全 文 ：第 源员 卷摇 第 猿 期
圆园员源 年 远 月
植摇 物摇 保摇 护摇 学摇 报
粤悦栽粤 孕匀再栽韵孕匀再蕴粤悦陨悦粤 杂陨晕陨悦粤
灾燥造援 源员摇 晕燥援 猿
允怎灶藻 摇 圆园员源
摇
基金项目院 山东出入境检验检疫局科研项目渊杂运圆园员圆园缘冤袁国家质检总局科研项目渊圆园员园陨运圆苑园冤
作者简介院 甘琴华袁女袁员怨愿猿年生袁工程师袁研究方向为植物检疫袁 耘鄄皂葬蚤造院 择澡早葬灶岳 澡燥贼皂葬蚤造援 糟燥皂
收稿日期院 圆园员猿 原 员园 原 圆愿
法国进境葡萄砧木中啤酒花矮化类
病毒的检测与序列分析
甘琴华摇 王英超摇 魏晓棠摇 邵秀玲摇 刘彩霞摇 厉摇 艳
渊山东检验检疫技术中心袁 青岛 圆远远园园圆冤
摘要院 为检测法国进境葡萄砧木中啤酒花矮化类病毒渊匀燥责 泽贼怎灶贼 增蚤则燥蚤凿袁匀杂灾凿冤袁对其进行了 砸栽鄄
孕悦砸检测及序列测定袁并构建系统进化树比较了不同地域来源 匀杂灾凿 间的分子差异性遥 结果表明
基于 匀杂灾凿基因序列设计合成的 员 对引物能够扩增出 猿园圆 遭责 大小的目标片段袁而健康植株无此扩
增产物遥 法国葡萄砧木中检出的 匀杂灾凿分离物袁与国内外已报道毒株的核酸序列同源性达 怨园豫 耀
怨苑豫 袁与已报道的 匀杂灾凿全基因组序列间差异较小袁表明 匀杂灾凿 的序列变异与地域尧寄主等无明显
相关性遥
关键词院 啤酒花矮化类病毒曰 法国进境葡萄砧木曰 砸栽鄄孕悦砸检测曰 序列分析
阅藻贼藻糟贼蚤燥灶 葬灶凿 泽藻择怎藻灶糟藻 葬灶葬造赠泽蚤泽 燥枣 匀燥责 泽贼怎灶贼 增蚤则燥蚤凿 蚤灶
早则葬责藻增蚤灶藻 则燥燥贼泽贼燥糟噪 枣则燥皂 云则葬灶糟藻
郧葬灶 匝蚤灶澡怎葬摇 宰葬灶早 再蚤灶早糟澡葬燥摇 宰藻蚤 载蚤葬燥贼葬灶早摇 杂澡葬燥 载蚤怎造蚤灶早摇 蕴蚤怎 悦葬蚤曾蚤葬摇 蕴蚤 再葬灶
渊杂澡葬灶凿燥灶早 陨灶泽责藻糟贼蚤燥灶 葬灶凿 匝怎葬则葬灶贼蚤灶藻 栽藻糟澡灶燥造燥早赠 悦藻灶贼藻则袁 匝蚤灶早凿葬燥 圆远远园园圆袁 杂澡葬灶凿燥灶早 孕则燥增蚤灶糟藻袁 悦澡蚤灶葬冤
粤遭泽贼则葬糟贼院 栽燥 凿藻贼藻糟贼 贼澡藻 匀燥责 泽贼怎灶贼 增蚤则燥蚤凿 渊匀杂灾凿冤 枣则燥皂 云则藻灶糟澡 早则葬责藻增蚤灶藻 则燥燥贼泽贼燥糟噪袁 贼澡藻蚤则 灶怎糟造藻燥贼蚤凿藻
泽藻择怎藻灶糟藻泽 葬灶凿 皂燥造藻糟怎造葬则 凿蚤增藻则泽蚤贼赠 憎藻则藻 葬灶葬造赠扎藻凿援 栽澡藻 蚤灶枣藻糟贼藻凿 云则藻灶糟澡 早则葬责藻增蚤灶藻 则燥燥贼泽贼燥糟噪 泽葬皂责造藻泽 憎藻则藻
凿藻贼藻糟贼藻凿 遭赠 砸栽鄄孕悦砸 怎泽蚤灶早 责则蚤皂藻则泽 凿藻泽蚤早灶藻凿 遭葬泽藻凿 燥灶 匀杂灾凿 早藻灶藻 灶怎糟造藻燥贼蚤凿藻 泽藻择怎藻灶糟藻援 宰澡藻则藻葬泽 灶燥
葬皂责造蚤枣蚤藻凿 责则燥凿怎糟贼泽 憎藻则藻 燥遭贼葬蚤灶藻凿 枣则燥皂 贼澡藻 澡藻葬造贼澡赠 泽葬皂责造藻泽袁 葬 泽责藻糟蚤枣蚤糟 枣则葬早皂藻灶贼 憎蚤贼澡 贼澡藻 藻曾责藻糟贼藻凿 泽蚤扎藻 燥枣
猿园圆 遭责 憎葬泽 葬皂责造蚤枣蚤藻凿援 栽澡藻 燥遭贼葬蚤灶藻凿 责则燥凿怎糟贼 憎葬泽 贼澡藻灶 糟造燥灶藻凿 蚤灶贼燥 贼澡藻 责郧耘酝鄄栽 增藻糟贼燥则 葬灶凿 泽藻择怎藻灶糟藻凿援
栽澡藻 责澡赠造燥早藻灶蚤糟 则藻造葬贼蚤燥灶泽澡蚤责 泽澡燥憎藻凿 贼澡葬贼 云则藻灶糟澡 早则葬责藻增蚤灶藻 则燥燥贼泽贼燥糟噪 憎葬泽 蚤灶枣藻糟贼藻凿 遭赠 匀杂灾凿曰 皂燥则藻燥增藻则袁 蚤贼
凿蚤泽责造葬赠藻凿 葬 澡蚤早澡 泽藻择怎藻灶糟藻 泽蚤皂蚤造葬则蚤贼赠 燥枣 怨园豫 原怨苑豫 糟燥皂责葬则藻凿 憎蚤贼澡 贼澡藻 糟蚤增蚤造 葬灶凿 枣燥则藻蚤早灶 则藻责燥则贼藻凿 蚤泽燥造葬贼藻泽援
栽澡藻泽藻 则藻泽怎造贼泽 泽怎早早藻泽贼藻凿 贼澡葬贼 匀杂灾凿泽 燥枣 凿蚤枣枣藻则藻灶贼 增葬则蚤藻贼蚤藻泽袁 澡燥泽贼泽 燥则 则藻早蚤燥灶泽 憎藻则藻 则藻造葬贼蚤增藻造赠 糟燥灶泽藻则增藻凿援
运藻赠 憎燥则凿泽院 匀燥责 泽贼怎灶贼 增蚤则燥蚤凿曰 早则葬责藻增蚤灶藻 则燥燥贼泽贼燥糟噪 枣则燥皂 云则葬灶糟藻曰 砸栽鄄孕悦砸 凿藻贼藻糟贼蚤燥灶曰 泽藻择怎藻灶糟藻 葬灶葬造赠泽蚤泽
摇 摇 啤酒花矮化类病毒渊匀燥责 泽贼怎灶贼 增蚤则燥蚤凿袁 匀杂灾凿冤属
于马铃薯纺锤块茎类病毒科 孕燥泽责蚤增蚤则燥蚤凿葬藻袁是啤酒花
矮化类病毒属 匀燥泽贼灶增蚤则燥蚤凿 的唯一成员遥 匀杂灾凿 容易
通过嫁接和嵌木芽接方式随无性繁殖材料远距离传
播袁在欧洲尧亚洲尧北美和中东均有分布咱员 原 猿暂 遥 员怨愿缘
年在日本的葡萄上发现了 匀杂灾凿袁研究认为其初侵
染源为葡萄袁在进化过程中逐渐适应了新的寄主袁包
括黄瓜尧石榴尧葡萄尧柑橘尧梨尧桃尧李尧杏和扁桃等草
本及木本植物咱源暂 遥 孕怎糟澡贼葬 等咱缘暂 员怨愿怨 年从德国的葡
萄砧木中分离到 匀杂灾凿曰酝葬贼燥怎泽藻噪 等咱远暂 圆园园猿 年在捷
克啤酒花产区的葡萄中发现 匀杂灾凿曰蕴蚤 等咱苑暂 圆园园远 年
从中国的葡萄中分离到 匀杂灾凿遥 匀杂灾凿 在葡萄咱愿暂和
杏咱怨暂上呈潜伏侵染袁但却可能成为另一种栽培植物
的潜在威胁袁甚至造成严重危害袁如啤酒花和柑橘矮
化尧李和桃产生斑果等袁且有时和葡萄树上的其它病
毒混合侵染袁加重病害的发生遥 匀杂灾凿 侵染寄主植
物后是否有症状表现袁症状表现是否与地域尧品种等
有关的研究目前较少咱员园暂 遥
栽燥则则藻泽等咱猿暂 员怨怨源 年用组织印迹法检测地中海尧
欧洲和美洲的核果类果树渊桃尧杏尧李冤上的类病毒袁
发现土耳其西部桃树上 匀杂灾凿 的发生率高达 缘苑豫 遥
法国曾在 圆园园愿 年对留尼旺岛出境的啤酒花矮化类
病毒作了有害生物风险评估袁发现不同国家和地区
果树上 匀杂灾凿 的发生分布状况存在很大差异咱员员暂 遥
粤皂葬则蚤等咱员圆暂在从李属植物上获得新的 匀杂灾凿 序列
后袁提出 匀杂灾凿分离物可能是由不同类型自然重组
形成的袁根据其序列特点将 匀杂灾凿分为 缘 个类型院李
型尧啤酒花型尧柑橘型尧李柑橘型和李原啤酒花原柑橘
型袁其中前三者为主要侵染类型袁后二者为次要侵染
类型遥
匀杂灾凿是一种无蛋白质外壳的侵染性单链环状
砸晕粤分子袁不具有抗原性袁不能采用血清学方法进
行检测遥 目前袁常用的检测方法主要有指示植物法尧
晕燥则贼澡藻则灶杂交尧核酸斑点杂交和 砸栽鄄孕悦砸咱员猿暂等遥 有
关法国进境葡萄砧木中 匀杂灾凿 的研究报道较少袁目
前中国地区还未见相关报道遥 本研究提取法国葡萄
砧木叶片的核酸袁利用 砸栽鄄孕悦砸方法检测并进行 糟阅鄄
晕粤克隆袁测定其核苷酸序列袁完成法国葡萄砧木样
品中 匀杂灾凿全序列分析袁以期为建立完善啤酒花矮
化类病毒检疫检测体系尧防治类病毒病害及果蔬转
基因抗病育种等奠定基础遥
员 材料与方法
员援 员 材料
供试植株院葡萄砧木叶片样品来自法国进境葡
萄砧木遥
试剂院酝鄄酝蕴灾反转录酶尧质粒小提和凝胶回收
试剂盒购于德国 匝蚤葬早藻灶 公司曰圆 伊 栽葬择 孕悦砸 酝葬泽贼藻则鄄
酝蚤曾和大肠杆菌 耘泽糟澡藻则蚤糟澡蚤葬 糟燥造蚤 阅匀缘琢 购自北京天
根生化科技有限公司曰栽源 阅晕粤 连接酶尧栽苑 砸晕粤 聚
合酶尧晕栽孕泽 和 责郧耘酝鄄栽 载体等购自美国 孕则燥皂藻早葬
公司遥
仪器院杂孕载鄄猿愿园 型光照恒温培养箱袁宁波江南仪
器厂曰耘责责藻灶凿燥则枣 缘猿猿源 孕悦砸扩增仪袁德国艾本德股份
公司遥
员援 圆 方法
员援 圆援 员 引物设计与合成
参考 郧藻灶月葬灶噪中登录的 匀杂灾凿 核苷酸序列渊登
录号院匀酝猿缘苑愿园圆援 员冤袁设计 猿 条引物袁其中 匀杂灾凿 孕员
用于反转录袁匀杂灾凿 孕圆 和 匀杂灾凿 孕猿 用于 孕悦砸 扩增遥
匀杂灾凿 孕员院缘忆鄄郧悦栽郧郧粤栽栽悦栽郧粤郧粤粤郧粤郧栽栽鄄猿忆曰匀杂灾凿
孕圆院缘忆鄄粤粤悦悦悦郧郧郧郧悦栽悦悦栽栽栽悦栽悦粤鄄猿忆曰匀杂灾凿 孕猿院缘忆鄄
粤粤悦悦悦郧郧郧郧悦粤粤悦栽悦栽栽悦栽悦鄄猿忆遥 引物由英潍捷基
公司合成遥
员援 圆援 圆 总 砸晕粤的提取
参考 郧怎燥等咱员源暂方法袁取叶片样品 缘 早袁提取核酸
沉淀后溶于 猿园 滋蕴焦碳酸二乙酯渊凿蚤藻贼澡赠造责赠则燥糟葬则遭燥灶鄄
葬贼藻袁阅耘孕悦冤处理水中遥 原 圆园 益贮存备用遥
员援 圆援 猿 砸栽鄄孕悦砸扩增
反转录体系院员园 伊 砸栽 酝蚤曾 圆 滋蕴尧圆援 缘 皂皂燥造 辕 蕴 杂怎鄄
责藻则 孕怎则藻 凿晕栽孕 圆 滋蕴尧员园 滋皂燥造 辕 蕴引物 匀杂灾凿 孕员 圆 滋蕴尧
匝怎葬灶贼 砸藻增藻则泽藻 栽则葬灶泽糟则蚤责贼葬泽藻 员 滋蕴尧提取的法国葡萄砧
木叶片组织总 砸晕粤 远 滋蕴袁补水至 圆园 滋蕴遥 猿苑 益孵育
远园 皂蚤灶袁反应液置于 原 圆园 益保存备用遥 以 匀杂灾凿 孕圆
和 匀杂灾凿 孕猿 作为扩增引物进行 孕悦砸 扩增袁以含有
匀杂灾凿全长序列的重组质粒作为阳性对照袁以无菌
水作空白对照遥 孕悦砸反应体系院圆 伊 栽葬择 孕悦砸 酝葬泽贼藻则
酝蚤曾 员圆援 缘 滋蕴尧 员园 滋皂燥造 辕 蕴 匀杂灾凿 孕圆 辕 孕猿 各 员 滋蕴尧
糟阅晕粤模板 圆援 缘 滋蕴袁补水至 圆缘 滋蕴遥 反应程序院怨源 益
缘 皂蚤灶曰怨源 益 猿园 泽袁缘猿 益 猿园 泽袁苑圆 益 猿园 泽袁猿缘 个循环曰
苑圆 益 员园 皂蚤灶遥
员援 圆援 源 砸栽鄄孕悦砸产物的回收尧克隆与酶切鉴定
将 孕悦砸扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳袁紫外灯
下切割特异性条带袁分别装入 员援 缘 皂蕴 离心管中袁使
用凝胶回收试剂盒进行回收遥 连接反应按照
责郧耘酝鄄栽载体试剂盒说明进行操作袁连接产物转入
大肠杆菌 阅匀缘琢 感受态细胞涂平板后袁猿苑 益培养过
夜遥 通过菌液 孕悦砸及酶切鉴定筛选阳性克隆遥
员援 圆援 缘 序列测定及分析
将筛选获得的含 匀杂灾凿目的片段的重组质粒进
行序列测定袁由华大基因科技服务有限公司完成遥
利用 月蚤燥耘凿蚤贼 苑援 园援 缘尧郧藻灶藻阅燥糟尧悦造怎泽贼葬造 宰尧酝耘郧粤 缘援 员园
软件将所测序列与 郧藻灶月葬灶噪 中已提交的相似序列
进行比较分析袁构建 哉孕郧酝粤系统发育树遥
圆 结果与分析
圆援 员 砸栽鄄孕悦砸扩增
孕悦砸产物经 圆援 园豫琼脂糖凝胶电泳袁样品 员尧猿尧
源尧缘尧员园 均出现了与阳性对照大小一致的特异性扩
增条带袁约 猿园圆 遭责渊图 员冤袁该片段大小与 匀杂灾凿 目标
基因片段大小一致袁而健康植株未出现该条带遥 表
明所用引物对 匀杂灾凿 具有较好的特异性袁可用于
匀杂灾凿的 砸栽鄄孕悦砸常规检测遥
苑源猿猿 期 甘琴华等院 法国进境葡萄砧木中啤酒花矮化类病毒的检测与序列分析
图 员 砸栽鄄孕悦砸检测葡萄砧木样品中的 匀杂灾凿
云蚤早援 员 阅藻贼藻糟贼蚤燥灶 燥枣 匀杂灾凿 蚤灶 早则葬责藻增蚤灶藻 则燥燥贼泽贼燥糟噪 泽葬皂责造藻泽 遭赠 砸栽鄄孕悦砸
摇 摇 酝院阅晕粤 酝葬则噪藻则 阅蕴圆园园园曰员 耀 员圆院葡萄砧木样品曰悦运 垣 院阳性对照曰悦运 原 院清水对照遥 酝院 阅晕粤 酝葬则噪藻则 阅蕴圆园园园曰 员 原 员圆院 早则葬责藻增蚤灶藻 则燥燥贼鄄
泽贼燥糟噪曰 悦运 垣 院 责燥泽蚤贼蚤增藻 糟燥灶贼则燥造曰 悦运 原 院 凿凿匀圆韵 糟燥灶贼则燥造援
圆援 圆 砸栽鄄孕悦砸产物的克隆及酶切鉴定
将回收的 砸栽鄄孕悦砸 产物与 责郧耘酝鄄栽 载体连接袁
转化大肠杆菌 阅匀缘琢袁经蓝白斑菌落选出阳性克隆遥
提取阳性克隆质粒用 孕悦砸 反应和 耘糟燥砸玉酶切鉴定
均得到大小为 猿园圆 遭责的预期片段渊图 圆袁图 猿冤袁证明
匀杂灾凿插入到重组质粒中遥
图 圆 孕悦砸筛选带有 匀杂灾凿的重组质粒
云蚤早援 圆 栽澡藻 则藻泽怎造贼泽 燥枣 泽藻造藻糟贼藻凿 则藻糟燥皂遭蚤灶葬灶贼 责造葬泽皂蚤凿 憎蚤贼澡 匀杂灾凿 遭赠 孕悦砸 葬皂责造蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶
摇 摇 酝院缘园 遭责 造葬凿凿藻则曰员 耀 怨院阳性克隆的 孕悦砸扩增曰悦运 垣 院阳性对照曰悦运 原 院清水对照遥 酝院 缘园 遭责 造葬凿凿藻则曰 员 原 怨院 泽藻造藻糟贼藻凿 责燥泽蚤贼蚤增藻 糟造燥灶藻 遭赠
孕悦砸曰 悦运 垣 院 责燥泽蚤贼蚤增藻 糟燥灶贼则燥造曰 悦运 原 院 凿凿匀圆韵 糟燥灶贼则燥造援
图 猿 耘糟燥砸玉酶切鉴定带有 匀杂灾凿的重组质粒
云蚤早援 猿 砸藻泽贼则蚤糟贼蚤燥灶 葬灶葬造赠泽蚤泽 燥枣 则藻糟燥皂遭蚤灶葬灶贼 责造葬泽皂蚤凿
憎蚤贼澡 匀杂灾凿 遭赠 耘糟燥砸玉
摇 摇 箭头所指为 猿园圆 遭责遥 酝员院阅晕粤 酝葬则噪藻则 阅蕴圆园园园曰酝圆院阅晕粤 酝葬则噪藻则 阅蕴员缘园园园曰员院重组质粒对照曰圆院阳性克隆重组质粒 耘糟燥砸玉酶切遥
粤则则燥憎 蚤灶凿蚤糟葬贼藻泽 猿园圆 遭责援 酝员院 阅晕粤 酝葬则噪藻则 阅蕴圆园园园曰 酝圆院 阅晕粤 酝葬则噪藻则 阅蕴员缘园园园曰 员院 则藻糟燥皂遭蚤灶葬灶贼 责造葬泽皂蚤凿 糟燥灶贼则燥造曰 圆院 则藻糟燥皂遭蚤灶葬灶贼 责造葬泽皂蚤凿 凿蚤鄄
早藻泽贼藻凿 憎蚤贼澡 耘糟燥砸玉援
圆援 猿 序列测定与分析
选取 员 个重组克隆进行序列测定袁得到 猿园圆 遭责
的序列遥 将得到的序列与已报道的部分毒株进行比
较袁其序列同源率达 怨园豫 耀怨苑豫 渊表 员冤袁具有较高
愿源猿 植摇 物摇 保摇 护摇 学摇 报 源员 卷
表 员 匀杂灾凿分离物与其它分离物核苷酸同源性比较
栽葬遭造藻 员 栽澡藻 澡燥皂燥造燥早赠 燥枣 灶怎糟造藻燥贼蚤凿藻 泽藻择怎藻灶糟藻 遭藻贼憎藻藻灶 匀杂灾凿 蚤泽燥造葬贼藻泽 葬灶凿 燥贼澡藻则泽
序列号
晕怎皂遭藻则
序列长度 渊遭责冤
蕴藻灶早贼澡
序列相似性
杂蚤皂蚤造葬则蚤贼赠
来源地区
粤则藻葬
来源寄主
匀燥泽贼
云允苑苑员园圆猿援 员 圆怨苑 怨缘 中国河北 匀藻遭藻蚤袁 悦澡蚤灶葬 枣 在蚤扎赠责澡怎泽 躁怎躁怎遭葬
阅匝猿苑员源缘怨援 员 圆怨苑 怨缘 中国北京 月藻蚤躁蚤灶早袁 悦澡蚤灶葬 葡萄 灾蚤贼蚤泽 增蚤灶蚤枣藻则葬
耘哉猿远缘猿缘远援 员 圆怨怨 怨缘 中国新疆 载蚤灶躁蚤葬灶早袁 悦澡蚤灶葬 啤酒花 匀怎皂怎造怎泽 造怎责怎造怎泽
哉园圆缘圆苑援 员 猿园猿 怨猿 中国台湾 栽葬蚤憎葬灶袁 悦澡蚤灶葬 香橼 悦蚤贼则怎泽 皂藻凿蚤糟葬
载员猿愿猿愿援 员 圆怨怨 怨猿 以色列 陨泽则葬藻造 葡萄柚 悦蚤贼则怎泽 责葬则葬凿蚤泽藻
载员缘猿猿园援 员 圆怨愿 怨远 德国 郧藻则皂葬灶 葡萄砧木 灾蚤贼蚤泽 增蚤灶蚤枣藻则葬 则燥燥贼泽贼燥糟噪
匀匝猿愿远苑圆远援 员 圆怨愿 怨圆 突尼斯 栽怎灶蚤泽蚤葬 柑橘 悦蚤贼则怎泽 则藻贼蚤糟怎造葬贼葬
匀匝猿愿远苑圆员援 员 猿园园 怨园 突尼斯 栽怎灶蚤泽蚤葬 柑橘 悦蚤贼则怎泽 则藻贼蚤糟怎造葬贼葬
再园怨猿缘圆援 员 圆怨苑 怨缘 西班牙 杂责葬蚤灶 桃树 孕则怎灶怎泽 责藻则泽蚤糟葬
粤允园员员愿员猿援 员 圆怨远 怨缘 西班牙 杂责葬蚤灶 扁桃 粤皂赠早凿葬造怎泽 糟燥皂皂怎灶蚤泽
耘哉愿苑圆圆苑苑援 员 猿园员 怨圆 西班牙 杂责葬蚤灶 甜橙 悦蚤贼则怎泽 泽蚤灶藻灶泽蚤泽
郧匝怨怨缘源远远援 员 圆怨愿 怨苑 意大利 陨贼葬造赠 葡萄 灾蚤贼蚤泽 增蚤灶蚤枣藻则葬
耘云缘圆猿愿圆苑援 员 圆怨苑 怨缘 土耳其 栽怎则噪藻赠 杏树 粤则皂藻灶蚤葬糟葬 增怎造早葬则蚤泽
粤月园缘源远员源援 员 猿园员 怨圆 日本 允葬责葬灶 柑橘 悦蚤贼则怎泽 则藻贼蚤糟怎造葬贼葬
粤月园缘源远园远援 员 猿园圆 怨圆 日本 允葬责葬灶 柑橘 悦蚤贼则怎泽 则藻贼蚤糟怎造葬贼葬
允匝园愿园圆苑怨援 员 猿园圆 怨圆 伊朗 陨则葬灶 柑橘 悦蚤贼则怎泽 则藻贼蚤糟怎造葬贼葬
允匝园愿园圆苑缘援 员 猿园源 怨员 伊朗 陨则葬灶 无花果 云则怎糟贼怎泽 枣蚤糟蚤
允匝园愿园圆苑源援 员 猿园远 怨员 伊朗 陨则葬灶 无花果 云则怎糟贼怎泽 枣蚤糟蚤
允匝园愿园圆苑猿援 员 猿园猿 怨圆 伊朗 陨则葬灶 桑树 酝燥则怎泽 葬造遭葬
允载圆缘怨源员远援 员 猿园圆 怨圆 希腊 郧则藻藻糟藻 甜橙 悦蚤贼则怎泽 泽蚤灶藻灶泽蚤泽
粤允圆怨苑愿源园援 员 圆怨苑 怨远 希腊 郧则藻藻糟藻 杏树 粤则皂藻灶蚤葬糟葬 增怎造早葬则蚤泽
耘云员缘员圆怨园援 员 圆怨苑 怨缘 塞尔维亚 杂藻则遭蚤葬 杏树 粤则皂藻灶蚤葬糟葬 增怎造早葬则蚤泽
耘哉怨猿员圆远园援 员 猿园猿 怨圆 苏丹 杂怎凿葬灶 甜橙 悦蚤贼则怎泽 泽蚤灶藻灶泽蚤泽
粤再圆猿苑员远愿援 员 圆怨缘 怨员 印度 陨灶凿蚤葬 柠檬砧木 悦蚤贼则怎泽 造蚤皂燥灶 则燥燥贼泽贼燥糟噪泽
粤允圆怨苑愿猿猿援 员 猿园园 怨猿 塞浦路斯 悦赠责则怎泽 杏树 粤则皂藻灶蚤葬糟葬 增怎造早葬则蚤泽
再园愿源猿苑援 员 圆怨怨 怨猿 法国 云则葬灶糟藻 桃树 孕则怎灶怎泽 责藻则泽蚤糟葬
允匝苑园远猿源猿援 员 圆怨苑 怨缘 韩国 运燥则藻葬 李 孕则怎灶怎泽 泽葬造蚤糟蚤灶葬
的同源性袁从而确定该序列为侵染法国葡萄砧木的
匀杂灾凿核酸片段遥 将该序列提交至 郧藻灶月葬灶噪袁获得序
列号为 运云苑员圆圆愿园遥
从序列一级结构上看袁匀杂灾凿 分离物的核酸序
列变异较小袁法国葡萄砧木中 匀杂灾凿 分离物与意大
利葡萄中 匀杂灾凿 分离物 郧匝怨怨缘源远远援 员 同源性最高袁
仅有 员园 个碱基的差异曰与德国葡萄砧木中 匀杂灾凿 分
离物 载员缘猿猿园援 员 和希腊杏树中 匀杂灾凿 分离物
粤允圆怨苑愿源园援 员 均有 员圆 个碱基的差异曰与突尼斯柑橘
中 匀杂灾凿 分离物 匀匝猿愿远苑圆员援 员 的差异较大袁二者相
差 猿园 个碱基遥
根据 匀杂灾凿 核苷酸序列建立 匀杂灾凿 不同分离物
的系统进化树渊图 源冤遥 圆苑 个不同地域 匀杂灾凿分离物
可以划分为 圆 个亚组遥 法国葡萄砧木中 匀杂灾凿 分离
物与德国葡萄砧木 载员缘猿猿园援 员 和意大利葡萄
郧匝怨怨缘源远远援 员 中分离物亲缘关系很近袁与希腊杏树
粤允圆怨苑愿源园援 员 和塞尔维亚杏树 耘云员缘员圆怨园援 员 中分离物
以很高的相似系数聚集在一起袁而与西班牙桃树
再园怨猿缘圆援 员尧扁桃树 粤允园员员愿员猿援 员尧中国河北枣树
云允苑苑员园圆猿援 员尧 韩国李树 允匝苑园远猿源猿援 员尧 法国桃树
再园愿源猿苑援 员尧塞浦路斯杏树 粤允圆怨苑愿猿猿援 员 中分离物等
分布在不同的亚组里袁亲缘关系较远遥 伊朗无花果
树分离物 允匝园愿园圆苑缘援 员 和 允匝园愿园圆苑源援 员尧日本柑橘树
分离物 粤月园缘源远员源援 员 和 粤月园缘源远园远援 员尧突尼斯柑橘树
分离物 匀匝猿愿远苑圆远援 员 和 匀匝猿愿远苑圆员援 员 均各自分布在
同一分枝中袁表明在相同地区同一寄主上的 匀杂灾凿
分离物相似系数较高袁亲缘关系较近遥
猿 讨论
我国拥有丰富的葡萄品种资源袁是世界上重要
怨源猿猿 期 甘琴华等院 法国进境葡萄砧木中啤酒花矮化类病毒的检测与序列分析
图 源 依据 匀杂灾凿核苷酸序列构建的系统发育树
云蚤早援 源 栽澡藻 责澡赠造燥早藻灶藻贼蚤糟 贼则藻藻 燥枣 匀杂灾凿 蚤泽燥造葬贼藻泽 遭葬泽藻凿 燥灶 贼澡藻 灶怎糟造藻燥贼蚤凿藻 泽藻择怎藻灶糟藻泽
的葡萄产区遥 匀杂灾凿 虽在葡萄咱愿暂上呈潜伏侵染袁但
却可能和葡萄树上的其它病毒混合侵染袁加重病害
的发生咱员缘暂 遥 本研究利用 砸栽鄄砸悦砸 方法检测到
匀杂灾凿袁这是首次在进境葡萄砧木样品中检测到该类
病毒袁将其核酸序列与 郧藻灶月葬灶噪 中报道的 匀杂灾凿 序
列进行比对分析袁发现与已报道的 匀杂灾凿 全基因组
序列间差异较小袁同源性为 怨园豫 耀 怨苑豫 遥 法国葡萄
砧木中 匀杂灾凿分离物与意大利葡萄中 匀杂灾凿 分离物
郧匝怨怨缘源远远援 员 同源性最高袁达到 怨苑豫 袁一级结构上仅
有 员园 个碱基的差异遥 核苷酸序列一级结构上袁不同
地域尧不同寄主之间序列差异较小袁已有报道显示
匀杂灾凿序列相当保守袁特别是中央保守区几乎没有
变化咱员远暂 遥 说明 匀杂灾凿 的序列变异与地域尧寄主等无
明显相关性袁这可能与 匀杂灾凿 随不同的寄主在不同
地区间远距离调运有关遥 法国进境葡萄砧木 匀杂灾凿
分离物与其它 匀杂灾凿 分离物核苷酸序列亦存在差
异袁孕藻造糟澡葬贼 等咱员苑暂报道侵染葡萄的 匀杂灾凿 亚型 砸晕粤
数据类型至少有 员园 种袁共同组成葡萄特异性 匀杂灾凿
组遥 葡萄上 匀杂灾凿 核酸序列是否比较保守袁还有待
于扩大检测样品数量进一步研究遥
致谢院中国检验检疫科学研究院张永江研究员为本试验提供
帮助袁特此致谢浴
参 考 文 献 渊砸藻枣藻则藻灶糟藻泽冤
咱员暂 砸葬凿蚤泽藻噪 杂袁 酝葬躁藻则 粤袁 允葬噪泽藻 杂袁 藻贼 葬造援 云蚤则泽贼 则藻责燥则贼 燥枣 匀燥责 泽贼怎灶贼
增蚤则燥蚤凿 蚤灶枣藻糟贼蚤灶早 澡燥责 蚤灶 杂造燥增藻灶蚤葬援 孕造葬灶贼 阅蚤泽藻葬泽藻袁 圆园员圆袁 怨远渊源冤院
缘怨圆
咱圆暂 耘造遭藻葬蚤灶葬 栽袁 运怎遭葬葬 砸 粤袁 悦澡燥怎藻蚤则蚤 耘袁 藻贼 葬造援 韵糟糟怎则则藻灶糟藻 燥枣 匀燥责
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