全 文 ：书西北植物学报!
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文章编号$
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-
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收稿日期$
!"#$)"()"(
&修改稿收到日期$
!"#$)"1)"&
基金项目$中国科学院西部之光(联合学者项目和青海省应用基础研究计划"
!"#$)23)*,$
#
作者简介$马
!
超"
#&11
#!男!在读硕士研究生!主要从事植物抗逆生物学研究)
4)567
$
89.0656896:
!;
56.7+8:5
"
通信作者$王海庆!博士!副研究员!主要从事植物抗逆分子生物学和牧草抗逆改良研究)
4)56.7
$
<60
;
9
=!
0<.
>
?+86/+80
扁蓿豆
1(23!$
基因的克隆和原核表达
马
!
超#!!沈迎芳#!!吴小培#!!王海庆#"
"
#
中国科学院 西北高原生物研究所高原适应与进化重点实验室!西宁
1#"""1
&
!
中国科学院大学!北京
#"""$&
#
摘
!
要$从扁蓿豆"
!"#$%&

()*+,"-$%&@+
#幼苗中克隆到一个编码晚期胚胎发生丰富蛋白的基因
!)./0!
!
AB65
数据库检索表明其编码产物属于
@4C
*
!
蛋白家族)半定量
DE)AFD
分析发现
!)./0!
在幼苗中表达水平不受
非生物胁迫"脱水+高盐和低温#和脱落酸诱导)利用
!)./0!
基因构建原核表达载体!在大肠杆菌中实现了过量
表达)通过斑点试验和菌落计数实验!对过量表达
GH@4C!
蛋白的大肠杆菌细胞在高盐"
+(5:7
%
@I6F7
和
"+(
5:7
%
@JF7
#+
((K
高温和
!"K
冷冻胁迫处理下的生长存活情况检测发现!
GH@4C!
蛋白过量表达能够明显提高
大肠杆菌对上述胁迫的耐受性)研究表明!
GH@4C!
蛋白对高盐和温度胁迫引起的细胞损伤具有保护作用)
关键词$扁蓿豆&晚期胚胎发生丰富蛋白&大肠杆菌&过量表达&盐胁迫&温度胁迫
中图分类号$
L*1(
&
L*1,
文献标志码$
C
%&"#
(
)!*+",)+
-
".#/01
2
+344#""51(23!$5+"61).-"$
4
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U
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!
F9.0S/SC86WS5
U
:BM8.)
S08S/
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R.0.0
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F9.06
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U
:BF9.0S/SC86WS5
U
:BM8.S08S/
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-
.0
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F9.06
#
784.+)/.
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C
;
S0SS08:W.0
;
676VSS5?H
U
:
;
S0S/./6?Y0W60V
"
@4C
#
>
H:VS.0<6/./:76VSWBH:5/SSW7.0
;
:B
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()*+,"-$%&@++MS
=
YS08S6067
U
/./HSXS67SWV96V.V?S7:0
;
/V:@4C
*
!B65.7
U
688:HW.0
;
V:V9SAB65
876//.B.86V.:0:B@4C
>
H:VS.0/
!
9SHS065SW6/!)./0!
"
!"#$%&

()*+,"-$%&76VSS5?H
U
:
;
S0S/./6?Y0W60V
>
H:VS.0!
#
+MS5.)
=
Y60V.V6V.XSDE)AFD6067
U
/.//9:
HS//.:07SXS7:B!)./0!W.W0:VHS)
/
>
:0/SV:WS9
U
WH6V.:0
!
9.
;
9/67.0.V
U
!
8:7W/VHS//VHS6V5S0V/60WCZC6
>>
7.86V.:0+C
>
H:]6H
U
:V.8S>
HS//.:0
XS8V:H<6/8:0/VHY8VSW60W!)./0!<6//Y88S//BY7
U
:XSHS>
HS//SW.0/1%(2$+[0:HWSHV:
;
SVV9S87YS/:B
V9SBY08V.:0V96V!)./0!
>
76
U
/.0
>
H:VS8V.0
;
8S7/6
;
6.0/V6?.:V.8/VHS//S/
!
;
H:8S7/:XSHS>
HS//.0
;
GH@4C!
>
H:VS.0Y0WSH6?.:V.8/VHS//S/
!
.087YW.0
;
9.
;
9/67.0.V
U
!
9S6V.0
;
60WBHSS^.0
;
!
<6/6
>>
H6./SW+M
>
:V6//6
U
/60W8:7:0
U
8:Y0V.0
;
.0XS/V.
;
6V.:0/9:
HS//.:0:BGH@4C!.0)
8HS6/SWV9SV:7SH608S:B/1%(2$V:9.
;
9/67.0.V
U
"
+(5:7
%
@I6F7:H"+(5:7
%
@JF7
#!
9S6V.0
;
"
((K
#
60W
BHSS^.0
;
"
!"K
#
/VHS//S/+E9SHS/Y7V//Y
;;
S/VV96V!)./0!
>
76
U
/6H:7S.0
>
H:VS8V.:0:B8S76
;
6.0/VW65)
6
;
S86Y/SW?
U
/67.0.V
U
60WVS5
>
SH6VYHS/VHS//+
93
-
:"+!4
$
!"#$%&

()*+,"-$%&@+
&
76VSS5?H
U
:
;
S0S/./6?Y0W60V
>
H:VS.0
&
/1%(2$
&
:XSHS>
HS//.:0
&
/67.0.V
U
/VHS//
&
VS5
>
SH6VYHS/VHS//
!!
晚期胚胎发生丰富蛋白"
76VSS5?H
U
:
;
S0S/./6)
?Y0W60V
>
H:VS.0
!
@4C
>
H:VS.0
#因其在植物胚胎形
成晚期大量积累而被最先报道,#-!之后在植物其它
组织和器官中发现非生物胁迫和脱落酸"
CZC
#能
够诱导
@4C
蛋白的合成!甚至在一些生物胁迫下
也有
@4C
蛋白基因表达,!)%-)后续研究表明细菌+
昆虫+线虫等有机体内也存在
@4C
蛋白,$),-)
@4C
蛋白富含甘氨酸等亲水性氨基酸!疏水性
氨基酸含量很少!具有高度的亲水性和热稳定性,*-)
在拟南芥中!
NY0WSHV56H]
等根据
@4C
蛋白的氨
基酸序列信息在
AB65
数据库中将其划分为
,
个家
族!大多数
@4C
蛋白基因的非编码区存在脱落酸+
低温以及脱水胁迫应答元件!能够被低温+干旱等非
生物胁迫因素以及脱落酸诱导表达,1-)在逆境胁迫
情况下!
@4C
蛋白具有保护细胞内酶等生物大分子
的活性!维持细胞膜的稳定性等作用,1)#"-)大麦中
编码
@4C
蛋白的
340#
基因过量表达能够明显提
高转基因水稻的抗旱和抗盐能力,##-)
T.75:YH
发
现拟南芥
@4C
蛋白基因
%()$*
和
%(),+,
在低温胁
迫保护调节中起关键作用,#!-)此外!在细菌和酵母
中
@4C
蛋白过量表达能够明显增强宿主细胞对低
温+高渗和高盐胁迫的耐受性,#%)#*-!因此在非生物胁
迫下
@4C
蛋白对细胞具有重要的保护作用)
扁蓿豆"
!"#$%&

()*+,"-$%&@+
#具有广适性和
极强的抵抗干旱+低温+盐碱胁迫的能力!是唯一能
够在青藏高原高寒地区生长的苜蓿属多年生豆科植
物,#1-)同时!扁蓿豆存在丰富的遗传多样性!是极
具驯化利用潜力的高寒地区豆科牧草资源,#&-!也是
研究植物适应环境机制的理想材料之一)
本实验根据低温胁迫转录组测序信息!从扁蓿
豆幼苗中克隆了编码晚期胚胎发生丰富蛋白
@4C
*
!
家族成员的
!)./0!
基因!半定量
DE)AFD
分析
发现!
!)./0!
在扁蓿豆幼苗中的表达水平不受非
生物胁迫和脱落酸诱导)利用原核表达系统对其在
非生物胁迫下细胞的保护效果分析表明!
GH@4C!
能够增强大肠杆菌对盐和温度胁迫的耐受性)根据
上述结果推测
!)./0!
基因在植物中除了逆境胁
迫保护作用之外!还可能发挥其他功能)
#
!
材料和方法
;+;
!
植物材料和处理
扁蓿豆种子由中国农业科学院草原研究所孙启
忠研究员提供)将种子用浓硫酸处理
#"5.0
!用流
水冲洗
(
次后置于铺有
!
层湿滤纸的培养皿中发
芽!
%W
后挑选发芽种子转移蛭石和黑土"
%_#
#混
合基质中!于
!!K
+
#,9
%
19
光照条件下生长
%
周
后对幼苗进行胁迫和脱落酸处理)将幼苗转移到
$
K
光照培养箱进行低温处理&采用
#("55:7
%
@
I6F7
水溶液浇灌进行高盐处理&脱落酸处理为将幼
苗洗净转移至培养皿中!整株用含有
"+"(` E!"
"
4
%
4
#的
#""
"
5:7
%
@
脱落酸溶液"
CZC
#喷雾
后!在培养皿中放置多层吸足水的吸水纸!封盖以防
止植株脱水&脱水处理将幼苗洗净后于室温进行自
然脱水)以上处理于不同时间点取样!液氮速冻后!
1"K
冰箱保存)
;<$
!
1(23!$
的克隆和半定量
=>?*%=
分析
总
DIC
提取使用
ED[^:7
试剂"
[0X.VH:
;
S0
!
QMC
#!按照说明书进行)提取的
DIC
调整浓度至
!""0
;
%
"
@
!用
AH.5SM8H.
>
V
EG
DEHS6
;
S0VJ.V
"
ASH)
BS8VDS67E.5S
#"
E6]6H6
!大连#按操作说明合成
8aIC
第一链)
根据本实验室获得的转录组测序结果设计正向
引物
@4C!b
"
(c)FEFEFEFEFEFEFEFEFCEFC)
FET)%c
#和反向引物
@4C!D
"
(c)FETCFETCCFT)
TCFCECFEFCFE)%c
#!以低温处理
!$9
幼苗
8a)
IC
为模板!用
A
U
H:?S/VaIC
聚合酶"
E6]6H6
!大
连#进行
AFD
扩增)
AFD
扩增产物经胶回收!
H5&
6
aIC
聚合酶"
E6]6H6
!大连#加尾处理后!克隆到
>
T4G)E46/
U
载体"
AH:5S
;
6
!
QMC
#进行测序)
!)./0!
表达水平半定量
DE)AFD
检测!以上
述不同处理的扁蓿豆幼苗中提取
DIC
合成
8aIC
为模板!用
H5&
6
聚合酶"
E6]6H6
!大连#进行
!1
次
循环扩增)内标基因为
0%+$-
"
GHC8Vb
$
(c)ETFE)
EFECCFETCTTFEFFCFE)%c
!
GHC8VD
$
(c)CC)
CTTCFEEFETTTFCCFT)%c
#)
;<@
!
1(23!$
原核表达载体构建
利用引物
@4C!b#
"
(c)TFTTCEFFCETEFT)
CFCEFTTCTTCECCT)%c
#和
@4C!D#
"
(c)TFTC)
TFEFEECCFCTFETECCETCTEETFECFCT)
%c
#扩增
!)./0!
基因翻译区!连接到
>
T4G)E
46/
U
载体测序确认后!
7&8N
#
和
9&%
#
双酶切获
得目的基因片段!连接到原核表达载体
>
4E)%"6
"
d
#"
I:X6
;
S0
!
QMC
#!转化
aN(e
大肠杆菌菌株!
挑选阳性克隆提取质粒!进行酶切鉴定后!获得原核
表达载体
>
4E)GH@4C!
)
;!
1(23!$
融合蛋白的表达
将
>
4E)GH@4C!
质粒转化大肠杆菌
Z@!#
"
a4%
#表达菌株!在含有
("5
;
%
@
卡那霉素的
@Z
平板培养基上挑取阳性克隆!接种到含有
("5
;
%
@
卡那霉素的
@Z
液体培养基中!于
%*K
振荡培养)
过夜培养物以
#_#""
"
4
%
4
#转接到新鲜
@Z
液体培
养基中培养
!
$
%9
至
fa
,""
达到
"+,
$
"+1
!加入异
丙基硫代半乳糖苷"
[AET
#至终浓度为
"+(55:7
%
@
诱导
%9
后!取
#5@
菌液离心收集菌体!用
#""
"
@
!gMaM)ACT4
电泳上样缓冲液重悬菌体!煮沸
#"
5.0
!室温
#!"""
;
离心
#"5.0
!取
#"
"
@
上清液进
($&#
#"
期
!!!!!!!!!!!!!
马
!
超!等$扁蓿豆
!)./0!
基因的克隆和原核表达
行
MaM)ACT4
电泳)
;+B
!
大肠杆菌转化子抗逆性实验
!
#
"定性分析
!
大肠杆菌培养和
[AET
诱导条
件如前所述)分别将含有
>
4E)GH@4C!
载体和空
载体
>
4E)%"6
"
d
#的大肠杆菌进行液体培养!当
[AET
诱导的大肠杆菌菌液
fa
,""
至
"+&
左右时!用
含有
("5
;
%
@
卡那霉素和
"+(55:7
%
@[AET
的
@Z
液体培养基将菌液稀释
#"
+
#""
和
#"""
倍!取
原菌液以及稀释后的菌液进行胁迫处理)盐胁迫试
验中!固体培养基中添加终浓度为
"+(55:7
%
@
[AET
!以及
"+(5:7
%
@I6F7
或
"+(5:7
%
@JF7
作
为胁迫处理!同时以只添加
"+(55:7
%
@[AET
的平
板培养基为非胁迫对照!将
#"
"
@
菌液滴加到上述
平板培养基!
%*K
培养
%W
后观察对照和处理的大
肠杆菌生长存活情况&温度胁迫试验中!将原菌液和
稀释后的菌液分别在
((K
的水浴中处理
%"5.0
和
!"K
冰箱冷冻过夜!将上述
#"
"
@
菌液滴加到不
含
[AET
的
@Z
固体培养基上!
%*K
培养
#,9
后进
行观察!同时以未经加热和冷冻处理的菌液为对照)
!"定量分析!菌落计数"
!
大肠杆菌培养+
[AET
诱导!以及胁迫处理条件与定性分析过程相
同!不同之处为将
[AET
诱导的大肠杆菌培养物
"
fa
,""
#
"+&
#用含有
(" 5
;
%
@
卡那霉素+
"+(
55:7
%
@[AET
的
@Z
液体培养基稀释
#"
倍!从中
取
#""
"
@
均匀涂布于固体
@Z
平板上!
%*K
培养后
进行菌落计数!用如下公式计算菌落形成率$
菌落形成率"
`
#
h
胁迫处理平板菌落数
非胁迫处理平板菌落数g
#""`
!
!
结果与分析
$<;
!
1(23!$
基因克隆和序列分析
本研究根据转录组测序结果设计引物!通过
DE)AFD
从
$K
处理
!$9
的扁蓿豆幼苗中扩增得
到长度约为
#+!]?
的特异性扩增条带"图
#
!
C
#)
将扩增产物切胶纯化和加尾处理后!连接到
E)
载体
进行了测序!结果显示序列长度为
##1#?
>
"图
#
!
Z
#)开放阅读框"
:
>
S0HS6W.0
;
BH65
#分析发现其中
含有一个由
&,&?
>
核苷酸组成的最大开放阅读框!
而且在起始密码子上游存在
#
个终止密码子"图
#
!
Z
#!因此该开放阅读框为完整开放阅读框)
对由
8aIC
序列推导的氨基酸序列在
AB65
数
据库查询表明该基因编码产物属于晚期胚胎发生丰
富蛋白
@4C
*
!
蛋白家族!其氨基酸序列中含有
!
个
和
@4C
*
!
蛋白成员显著匹配的区段"图
!
#)进一
步在
TS0Z60]
中查询比对发现!该基因所编码的蛋
白质氨基酸序列与截型苜蓿"
!"#$%&

(+)*-%&+*:
2&
#+可可"
5,"(;)(8&%&%&(
#+大豆"
<2
=
%$-"8&>
#
和拟南芥"
0)&;$#(
?
@$@+,&2$&-&
#中的
@4C
*
!
蛋
白家族成员具有高度的一致性!其中与截型苜蓿
图
#
!
扁蓿豆
!)./0!
基因的克隆及其序列分析
C+
扁蓿豆
!)./0!
基因
DE)AFD
产物电泳结果&
Z+
扁蓿豆
!)./0!
的
8aIC
序列及其编码的氨基酸序列&
G+#]?aIC76WWSH
&方框标示
!)./0!
起始密码子上游的终止密码子
b.
;
+#
!
F7:0.0
;
60W/S
=
YS08S6067
U
/./:B!)./0!
;
S0SBH:5!1)*+,"-$%&
C+C
;
H:/S
;
S7S7S8VH:
>
9:HS/./:BDE)AFD
>
H:WY8V/:B!)./0!BH:5!1)*+,"-$%&
&
Z+8aIC/S
=
YS08S60WWSWY8SW
65.0:68.W/S
=
YS08S:B!)./0!
&
G+#]?aIC76WWSH
&
C/V:
>
8:W:06VY
>
/VHS65:BV9S/V6HV8:W:0:B!)./0!./?:\SW
,$&#
西
!
北
!
植
!
物
!
学
!
报
!!!!!!!!!!!!!!!!!!!
%$
卷
GV@4C#$
的一致性最高"图
!
#)为此!将该基因命
名为
!)./0!
"
!"#$%&

()*+,"-$%&76VSS5?H
U
:)
;
S0S/./6?Y0W60V
>
H:VS.0!
#)其所编码产物长度为
%!!
个氨基酸"图
#
!
Z
&图
!
#!预测分子量为
%,+#
]a
!理论等电点为
$+((
)平均疏水性系数"
TH60W
6XSH6
;
S9
U
WH:
>
6V9
U
.0WS!
TDCiO.0WS#预测为
"+$!*,
!表明具有较高的亲水性)
$<$
!
1(23!$
在逆境胁迫下的表达特性
利用半定量
DE)AFD
!以组成型表达的肌动蛋
白基因"
0%+$-
#为内标!对
!)./0!
基因在室温脱
水"图
%
!
C
#+
#("55:7
%
@I6F7
"图
%
!
Z
#+
CZC
诱
导"图
%
!
F
#和
$K
低温处理"图
%
!
a
#条件下的表达
水平进行了检测)结果显示!在上述逆境胁迫和
CZC
处理过程中!
!)./0!
基因表达水平没有明
显的变化!在扁蓿豆幼苗中为组成型表达"图
%
#)
$<@
!
C+D07$
原核表达载体构建及其表达
为了实现
GH@4C!
蛋白在大肠杆菌中的表达!
将
!)./0!
基因翻译区片段"
&,&?
>
#连接到
>
4E)
%"6
"
d
#载体!构建了原核表达载体)构建的载体经
酶切鉴定后"图
$
!
6
#!转化大肠杆菌表达菌株
Z@!#
"
a4%
#!将含有
>
4E)%"6
"
d
#和
>
4E)GH@4C!
质粒
的表达菌株培养物经终浓度为
"+(55:7
%
@[AET
诱导
%9
后!对诱导前后的菌体总蛋白进行
MaM)
ACT4
电泳检测)含有
>
4E)GH@4C!
表达载体的
菌株经
[AET
诱导!在菌体总蛋白中出现了
#
条约
$(]a
的条带"图
$
!
?
#)
GH@4C!
蛋白原核表达产
物在
I)
末端融合了
("
个氨基酸残基组成的
N./)
V6
;
和
M)V6
;
标签片段!融合蛋白的理论分子量为
$#+(]a
!而
MaM)ACT4
电泳表观分子量略大于理
论分子量)上述电泳表观分子量和预测分子量之间
图
!
!
扁蓿豆
GH@4C!
与其它植物中
@4C
*
!
蛋白的氨基酸序列比对
下划线示
!
个
@4C
*
!
蛋白保守区段&
GV@4C#$+
截型苜蓿"
RA
*
""%,#*#&#+#
#&
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基因表达水平半定量
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分析
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图
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#及其原核表达产物电泳分析"
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蛋白过量表达对大肠杆菌逆境胁迫的保护效果
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菌液滴板试验&
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含有
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固体培养基添加
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%
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和
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%
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固体培养基添加
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%
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和
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!
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!
物
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学
!
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卷
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以及在
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溶液中仍然存在部分结构有关)
$!
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过量表达对大肠杆菌的逆境胁迫保护
为了鉴定
GH@4C!
蛋白对大肠杆菌在逆境胁
迫下的保护效果!将经过
[AET
诱导的大肠杆菌!分
别给予
"+(5:7
%
@I6F7
和
"+(5:7
%
@
的
JF7
高盐
胁迫!以及
((K
高温和
!"K
冷冻处理后!观察测
定宿主菌的生长和存活情况!发现
GH@4C!
过表达
能够明显提高大肠杆菌在上述胁迫条件下的生长和
存活能力"图
(
!
C
+
Z
#)菌落计数结果"图
(
!
Z
#表
明!在
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@I6F7
和
JF7
高盐胁迫下!
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@4C!
过表达菌株的菌落形成率分别为
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和
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!而含有
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别为
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和
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GH@4C!
过表达菌株的菌落形成率为
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!含有载体
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&
!"K
冷冻处理后!
GH@4C!
过表达菌株的菌落形成率为
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!对照菌株菌落形成率为
1+1#`
)
%
!
讨
!
论
@4C
蛋白普遍存在于植物中!在调节种子发育
以及非生物胁迫保护中起重要作用,!"-)它们普遍
具有高亲水性及热稳定性!在防止细胞失水+保护膜
结构的稳定性+酶活性+离子平衡调节以及抗氧化过
程中扮演重要角色,!#-)本实验从扁蓿豆幼苗中克
隆得到编码
@4C
*
!
蛋白的
!)./0!
基因!其所编
码的蛋白质的氨基酸序列与来自截型苜蓿+大豆+可
可和拟南芥等物种的
@4C
*
!
蛋白具有高度一致
性)平均疏水性系数预测显示
GH@4C!
蛋白具有
高亲水性)拟南芥中由
CV#
;
"#$*"
位点编码的
@4C
*
!
蛋白结构中存在和动物细胞表面的纤连蛋
白"
B.?H:0S8V.0
#
%
型结构域相似的结构区段,!!-)动
物纤连蛋白参与细胞形状维持+细胞粘附以及运动
和创伤修复等功能,!!-)由于植物
@4C
*
!
蛋白一般
存在于胞质中!而且其基因表达受与细胞失水相关
的非生物胁迫+机械损伤以及昆虫咬噬所诱导!因此
推测其功能和细胞脱水保护有关,!!-)最近对甘薯
A;./0#$
基因功能分析发现!
[?@4C#$
可以通过正
向调节木质素合成!增强植物对干旱和盐胁迫的耐
受性,!#-)除此之外!还没有其它有关
@4C
*
!
蛋白
功能的试验证据)本研究通过大肠杆菌表达系统!
分析了扁蓿豆
GH@4C!
蛋白对细胞在非生物逆境
胁迫下的保护效果!发现
GH@4C!
蛋白在大肠杆菌
中过表达后!能够明显提高细菌对高盐和温度胁迫
的耐受性)但是
GH@4C!
过表达对高浓度山梨醇
和甘露醇模拟脱水胁迫下的大肠杆菌没有观察到明
显的保护效果)其原因可能与原核胞与真核细胞在
细胞结构上存在差异!或
GH@4C!
对不同胁迫保护
具有机制上的特异性有关)
基因表达特性发现植物
@4C
*
!
蛋白基因通常
在干旱+高盐+温度胁迫以及
CZC
诱导下呈上调趋
势!此外还发现乙烯诱导+损伤情况下上调表
达,!#!%)!(-!上述结果与该蛋白在细胞内的功能推测
相符合)本研究表明
GH@4C!
蛋白对大肠杆菌具
有显著的逆境胁迫保护作用!但非生物胁迫和
CZC
处理对扁蓿豆幼苗中
!)./0!
基因的表达水平没
有发现明显的差异!属于组成型表达)此前对菜豆
中编码
@4C
蛋白家族中的
#
个脱水蛋白"
WS)
9
U
WH.0
#基因及其所编码蛋白质的分析发现!尽管其
基因在转录水平受到逆境胁迫诱导!但由于尚未知
的特异性蛋白水解酶的降解作用!该脱水蛋白在不
同器官之间的稳定性存在明显差异,!,-)此外!也有
研究表明!
@4C
蛋白在植物中除了逆境胁迫保护功
能外!还对植物的发育!如根和气孔发育,!*)!1-!以及
木质素合成具有调控作用,!#-)因此!在扁蓿豆中
!)./0!
基因表达是否存在转录之后调控机制"如翻
译水平+蛋白质水平等#!以及该组成型表达基因是否
在维持植物基本水平的胁迫保护中发挥功能!甚至还
存在尚未发现的功能!是今后需要回答的问题)对于
上述问题的解答和推测的验证!将会进一步深化对
@4C
蛋白在植物胁迫以及生长发育中的功能认识!
也将为植物抗逆改良提供重要的参考信息)
参考文献!
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