全 文 ：植物病理学报
ACTA PHYTOPATHOLOGICA SINICA摇 41(3): 232鄄239(2011)
收稿日期: 2010鄄01鄄14; 修回日期: 2011鄄02鄄26
基金项目: “十一五冶国家科技支撑项目 (2006BAD08A16); 国家质检总局科技计划项目 (2009IK321; 2010IK261)
通讯作者: 王卫芳, 博士,研究员, 主要从事植物病原真菌检疫鉴定与果树病理学研究; Tel: 020鄄38290936, Fax: 020鄄38290951,
E鄄mail: wfwang1@yahoo. com. cn。
进境美国苹果星裂壳孢果腐病菌的首次截获
———病原真菌的鉴定及风险分析
王卫芳*, 胡 佳, 赵立荣, 冯黎霞, 吴海荣, 胡学难, 钟国强
(广东出入境检验检疫技术中心, 广州 510623)
摘要: 广东口岸从美国华盛顿输华苹果(Malus domestica)中截获可疑腐烂病果, 症状表现为果梗凹腐或萼凹腐,病部果皮
暗褐色至黑色,病健交界处纹带褐色,分生孢子器黑色、颗粒状,直径 0. 3 ~ 0. 8 mm,部分埋生或近表生, 显微镜检可见无色
单胞的分生孢子。 分离物生长温度 -3 ~ 25益, 最适为 20益, 经柯赫氏法则验证确认为截获病果的病原菌。 Blast 分析表
明从分离物基因组中扩增到的 ITS基因与 GenBank中已知的 Phacidiopycnis washingtonensis菌株 ITS序列同源性达 100% 。
经形态特征、培养性状及 ITS系统发育分析, 将病原菌鉴定为苹果星裂壳孢果腐病菌(Ph. washingtonensis Xiao& J. D. Ro鄄
gers,2005),在分类上隶属于半知菌亚门球壳孢目星裂壳孢属(Phacidiopycnis),此截获鉴定属我国首次。 迄今为止我国尚
未有该病菌发生为害的报道,本文就此病菌对我国苹果和梨产业的潜在风险进行了评估分析。
关键词: 苹果病害; 病原真菌鉴定; Phacidiopycnis washingtonensis; 苹果星裂壳孢果腐病
First interception of fruit rot(Phacidiopycnis washingtonensis) on apples imported
from US———identification and risk analysis of the causal fungal agent 摇 WANG
Wei鄄fang, HU Jia, ZHAO Li鄄rong, FENG Li鄄xia, WU Hai鄄rong, HU Xue鄄nan, ZHONG Guo鄄qiang
(Guangdong Exit鄄Entry Inspection and Quarantine Technology Center, Guangzhou 510623, China)
Abstract: Suspicious decayed fruits of apple(Malus domestica) imported from Washington State,U. S. A.
were intercepted at Guangdong port in China, which displayed symptom of stem鄄end rot or calyx鄄end rot, with
dark brown to black skin and brown boundary between the diseased and health part. Black granule pycnidia of
0. 3 -0. 8 mm in diameter partially immersed or nearly free on the surface of decayed fruits. Colorless, single
cell conidia oozed from pycnidia were observed by microscope examination. The isolate grew at - 3 - 25益,
reach the optimum growth at 20益 and were verified as the causal fungal agent by Koch忆s postulates. Blast a鄄
nalysis revealed ITS amplified from the genome DNA of isolate displayed 100% sequence similarity to known
ITS of Phacidiopycnis washingtonensis strains in GenBank. On the basis of morphological characteristics, cul鄄
ture patterns, phylogenetic studies on ITS sequence, the causal agent of US rotten apple was identified as Ph.
washingtonensis Xiao& J. D. Rogers(2005), which belongs to Deuteromycotina, Sphaeropsidales, Phacid鄄
iopycnis. This was the first interception in China, so far there has been no any report yet on the occurrence of
the species in China, therefore the potential risk on the industry of apple and pear was evaluated in this paper.
Key words: apple disease; fungal pathogen identification; Phacidiopycnis washingtonensis; Phacidiopycnis
rot on apple fruit
中图分类号: Q945. 8摇 摇 摇 摇 摇 文献标识码: A摇 摇 摇 摇 摇 文章编号: 0412鄄0914(2011)03鄄0232鄄08
摇
摇 3 期 王卫芳,等:进境美国苹果星裂壳孢果腐病菌的首次截获———病原真菌的鉴定及风险分析
摇 摇 蔷薇科苹果亚科苹果属落叶乔木———苹果
(Malus domestica)是我国重要的栽培果树之一,也
是我国出口创汇的重要水果种类。 随着国际间水
果贸易往来的日益频繁,外来新的、危险性有害生
物潜在高频率的入侵对我国苹果生产的威胁随之
增强。 广东佛山澜石口岸从进境美国苹果中截获
了一种我国从未报道的果实腐烂病害,本文对该病
害的症状进行了描述, 对病原菌进行了分类鉴定,
分析评估了病菌对我国苹果和梨产业的潜在风险。
通过分离培养、形态学观察、致病性测定及病菌基
因组中 ITS序列检测分析,将病原菌鉴定为 Phac鄄
idiopycnis washingtonensis Xiao& J. D. Rogers(下文
中 Phacidiopycnis缩写为 Ph. ),此截获鉴定在我国
尚属首次。 迄今为止,除美国太平洋地区西北岸华
盛顿中北部外[1,2],世界其他国家和地区尚未有该
病发生为害的报道。 本研究在“17、18 届中美植物
双边检疫会谈冶中为解决中美水果贸易争端提供
了强有力的技术支持,为进境美国苹果果腐病检疫
鉴定方法与技术标准的制定奠定了基础。
1摇 材料与方法
1. 1摇 供试样品与症状检验
供试病果从美国华盛顿 Witte orchards Inc、
Evans Friut Company和 Northern Friut Company等
三家包装厂输华苹果中截获,品种:Red Delicious
(中文名:红元帅,俗名:蛇果)。 对病果外观及剖
面症状特点进行观察记录(显微镜:Carl ZEISS Mi鄄
coimaging GmbH)。
1. 2摇 苹果果腐病菌的分离
病菌的分离采用组织分离法[1,2];若病果皮上
有明显的分生孢子器,则直接挑取孢子器制成孢子
悬浮液,在 PDA平板、20益黑暗条件下稀释分离培
养,病菌纯化后于 4益下保存。
1. 3摇 病菌形态特征的观察
选取有明显分生孢子器的病果皮组织进行冰
冻切片(切片机:LEICA CM 1900),棉兰染色后,
于倒置显微镜(Nikon eclipse TE 200鄄U)下观察记
录分生孢子器的形态特征。 显微观察病果皮上及
分离物的分生孢子形态特征(显微镜:Carl ZEISS
Axiophot)。
1. 4摇 分离物培养性状的观察
将分离物菌落边缘菌丝体块置于 PDA平板中
央[1,2],在 20益、黑暗条件下培养,观察记录菌落的
生长速度、颜色变化、子实体的形成和产孢情况。
1. 5摇 致病性测定
供试水果为健康的红元帅苹果(产地:美国华
盛顿),供试菌株为分离物 Aphw0801、Aphw0802、
Aphw0803 ( 20益、黑暗下于 PDA 平板上培养
20 d),分生孢子供试浓度为 1 伊 104 / mL。 采取有
伤和无伤方式对果梗凹部或果萼凹部接种[1,2],每
处理接种 10 个果实,以无菌水作对照。 保湿后置
于 20益下,定期观察接种果实的发病情况,发病后
按照 1. 2 中的方法分离病菌,对柯赫氏法则验证确
认的菌株进行形态学鉴定。
1. 6摇 ITS基因序列测定与系统发育分析
选取 Aphw0801、Aphw0802、Aphw0803 3 株分
离物,于 PDA 培养基、25益、黑暗条件下培养 5 d,
挑取菌落边缘新鲜菌丝,采用常规 CTAB 法提取
基因组 DNA作扩增模板,利用真菌 ITS 通用引物
ITS1 ( 5忆鄄TCCGTAGGTGAACCTGCGG鄄3忆) 和
ITS4 (5忆鄄TCCTCCGCTTATTGATATGC鄄3忆) [3],扩
增病菌基因组 DNA 中的 ITS 基因。 PCR 反应体
系总体积为 25 滋L:10 倍 PCR 缓冲液(含 MgCl2)
2. 5 滋L,dNTP(2. 5 mmol / L)2 滋L,上下游引物(10
滋mol / L)各 1 滋L,Taq (5U / 滋L) 0. 125 滋L,模板
DNA 2 滋L,ddH2O 16. 375 滋L。 反应程序为 94益
预变性 2 min;94益 45 s,60益 45 s,72益 1 min,30
个循环;72益 延伸 10 min,4益保存。 PCR 产物送
上海英潍捷基生物有限公司纯化测序,测序结果与
NCBI / GenBank 数据库中的已知序列进行 BLAST
比较,确定与试验菌株亲缘关系最近的种。 从
GenBank中获得与试验菌株 ITS 序列同源性较高
的相关种属的 ITS 序列,构建系统发育树。 用
MEGA version 4. 0. 1 进行进化分析,进化树的构
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摇
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建采用 Neighbour鄄joining 方法,设置均为默认值,
同时计算进化距离及各分支的置信度。
1. 7摇 病原菌适生相关因素的初步测定
1. 7. 1摇 温度和培养基对菌丝体的生长观测摇 供试
菌株为分离物 Aphw0801,在黑暗条件下,以 5益为
间隔梯度,于 0 ~ 30益温度范围内观察温度对菌丝
体生长的影响;在 20益、黑暗下评估 7 种培养基对
菌丝体生长的影响,测量所得数据用 SAS 8. 01a做
DUNCAN分析(琢 =0. 05)。 培养基配方 / L:PDA:
40. 1g PDA粉 (广东环凯公司);OA颐 30 g 燕麦片
(百事中国公司),20 g 琼脂粉(广州威佳公司);
MEA:30 g麦芽提取物(英国 OXID Ltd),15 g 琼
脂粉;AJA: 200 mL苹果汁,3. 0 g CaCO3,15 g 琼
脂粉;PJA:200 mL 梨汁,3. 0 g CaCO3,15 g 琼脂
粉;V8:200 mL V鄄8 混合蔬菜汁(美国金宝汤公
司),3. 0 g CaCO3,15 g 琼脂粉。 果汁配制法:
200 g 水果果肉于 1 L ddH2O 榨汁过滤,AJAa 和
AJAb中的苹果分别取自辽宁营口的水晶红富士
和美国华盛顿的红元帅,PJA中的鸭梨产自河北。
1. 7. 2摇 病原菌对不同产地、不同品种水果的致病
性测定摇 以分离物 Aphw0801 为接种体、中国辽宁
水晶红富士苹果和河北鸭梨及美国华盛顿红元帅
苹果为接种果实,采用有伤接种法,分析比较进境
截获的苹果果腐病病原菌对不同产地、不同品种水
果的致病性差异。
2摇 结果与分析
2. 1摇 症状特点
截获的苹果果腐病果显现果梗凹腐或萼凹腐,
分别从果梗基部、果萼基部开始发病,逐渐向果实
下部或上部扩展。 其共同特点是病部果皮暗褐色
至黑色,果肉变褐腐烂,病健交界处有明显的黑褐
色分界纹带(图 1鄄A);顺着果梗切开病果,剖面病
健交界处也可见明显的鲜亮褐色纹带;病部果肉组
织褐色,呈海绵状,质地稍硬(图 1鄄B)。 病果刚截
获时,果梗凹处分布少量黑色、小颗粒状分生孢子
器,在立体显微镜下分生孢子器呈半球形,表生或
部分埋生在果皮上,徒手切片后镜检可见大量分生
孢子从分生孢子器中涌出,无色、单细胞。 将此病
果放置于 4益下,病菌仍可扩展,7 ~ 10 d 后整个病
果表面密布分生孢子器,分生孢子器初白色,成熟
后转黑色,并溢出乳白色至乳黄色粘质状分生孢子
团(图 1鄄C)。 后期病果散发浓烈的酸臭味,不堪
食用。
2. 2摇 病原菌的形态特征
病菌的载孢体为分生孢子器,亚球形,稍扁平,
暗黑色,直径约 0. 3 ~ 0. 8 mm,单腔室或呈星状开
裂成不规则的多腔室,开口为小孔或不规则孔穴
(图 1鄄D1、D2)。 分生孢子光滑, 无色透明,单胞,
泪滴形、一端平截,或卵形至椭圆形,无胞痕,具油
球 2 个(图 1鄄E)。 截获的腐烂果实上分生孢子大
小为(6. 1 ~ 8. 3) 滋m 伊 (2. 4 ~ 4) 滋m;APhw0801、
APhw0802、 APhw0803 3 株分离物(20益、黑暗下
于 PDA培养 4 wk)的分生孢子大小与病果上的分
生孢子相差甚微,分别为(5. 9 ~ 8. 4) 滋m 伊 (3 ~
4) 滋m、(5. 5 ~ 7. 9) 滋m 伊 (2. 8 ~ 3. 6) 滋m、(6. 7
~ 8. 0) 滋m 伊 (2. 8 ~ 3. 6) 滋m。 以上结果与 Xiao&
J. D. Rogers 描述的苹果果腐病菌 Ph. washing鄄
tonensis的形态特征一致[1](表 1)。
2. 3摇 病菌分离物的培养性状
采用组织分离法或孢子稀释分离法, 从截获
的进境美国苹果病果样品上分离到的菌株均与
Ph. washingtonensis的培养性状[1]一致:在 20益、
黑暗培养条件下,菌落在 PDA 平板上呈圆形、平
铺,气生菌丝旺盛、绒毛状,边缘不整齐,呈裂瓣状。
菌落初为纯白色(培养 3 d),菌丝体老熟后逐渐由
白色变为鼠灰色、灰黑色,最终变为黑色。 培养 7 d
后菌落中部呈鼠灰色至灰黑色,培养 10 d 后菌落
形成深浅色交替的菌丝环带,菌落背面从中部至边
缘依次呈黑、灰黑、灰、白色共 4 个环带(图 1鄄F1、
F2)。 分生孢子器成熟速度较快且产孢丰富,培养
至 7 d在菌落表面出现肉眼可见的粘稠状、乳白色
至乳黄色分生孢子团,培养 14 d 后分生孢子团则
布满整个菌落。
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摇
摇 3 期 王卫芳,等:进境美国苹果星裂壳孢果腐病菌的首次截获———病原真菌的鉴定及风险分析
Fig. 1摇 Symptoms of fruit rot on Red delicious apple and morphological and culture
characteristics of Phacidiopycnis washingtonensis
A: Stem鄄end rot on apple showing clear brown boundary between diseased and health part on the surface of
fruit; B: Internal section of decayed fruit; C: Pycnidia densely covered on the surface of entire fruit;
D: Section through pycnidium, D1: With uniloculate; D2: With several irregular aperture(stained blue conidia lining
pycnidial cavity); E: Conidia by DIC; F: 10 d old PDA culture at 20益 in the dark , F1: Colony face; F2: Colony inverse.
2. 4摇 病原菌的致病性
以 Aphw0801、Aphw0802、Aphw0803 3 株分离
物为接种体,接种华盛顿产的苹果品种红元帅健
果,3 周后检查发现无论是采用有伤还是无伤接
种,除对照外,接种的果实在果梗凹或萼凹部均呈
褐腐症状并出现明显的鼠灰色菌丝体。 将接种果
实转入 4益冰箱中贮藏,30 d 后检查发现对照果仍
不发病,而接种的果实发病率为 100% ,整果均呈
黑色腐烂状,果皮上出现大量黑色颗粒状分生孢子
器,症状与截获的病果完全相同。 从接种果上再次
分离到的病菌与供试菌株培养特性及形态特征一
致。 经 柯 赫 氏 法 则 验 证, 确 认 Aphw0801、
Aphw0802、Aphw0803 均为截获的进境美国苹果果
腐病果的病原菌。
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摇
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Table 1摇 Conidia sizea of Phacidiopycnis washingtonensis intercepted and literature documented
Isolatesb
Range
/ (滋m 伊 滋m)
Average
/ (滋m 伊 滋m)
on PDA APhw0801 (5. 9 - 8. 4) 伊 (3 -4) 7. 3 伊 3. 3
APhw0802 (5. 5 - 7. 9) 伊 (2. 8 - 3. 6) 7. 3 伊 3. 3
APhw0803 (6. 7 - 8. 0) 伊 (2. 8 - 3. 6) 7. 3 伊 3. 2
Xiao& J. D. Rogers[1] [(5 - )6 -7. 5( -8)] 伊 [3 -4( -4. 5)] 7 伊3. 5
on fruit APhw0801 鄄 鄄
APhw0802 (6. 1 - 8. 3) 伊 (2. 4 - 4) 7. 5 伊 3. 4
APhw0803 鄄 鄄
Xiao& J. D. Rogers[1] [(4. 5 - )6 -7. 5( -9)] 伊 [2 -4( -5)] 7 伊3. 5
a Values for each isolate are the means of pooled data from 30 conidia; b Strians were isolated from Red Delicious apple
intercepted at Guangdong port, China; 鄄 : non鄄measurement.
2. 5摇 ITS序列的 BLAST与系统发育分析
采 用 引 物 ITS1 / ITS4, 从 Aphw0801、
Aphw0802、Aphw0803 3 株分离物的基因组 DNA
中均扩增得到大小约为 550 bp 的 PCR 产物(图
2),测序结果表明该片段实际大小是 513 bp,Gen鄄
Bank 登录号为 FJ237045、GU367605、GU367606。
BLAST分析表明以上 3 个序列与 GenBank中已知
的 Ph. washingtonensis 的 CLX2151、 CLX2152、
LX2520、CLX2521、CLX2527、CLX2528 等 6 个菌
株的 ITS1鄄5. 8S r RNA鄄ITS2 全序列 AY608643、
AY608644、 AY608645、 AY608646、 AY608647、
AY608648 的同源性均为 100% 。
Fig. 2 摇 PCR amplification product from iso鄄
lates of fruit rot by primers ITS1 / ITS4
for ITS
M: DL2000 marker; 1鄄3: Isolate Aphw0801, Aphw0802,
Aphw0803; 4: Health apple fruit tissue; 5: H2O.
摇 摇 将扩增到的序列 FJ237045、GU367605、GU3鄄
67606 与 GenBank中已知的 Phacidiopycnis属内相
关性较高的种和其他种属的 ITS 序列进行多序列
比对分析并构建系统发育树(图 3), 结果表明菌
株 Aphw0801、Aphw0802、Aphw0803 在系统发育
树上与 Phacidiopycnis 属中的 Ph. washingtonensis
(苹果果腐病菌)聚在同一簇,支持度为 100% ,与
其同属的另一个种 Ph. pyri(梨波氏盘果腐菌,有
性型:Potebniamyces pyri) [4,5]相邻但不聚在同一
簇,而与 Gugnardia citricarpa、Phoma tracheiphila
等其他亲缘关系较低的种属距离远。
2. 6摇 温度对病原菌生长的影响
观测了菌株 Aphw0801 菌丝体在于 PDA 平板
上、黑暗条件下、0 ~ 30益的生长情况。 结果表明:
当温度低至 0益时,病菌菌丝体以 0. 55 mm / d的速
度缓慢生长,当温度上升至 5、10、15益时菌丝体生
长速率分别上升至 1. 65 mm / d、4. 89 mm / d、7. 39
mm / d,至 20益 时菌丝体生长速率达到 9. 00
mm / d,气生菌丝体旺盛,而且培养 7 d 就可在菌落
表面形成明显的分生孢子团,而当温度升至 25益
时,菌丝体生长速率则迅速降至 1. 27 mm / d,气生
菌丝不旺盛,产孢慢,培养 20 d 才在菌落中出现少
许分生孢子团;在 30益高温下病菌停滞生长,但转
至 20益培养菌丝体又恢复生长。 由此可见,该病
菌是一种低温型真菌,可在 0 ~ 25益下生长,病菌
最适生长温度是 20益,其次依次为 15、10、5、25益。
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摇 3 期 王卫芳,等:进境美国苹果星裂壳孢果腐病菌的首次截获———病原真菌的鉴定及风险分析
Fig. 3摇 Phylogenetic tree based on ITS gene sequences showing the positions of
Aphw0801,Aphw0802, Aphw0803 and related strains
Only bootstrap values above 50 % , expressed as percentages of 1 000 replications are shown at the branch
points. Bar, 0. 02 substitution per nucleotide position(Phacidiopycnis = Ph. ) .
摇 摇 以上观察结果与 Xiao& J. D Rogers 描述的一
致,他们认为:甚至在鄄3 ~ 0益的低温条件下 Ph.
washingtonensis仍然能生长, - 3、0益生长速度分
别为 0. 15 mm / d、0. 53 mm / d,相反 25益以上的较
高温度条件下不利于病菌的生长,35益可导致病菌
死亡[1]。
2. 7摇 培养基对病菌生长的影响
在供试的 7 种培养基中,菌株 Aphw0801 的菌
丝体在 OA 中生长最慢,生长速率约为 2 mm / d。
在 MEA、AJAb和 V8 3 种培养基上,菌丝体生长速
率在 6 ~ 8 mm / d 之间,居 7 种培养基之中。 在
PDA、AJAa、PJA 培养基上菌丝体生长最快,生长
速率在 10 mm / d 左右。 通过 SAS 8. 01a 进行
DUNCAN分析(琢 = 0. 05),以中国出产的水果为
原料的培养基 AJAa(辽宁红富士苹果汁培养基)、
PJA(河北鸭梨汁培养基)明显比 AJAb(美国华盛
顿红元帅苹果汁培养基)更能满足病菌生长的营
养需求(图 4)。
2. 8摇 病原菌对不同产地水果品种的致病性比较
菌株 Aphw0801 对辽宁红富士苹果及河北鸭
梨与对美国华盛顿红元帅苹果均表现很强的致病
性,且致病程度基本一致。 即在接种后 5 d,在 3 个
Fig. 4 摇 Effects of different culture media on
radial mycelial of Phacidiopycnis
washingtonensis
PDA = Potato dextrose agar; OA = Oatmeal agar; MEA =
Malt extract agar; AJAa = Liaoning red Fuji apple juice
agar; AJAb = Washington red delicious apple juice agar;
PJA = Hebei Ya pear jucie agar;V8 = V鄄8 juice agar. Differ鄄
ent letters show significant differences (P <0. 05), the same
letters show no significant differences (P >0. 05) .
水果品种的接种部位都出现明显病斑和白色菌丝
体,接种后 20 d果实腐烂组织面积达 90% ,并出现
黑色的分生孢子器,接种 30 d 后所有果实整果腐
烂,而对照果实无一发病(表 2)。
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摇
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Table 2摇 Symptom comparison on different apple varieties by pathogenicity
tested with Phacidiopycnis washingtonensis*
After
inoculation / d
Lesion size / (cm 伊 cm)
Chinese red
Fuji apple
Chinese ya
pear
US red
delicious apple
Characteristic
in common
5 25 伊5 29 伊8 23 伊5 With visible white mycelium
10 48 伊30 47 伊23 33 伊23 Mycelium change to grey and grew profusely
15 62 伊43 79 伊38 78 伊35 Rotten fruit tissue changed to black
20 90% fruit tissue rot 90% fruit tissue rot 90% fruit tissue rot With obvious black pycnidia and pleasant odour
30 Rot on entire fruit Rot on entire fruit Rot on entire fruit With cream conidia ooze
* Isolate APhw0801 was used as inoculum; inoculated fruits were incubated at 20益 in dark; lesion size = length 伊 width
(cm 伊 cm) .
3摇 讨论与结论
3. 1摇 进境美国苹果果腐病病原菌种的确定
Phacidiopycnis(缩写:Ph. )是 Potebnia于 1921
建立的属[6],在分类上属半知菌亚门(Deuteromy鄄
cotina)、腔孢纲(Coelomycetes)、球壳孢目(Spha鄄
eropsidales),球壳孢科(Sphaeropsidaceae),星裂壳
孢属(Phacidiopycnis)。 Ph. pyri(Fuckel)Weindl鄄
mayr(1964 )与 Ph. washingtonensis Xiao& J. D.
Rogers sp. nov. (2005)是该属中 2 个有重要经济
意义的代表性种,其中 Ph. pyri[有性型 Potebnia
myces pyri(Berk. & Broome)Dennis,1978]是我国
禁止进境检疫性有害生物[7],分布在欧洲、印度和
美国太平洋地区西北岸的华盛顿州、俄勒冈州,在
西洋梨 ( Pyrus communis) 上发生普遍,苹果次
之[4,5],而 Ph. washingtonensis (有性型尚未见报
道)是 Xiao& J. D. Rogers 于 2005 年定名的新
种[1],目前仅分布在美国太平洋地区西北岸华盛
顿中北部,在苹果上比在西洋梨上为害普遍[1,2]。
广东口岸截获的进境美国苹果腐烂病果与美
籍学者 Xiao& J. D. Rogers描述的由 Ph. washing鄄
tonensis引起的苹果果腐病症状[1,2]相似,3 株分离
物 Aphw0801、Aphw0802、Aphw0803 经柯赫氏法
则验证确定为病果的病原菌,并与 Ph. washing鄄
tonensis的形态特征、培养特性一致。 从 3 株分离
物中扩增到的 ITS 序列与 GenBank 中已知的 6 个
Ph. washingtonensis 菌株 ITS 序列的同源性为
100% ,并在系统发育树上与 Ph. washingtonensis
聚在同一簇,而与 Ph. pyri 相邻但不聚在同一簇。
综上结果,作者将进境苹果果腐病病原菌鉴定为
Ph. washingtonensis Xiao& J. D. Rogers sp nov.
(2005),此截获鉴定在我国尚属首次,迄今为止我
国尚未有该病害分布为害的报道。 为了便于与其
他真菌引起的苹果果腐病加以区分,将此病害称为
苹果星裂壳孢果腐病[8]。
3. 2摇 进境美国苹果果腐病菌的风险评估
自 Xiao& J. D. Rogers 于 2005 年在国际上首
次公开报道 Ph. washingtonensis 在华盛顿苹果产
区分布为害后,已引起国际关注。 该病菌具有采前
侵染、采后发病的特点,严重时在华盛顿导致贮藏
7. 5 个月后的红元帅苹果果腐率高达 24% ,此外还
可造成苹果授粉树(Malus sylvestris)嫩梢嫩枝枯
死、树皮溃疡及梨树 ( Pyrus communis) 枝条枯
死[1,2]。
本文作者及 Xiao& J. D. Rogers[1]的研究表明
该病菌是较为典型的低温型真菌,生长温度为 - 3
~ 25益,最适生长温度是 20益,其次依次为 15、10、
5、25益。 显然在国际贸易过程中,染病苹果果实中
的病菌可随低温海运进一步扩展,通过果实传带进
入中国的可能性极高,2008 ~ 2010 年广东口岸已
累计从美国进境苹果中截获该病菌 4 次,特别是在
同一口岸曾在 3 个月内连续 3 次截获该病菌就印
证了这一点。 我国渤海湾、黄河故道和秦岭北麓、
西北及西南等苹果主产区多属暖温带季风气候或
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摇
摇 3 期 王卫芳,等:进境美国苹果星裂壳孢果腐病菌的首次截获———病原真菌的鉴定及风险分析
冷凉高原气候,可满足该低温型真菌的生长发育。
据报道该病菌寄主广,包括蔷薇科梨属(Pyrus)、苹
果属(Malus)、温桲属(Cydonia)等果树,欧洲栽培
苹果红元帅(Red Delicious)、金冠 (Golden Deli鄄
cious)、富士(Fuji)等品种均感病[1,2]。 作者观测
了 7 种培养基对病菌分离物 Aphw0801 菌株生长
的影响,结果表明病菌在中国产富士苹果汁和鸭梨
汁培养基中生长最快,而且比美国华盛顿红元帅苹
果汁培养基更适合病菌的生长,致病性测定进一步
表明富士苹果和鸭梨均是该病菌的适宜寄主,目前
富士在我国苹果主产区的栽培面积超过 60% ,是
我国苹果的主栽品种,而鸭梨则是我国北方白梨系
统栽培面积最大的品种,由此推断,该病菌进入后
在我国定殖的可能性高。 该病菌可经风雨传播,通
过带病苗木、接穗和果实进行远距离传播,一旦定
殖后扩散的可能性也高。
综上所述,Ph. washingtonensis 一旦随美国输
华苹果传入我国,对我国的苹果和梨产业具有潜在
的威胁。 自 1995 年美国华盛顿州苹果输华植物卫
生条件签署以来,美国苹果有害生物的发生情况产
生了变化,为加强风险管理,保障我国果业的安全
生产及出口创汇,建议今后将 Ph. washingtonensis
增补为中国禁止进境的检疫性有害生物,加强口岸
检疫监管,严防病菌的入侵。
致谢:病菌分类归属的查询及确认中得到了安徽农
业大学林学院真菌学专家林英任教授的指导
和帮助;中国检验检疫科学研究院严进研究
员惠赠参考资料“A revision of the Phacidi鄄
aceae and related anamorphs冶,在此谨表诚挚
的感谢!
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责任编辑:曾晓葳
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