造藻造藻泽袁孕粤杂粤冤
可快速检测 阅晕粤单个碱基的突变袁孕粤杂粤 常被用来
检测害虫的杀虫剂抗药性相关基因的突变频
率咱员缘 原 员苑暂 袁且在检测害虫抗药性时袁 孕粤杂粤 技术比
砸云蕴孕技术的检测结果更准确咱员愿暂 遥 与叶螨生物测定
的传统方法要要要玻片浸渍法或叶片浸渍法相比更
加简便尧快速遥
阿维菌素的频繁使用导致二斑叶螨抗药性的
发生袁目前山东昌乐和寿光蔬菜田二斑叶螨种群对
阿维菌素的抗药性达高抗性水平咱员怨暂 袁北京地区也发
现阿维菌素治理二斑叶螨时防效显著下降咱圆园暂 袁部分
地区甚至出现阿维菌素防治该螨完全失效的事例袁
因此监测北京二斑叶螨种群对阿维菌素的抗药性
对于该螨的化学防治具有重要指导意义遥 本研究
采用玻片浸渍法测定了北京 源 个地区二斑叶螨对阿
维菌素的抗药性水平袁并基于该螨对阿维菌素抗性
机制报道的基础上咱员源暂 袁针对 郧造怎悦造 的点突变位点建
立了 孕粤杂粤技术袁根据条带的有无快速判别田间二
斑叶螨种群的基因突变频率袁旨在为当地二斑叶螨
的防治和抗药性治理提供科学依据遥
员 材料与方法
员援 员 材料
二斑叶螨室内敏感种群来自南京农业大学植
物保护学院袁自 圆园园怨 年在室内人工气候箱内采用海
绵叶盘法袁由野碧丰冶品种的无虫菜豆苗叶片作为寄
主进行继代饲养袁期间未接触任何杀虫剂遥 饲养条
件为 圆远 依员 益尧光周期 蕴 颐 阅 越 员远 澡 颐 愿 澡遥 源 个田间抗
性种群分别采自北京昌平尧海淀尧怀柔和密云的茄
子田和草莓田袁室内饲养 员 代后进行试验遥
员援 愿豫阿维菌素渊 葬遭葬皂藻糟贼蚤灶冤乳油袁由北京中农
大生物技术股份有限公司生产遥
所用引物由上海英竣生物工程公司合成袁序列
测序由北京擎科生物工程有限公司进行遥 孕悦砸 扩
增中使用的聚合酶 圆 伊 耘泽 栽葬择 酝葬泽贼藻则酝蚤曾渊园援 员哉 栽葬择
耘 辕 滋蕴冤购自北京康为试剂生物科技有限公司遥 叶螨
的基因组 阅晕粤提取试剂盒购自北京百泰克生物技
术有限公司遥 阅晕粤纯化试剂盒袁匝蚤葬早藻灶公司产品遥
砸载在鄄猿愿园悦 智能型人工气候箱袁宁波江南仪器
厂遥 伯乐 杂员园园园 型 孕悦砸仪袁美国 月蚤燥鄄砸葬凿公司遥
员援 圆 方法
员援 圆援 员 叶螨雌成螨的生物测定
叶螨的室内毒力测定采用玻片浸渍法咱圆员暂进行遥
愿远 植摇 物摇 保摇 护摇 学摇 报 源员 卷
将双面胶带剪成 圆 耀猿 糟皂长袁贴在载玻片一端袁揭去
双面胶带上的纸片袁用零号毛笔挑选大小一致尧体
色鲜艳尧行动活泼的雌成螨袁将其背部粘在双面胶
带上袁不要粘住螨足尧螨须和口器袁每片胶带粘 猿 行袁
每行大约粘 员缘 耀圆园 头叶螨遥 在温度为 圆远 依 员 益尧蕴颐
阅 越 员远 澡 颐 愿 澡尧相对湿度 远园豫的人工气候箱中放置 源
澡后袁用 韵造赠皂责怎泽双目解剖镜观察袁严格剔除死亡或
不太活泼以及体位不合适的叶螨个体遥 各药剂在
预备试验的基础上稀释 缘 耀苑 个浓度袁将带螨玻片的
一端浸入药液中袁轻轻摇动 缘 泽后取出袁迅速用吸水
纸吸干螨体及其周围多余的药液遥 铺一层湿润纱
布在白色瓷盘内袁浸过药液的玻片放置于瓷盘内袁
再盖上玻璃板保湿遥 以带螨玻片浸渍清水作为对
照袁每个处理重复 猿 耀 源 次遥 圆源 澡后用双目解剖镜检
查结果袁分别记录存活和死亡的叶螨数量遥 用毛笔
轻触螨体袁以螨足不动者为死亡袁对照处理死亡率
在 员园豫以下为有效试验遥 试验数据采用 孕则燥遭蚤贼软件
进行处理袁计算药剂的斜率尧标准误差值尧致死中浓
度渊蕴悦缘园值冤及其 怨缘豫置信限等袁并计算各田间种群
的抗性倍数遥 抗性倍数 越 二斑叶螨田间种群的
蕴悦缘园值 辕敏感种群的 蕴悦缘园值遥
员援 圆援 圆 叶螨基因组 阅晕粤提取和 孕悦砸扩增
分别挑取二斑叶螨室内敏感种群和田间种群
的单头雌成螨袁采用 阅晕粤 提取试剂盒渊溶液型冤进
行其基因组 阅晕粤提取袁具体方法参照试剂盒说明书
进行遥 根据 运憎燥灶等咱员源暂报道二斑叶螨谷氨酸门控氯
离子通道渊郧造怎悦造冤的点突变位点和序列袁设计扩增产
物 郧造怎悦造 片段中包含此点突变位点的引物对院上游
引物 云憎鄄源园缘院郧郧郧郧粤粤栽粤悦粤郧悦栽郧栽悦栽悦粤粤粤和下游
引物 砸增鄄源园缘院栽郧粤粤栽悦悦栽栽郧郧悦郧郧栽郧栽悦粤粤粤袁以二斑
叶螨的基因组 阅晕粤为模板进行 孕悦砸 扩增遥 扩增体
系为院圆 伊 耘泽 栽葬择 酝葬泽贼藻则酝蚤曾 为 员园 滋蕴袁阅晕粤 模板为
员 滋蕴袁分别加入 员 滋蕴 员园 滋皂燥造 辕 蕴的上游和下游引物袁
最后用水补充至 圆园 滋蕴遥 孕悦砸 扩增程序院怨缘 益预变
性猿 皂蚤灶曰怨缘 益变性 猿园 泽袁缘愿 益退火 猿园 泽袁苑圆 益延伸
员 皂蚤灶袁猿缘 个循环曰苑圆 益延伸 员园 皂蚤灶遥 取 孕悦砸 产物
愿 滋蕴在员援 缘豫琼脂糖凝胶电泳检测遥 获得的特异性
孕悦砸产物回收后袁采用 阅晕粤 纯化试剂盒进行纯化
后袁送北京擎科生物技术有限公司采用上述 孕悦砸 扩
增中所用的上游和下游引物渊云憎鄄源园缘 和 砸增鄄源园缘冤进
行双向序列测定遥
员援 圆援 猿 郧猿圆猿阅点突变及频率检测
采用 阅晕粤酝粤晕软件对阿维菌素抗性和敏感种
群的 郧造怎悦造 测序结果进行序列分析袁对发生点突变
的位点上游设置 孕粤杂粤引物袁同时在引物的倒数第 猿
位引入错配碱基 栽袁见 砸云 引物序列中方框标注处遥
抗性种群和敏感种群的点突变检测所用上游引物
分别为 砸云院缘忆鄄粤粤郧悦栽郧栽栽郧粤悦粤栽栽栽郧郧粤悦 栽郧粤鄄猿忆和
杂云院 缘忆鄄粤粤郧悦栽郧栽栽郧粤悦粤栽栽栽郧郧粤悦栽郧郧鄄猿忆遥 为了保
证二斑叶螨基因组 阅晕粤提取成功袁点突变频率检测
时设置了对照基因 缘援 愿杂袁其上游和下游引物参照朱
砂叶螨的稳定内参基因 缘援 愿杂 的引物序列及扩增程
序进行咱圆圆暂 遥 郧猿圆猿阅点突变的等位基因频率渊豫 冤 越
咱渊抗性纯合子个体数 辕检测总数冤 垣 渊抗性杂合子个
体数 辕检测总数 辕 圆冤暂 伊 员园园遥
郧猿圆猿阅点突变的 孕悦砸扩增时袁砸云和 杂云与一条
公用的下游引物 砸增鄄源园缘 渊缘忆鄄栽郧粤粤栽悦悦栽栽郧郧悦郧郧栽鄄
郧栽悦粤粤粤鄄猿忆冤分别配对进行 孕悦砸 扩增遥 砸云 和 砸增鄄
源园缘 组成抗性种群检测引物对袁杂云和 砸增鄄源园缘 组成敏
感种群检测引物对遥 孕悦砸 扩增体系院上下游引物
渊员园 滋皂燥造 辕 蕴冤分别加入 园援 缘 滋蕴袁阅晕粤 模板 员 滋蕴袁圆 伊
耘泽 酝蚤曾 渊园援 员哉 栽葬择 耘 辕 滋蕴冤为 员园滋蕴袁最后加 凿凿匀圆韵补
足至 圆园滋蕴遥 扩增程序院怨源益预变性 猿皂蚤灶曰怨源益变性
圆园 泽袁远圆 益退火 猿园 泽袁苑圆 益延伸 猿园 泽袁猿园 个循环曰苑圆 益
延伸 猿 皂蚤灶遥 取样 愿 滋蕴 在 员援 缘豫电泳条件下检测不
同种群二斑叶螨基因型突变结果遥
圆 结果与分析
圆援 员 二斑叶螨对阿维菌素的抗药性测定
昌平尧怀柔尧海淀和密云的二斑叶螨种群雌成
螨对阿维菌素的 蕴悦缘园值分别为 源源愿援 怨猿尧圆远苑援 源猿尧圆园员郾 员猿 和 员苑猿援 缘猿 皂早 辕 蕴遥 与室内相对敏感种群相
比袁昌平种群的抗性倍数高达 源 怨愿愿援 员员 倍袁抗性倍
数最低的是密云种群袁也达 员怨圆愿援 员员 倍袁说明 源 个北
京地区种群均达到了极高抗性水平渊表 员冤遥
圆援 圆 郧造怎悦造基因片段扩增比对
采用扩增 郧造怎悦造 的特异性引物对 云憎鄄源园缘院缘忆鄄
郧郧郧郧粤粤栽粤悦粤郧悦栽郧栽悦栽悦粤粤粤鄄猿忆 和 砸增鄄源园缘院 缘忆鄄
栽郧粤粤栽悦悦栽栽郧郧悦郧郧栽郧栽悦粤粤粤鄄猿忆袁扩增二斑叶螨敏
感和抗性种群内不同个体的基因组 阅晕粤袁均获得 员
条大小为 源园缘 遭责的特异性片段渊图 员冤遥
在该扩增片段的 阅晕粤 序列中袁圆缘员 位出现 员 个
点突变袁敏感种群中的 郧突变为抗性种群中的 粤袁即
二斑叶螨 郧造怎悦造 全序列的开放阅读框渊韵砸云冤中的
怨远愿 位核苷酸发生了变化袁由 郧 突变为 粤袁该点突变
导致其 韵砸云的 猿圆猿 位氨基酸序列由甘氨酸渊郧冤突
变为天冬氨酸渊阅冤渊图 圆冤遥
怨远员 期 唐小凤等院二斑叶螨对阿维菌素的抗药性及抗性基因的 孕粤杂粤检测技术
表 员 北京 源 个地区二斑叶螨种群对阿维菌素的抗药性测定
栽葬遭造藻 员 粤遭葬皂藻糟贼蚤灶 则藻泽蚤泽贼葬灶糟藻 燥枣 枣燥怎则 责燥责怎造葬贼蚤燥灶泽 燥枣 栽藻贼则葬灶赠糟澡怎泽 怎则贼蚤糟葬藻 蚤灶 月藻蚤躁蚤灶早
种群
孕燥责怎造葬贼蚤燥灶
斜率 依标准误
杂造燥责藻 依 杂耘
蕴悦缘园渊怨缘豫 悦蕴冤
渊皂早 辕 蕴冤
抗性倍数
砸藻泽蚤泽贼葬灶贼 则葬贼蚤燥
敏感 杂怎泽糟藻责贼蚤遭造藻 员援 员圆 依 园援 员苑 园援 园怨渊园援 园缘 耀 园援 员愿冤 员援 园园
昌平 悦澡葬灶早责蚤灶早 员援 怨猿 依 园援 员苑 源源愿援 怨猿渊猿圆远援 远远 耀 远员远援 怨缘冤 源怨愿愿援 员员
怀柔 匀怎葬蚤则燥怎 员援 猿圆 依 园援 员猿 圆远苑援 源猿渊员苑远援 园怨 耀 源园远援 员苑冤 圆怨苑员援 源源
海淀 匀葬蚤凿蚤葬灶 员援 远员 依 园援 员怨 圆园员援 员猿渊员源圆援 远园 耀 圆愿猿援 远愿冤 圆圆猿源援 苑愿
密云 酝蚤赠怎灶 员援 怨缘 依 园援 员苑 员苑猿援 缘猿渊员猿远援 园苑 耀 圆圆员援 猿圆冤 员怨圆愿援 员员
图 员 特异性引物扩增敏感和抗性二斑叶螨种群的谷氨酸受体基因片段
云蚤早援 员 郧造怎悦造 早藻灶藻 枣则葬早皂藻灶贼 葬皂责造蚤枣蚤藻凿 枣则燥皂 泽怎泽糟藻责贼蚤遭造藻 葬灶凿 则藻泽蚤泽贼葬灶贼 责燥责怎造葬贼蚤燥灶泽 燥枣
栽藻贼则葬灶赠糟澡怎泽 怎则贼蚤糟葬藻 怎泽蚤灶早 泽责藻糟蚤枣蚤糟 责则蚤皂藻则泽
摇 摇 酝院酝葬则噪藻则 陨曰员 耀 源院二斑叶螨敏感个体曰缘 耀 愿院二斑叶螨抗性个体曰悦运院阴性对照遥 酝院 酝葬则噪藻则 陨曰 员 原 源院 泽怎泽糟藻责贼蚤遭造藻 蚤灶凿蚤增蚤凿怎葬造泽 燥枣 栽援 怎则鄄
贼蚤糟葬藻曰 缘 原 愿院 则藻泽蚤泽贼葬灶贼 蚤灶凿蚤增蚤凿怎葬造泽 燥枣 栽援 怎则贼蚤糟葬藻曰 悦运院 灶藻早葬贼蚤增藻 糟燥灶贼则燥造援
圆援 猿 抗性和敏感种群的突变位点
将检测抗性和敏感二斑叶螨种群的 砸云 引物和
杂云引物分别与公用的下游引物 砸增鄄源园缘 配对袁扩增
二斑叶螨的抗性和敏感种群遥 引物对 杂云 垣 砸增鄄源园缘
对室内敏感种群扩增时袁可以稳定出现 员 条 员苑远 遭责
左右的条带袁而扩增抗性种群时无带曰引物对 砸云 垣
砸增鄄源园缘 扩增抗性种群时袁可以出现 员 条 员苑远 遭责 的条
带袁而扩增敏感种群时无带遥 进一步测序结果也表
明袁这条 员苑远 遭责条带是上述 源园缘 遭责序列中尾端的一
部分序列袁也是预期扩增的条带渊图 猿冤遥 说明针对
抗性和敏感种群的引物对和扩增条件都是可行而
且稳定的袁可以用于以下不同种群的抗性基因频率
检测遥
圆援 源 抗性种群基因突变频率
从北京的昌平尧海淀尧怀柔和密云共 源 个种群中
随机抽取 源园 头二斑叶螨个体袁对照基因 缘援 愿杂 扩增
中均出现了稳定单一的条带袁说明二斑叶螨个体
阅晕粤提取成功遥 而采用抗性和敏感种群的 郧造怎悦造突
变位点检测引物对分别进行 孕悦砸扩增袁室内敏感二
斑叶螨种群中袁采用敏感引物对可扩增到 员苑远 遭责 的
特异性条带袁抗性引物对扩增时则未见条带袁即未
检测到有抗性基因袁其基因型表现为 杂杂遥 而北京 源
个不同田间种群中袁昌平和密云种群的抗性基因频
率达到 员园园援 园园豫 袁怀柔和海淀种群的抗性基因频率
分别为 愿远援 圆缘豫和 怨园援 园园豫 遥
猿 讨论
二斑叶螨是抗药性发展最为严重且难以治理
的农业害螨袁阿维菌素是该螨防治中常用的重要杀
螨剂之一咱圆猿暂 遥 各地由于用药历史和频率的差异袁二
斑叶螨对阿维菌素的抗性程度不一致遥 圆园园员 年赵
卫东等咱圆猿暂测定山东寿光抗性种群和山东烟台二斑
叶螨田间种群对阿维菌素的 蕴悦缘园值为 园援 园圆 耀 园援 园怨皂早 辕 蕴袁尚未对其产生抗药性袁而同一时期甘肃兰州 缘
个地区的田间二斑叶螨种群对阿维菌素已产生 远 耀
员园 倍的抗药性咱愿暂 遥 说明各地二斑叶螨的阿维菌素
抗药性差异很大袁用药必须在抗性监测的基础上进
行遥 本研究发现袁北京 源 个地区的二斑叶螨雌成螨
对阿维菌素的 蕴悦缘园值超过 员苑园 皂早 辕 蕴袁抗性倍数均在员 园园园 倍以上袁为极高抗性水平遥 同时抗性基因的突
变频率达 愿远援 圆缘豫 耀 员园园援 园园豫 袁而且昌平尧怀柔和密
云种群中均未发现敏感纯合子个体袁说明北京 源 个
测试地区的二斑叶螨种群已经无法采用阿维菌素
进行高效防治袁这与近年来国外二斑叶螨种群的表
现很相似遥 塞浦路斯和伊朗等国家二斑叶螨田间
种群对阿维菌素分别产生 猿 愿圆圆 倍和超过 员圆 苑缘缘 倍
的抗性水平咱圆源 原 圆缘暂 袁与我国田间多地出现阿维菌素对
园苑 植摇 物摇 保摇 护摇 学摇 报 源员 卷
图 圆 抗性和敏感二斑叶螨种群中 郧造怎悦造基因片段的核苷酸序列比对
云蚤早援 圆 晕怎糟造藻燥贼蚤凿藻 泽藻择怎藻灶糟藻 糟燥皂责葬则蚤泽燥灶泽 燥枣 郧造怎悦造 枣则葬早皂藻灶贼泽 枣则燥皂 则藻泽蚤泽贼葬灶贼 葬灶凿 泽怎泽糟藻责贼蚤遭造藻 责燥责怎造葬贼蚤燥灶泽 燥枣 栽藻贼则葬灶赠糟澡怎泽 怎则贼蚤糟葬藻
摇 摇 砸员 耀 砸苑院二斑叶螨抗性种群不同个体的扩增片段序列曰杂员 耀 杂猿院敏感种群不同个体的扩增片段序列遥 竖向方框内为突变位点曰横
向方框内为扩增产物为 源园缘 遭责的上游和下游引物曰下划线标识为基因型检测所用的上游引物遥 砸员 原 砸苑院 栽澡藻 枣则葬早皂藻灶贼 泽藻择怎藻灶糟藻泽 燥枣 凿蚤枣鄄
枣藻则藻灶贼 蚤灶凿蚤增蚤凿怎葬造泽 蚤灶 贼澡藻 则藻泽蚤泽贼葬灶贼 责燥责怎造葬贼蚤燥灶 燥枣 栽援 怎则贼蚤糟葬藻曰 杂员 原 杂猿院 贼澡藻 枣则葬早皂藻灶贼 泽藻择怎藻灶糟藻泽 燥枣 凿蚤枣枣藻则藻灶贼 蚤灶凿蚤增蚤凿怎葬造泽 蚤灶 贼澡藻 泽怎泽糟藻责贼蚤遭造藻 泽贼则葬蚤灶援 栽澡藻
灶怎糟造藻燥贼蚤凿藻 蚤灶 贼澡藻 增藻则贼蚤糟葬造 遭燥曾 蚤泽 贼澡藻 责燥蚤灶贼 皂怎贼葬贼蚤燥灶曰 贼澡藻 泽藻择怎藻灶糟藻泽 蚤灶 贼澡藻 澡燥则蚤扎燥灶贼葬造 遭燥曾藻泽 葬则藻 贼澡藻 枣燥则憎葬则凿 葬灶凿 则藻增藻则泽藻 责则蚤皂藻则泽 灶葬皂藻凿 云憎鄄源园缘 葬灶凿
砸增鄄源园缘袁 则藻泽责藻糟贼蚤增藻造赠曰 贼澡藻 泽藻择怎藻灶糟藻 怎灶凿藻则造蚤灶藻凿 蚤泽 贼澡藻 枣燥则憎葬则凿 责则蚤皂藻则 枣燥则 贼澡藻 早藻灶燥贼赠责藻 皂燥灶蚤贼燥则蚤灶早援
二斑叶螨防效明显降低的现象是一致的咱员怨 原 圆园暂 袁还可
以解释北京市大兴区蔬菜基地于 圆园员圆 年采用阿维
菌素喷施二斑叶螨后完全无法控制其种群的发展
与为害的原因咱圆远暂 遥 由此建议北京测试地区的二斑
叶螨种群防治应暂停阿维菌素及其同一作用机制
杀虫剂或杀螨剂的使用袁其它未产生明显抗药性的
地区也应慎重使用阿维菌素遥 对更多二斑叶螨田
间种群进行抗药性早期监测及治理将有助于阿维
菌素及此类杀虫剂的合理使用和对二斑叶螨的高
效防治遥
叶螨的常规抗药性监测是以药剂对叶螨种群
的毒力测定结果为依据来评价的袁常用方法为玻片
浸渍法尧浸叶法尧喷雾法等咱圆苑 原 圆怨暂 遥 这些方法对试虫
的生理状态尧虫龄等各方面标准要求较高袁试虫需
要量大袁耗费时间长袁且由于试虫个体微小尧极易受
到操作过程中诸多不确定因素的影响咱猿园暂 遥 本研究
采用的 孕粤杂粤技术可以通过快速检测点突变的存在
而确定其个体的基因型袁根据抗性相关基因的突变
频率估测抗药性发生的程度袁该技术简单尧快捷袁
需要试虫的数量少尧对其生理状态要求低遥还可根据
员苑员 期 唐小凤等院二斑叶螨对阿维菌素的抗药性及抗性基因的 孕粤杂粤检测技术
图 猿 二斑叶螨抗性和敏感种群中的突变位点
云蚤早援 猿 阅藻贼藻糟贼蚤燥灶 燥枣 责燥蚤灶贼 皂怎贼葬贼蚤燥灶泽 蚤灶 则藻泽蚤泽贼葬灶贼 葬灶凿 泽怎泽糟藻责贼蚤遭造藻 责燥责怎造葬贼蚤燥灶 燥枣 栽藻贼则葬灶赠糟澡怎泽 怎则贼蚤糟葬藻
摇 摇 酝院酝葬则噪藻则 陨曰员 耀 猿院二斑叶螨室内敏感种群袁扩增引物对为 杂云 垣 砸增鄄源园缘曰源院空白对照曰缘 耀 苑院二斑叶螨抗性种群袁扩增引物对为 砸云 垣
砸增鄄源园缘曰愿院空白对照遥 各种群分别检测 源园 头袁此电泳图片仅显示 猿 头遥 酝院 酝葬则噪藻则 陨曰 员 原 猿院 泽怎泽糟藻责贼蚤遭造藻 栽援 怎则贼蚤糟葬藻 怎泽蚤灶早 贼澡藻 泽怎泽糟藻责贼蚤遭造藻
泽责藻糟蚤枣蚤糟 责则蚤皂藻则泽 憎蚤贼澡 杂云 垣 砸增鄄源园缘曰 源院 灶藻早葬贼蚤增藻 糟燥灶贼则燥造 怎泽蚤灶早 杂云 垣 砸增鄄源园缘曰 缘 原 苑院 则藻泽蚤泽贼葬灶贼 栽援 怎则贼蚤糟葬藻 怎泽蚤灶早 贼澡藻 则藻泽蚤泽贼葬灶贼 泽责藻糟蚤枣蚤糟 责则蚤皂藻则泽 憎蚤贼澡
砸云 垣 砸增鄄源园缘曰 愿院 灶藻早葬贼蚤增藻 糟燥灶贼则燥造 怎泽蚤灶早 砸云 垣 砸增鄄源园缘曰 源园 蚤灶凿蚤增蚤凿怎葬造泽 憎藻则藻 凿藻贼藻糟贼藻凿 枣燥则 藻葬糟澡 糟燥皂遭蚤灶葬贼蚤燥灶 葬灶凿 猿 燥灶藻泽 憎藻则藻 泽澡燥憎灶 蚤灶 贼澡蚤泽 枣蚤早怎则藻援
抗性引物对和敏感引物对的扩增结果袁快速确定测
试个体属于抗性基因型或敏感基因型或者杂合基
因型袁因此在害虫抗性基因突变频率的检测中应用
较多咱猿员暂 遥 有文献报道二斑叶螨对阿维菌素抗性相
关的 郧造怎悦造 基因出现了 郧猿圆猿阅 的点突变咱员源暂 遥 本研
究采用上游引物 猿忆末端倒数第 猿 位核苷酸引入错配
碱基渊本研究中引物错配碱基设为 栽冤的方法增加
孕粤杂粤扩增的特异性袁成功建立了二斑叶螨对阿维
菌素抗药性的 孕粤杂粤 引物对袁采用敏感和抗性特异
性引物对扩增试虫的基因组 阅晕粤袁通过 员苑远 遭责 扩增
片段的有无直接判断测试个体的基因型遥 采用该
技术从基因组 阅晕粤提取到 孕悦砸 扩增仅需要 愿 澡袁大
大缩短了抗药性检测时间袁可以快速获知田间二斑
叶螨种群对阿维菌素抗性相关基因的突变频率袁由
此估测二斑叶螨种群对阿维菌素的抗药性遥 同时袁
该技术也可实现二斑叶螨对阿维菌素抗药性的早
期预警及样品的高通量快速检测袁由此可及时明确
二斑叶螨田间种群对阿维菌素的抗性基因突变频
率及变化袁估测其抗药性发展速度袁及时调整二斑
叶螨的科学防治策略遥
本研究发现北京 源 个二斑叶螨种群的抗性基因
频率均在 愿缘豫以上袁其中昌平和密云种群的全部检
测个体均为抗性纯合子遥 理论上而言相关抗性基
因频率越高袁害虫的抗药性越强袁但本研究中密云
种群的生物测定结果显示袁其抗性倍数最低袁为
员 怨圆愿援 员员 倍袁检测个体却全部表现为抗性纯合子渊抗
性基因频率为 员园园援 园园豫 冤袁其原因可能是害虫尧害螨
抗药性的产生不仅与相关抗性基因点突变有关袁还
与其本身代谢酶活性变化以及其它位点同时产生
的点突变也有重要关系咱猿员暂 袁这在以往文献中也有同
样或者类似报道咱员员袁猿圆暂 遥 另外袁孕粤杂粤 技术的使用需
要以明确试虫的靶标抗性机制为前提袁否则无法设
计特异性引物遥 因此随着害虫抗药性靶标机制研
究的不断深入和相关突变位点的阐明袁该技术将会
更广泛地应用于害虫的抗药性早期监测中遥
参 考 文 献渊砸藻枣藻则藻灶糟藻泽冤
咱员暂 阅藻则皂葬怎憎 宰袁 宰赠遭燥怎憎 晕袁 砸燥皂遭葬怎贼泽 杂袁 藻贼 葬造援 粤 造蚤灶噪 遭藻贼憎藻藻灶
澡燥泽贼 责造葬灶贼 葬凿葬责贼葬贼蚤燥灶 葬灶凿 责藻泽贼蚤糟蚤凿藻 则藻泽蚤泽贼葬灶糟藻 蚤灶 贼澡藻 责燥造赠责澡葬早燥怎泽
泽责蚤凿藻则 皂蚤贼藻 栽藻贼则葬灶赠糟澡怎泽 怎则贼蚤糟葬藻援 孕则燥糟藻藻凿蚤灶早泽 燥枣 贼澡藻 晕葬贼蚤燥灶葬造
粤糟葬凿藻皂赠 燥枣 杂糟蚤藻灶糟藻泽 燥枣 贼澡藻 哉灶蚤贼藻凿 杂贼葬贼藻泽 燥枣 粤皂藻则蚤糟葬袁 圆园员猿袁
员员园渊圆冤院 耘员员猿 原 耘员圆圆
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泽蚤泽贼葬灶糟藻 皂藻糟澡葬灶蚤泽皂泽 蚤灶 贼澡藻 贼憎燥鄄泽责燥贼贼藻凿 泽责蚤凿藻则 皂蚤贼藻 栽藻贼则葬灶赠糟澡怎泽
怎则贼蚤糟葬藻 葬灶凿 燥贼澡藻则 蚤皂责燥则贼葬灶贼 粤糟葬则蚤院 葬 则藻增蚤藻憎援 陨灶泽藻糟贼 月蚤燥糟澡藻皂蚤泽贼则赠
葬灶凿 酝燥造藻糟怎造葬则 月蚤燥造燥早赠袁 圆园员园袁 源园渊愿冤院 缘远猿 原 缘苑圆
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贼蚤灶 则藻泽蚤泽贼葬灶糟藻 蚤灶 栽藻贼则葬灶赠糟澡怎泽 糟蚤灶灶葬遭葬则蚤灶怎泽援 孕藻泽贼蚤糟蚤凿藻 月蚤燥糟澡藻皂蚤泽鄄
贼则赠 葬灶凿 孕澡赠泽蚤燥造燥早赠袁 圆园园怨袁 怨缘渊猿冤院 员源苑 原 员缘员
咱源暂 任健袁 周玉书袁 赵玉伟袁 等援 二斑叶螨对阿维菌素的抗药性
预测研究援 中国农学通报袁 圆园园远袁 圆圆渊圆冤院 猿猿苑 原 猿猿愿
咱缘暂 悦造葬则噪 允 酝援 砸藻泽蚤泽贼葬灶糟藻 贼燥 葬增藻则皂藻糟贼蚤灶泽院 藻曾贼藻灶贼袁 皂藻糟澡葬灶蚤泽皂泽袁
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圆苑 植摇 物摇 保摇 护摇 学摇 报 源员 卷
咱愿暂 沈慧敏袁 杨宝生援 二点叶螨对 员远 种杀虫尧杀螨剂的抗药性援
植物保护学报袁 圆园园员袁 圆愿渊源冤院 猿远圆 原 猿远远
咱怨暂 杂贼怎皂责枣 晕袁 晕葬怎藻灶 砸援 月蚤燥糟澡藻皂蚤糟葬造 皂葬则噪藻则泽 造蚤灶噪藻凿 贼燥 葬遭葬皂藻糟贼蚤灶
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贼蚤糟蚤凿藻 月蚤燥糟澡藻皂蚤泽贼则赠 葬灶凿 孕澡赠泽蚤燥造燥早赠袁 圆园园圆袁 苑圆渊圆冤院 员员员 原 员圆员
咱员园暂 赵卫东袁 王开运袁 姜兴印袁 等援 二斑叶螨对阿维菌素尧哒螨
灵和甲氰菊酯的抗性选育及其解毒酶活力变化援 昆虫学
报袁 圆园园猿袁 源远渊远冤院 苑愿愿 原 苑怨圆
咱员员暂 运憎燥灶 阅 匀袁 杂藻燥灶早 郧 酝袁 运葬灶早 栽 允袁 藻贼 葬造援 酝怎造贼蚤责造藻 则藻泽蚤泽贼葬灶糟藻
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泽怎遭怎灶蚤贼泽 枣则燥皂 蚤增藻则皂藻糟贼蚤灶鄄则藻泽蚤泽贼葬灶贼 悦燥燥责藻则蚤葬 燥灶糟燥责澡燥则葬 葬枣枣藻糟贼
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葬灶糟藻 蚤灶 贼澡藻 贼憎燥鄄泽责燥贼贼藻凿 泽责蚤凿藻则 皂蚤贼藻袁 栽藻贼则葬灶赠糟澡怎泽 怎则贼蚤糟葬藻 运燥糟澡援
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咱员缘暂 李春晓袁 张晓龙袁 曹晓梅袁 等援 特异性等位基因 孕悦砸扩增
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圆园员猿袁 源园渊源冤院 猿远猿 原 猿远愿
咱员愿暂 在蚤糟澡燥增佗 栽袁 运燥糟燥怎则藻噪 云袁 杂葬造葬增葬 允袁 藻贼 葬造援 阅藻贼藻糟贼蚤燥灶 燥枣 燥则早葬灶燥鄄
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渊愿冤院 愿缘猿 原 愿远园
咱员怨暂 刘庆娟袁 刘永杰袁 周仙红袁 等援 四个二斑叶螨地理种群卵
对 员园种杀螨剂的敏感性差异援 植物保护袁 圆园员圆袁 猿愿渊源冤院
员苑愿 原 员愿园
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对二斑叶螨的毒力测定及田间防效援 农药袁 圆园员猿袁 缘圆渊猿冤院
圆圆缘 原 圆圆苑
咱圆员暂 唐小凤袁 张友军袁 吴青君袁 等援 杀螨剂对截形叶螨的毒力
及助剂对杀螨剂的增效作用研究援 环境昆虫学报袁 圆园员猿袁
猿缘渊猿冤院 猿圆圆 原 猿圆苑
咱圆圆暂 杂怎灶 宰袁 允蚤灶 再袁 匀藻 蕴袁 藻贼 葬造援 杂怎蚤贼葬遭造藻 则藻枣藻则藻灶糟藻 早藻灶藻 泽藻造藻糟贼蚤燥灶
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咱圆猿暂 赵卫东袁 王开运袁 姜兴印袁 等援 二斑叶螨对常用杀螨剂的
抗药性测定援 农药学学报袁 圆园园员袁 猿渊猿冤院 愿远 原 愿愿
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泽责燥贼贼藻凿 泽责蚤凿藻则 皂蚤贼藻袁 栽藻贼则葬灶赠糟澡怎泽 怎则贼蚤糟葬藻 运燥糟澡 渊 粤糟葬则蚤院 栽藻贼鄄
则葬灶赠糟澡蚤凿葬藻冤援 粤糟葬则燥造燥早蚤葬袁 圆园员猿袁 缘猿渊猿冤院 圆猿缘 原 圆源远
咱圆远暂 李明远援 李明远断病手迹渊二十七冤摇 难防的二斑叶螨援 农
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咱圆苑暂 刘金香袁 胡美英袁 韩巨才袁 等援 山楂叶螨抗药性及混配增
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应援 植物保护学报袁 圆园园远袁 猿猿渊圆冤院 员愿苑 原 员怨圆
咱圆怨暂 增葬灶 晕蚤藻怎憎藻灶澡怎赠泽藻 孕袁 增葬灶 蕴藻藻怎憎藻灶 栽袁 运澡葬躁藻澡葬造蚤 允袁 藻贼 葬造援 酝怎鄄
贼葬贼蚤燥灶泽 蚤灶 贼澡藻 皂蚤贼燥糟澡燥灶凿则蚤葬造 糟赠贼燥糟澡则燥皂藻 遭 燥枣 栽藻贼则葬灶赠糟澡怎泽 怎则贼蚤糟葬藻
运燥糟澡 渊粤糟葬则蚤院 栽藻贼则葬灶赠糟澡蚤凿葬藻冤 糟燥灶枣藻则 糟则燥泽泽鄄则藻泽蚤泽贼葬灶糟藻 遭藻贼憎藻藻灶
遭蚤枣藻灶葬扎葬贼藻 葬灶凿 葬糟藻择怎蚤灶燥糟赠造援 孕藻泽贼 酝葬灶葬早藻皂藻灶贼 杂糟蚤藻灶糟藻袁 圆园园怨袁
远缘渊源冤院 源园源 原 源员圆
咱猿园暂 黄素青袁 徐汉虹袁 曾东强袁 等援 农田害螨的几种生物测定
方法援 植物保护袁 圆园园缘袁 猿员渊员冤院 苑怨 原 愿员
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虫抗药性研究中的应用援 中华卫生杀虫药械袁 圆园员员袁 员苑
渊圆冤院 员源员 原 员源源
咱猿圆暂 运蚤皂 匀 允袁 匀葬憎贼澡燥则灶藻 阅 允袁 孕藻贼藻则泽 栽袁 藻贼 葬造援 粤责责造蚤糟葬贼蚤燥灶 燥枣
阅晕粤鄄遭葬泽藻凿 早藻灶燥贼赠责蚤灶早 贼藻糟澡灶蚤择怎藻泽 枣燥则 贼澡藻 凿藻贼藻糟贼蚤燥灶 燥枣 噪凿则鄄造蚤噪藻
责赠则藻贼澡则燥蚤凿 则藻泽蚤泽贼葬灶糟藻 蚤灶 枣蚤藻造凿 责燥责怎造葬贼蚤燥灶泽 燥枣 悦燥造燥则葬凿燥 责燥贼葬贼燥
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愿缘 原 怨远
渊责任编辑院谢小帆冤
猿苑员 期 唐小凤等院二斑叶螨对阿维菌素的抗药性及抗性基因的 孕粤杂粤检测技术