全 文 ：植物病理学报
ＡＣＴＡ ＰＨＹＴＯＰＡＴＨＯＬＯＧＩＣＡ ＳＩＮＩＣＡ　 ４４(１): ３６￣４５(２０１４)
收稿日期: ２０１３￣０５￣３１ꎻ 修回日期: ２０１３￣１２￣１９
基金项目: 广西自然科学基金项目(２０１２ＧＸＳＦＢＡ０５３０３８)
通讯作者: 黎起秦ꎬ教授ꎬ主要从事植物病理学研究ꎻＥ￣ｍａｉｌ: ｑｑｌｉ５８０６＠ｇｘｕ􀆰 ｅｄｕ􀆰 ｃｎ
第一作者: 陈振东ꎬ男ꎬ广西平南人ꎬ助理研究员ꎬ博士研究生ꎬ主要从事蔬菜病理学研究ꎻＥ￣ｍａｉｌ: ｃｚｄ３８０８＠ｇｘａａｓ􀆰 ｎｅｔꎮ
苦瓜枯萎病菌的鉴定及其遗传多样性分析
陈振东１ꎬ２ꎬ３ꎬ 袁高庆１ꎬ 黎起秦１∗ꎬ 秦 健１ꎬ 蒋雅琴３ꎬ 黄如葵２ꎬ３
( １广西大学农学院ꎬ 南宁 ５３０００４ꎻ ２ 广西作物遗传改良生物技术重点开放实验室ꎬ 南宁 ５３０００７ꎻ
３ 广西农业科学院蔬菜研究所ꎬ 南宁 ５３０００７)
摘要:对分离获得的 ３２株苦瓜枯萎病菌菌株进行形态学特征和寄主专化型测定ꎬ结果表明ꎬ测试的苦瓜枯萎病菌株均为尖
孢镰刀菌苦瓜专化型 (Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ ｆ. ｓｐ. ｍｏｍｏｒｄｉｃａｅ)ꎬ这些菌株可以侵染苦瓜和瓠瓜幼苗ꎬ但不侵染其他葫芦科
瓜类作物ꎮ 对苦瓜枯萎病菌菌株的 ｒＤＮＡ￣ＩＴＳ 区 ( ＩＴＳ１、５.８Ｓ 和 ＩＴＳ２)序列进行扩增测序ꎬ结果显示其序列长度均为 ４５６
ｂｐꎻ聚类分析表明测序菌株与镰刀菌属中尖孢镰刀菌不同专化型的菌株聚为一群ꎮ 利用 ＲＡＰＤ 标记技术分析苦瓜枯萎病
菌的遗传多样性ꎬ结果显示苦瓜枯萎病菌株与其他葫芦科瓜类作物枯萎病菌株间的遗传相似系数范围为 ０.５９~ ０.９９ꎬ当遗
传相似系数为 ０.８５时ꎬ供试的 ４８个菌株分成 １０个类群 (Ｇ１~ １０)ꎮ 在 ＲＡＰＤ聚类树中所有苦瓜枯萎病菌株聚在一个分支上
(Ｇ１ 群)ꎬ菌株间的遗传相似系数范围为 ０.９２~ １.００ꎬ具有较高的遗传相似性ꎬ且菌株的聚群与地理来源存在一定的相关性ꎮ
关键词:尖孢镰刀菌苦瓜专化型ꎻ ｒＤＮＡ￣ＩＴＳꎻ ＲＡＰＤ￣ＰＣＲꎻ 遗传多样性
Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ ｇｅｎｅｔｉｃ ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ ｉｓｏｌａｔｅｓ ｆｒｏｍ ｂｉｔｔｅｒ
ｇｏｕｒｄ 　 ＣＨＥＮ Ｚｈｅｎ￣ｄｏｎｇ１ꎬ２ꎬ３ꎬ ＹＵＡＮ Ｇａｏ￣ｑｉｎｇ１ꎬ ＬＩ Ｑｉ￣ｑｉｎ１ꎬ ＱＩＮ Ｊｉａｎ１ꎬ ＪＩＡＮＧ Ｙａ￣ｑｉｎ３ꎬ ＨＵＡＮＧ
Ｒｕ￣ｋｕｉ２ꎬ３　 ( １ Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅꎬ Ｇｕａｎｇｘｉ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙꎬ Ｎａｎｎｉｎｇ ５３０００４ꎬ Ｃｈｉｎａꎻ ２ Ｇｕａｎｇｘｉ Ｃｒｏｐ Ｇｅｎｅｔｉｃ Ｉｍｐｒｏｖｅｍｅｎｔ ａｎｄ
Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｌａｂꎬ Ｎａｎｎｉｎｇ ５３０００７ꎬ Ｃｈｉｎａꎻ ３ Ｖｅｇｅｔａｂｌｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅꎬ Ｇｕａｎｇｘｉ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓꎬ
Ｎａｎｎｉｎｇ ５３０００７ꎬ Ｃｈｉｎａ)
Ａｂｓｔｒａｃｔ: Ｔｈｉｒｔｙ￣ｔｗｏ Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ ｉｓｏｌａｔｅｓ ｏｂｔａｉｎｅｄ ｆｒｏｍ ｗｉｌｔ ｂｉｔｔｅｒ ｇｏｕｒｄ ｉｎ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｒｅｇｉｏｎｓ ｏｆ Ｃｈｉｎａ
ｗｅｒｅ ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ ｂｙ ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ ａｎｄ ｆｏｒｍａｅ ｓｐｅｃｉａｌｅｓ ｔｅｓｔ. Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ａｌｌ ｉｓｏｌａｔｅｓ ｗｅｒｅ Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｏｘ￣
ｙｓｐｏｒｕｍ ｆ. ｓｐ. ｍｏｍｏｒｄｉｃａｅ (ＦＯＭ) . Ｔｈｅｓｅ ｉｓｏｌａｔｅｓ ｃｏｕｌｄ ｏｎｌｙ ｉｎｆｅｃｔ ｔｈｅ ｓｅｅｄｌｉｎｇｓ ｏｆ ｂｉｔｔｅｒ ｇｏｕｒｄ ａｎｄ ｂｏｔｔｌｅ
ｇｏｕｒｄꎬ ｂｕｔ ｎｏｔ ｔｈｅ ｏｔｈｅｒ ｃｕｃｕｒｂｉｔ ｓｐｅｃｉｅｓ. Ａｍｐｌｉｆｙｉｎｇ ａｎｄ ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ ｔｈｅ ｒＤＮＡ￣ＩＴＳ ｏｆ ｉｓｏｌａｔｅｓ ｓｈｏｗｅｄ
ｔｈａｔ ｔｈｅ ｔｏｔａｌ ｌｅｎｇｔｈ ｏｆ ｒＤＮＡ￣ＩＴＳ (ＩＴＳ１ꎬ ５.８Ｓ ａｎｄ ＩＴＳ２) ｏｆ ＦＯＭ ｉｓｏｌａｔｅ ｗａｓ ４５６ ｂａｓｅ ｐａｉｒｓ. Ｔｈｅ ｃｌｕｓｔｅｒｉｎｇ ａ￣
ｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｒＤＮＡ￣ＩＴＳ ｉｎｄｉｃａｔｅｄ ｔｈａｔ ＦＯＭ ａｎｄ Ｆ. ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ ｆ. ｓｐｐ. ｉｓｏｌａｔｅｓ ｃｏｕｌｄ ｂｅ ｇａｔｈｅｒｅｄ ｉｎｔｏ ｏｎｅ ｇｒｏｕｐ.
Ｍｅａｎｗｈｉｌｅ ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ ｔｈｅ ｇｅｎｅｔｉｃ ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ ａｎａｌｙｓｉｓ ｗｉｔｈ ＲＡＰＤ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｍａｒｋｅｒ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｇｅｎｅｔｉｃ ｓｉｍ￣
ｉｌａｒｉｔｙ ｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔ ｏｆ ＦＯＭ ｉｓｏｌａｔｅｓ ａｎｄ ｔｈｅ ｏｔｈｅｒ ｆｏｒｍａｅ ｓｐｅｃｉａｌｅｓ ｏｆ Ｆ. ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ ｉｓｏｌａｔｅｓ ｆｒｏｍ ｃｕｃｕｒｂｉｔ ｈｏｓｔｓ
ｗａｓ ｒａｎｇｉｎｇ ｆｒｏｍ ０.５９ ｔｏ ０.９９ꎻ ｆｏｒｔｙ￣ｅｉｇｈｔ ｉｓｏｌａｔｅｓ ｃｏｕｌｄ ｂｅ ｄｉｖｉｄｅｄ ｉｎｔｏ ｔｅｎ ＲＡＰＤ ｇｒｏｕｐｓ (Ｇ１－１０) ｗｈｅｎ ｔｈｅ ｇｅ￣
ｎｅｔｉｃ ｓｉｍｉｌａｒｉｔｙ ｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔ ｒｅａｃｈｅｄ ０.８５. Ｉｎ ＲＡＰＤ ｄｅｎｄｒｏｇｒａｍꎬ ａｌｌ ｔｈｅ ＦＯＭ ｉｓｏｌａｔｅｓ ｗｅｒｅ ｇａｔｈｅｒｅｄ ｉｎｔｏ ｏｎｅ ｐｈｙ￣
ｌｏｇｅｎｅｔｉｃ ｂｒａｎｃｈ (ｇｒｏｕｐ Ｇ１) ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｇｅｎｅｔｉｃ ｓｉｍｉｌａｒｉｔｙ ｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔ ｒａｎｇｅｄ ｆｒｏｍ ０.９２ ｔｏ １.００ꎬ ｗｈｉｃｈ ｉｎｄｉｃａｔｅｄ ａ
ｈｉｇｈ ｇｅｎｅｔｉｃ ｓｉｍｉｌａｒｉｔｙ ｅｘｉｓｔｅｄ ｉｎ ｔｈｅｓｅ ｉｓｏｌａｔｅｓꎬ ａｎｄ ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃ ｇｒｏｕｐ ｗａｓ ｒｅｌａｔｅｄ ｔｏ ｇｅｏｇｒａｐｈ￣
ｉｃ ｏｒｉｇｉｎ ｉｎ ｓｏｍｅ ｅｘｔｅｎｔｓ.
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ: Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ ｆ. ｓｐ. ｍｏｍｏｒｄｉｃａｅꎻ ｆｏｒｍａｅ ｓｐｅｃｉａｌｅｓꎻ ｒＤＮＡ￣ＩＴＳꎻ ＲＡＰＤ￣ＰＣＲꎻ ｇｅｎｅｔｉｃ
ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ
　
　 １期 陈振东ꎬ等:苦瓜枯萎病菌的鉴定及其遗传多样性分析
中图分类号: Ｓ４３２.１　 　 　 　 　 文献标识码: Ａ　 　 　 　 　 文章编号: ０４１２￣０９１４(２０１４)０１￣００３６￣１０
　 　 苦瓜(Ｍｏｍｏｒｄｉｃａ ｃｈａｒａｎｔｉａ)枯萎病在我国的华
南、华东、西南和台湾等地区[１~６]以及国外的印度、
日本和菲律宾等国家[７~９]的苦瓜产区均可发生ꎬ引
起苦瓜整株萎蔫死亡ꎬ是苦瓜生产上危害最为严重
的一种土传病害ꎬ严重制约了苦瓜产业的发展[１０]ꎮ
１９８３年 Ｓｕｎ 等[１１]首次报道了引起苦瓜枯萎
病的病原为尖孢镰刀菌苦瓜专化型(Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｏｘ￣
ｙｓｐｏｒｕｍ ｆ. ｓｐ. ｍｏｍｏｒｄｉｃａｅꎬ ＦＯＭ)ꎮ 目前已知的葫
芦科瓜类枯萎病尖孢镰刀菌的专化型( ｆｏｒｍａｅ ｓｐｅ￣
ｃｉａｌｅｓ)至少有 ８种[１２ꎬ１３]ꎬ而各专化型菌株的形态非
常接近ꎬ不同的专化型仍主要依赖特殊寄主或较窄
的寄主范围进行区分[３ꎬ４]ꎮ ２００８ 年ꎬ Ｃｕｍａｇｕｎ
等[１４]对来自菲律宾的 ２１ 个苦瓜枯萎病菌株进行
硝酸盐利用缺陷 (Ｎｉｔｒａｔｅ￣ｎｏｎ￣ｕｔｉｌｉｚｉｎｇꎬ ｎｉｔ)突变体
诱导和营养体亲和性测定ꎬ获得 ４个营养体亲合群
(Ｖｅｇｅｔａｔｉｖｅ ｃｏｍｐａｔｉｂｉｌｉｔｙ ｇｒｏｕｐｓꎬ ＶＣＧｓ)ꎬ发现大
部分菌株属于同一个营养体亲合群ꎬ表现较低的遗
传多态率 (ＶＣＧｄｉｖ ＝ ０.１９)ꎮ 目前尚未见有关中国
尖孢镰刀菌苦瓜专化型菌株在镰刀菌种间的分子
系统发育关系及种内遗传多样性的系统报道ꎮ
本文在病原表型鉴定和寄主专化型测定的基
础上ꎬ对苦瓜枯萎病菌核糖体基因内转录间隔区
( ｒＤＮＡ￣ＩＴＳ)序列进行了分析ꎬ评价 ＩＴＳ 序列在苦
瓜枯萎病菌鉴定中的作用ꎻ并用随机扩增多态性
ＤＮＡ (ｒａｎｄｏｍ ａｍｐｌｉｆｉｅｄ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃ ＤＮＡꎬ ＲＡＰＤ)
技术研究苦瓜枯萎病菌及其近缘株系在尖孢镰刀
菌种内的遗传差异性ꎬ从而为今后开展病原的快速
鉴定和苦瓜的抗病分子育种研究提供科学依据ꎮ
１　 材料与方法
１.１　 供试菌株
分别对采自广西、广东、福建和湖南等地的苦
瓜枯萎病样本用组织分离法[１５]分离病原物ꎬ获得
３２株苦瓜枯萎病单孢纯化菌株ꎬ用柯赫氏法则对
这些菌株进行寄主回接测定ꎬ以确认其病原ꎬ然后
对这些菌株进行形态学和寄主专化型测定ꎮ
用于遗传多样性分析的菌株ꎬ除分离得到的
３２株菌株外ꎬ另增加 １６株瓜类枯萎病尖孢镰刀菌
不同专化型的近缘菌株ꎬ包括:由中国普通微生物
保藏管理中心 (Ｃｈｉｎａ Ｇｅｎｅｒａｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｕｌ￣
ｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ Ｃｅｎｔｅｒꎬ ＣＧＭＣＣ)和中国农业微生
物菌种保藏管理中心 (Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃ￣
ｔｉｏｎ ｏｆ Ｃｈｉｎａꎬ ＡＣＣＣ)提供的 ２株黄瓜枯萎病菌、２
株西瓜枯萎病菌ꎬ以及由广西农科院蔬菜研究所病
理实验室分离、鉴定和保存的 １２ 株瓜类作物枯萎
病菌株 (其中西瓜枯萎病菌 ２ 株ꎬ甜瓜枯萎病菌 １
株ꎬ瓠瓜枯萎病菌 ２株ꎬ丝瓜枯萎病菌 ３株ꎬ冬瓜枯
萎病菌 ４株)ꎮ 所有供试的 ４８个菌株的名称、寄主
及来源见表 １ꎮ
１.２　 苦瓜枯萎病菌形态学特征及寄主专化型测定
将苦瓜枯萎病菌株分别移至马铃薯蔗糖培养
基 (ｐｏｔａｔｏ ｓｕｇａｒ ａｇａｒꎬ ＰＳＡ)平板上ꎬ在 ２６ ℃恒温
下暗培养 ７ ｄꎬ观察各菌株的菌落、分生孢子、产孢
细胞和厚垣孢子的形态和颜色ꎬ测量其大小ꎮ
专化型测定的寄主植物有苦瓜、冬瓜、节瓜、西
瓜、甜瓜、黄瓜、瓠瓜、丝瓜和南瓜ꎬ由广西农科院蔬
菜研究所提供ꎮ 育苗前先用 ０.１％升汞液进行种子
消毒ꎬ经灭菌水冲洗后播种至灭菌基质中ꎻ待苗长
至两叶一心时ꎬ将苗轻轻拔出洗净根部ꎬ将其放入
浓度为 １×１０６ ｃｆｕ􀅰ｍＬ－１的病原菌孢子悬浮液中浸
根 ３０ ｍｉｎꎻ然后移至装有灭菌基质的营养钵ꎬ移到
温度为 ２６~２８℃的温室中ꎮ 以清水作对照ꎬ各菌株
接种每一寄主植物 ３０株ꎬ每处理 ３次重复ꎬ接种后
隔天观察发病情况ꎬ２５ ｄ后统计发病率和死亡率ꎮ
１.３　 苦瓜枯萎病菌的 ｒＤＮＡ￣ＩＴＳ序列分析
采用改进的 ＣＴＡＢ ( ｃｅｔｙｌｔｒｉｍｅｔｈｙｌａｍｍｏｎｉｕｍ
ｂｒｏｍｉｄｅ)法[１６]提取供试菌株基因组 ＤＮＡꎬ置于
－２０℃冰箱中保存ꎮ 用真菌 ｒＤＮＡ￣ＩＴＳ序列的通用
引物 ＩＴＳ４ ( ５′￣ＴＣＣＴＣＣＧＣＴＴＡＴＴＧＡＴＡＴＧＣ￣３′)
和 ＩＴＳ５ (５′￣ ＧＧＡＡＧＴＡＡＡＡＧＴＣＧＴＡＡＣＡＡＧ Ｇ￣
３′) [１７]对 ３２个苦瓜枯萎病菌菌株的基因组 ＤＮＡ
进行扩增ꎬ引物由生工生物工程 (上海)有限公司
合成ꎮ 扩增体系 ２５ μＬ:有 １０×ＰＣＲ ｂｕｆｆｅｒ ２􀆰 ５ μＬ、
ＭｇＣｌ２(２.５ ｍｍｏｌ􀅰Ｌ
－１)２ μＬ、Ｔａｑ 酶 (５ Ｕ􀅰μＬ－１)
０.２ μＬ、ｄＮＴＰｓ (１０ ｍｍｏｌ􀅰Ｌ－１ ｅａｃｈ)１􀆰 ０ μＬ、引物
ＩＴＳ４ ( １０ μｍｏｌ 􀅰 Ｌ－１ ) １. ０ μＬ、 引 物
ＩＴＳ ５ ( １０μｍｏｌ􀅰Ｌ－１ ) １ . ０μＬ 、ＤＮＡ模板２０ ｎｇ 、
７３
　
植物病理学报 ４４卷
Ｔａｂｌｅ １　 Ｉｓｏｌａｔｅｓ ｏｆ Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｏｘｙｓｐｏｒｉｕｍ ｕｓｅｄ ｉｎ ｔｈｅ ｓｔｕｄｙ
Ｉｓｏｌａｔｅ Ｈｏｓｔ Ｓｏｕｒｃｅ
ＧＤ￣１ Ｂｉｔｔｅｒ ｇｏｕｒｄ ＧＺꎬ Ｇｕａｎｇｄｏｎｇꎬ Ｃｈｉｎａ
ＧＤ￣２ Ｂｉｔｔｅｒ ｇｏｕｒｄ ＧＺꎬ Ｇｕａｎｇｄｏｎｇꎬ Ｃｈｉｎａ
ＦＪ￣１１ Ｂｉｔｔｅｒ ｇｏｕｒｄ ＦＺꎬ Ｆｕｊｉａｎꎬ Ｃｈｉｎａ
ＦＪ￣１５ Ｂｉｔｔｅｒ ｇｏｕｒｄ ＦＺꎬ Ｆｕｊｉａｎꎬ Ｃｈｉｎａ
ＨＹ￣１ Ｂｉｔｔｅｒ ｇｏｕｒｄ ＨＹꎬ Ｈｕｎａｎꎬ Ｃｈｉｎａ
ＨＹ￣２ Ｂｉｔｔｅｒ ｇｏｕｒｄ ＨＹꎬ Ｈｕｎａｎꎬ Ｃｈｉｎａ
ＷＴ￣１ Ｂｉｔｔｅｒ ｇｏｕｒｄ ＮＮꎬ Ｇｕａｎｇｘｉꎬ Ｃｈｉｎａ
ＷＴ￣４ Ｂｉｔｔｅｒ ｇｏｕｒｄ ＮＮꎬ Ｇｕａｎｇｘｉꎬ Ｃｈｉｎａ
ＣＧＭＣＣ３.２８３０ Ｃｕｃｕｍｂｅｒ ＣＧＭＣＣ
ＡＣＣＣ３０２２０ Ｃｕｃｕｍｂｅｒ ＡＣＣＣ
ＡＣＣＣ３００２４ Ｗａｔｅｒｍｅｌｏｎ ＡＣＣＣ
ＡＣＣＣ３１３５４ Ｗａｔｅｒｍｅｌｏｎ ＡＣＣＣ
ＦＯＮＺＨ１３３ Ｗａｔｅｒｍｅｌｏｎ ＺＺꎬ Ｈｅｎａｎꎬ Ｃｈｉｎａ
ＦＯＮ８ Ｗａｔｅｒｍｅｌｏｎ ＮＮꎬ Ｇｕａｎｇｘｉꎬ Ｃｈｉｎａ
ＦＯＭＸＪ１５１ Ｍｕｓｋｍｅｌｏｎ ＣＪꎬ Ｘｉｎｊｉａｎｇꎬ Ｃｈｉｎａ
ＦＪＡＴ １７３ Ｂｏｔｔｌｅ ｇｏｕｒｄ ＦＺꎬ Ｆｕｊｉａｎꎬ Ｃｈｉｎａ
ＦＪＡＴ １７５ Ｂｏｔｔｌｅ ｇｏｕｒｄ ＦＺꎬ Ｆｕｊｉａｎꎬ Ｃｈｉｎａ
ＦＬＵＧＤ１ Ｌｕｆｆａ ＧＺꎬ Ｇｕａｎｇｄｏｎｇꎬ Ｃｈｉｎａ
ＦＬＵＧＤ２ Ｌｕｆｆａ ＧＺꎬ Ｇｕａｎｇｄｏｎｇꎬ Ｃｈｉｎａ
ＦＬＵＧＤ３ Ｌｕｆｆａ ＧＺꎬ Ｇｕａｎｇｄｏｎｇꎬ Ｃｈｉｎａ
ＦＢＥＮＸ１０２ Ｗａｘ ｇｏｕｒｄ ＮＸꎬ Ｇｕａｎｇｘｉꎬ Ｃｈｉｎａ
ＦＢＥＮＮ３ Ｗａｘ ｇｏｕｒｄ ＮＮꎬ Ｇｕａｎｇｘｉꎬ Ｃｈｉｎａ
ＦＢＥＹＬ５ Ｗａｘ ｇｏｕｒｄ ＹＬꎬ Ｇｕａｎｇｘｉꎬ Ｃｈｉｎａ
ＦＢＥＧＬ１ Ｗａｘ ｇｏｕｒｄ ＧＬꎬ Ｇｕａｎｇｘｉꎬ Ｃｈｉｎａ
ＳＣ￣１ Ｂｉｔｔｅｒ ｇｏｕｒｄ ＣＤꎬ Ｓｉｃｈｕａｎꎬ Ｃｈｉｎａ
ＣＱ￣１ Ｂｉｔｔｅｒ ｇｏｕｒｄ ＣＱꎬ Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇꎬ Ｃｈｉｎａ
ＱＴ￣１ Ｂｉｔｔｅｒ ｇｏｕｒｄ ＮＮꎬ Ｇｕａｎｇｘｉꎬ Ｃｈｉｎａ
ＡＳ￣１ Ｂｉｔｔｅｒ ｇｏｕｒｄ ＮＮꎬ Ｇｕａｎｇｘｉꎬ Ｃｈｉｎａ
ＡＳ￣８ Ｂｉｔｔｅｒ ｇｏｕｒｄ ＮＮꎬ Ｇｕａｎｇｘｉꎬ Ｃｈｉｎａ
ＡＳ￣９ Ｂｉｔｔｅｒ ｇｏｕｒｄ ＮＮꎬ Ｇｕａｎｇｘｉꎬ Ｃｈｉｎａ
ＡＳ￣１０ Ｂｉｔｔｅｒ ｇｏｕｒｄ ＮＮꎬ Ｇｕａｎｇｘｉꎬ Ｃｈｉｎａ
ＡＳ￣１１ Ｂｉｔｔｅｒ ｇｏｕｒｄ ＮＮꎬ Ｇｕａｎｇｘｉꎬ Ｃｈｉｎａ
ＡＳ￣１２ Ｂｉｔｔｅｒ ｇｏｕｒｄ ＮＮꎬ Ｇｕａｎｇｘｉꎬ Ｃｈｉｎａ
ＡＳ￣１３ Ｂｉｔｔｅｒ ｇｏｕｒｄ ＮＮꎬ Ｇｕａｎｇｘｉꎬ Ｃｈｉｎａ
ＡＳ￣１４ Ｂｉｔｔｅｒ ｇｏｕｒｄ ＮＮꎬ Ｇｕａｎｇｘｉꎬ Ｃｈｉｎａ
ＡＳ￣１５ Ｂｉｔｔｅｒ ｇｏｕｒｄ ＮＮꎬ Ｇｕａｎｇｘｉꎬ Ｃｈｉｎａ
ＡＳ￣１６ Ｂｉｔｔｅｒ ｇｏｕｒｄ ＮＮꎬ Ｇｕａｎｇｘｉꎬ Ｃｈｉｎａ
ＡＳ￣１７ Ｂｉｔｔｅｒ ｇｏｕｒｄ ＮＮꎬ Ｇｕａｎｇｘｉꎬ Ｃｈｉｎａ
ＡＳ￣１９ Ｂｉｔｔｅｒ ｇｏｕｒｄ ＮＮꎬ Ｇｕａｎｇｘｉꎬ Ｃｈｉｎａ
ＡＳ￣２０ Ｂｉｔｔｅｒ ｇｏｕｒｄ ＮＮꎬ Ｇｕａｎｇｘｉꎬ Ｃｈｉｎａ
ＡＳ￣２１ Ｂｉｔｔｅｒ ｇｏｕｒｄ ＮＮꎬ Ｇｕａｎｇｘｉꎬ Ｃｈｉｎａ
ＡＳ￣２２ Ｂｉｔｔｅｒ ｇｏｕｒｄ ＮＮꎬ Ｇｕａｎｇｘｉꎬ Ｃｈｉｎａ
ＡＳ￣２３ Ｂｉｔｔｅｒ ｇｏｕｒｄ ＮＮꎬ Ｇｕａｎｇｘｉꎬ Ｃｈｉｎａ
ＡＳ￣２４ Ｂｉｔｔｅｒ ｇｏｕｒｄ ＮＮꎬ Ｇｕａｎｇｘｉꎬ Ｃｈｉｎａ
ＡＳ￣２５ Ｂｉｔｔｅｒ ｇｏｕｒｄ ＮＮꎬ Ｇｕａｎｇｘｉꎬ Ｃｈｉｎａ
ＡＳ￣２６ Ｂｉｔｔｅｒ ｇｏｕｒｄ ＮＮꎬ Ｇｕａｎｇｘｉꎬ Ｃｈｉｎａ
ＡＳ￣２７ Ｂｉｔｔｅｒ ｇｏｕｒｄ ＮＮꎬ Ｇｕａｎｇｘｉꎬ Ｃｈｉｎａ
ＡＳ￣２８ Ｂｉｔｔｅｒ ｇｏｕｒｄ ＮＮꎬ Ｇｕａｎｇｘｉꎬ Ｃｈｉｎａ
ＣＧＭＣＣ: Ｃｈｉｎａ Ｇｅｎｅｒａｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ Ｃｅｎｔｅｒꎻ ＡＣＣＣ: Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｃｈｉｎａꎻ
ＧＺ: Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ ｃｉｔｙꎻ ＦＺ: Ｆｕｚｈｏｕ ｃｉｔｙꎻ ＨＹ: Ｈｅｎｇｙａｎｇ ｃｉｔｙꎻ ＣＤ: Ｃｈｅｎｇｄｕ ｃｉｔｙꎻ ＣＱ: Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ ｃｉｔｙꎻ ＮＮ: Ｎａｎｎｉｎｇ
ｃｉｔｙꎻ ＺＺ: Ｚｈｅｎｇｚｈｏｕ ｃｉｔｙꎻ ＣＪ: Ｃｈａｎｇｊｉ ｃｉｔｙꎻ ＮＸ: Ｎａｎｘｉａｏ ｃｉｔｙꎻ ＹＬ: Ｙｕｌｉｎ ｃｉｔｙꎻ ＧＬ: Ｇｕｉｌｉｎ ｃｉｔｙ.
８３
　
　 １期 陈振东ꎬ等:苦瓜枯萎病菌的鉴定及其遗传多样性分析
ｄｄＨ２Ｏ １５.３ μＬꎻ设 １ 个反应管用双蒸水代替模板
ＤＮＡ作对照ꎮ 反应程序:９４℃预变性 １０ ｍｉｎꎻ９４℃
变性 １ ｍｉｎꎬ５５℃退火 １ ｍｉｎꎬ７２℃延伸 ２ ｍｉｎꎬ共 ２５
个循环ꎻ７２℃延伸 １０ ｍｉｎꎬ４℃保存备用ꎮ 以 １００
ｂｐ ｐｌｕｓⅡＤＮＡ Ｌａｄｄｅｒ(北京天根生物技术有限公
司)为标准分子量ꎬ取 ５ μＬ ＰＣＲ产物经 １.０％琼脂
糖凝胶电泳检测ꎬ在 ＵＶＩｔｅｃ􀅺凝胶成像系统上观
察并拍照ꎮ
将 ＰＣＲ产物送上海生工测序后ꎬ与 ＧｅｎＢａｎｋ
数据库的核苷酸序列进行 ＢＬＡＳＴ 同源性比对分
析ꎮ 从 ＧｅｎＢａｎｋ数据库中下载参照镰刀菌菌株的
ｒＤＮＡ￣ＩＴＳ区序列ꎬ用 Ｃｌｕｓｔａｌ Ｘ (ｖｅｒｓｉｏｎ １.８３)软件
中的 Ａｌｉｇｎｍｅｎｔ 程序进行多重比对 (Ｍｕｌｔｉｐｌｅ
ａｌｉｇｎｍｅｎｔ)ꎬ采用 Ｍｅｇａ (Ｖｅｒｓｉｏｎ ４.０)软件包[１８]邻
接法 (ｎｅｉｇｈｂｏｒ￣ｊｏｉｎｉｎｇ)构建分子系统发育树ꎬ用
Ｂｏｏｔｓｔｒａｐ进行系统发育树置信度检测ꎬ自展数据
集为 １ ０００次ꎮ
１.４　 苦瓜枯萎病菌的遗传多样性分析
从 ６５条十碱基寡聚核苷酸随机引物中筛选扩
增条带清晰、多态性好的随机引物ꎬ对 ４８个供试菌
株进行指纹图谱分析ꎮ ＲＡＰＤ￣ＰＣＲ 反应体系 ２５
μＬ:２ ×Ｅｓ Ｔａｑ ＭａｓｔｅｒＭｉｘ (含有 ２ × Ｅｓ Ｔａｑ ＰＣＲ
Ｂｕｆｆｅｒꎬ３ ｍｍｏｌ􀅰Ｌ－１ ＭｇＣｌ２ꎬＥｓ Ｔａｑ 酶和 ４００ μｍｏｌ
􀅰Ｌ－１ ｄＮＴＰ Ｍｉｘꎬ北京康为世纪生物科技有限公
司)１２.５ μＬꎬ随机引物 (１０ μｍｏｌ􀅰Ｌ－１)２.０ μＬꎬ模
板 ＤＮＡ ３０ ｎｇꎬｄｄＨ２Ｏ ８.５ μＬꎮ 每次 ＰＣＲ 均设不
含模板 ＤＮＡ 的空白对照ꎮ 每个随机引物扩增反
应重复 ３ 次ꎮ 反应程序:９４℃预变性 １０ ｍｉｎꎻ９４℃
变性 １ ｍｉｎꎬ３７℃退火 ４５ ｓꎬ７２℃延伸 １ ｍｉｎꎬ共 ３０
个循环ꎻ７２℃延伸 １０ ｍｉｎꎬ４℃保存备用ꎮ ＰＣＲ 产
物检测方法同 １.３ꎮ 所用引物及 Ｍａｒｋｅｒ ＤＬ ２ ０００
均购自生工生物工程(上海)有限公司ꎮ
采用有带记为“１”、无带记为“０”的方法记录
ＰＣＲ扩增的 ＤＮＡ 条带ꎮ 利用 ＮＴＳＹＳｐｃ (Ｖｅｒｓｉｏｎ
２.１０ｅ)软件计算菌株间的 Ｄｉｃｅ 遗传相似系数ꎬ采
用非加权组平均法(ｕｎｗｅｉｇｈｔｅｄ ｐａｉｒ￣ｇｒｏｕｐ ｍｅｔｈｏｄ
ｗｉｔｈ ａｒｉｔｈｍｅｔｉｃ ｍｅａｎｓꎬＵＰＧＭＡ)构建系统聚类图ꎮ
２　 结果与分析
２.１　 苦瓜枯萎病菌的形态特征及专化型
苦瓜枯萎病菌在 ＰＳＡ 培养基上气生菌丝浓
密ꎬ棉絮状ꎬ白色至淡紫色ꎬ菌落背面白色或淡紫
色ꎮ 小型分生孢子椭圆形或卵圆形ꎬ呈假头状生于
产孢细胞上ꎬ大小 ９.６ (８.５~１３.５) μｍ×２.６ (２􀆰 ４ ~
３.１) μｍꎻ大型分生孢子镰刀形ꎬ顶端细胞稍弯曲ꎬ
足细胞明显ꎬ３~５个隔膜ꎬ多为 ３个隔膜ꎬ大小 ２７.７
(２０.３ ~ ４５.５) μｍ×３.４ (２.７ ~ ４.９) μｍꎻ产孢细胞
短ꎬ单瓶梗ꎬ大小 １６.４ (６.２ ~ ２７.５) μｍ×２.８ (２.５ ~
３.６) μｍꎻ厚垣孢子球形或长圆形ꎬ有疣突ꎬ单生、
顶生ꎬ直径 ９.３ (７.６~１３.８) μｍꎮ 依据 Ｌｅｓｌｉｅ 等[１９]
和Ｗａｎｇ 等[２０]关于镰刀菌的形态鉴定方法ꎬ初步
确定引起苦瓜枯萎病的病原物为美丽组尖孢镰刀
菌 (Ｆ. ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ)ꎮ
测试的苦瓜枯萎病菌株对苦瓜幼苗的发病率
为 １００.０％ꎬ死亡率在 ７３.３％ ~ １００.０％ꎮ 被侵苗表
现出明显矮化、子叶皱缩、真叶发黄、根部褐变、植
株萎蔫枯死等典型症状ꎮ 同时ꎬ这些菌株也可侵染
瓠瓜[Ｌａｇｅｎａｒｉａ ｓｉｃｅｒａｒｉａ (Ｍｏｌｉｎａ) Ｓｔａｎｄｌ.]幼苗:
长瓠子 ( ｖａｒ. ｃｌａｖａｔａ Ｈａｒａ) 发病率在 ８３. ３％ ~
１００􀆰 ０％ꎬ死亡率在 ４０. ０％ ~ ９６. ７％ꎻ短瓠子 ( ｖａｒ.
ｃｌａｖａｔａ Ｈａｒａ) 发病率在 ８６.７％~１００.０％ꎬ死亡率在
４６.７％~９６.７％ꎻ园扁葫芦[ｖａｒ. ｄｅｐｒｅｓｓａ (Ｓｅｒ.) Ｈａ￣
ｒａ]发病率在 ０. ０％ ~ ４０. ０％ꎬ死亡率在 ０. ０％ ~
２３􀆰 ３％ꎻ长颈葫芦 (ｖａｒ. ｃｏｕｇｏｕｒｄａ Ｈａｒａ)发病率在
１０.０％~５３.３％ꎬ死亡率在 ０.０％~１０.０％ꎬ被侵幼苗表现
矮化、子叶枯死、真叶发黄、维管束变褐、植株凋萎
等症状ꎻ但是ꎬ测试菌株均不侵染冬瓜、节瓜、西瓜、
甜瓜、黄瓜、丝瓜和南瓜等瓜类幼苗ꎮ
依据上述结果ꎬ可确定供试的 ３２ 株苦瓜枯萎
病菌株均为尖孢镰刀菌苦瓜专化型(Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｏｘ￣
ｙｓｐｏｒｕｍ ｆ. ｓｐ. ｍｏｍｏｒｄｉｃａｅ)ꎮ
２.２　 苦瓜枯萎病菌的 ｒＤＮＡ￣ＩＴＳ序列分析
２.２.１　 ｒＤＮＡ￣ＩＴＳ 序列测定及同源性分析 　 用引
物 ＩＴＳ４ / ＩＴＳ５从 ３２ 个苦瓜枯萎病菌株的基因组
ＤＮＡ中扩增出大小约 ５４０ ｂｐ的片段(图 １)ꎮ 对扩
增产物测序ꎬ并在 ＧｅｎＢａｎｋ 数据库中进行 ＢＬＡＳＴ
分析ꎬ结果显示苦瓜枯萎病菌株与 ＧｅｎＢａｎｋ 数据
库中的不同寄主专化型尖孢镰刀菌菌株的同源性
均在 ９５％以上ꎮ 用 Ｃｌｕｓｔａｌ Ｘ 软件对测序菌株及
ＧｅｎＢａｎｋ数据库中 ２ 个尖孢镰刀菌苦瓜专化型菌
株 ＪＨ￣１、 ＳＪ￣ＫＧ (序列号 分 别 为: ＧＵ１２６６８８、
９３
　
植物病理学报 ４４卷
ＧＵ４４５３６４)的 ｒＤＮＡ￣ＩＴＳ 区序列进行对位比较ꎬ结
果显示这些菌株的 ｒＤＮＡ￣ＩＴＳ 区 ( ＩＴＳ１、５. ８Ｓ 和
ＩＴＳ２)序列长度均为 ４５６ ｂｐꎬ且碱基顺序完全相
同ꎮ 图 １ 为 ５ 个不同地理来源的代表性菌株 ＧＤ￣
１、ＦＪ￣１１、ＷＴ￣１、ＨＹ￣１、ＡＳ￣９的 ｒＤＮＡ￣ＩＴＳ序列扩增
产物的电泳结果ꎬＧｅｎＢａｎｋ 登录序列号为: ＪＮ００￣
５７４９￣ＪＮ００５７５３ꎮ
Ｆｉｇ. １ 　 Ａｇａｒｏｓｅ ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ ｏｆ ＩＴＳ￣ＰＣＲ
ｐｒｏｄｕｃｔｓ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｐｒｉｍｅｒｓ ＩＴＳ４ / ＩＴＳ５
Ｍ: １００ ｂｐ ＤＮＡ Ｌａｄｄｅｒꎻ Ｌａｎｅ １: Ｎｅｇａｔｉｖｅ ｃｏｎｔｒｏｌꎻ Ｌａｎｅ ２
ｔｏ ６: ＩＴＳ￣ＰＣＲ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ＧＤ￣１、ＦＪ￣１１、ＷＴ￣１、ＨＹ￣１ ａｎｄ
ＡＳ￣９.
２.２.２　 基于 ｒＤＮＡ￣ＩＴＳ 区序列的聚类分析　 将测
序的 ３２个苦瓜枯萎病菌株的 ｒＤＮＡ￣ＩＴＳ 区序列与
ＧｅｎＢａｎｋ数据库中下载的 ２１个相关菌株的 ｒＤＮＡ￣
ＩＴＳ区序列进行一致性比对ꎬ构建系统发育树 (图
２)ꎮ 下载的序列来自 １３ 个尖孢镰刀菌 (Ｆ. ｏｘｙｓ￣
ｐｏｒｕｍ)不同专化型菌株、３ 个胶孢镰刀菌(Ｆ. ｓｕｂ￣
ｇｌｕｔｉｎａｎｓ)菌株、２ 个梨孢镰刀菌(Ｆ. ｐｏａｅ)菌株和
３个腐皮镰刀菌(Ｆ. ｓｏｌａｎｉ)菌株ꎮ 系统树中设定
的外围群为腐皮镰刀菌ꎮ 在一致性比对中ꎬ发现苦
瓜枯萎病菌株与尖孢镰刀菌西瓜专化型菌株 (序
列号:ＥＵ５８８３９６)的 ｒＤＮＡ￣ＩＴＳ 区序列仅有一个碱
基差异ꎬ与另外 １２ 个尖孢镰刀菌专化型菌株的
ｒＤＮＡ￣ＩＴＳ区序列完全一致ꎬ与其他镰刀菌菌株的
ｒＤＮＡ￣ＩＴＳ区序列有较多的碱基差异ꎮ 系统树显
示ꎬ５３个镰刀菌菌株被分成 ４ 个类群ꎮ 同为尖孢
镰刀菌的 ４５个不同专化型菌株均归在类群Ⅰ中ꎬ
包括 ３２个自测的苦瓜枯萎病菌株、来自 ＧｅｎＢａｎｋ
数据库中的 ２个尖孢镰刀菌苦瓜专化型菌株 ＪＨ￣１
和 ＳＪ￣ＫＧ、９个其他瓜类作物枯萎病尖孢镰刀菌专
化型菌株、１个尖孢镰刀菌番茄专化型菌株和 １ 个
尖孢镰刀菌百合专化型菌株ꎬ进化枝的自展支持率
为 ９７％ꎻ类群Ⅱ包括 ３ 个胶孢镰刀菌株ꎬ进化枝的
自展支持率为 ６５％ꎻ类群Ⅲ包括 ２ 个梨孢镰刀菌
株ꎬ进化枝的自展支持率为 ９９％ꎻ类群Ⅳ由外围群
的 ３个腐皮镰刀菌株构成ꎬ进化枝的自展支持率为
１００％ꎮ 从聚类分析结果可以看出ꎬ利用 ｒＤＮＡ￣ＩＴＳ
序列分析可以区分镰刀菌属的不同种ꎬ但不能将尖
孢镰刀菌苦瓜专化型菌株与种内的其他专化型菌
株区分开来ꎮ
２.３　 苦瓜枯萎病菌的遗传多样性分析
２.３.１　 ＲＡＰＤ引物筛选和扩增结果　 从供试的 ６５
条随机引物筛选出扩增重复性好、对每个菌株均具
有鉴别能力的多态性随机引物 １８条ꎬ对 ４８个尖孢
镰刀菌菌株基因组 ＤＮＡ 进行扩增ꎬ共获得条带
２６１条ꎬ其中多态性条带 ２５３ 条ꎬ多态性比例为 ９６.
９％ꎻ不同引物扩增条带数在 ８ ~ ２１ 条ꎬ平均每个引
物产生多态性条带 １４.１条ꎬ扩增片段大小在 １５０ ~
２ ２００ ｂｐ 之间ꎮ 引物 Ｓ１７４ 的扩增图谱(图 ３)表
明ꎬ条带强弱和分子量大小反映了引物对菌株
ＤＮＡ序列不同基因位点拷贝数量的差异以及菌株
间在基因位点上同源程度的差异ꎬ表明尖孢镰刀菌
各瓜类专化型菌株在种内存在丰富的遗传多样性ꎮ
不同引物扩增苦瓜枯萎病菌基因组 ＤＮＡꎬ产生的
条带数在 ５~ １３ 条之间ꎬ共获得条带 １４１ 条ꎬ其中
多态性条带 ４４ 条ꎬ平均每个引物产生多态性条带
２.４条ꎬ多态性比例为 ３１􀆰 ２％ꎮ 引物在苦瓜枯萎病
菌菌株间产生多态性条带较少ꎬ表明苦瓜枯萎病菌
菌株间的分子遗传多态率较低ꎮ
２.３.２　 聚类分析　 根据 ＲＡＰＤ 标记扩增结果计算
菌株间的遗传相似系数ꎬ用 ＵＰＧＭＡ 法对数据进
行聚类分析ꎬ建立聚类树状图 (图 ４)ꎮ 从树状图
可以看出ꎬ４８ 个尖孢镰刀菌菌株间的遗传相似系
数在 ０.５９~０.９９之间ꎬ平均为 ０.７９ꎮ 当相似系数为
０.８５ (Ｌ 线)时ꎬ４８ 个菌株被划分成 １０ 个类群
(Ｇｒｏｕｐｓꎬ Ｇ１~１０)ꎬ聚类结果说明尖孢镰刀菌各瓜类
专化型菌株遗传分化大ꎮ 其中 Ｇ１ 类群包含了 ３２
个苦瓜枯萎病菌株ꎬ遗传相似系数范围在 ０􀆰 ９２ ~
１.００ꎬ平均为 ０.９６ꎬ遗传相似性高ꎻＧ２ 类群包括 ３
个丝瓜专化型菌株和 ４ 个冬瓜专化型菌株ꎻＧ３ 类
０４
　
　 １期 陈振东ꎬ等:苦瓜枯萎病菌的鉴定及其遗传多样性分析
群包括 １个黄瓜专化型菌株和 １ 个甜瓜专化型菌
株ꎻ其他 ７个黄瓜、西瓜、葫芦专化型菌株分布在不
同分支上 (Ｇ４ ~ Ｇ１０)ꎬ表现为显著的遗传差异ꎬ遗
传相似性低ꎮ
Ｆｉｇ. ２　 Ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃ ｔｒｅｅ ｏｆ ＩＴＳ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｉｎ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｓｐｅｃｉｅｓ ｏｆ Ｆｕｓａｒｉｕｍ
１４
　
植物病理学报 ４４卷
Ｆｉｇ. ３　 ＲＡＰＤ ｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔｓ ｏｆ ４８ Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ ｉｓｏｌａｔｅｓ ｏｂｔａｉｎｅｄ ｗｉｔｈ ｐｒｉｍｅｒ Ｓ１７４
Ｍ: Ｍａｒｋｅｒ ＤＬ２ ０００ꎻ Ｌａｎｅ １￣８ ａｎｄ ２５￣４８: Ｆ. ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ ｉｓｏｌａｔｅｓ ｆｒｏｍ ｗｉｌｔｅｄ ｂｉｔｔｅｒ ｇｏｕｒｄ ｐｌａｎｔｓꎻ Ｌａｎｅ ９￣１０: Ｆ.
ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ ｆ. ｓｐ. ｃｕｃｕｍｅｒｉｎｕｍ (ＣＧＭＣＣ３.２８３０ꎬ ＡＣＣＣ３０２２０)ꎻ Ｌａｎｅ １１￣１４: Ｆ. ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ ｆ. ｓｐ. ｎｉｖｅｕｍ (ＡＣ￣
ＣＣ３０２２０ꎬ ＡＣＣＣ３００２４ꎬ ＡＣＣＣ３１３５４ꎬ ＦＯＮＺＨ１３３ꎬ ＦＯＮ８ )ꎻ Ｌａｎｅ １５: Ｆ. ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ ｆ. ｓｐ. ｍｅｌｏｎｉｓ
(ＦＯＭＸＪ１５１)ꎻ Ｌａｎｅ １６￣１７: Ｆ. ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ ｆ. ｓｐ ｌａｇｅｎａｒｉａｅ (ＦＪＡＴ１７３ꎬ ＦＪＡＴ１７５)ꎻ Ｌａｎｅ １８￣２０: Ｆ. ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ ｆ.
ｓｐ. ｌｕｆｆａｅ ( ＦＬＵＧＤ１ꎬ ＦＬＵＧＤ２ꎬ ＦＬＵＧＤ３)ꎻ Ｌａｎｅ ２１￣２４: Ｆ. ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ ｆ. ｓｐ. ｂｅｎｉｎｃａｓａｅ ( ＦＢＥＮＸ１０２ꎬ
ＦＢＥＮＮ３ꎬ ＦＢＥＹＬ５ꎬ ＦＢＥＧＬ１) ꎻ ＣＫ: Ｎｅｇａｔｉｖｅ ｃｏｎｔｒｏｌ.
３　 讨论
葫芦科植物枯萎病菌专化型菌株的致病性较
为复杂ꎬＺｈｕ等[１]用分离自广东的苦瓜枯萎病菌接
种瓠瓜和葫芦幼苗ꎬ其发病率分别为 ７５. ５％和
２５􀆰 ６％ꎬ因此认为作专化型鉴定时有必要接种瓠瓜
和葫芦ꎮ 本研究用不同地理来源的 ３２株苦瓜枯萎
病菌接种苦瓜幼苗ꎬ发病率为 １００.０％ꎬ死亡率在
７３.３％~１００.０％ꎻ接种瓠瓜的不同变种ꎬ发病率为
０.０％~１００.０％ꎬ死亡率为 ０.０％ ~ ９６.７％ꎬ表明瓠瓜
可能是尖孢镰刀菌苦瓜专化型菌株的次要寄主ꎬ这
与 Ｚｈｕ等[１]的报道一致ꎮ
镰刀菌属分种的主要依据是培养物的形态特
征ꎬ然而由于形态特征容易受到培养条件和其它因
素的影响ꎬ而且许多种未发现有性阶段ꎬ给鉴定工
作带来一定的困难ꎮ ＩＴＳ 序列已广泛应用于植物
病原菌近亲类群的鉴定和系统发育分析ꎬ是病原菌
系统发育及分类鉴定的重要依据[２１~２４]ꎮ 本研究利
用 ｒＤＮＡ￣ＩＴＳ区序列构建分子系统发育树ꎬ发育树
中苦瓜枯萎病菌株和其他美丽组尖孢镰刀菌专化
型菌株聚在一起ꎬ与李瑟组胶孢镰刀菌株、枝孢组
梨孢镰刀菌株和马特组腐皮镰刀菌株区分在不同
的进化枝上ꎬ表明 ｒＤＮＡ￣ＩＴＳ区序列反映了镰刀菌
种间存在不同程度的差异ꎬ可作为鉴定苦瓜枯萎病
菌的辅助手段ꎬ但难以区分尖孢镰刀菌苦瓜专化型
菌株与其他尖孢镰刀菌瓜类专化型菌株[２５ꎬ２６]ꎬ仍
需依赖于菌株对寄主的致病性鉴定实现种内的区
分ꎮ 如要实现尖孢镰刀菌苦瓜专化型菌株的分子
快速鉴定ꎬ仍需发掘除 ＩＴＳ序列之外的其它特异性
序列ꎮ
ＲＡＰＤ多态性标记技术在研究病原菌的遗传
多样性中已有广泛应用ꎬ由 ＲＡＰＤ 标记构建的聚
类群与病原菌致病力、地理来源、生理小种或营养
２４
　
　 １期 陈振东ꎬ等:苦瓜枯萎病菌的鉴定及其遗传多样性分析
Ｆｉｇ. ４　 Ｄｅｎｄｒｏｇｒａｍ ｏｆ ４８ Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ ｉｓｏｌａｔｅｓ ｂａｓｅｄ ｏｎ ＲＡＰＤ ｄａｔａ
ｕｓｉｎｇ Ｄｉｃｅ ｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔ ｏｆ ｓｉｍｉｌａｒｉｔｙ ａｎｄ ＵＰＧＭＡ ｃｌｕｓｔｅｒ ａｎａｌｙｓｉｓ
体亲和群等存在一定的对应关系ꎬ反映了病原菌种
间或种内遗传背景的差异[２７~３１]ꎮ 本文通过对苦瓜
枯萎病菌与其他瓜类作物枯萎病菌近缘株系进行
ＲＡＰＤ标记聚类分析ꎬ可以看出苦瓜枯萎病菌株全
部聚在 Ｇ１ 类群中ꎬ相似系数高ꎬ菌株间的多态率
较低ꎬ说明苦瓜枯萎病菌遗传分化不大ꎬ遗传背景
和亲缘关系相似ꎬ这可能与其致病性和较窄的寄主
范围等因素有关ꎮ 在测试的苦瓜枯萎病菌株中ꎬ除
来自福建的两个菌株(ＦＪ￣１、ＦＪ￣２)遗传距离相对较
远而未能聚在一起外ꎬ其他菌株如来自广州的 ＧＤ￣
１和 ＧＤ￣２ 聚在同一分支上ꎬ来自衡阳的 ＨＹ￣１ 和
ＨＹ￣２聚在同一分支上ꎬ来自南宁的ＷＴ￣１和ＷＴ￣２
聚在同一分支上ꎬ反映了地域同源性较强的菌株不
存在明显的遗传分化ꎬ菌株的聚类与其地理来源存
在一定的相关性ꎬ这可能是由于病原菌与不同地区
的环境条件及种植品种长期互作选择、协同进化引
起的现象ꎮ 聚类树中类群 Ｇ１ 与类群 Ｇ２ 聚在一
起ꎬ与其他类群存在较远的遗传距离ꎬ表明侵染苦
瓜的尖孢镰刀菌菌株与侵染丝瓜、冬瓜的尖孢镰刀
菌菌株亲缘关系更为相近ꎮ 尖孢镰刀菌不同瓜类
作物专化型菌株之间虽然在形态学表型特征上相
同或相近ꎬ但是分子遗传相似性差异显著ꎬ表明尖
孢镰刀菌种内存在丰富的遗传多样性ꎬ生理分化复
杂ꎮ
ＲＡＰＤ指纹图谱信息量丰富ꎬ可以通过寻找病
原菌专一性 ＤＮＡ标记ꎬ制作特异探针或转换成更
加稳定的特异标记ꎬ应用于植物病原的鉴定和诊
断[３２ꎬ３３]ꎮ 本研究利用 ＲＡＰＤ分子标记分析不同葫
芦科作物枯萎病菌的遗传背景ꎬ发现了一些尖孢镰
刀菌苦瓜专化型菌株的特征性差异条带ꎮ 筛选特
３４
　
植物病理学报 ４４卷
异条带ꎬ用于制作鉴定尖孢镰刀菌苦瓜专化型菌株
的特异探针的研究工作正在进行中ꎮ
参考文献
[１] 　 Ｚｈｕ Ｔ Ｓꎬ Ｑｉ Ｐ Ｋ. Ｓｔｕｄｙ ｏｎ ｔｈｅ ｐａｔｈｏｇｅｎ ｏｆ ｂｉｔｔｅｒ
ｇｏｕｒｄ ｗｉｌｔ ｉｎ Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ ( ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ) [ Ｊ] . Ｊｏｕｒｎａｌ
Ｓｏｕｔｈ Ｃｈｉｎａ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ (华南农业大学学
报)ꎬ １９９８ꎬ １９(４): １４－１８.
[２] 　 Ｘｉａｏ Ｃ Ｈꎬ Ｙｕ Ｘ Ｍꎬ Ｈｅ Ｙ Ｙ. Ｓｔｕｄｉｅｓ ｏｎ ｔｈｅ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ
ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ ｏｆ ｔｈｅ ｐａｔｈｏｇｅｎ ｏｆ ｃｕｃｕｒｂｉｔ ｗｉｌｔ ( ｉｎ Ｃｈｉ￣
ｎｅｓｅ)[ Ｊ] . Ｐｌａｎｔ Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ (植物保护)ꎬ ２００８ꎬ ３４
(２): ８３－８５.
[３] 　 Ｙａｎｇ Ｙꎬ Ｚｈｏｕ Ｑꎬ Ｊｉ Ｈꎬ ｅｔ ａｌ. Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ａｎｄ ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａ￣
ｔｉｏｎ ｏｆ Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｓｐｅｃｉｅｓ ｆｒｏｍ ｗｉｌｔｅｄ ｂｉｔｔｅｒ ｇｏｕｒｄ ( ｉｎ
Ｃｈｉｎｅｓｅ)[ Ｊ] . Ａｃｔａ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｅ Ｚｈｅｊｉａｎｇｅｎｓｉｓ (浙江
农业学报)ꎬ ２０１０ꎬ ２２(３): ３５４－３５７.
[４] 　 Ｓｕ Ｍ Ｘꎬ Ｘｉａｏ Ｒ Ｆꎬ Ｚｈｕ Ｙ Ｊꎬ ｅｔ ａｌ. Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ
ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｐａｔｈｏｇｅｎ ｉｎｓｉｄｅ ｔｈｅ ｔｉｓｓｕｅ ｏｆ
Ｍｏｍｏｒｄｉｃａ ｃｈａｒａｎｔｉａ ( ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ)[Ｊ] . Ｃｈｉｎａ Ｖｅｇｅｔａ￣
ｂｌｅｓ (中国蔬菜)ꎬ ２０１０ꎬ １６: ６２－６６.
[５] 　 Ｒａｏ Ｘ Ｑꎬ Ｌｉ Ｒ Ｋ. Ｓｔｕｄｉｅｓ ｏｎ ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｒｅｓｉｓｔ￣
ａｎｃｅ ｔｏ ｂｉｔｔｅｒ ｇｏｕｒｄ ｗｉｌｔ ａｔ ｓｅｅｄｌｉｎｇ ｓｔａｇｅ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｆｉｌ￣
ｔｒａｔｅ ｏｆ Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ Ｓｃｈｌ. ｆ. ｓｐ. ｍｏｍｏｒｄｉｃａｅ
(ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ)[Ｊ]. Ａｃｔａ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔａｔｉｓ Ｊｉａｎｇ￣
ｘｉｅｎｓｉｓ (江西农业大学学报)ꎬ １９９９ꎬ ２１(３): ３６７－
３６９.
[６] 　 Ｌｉｎ Ｙ Ｓꎬ Ｈｕａｎｇ Ｃ Ｈꎬ Ｋｕｏ Ｍ Ｓ. Ｏｃｃｕｒｒｅｎｃｅ ａｎｄ ｄｉｓ￣
ｓｅｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｗｉｌｔ ｏｆ ｂｉｔｔｅｒ ｇｏｕｒｄ ｉｎ Ｔａｉｗａｎ
[Ｊ] . Ｐｌａｎｔ Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ Ｂｕｌｌｅｔｉｎꎬ １９９６ꎬ ５(１): ３８－４６.
[７] 　 Ｒａｋｈｏｌｉｙａ Ｋ Ｂꎬ Ｊａｎｉ Ｓ Ｍꎬ Ｃｈｈｅｌａｄｉｙａ Ｋ Ｋꎬ ｅｔ ａｌ. Ｆｕ￣
ｓａｒｉｕｍ ｗｉｌｔ ｏｆ ｂｉｔｔｅｒ ｇｏｕｒｄ[Ｊ] . Ｉｎｄｉａｎ Ｐｈｙｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙꎬ
２００３ꎬ ５６ (４): ５０３.
[８] 　 Ｉｍａｍｕｒａ Ｙꎬ Ｋａｗａｇｏｅ Ｙꎬ Ｋｕｎｏ Ｋꎬ ｅｔ ａｌ. Ｏｃｃｕｒｒｅｎｃｅ
ｏｆ Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｗｉｌｔ ｃａｕｓｅｄ ｂｙ Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ ｉｎ
ｂａｌｓａｍ ｐｅａｒｓ[Ｍｏｍｏｒｄｉｃａ ｃｈａｒａｎｔｉａ] ｉｎ Ｍｉｙａｚａｋｉꎬ Ｊａ￣
ｐａｎ ａｎｄ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｔｈｅ ｐａｔｈｏｇｅｎ ｂａｓｅｄ ｏｎ ｔｈｅ ｒＤＮＡ
ＩＧＳ ｓｅｑｕｅｎｃｅ[ Ｊ] . Ｋｙｕｓｈｕ Ｐｌａｎｔ Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ Ｒｅｓｅａｒｃｈꎬ
２００７ꎬ ５３: １－８.
[９] 　 Ｃｕｍａｇｕｎ Ｃ Ｊ Ｒꎬ Ａｇｕｉｒｒｅ Ｊ Ａꎬ Ｒｅｌｅｖａｎｔｅ Ｃ Ａꎬ ｅｔ ａｌ.
Ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃｉｔｙ ａｎｄ ａｇｇｒｅｓｓｉｖｅｎｅｓｓ ｏｆ Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｏｘｙｓｐｏ￣
ｒｕｍ Ｓｃｈｌ. ｉｎ ｂｏｔｔｌｅ ｇｏｕｒｄ ａｎｄ ｂｉｔｔｅｒ ｇｏｕｒｄ[ Ｊ] . Ｐｌａｎｔ
Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ Ｓｃｉｅｎｃｅꎬ ２０１０ꎬ ４６(２): ５１－５８.
[１０] Ｇｕｏ Ｔ Ｘꎬ Ｍｏ Ｊ Ｙ. Ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｔｏ ｔｈｅ ｂｌｉｇｈｔ ｄｉｓｅａｓｅ
(Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ ｆ. ｓｐ. ｍｏｍｏｄｉｃａｅ) ｏｆ ｓｅｖｅｒａｌ
ｂｉｔｔｅｒ ｇｏｕｒｄ ｖａｒｉｅｔｉｅｓ ( ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ)[ Ｊ] . Ｇｕａｎｇｘｉ Ａｇｒｉ￣
ｃｕｌｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ (广西农业科学)ꎬ ２００７ꎬ ３８(４):
４０８－４１０.
[１１] Ｓｕｎ Ｓ Ｋꎬ Ｈｕａｎｇ Ｊ Ｗ. Ａ ｎｅｗ Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｗｉｌｔ ｏｆ ｂｉｔｔｅｒ
ｇｏｕｒｄ ｉｎ Ｔａｉｗａｎ [ Ｊ] . Ｐｌａｎｔ Ｄｉｓｅａｓｅꎬ １９８３ꎬ ６７ ( ２):
２２６－２２７.
[１２] Ｗｕ Ｙ Ｃꎬ Ｗａｎｇ Ｓ Ｚ. Ａ ｐｒｅｌｉｍｉｎａｒｙ ｓｔｕｄｙ ｏｎ ｐａｔｈｏｇｅｎ
ａｎｄ ｆｏｒｍａ ｓｐｅｃｉａｌｉｓ ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｇｏｕｒｄ ｗｉｌｔ ( ｉｎ Ｃｈｉ￣
ｎｅｓｅ)[Ｊ] . Ａｃｔａ Ｐｈｙｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａ Ｓｉｎｉｃａ (植物病理学
报)ꎬ １９９４ꎬ ２４(１): ９５.
[１３] Ｑｉ Ｐ Ｋ. Ａ Ｓｕｒｖｅｙ ｏｎ ｔｈｅ Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ ｆ. ｓｐｐ.
ｏｆ Ｃｕｃｕｒｂｉｔａｃｅａｅ ( ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ)[Ｊ] . Ｊｏｕｒｎａｌ Ｓｏｕｔｈ Ｃｈｉ￣
ｎａ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ (华南农业大学学报)ꎬ
１９９５ꎬ １６(４): １１０－１１４.
[１４] Ｊｏｓｅｐｈ Ｃꎬ Ｃｕｍａｇｕｎ Ｒꎬ Ｏｒｉｂｉａｎａ Ｚ Ｃꎬ ｅｔ ａｌ. Ｖｅｇｅｔａ￣
ｔｉｖｅ ｃｏｍｐａｔｉｂｉｌｉｔｙ ａｍｏｎｇ Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ ｉｓｏｌａｔｅｓ
ｆｒｏｍ ｂｉｔｔｅｒ ｇｏｕｒｄ ａｎｄ ｂｏｔｔｌｅ ｇｏｕｒｄ ｉｎ ｔｈｅ Ｐｈｉｌｉｐｐｉｎｅｓ
[Ｊ] . Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｌａｎｔ Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ Ｒｅｓｅａｒｃｈꎬ ２００８ꎬ ４８
(３): ２８３－２９３.
[１５] Ｌｅｓｌｉｅ Ｊ Ｆꎬ Ｓｕｍｍｅｒｅｌｌ Ｂ Ａ. Ｔｈｅ Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ
ｍａｎｕａｌ[Ｍ] . ＵＳＡ: Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇꎬ ２００６ꎬ １６－
１７.
[１６] Ｇｒｏｅｎｅｗａｌｄ Ｓꎬ Ｖａｎ Ｄｅｎ Ｂｅｒｇ Ｎꎬ Ｍａｒａｓａｓ Ｗ Ｆ Ｏꎬ
ｅｔ ａｌ. Ｔｈｅ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｈｉｇｈ￣ｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔ ＡＦＬＰ’ ｓ ｉｎ
ａｓｓｅｓｓｉｎｇ ｇｅｎｅｔｉｃ ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ ｉｎ Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ ｆ.
ｓｐ. ｃｕｂｅｎｓｅ [ Ｊ] . Ｍｙｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈꎬ ２００６ꎬ １１０
(３): ２９７－３０５.
[１７] Ｌｉｕ Ｃ Ｌꎬ Ｗｅｎ Ｊ Ｚꎬ Ｙａｎｇ Ｍ Ｘꎬ ｅｔ ａｌ. Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ
ｒＤＮＡ￣ＩＴＳ ｉｎ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｔｅｓｔ ｏｆ ｐｈｙｔｏｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ ｆｕｎｇｉ
( ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ) [ Ｊ] . Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｎｏｒｔｈｅａｓｔ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ
Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ (东北农业大学学报)ꎬ ２００７ꎬ ３８(１): １０１－
１０６.
[１８] Ｔａｍｕｒａ Ｋꎬ Ｄｕｄｌｅｙ Ｊꎬ Ｎｅｉ Ｍꎬ ｅｔ ａｌ. ＭＥＧＡ４: Ｍｏｌｅｃｕ￣
ｌａｒ ｅｖｏｌｕｔｉｏｎａｒｙ ｇｅｎｅｔｉｃｓ ａｎｙｌｙｓｉｓ (ＭＥＧＡ) ｓｏｆｔｗａｒｅ
ｖｅｒｓｉｏｎ ４. ０ [ Ｊ] . Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｅｖｏｌｕｔｉｏｎꎬ
２００７ꎬ ２４(８): １５９６－１５９９.
[１９] Ｌｅｓｌｉｅ Ｊ Ｆꎬ Ｓｕｍｍｅｒｅｌｌ Ｂ Ａ. Ｔｈｅ Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ
４４
　
　 １期 陈振东ꎬ等:苦瓜枯萎病菌的鉴定及其遗传多样性分析
ｍａｎｕａｌ[Ｍ] . ＵＳＡ: Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇꎬ ２００６ꎬ ２１２－
２１８.
[２０] Ｗａｎｇ Ｇ Ｃꎬ Ｚｈｅｎｇ Ｚꎬ Ｙｅ Ｑ Ｍꎬ ｅｔ ａｌ. Ｇｕｉｄｅ ｔｏ ｉｄｅｎｔｉ￣
ｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｃｏｍｍｏｎ Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｓｐｅｃｉｅｓ [Ｍ] . Ｂｅｉｊｉｎｇ:
Ｃｈｉｎａ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｐｒｅｓｓ (北
京: 中国农业科学技术出版社)ꎬ １９９６ꎬ １－９７.
[２１] Ｔａｙｌｏｒ Ｊ Ｗꎬ Ｊａｃｏｂｓｏｎ Ｄ Ｉꎬ Ｋｒｏｋｅｎ Ｓꎬ ｅｔ ａｌ. Ｐｈｙｌｏｇｅ￣
ｎｅｔｉｃ ｓｐｅｃｉｅｓ ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ ａｎｄ ｓｐｅｃｉｅｓ ｃｏｎｃｅｐｔｓ ｉｎ ｆｕｎｇｉ
[Ｊ] . Ｆｕｎｇａｌ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ ａｎｄ Ｂｉｏｌｏｇｙꎬ ２０００ꎬ ３１ ( １):
２１－３２.
[２２] Ｎｉｎｅｔ Ｂꎬ Ｊａｎ Ｉꎬ Ｂｏｎｔｅｍｓ Ｏꎬ ｅｔ ａｌ. Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｉｄｅｎｔｉｆｉ￣
ｃａｔｉｏｎ ｏｆ Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｓｐｅｃｉｅｓ ｉｎ Ｏｎｙｃｈｏｍｙｃｏｓｅｓ [ Ｊ ] .
Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｙꎬ ２００５ꎬ ２１０(１): ２１－２５.
[２３] Ｃｏｏｋｅ Ｄ Ｅ Ｌꎬ Ｄｒｅｎｔｈ Ａꎬ Ｄｕｎｃａｎ Ｊ Ｍꎬ ｅｔ ａｌ. Ａ ｍｏ￣
ｌｅｃｕｌａｒ ｐｈｙｌｏｇｅｎｙ ｏｆ Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ａｎｄ ｒｅｌａｔｅｄ ｏｏｍｙｃｅ￣
ｔｅｓ[Ｊ] . Ｆｕｎｇａｌ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ ａｎｄ Ｂｉｏｌｏｇｙꎬ ２０００ꎬ ３０(１):
１７－３２.
[２４] Ｖｉｓｅｎｔｉｎ Ｉꎬ Ｔａｍｉｅｔｔｉ Ｇꎬ Ｖａｌｅｎｔｉｎｏ Ｄꎬ ｅｔ ａｌ. Ｔｈｅ ＩＴＳ
ｒｅｇｉｏｎ ａｓ ａ ｔａｘｏｎｏｍｉｃ ｄｉｓｃｒｉｍｉｎａｔｏｒ ｂｅｔｗｅｅｎ Ｆｕｓａｒｉｕｍ
ｖｅｒｔｉｃｉｌｌｉｏｉｄｅｓ ａｎｄ Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｕｍ [ Ｊ] . Ｍｙｃｏ￣
ｌｏｇｉｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈꎬ ２００９ꎬ １１３(１０): １１３７－１１４５.
[２５] Ｚｈｅｎｇ Ｘ Ｆꎬ Ｌａｎ Ｊ Ｌꎬ Ｃａｏ Ｙꎬ ｅｔ ａｌ. Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ
ＩＴＳ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｗｉｌｔ ｐａｔｈｏｇｅｎｓ ｆｒｏｍ
ｔｈｅ ｃｕｃｕｒｂｉｔｓ ｃｒｏｐｓ ( ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ) [ Ｊ] . Ｓｃｉｅｎｔｉａ Ａｇｉｃｕｌ￣
ｔｕｒａ Ｓｉｎｉｃａ (中国农业科学)ꎬ ２００８ꎬ ４１(１２): ４０７７－
４０８４.
[２６] Ｙｕ Ｚ Ｄꎬ Ｌｉｕ Ｘ Ｙꎬ Ｃａｏ Ｚ Ｍ. ＩＳＳＲ ｍａｒｋｅｒ ａｎｄ ＩＴＳ ｓｅ￣
ｑｕｅｎｃｅ ｓｔｕｄｙ ｏｆ Ｍｅｌａｍｐｓｏｒａ ｌａｒｉｃｉ￣ｐｏｐｕｌｉｎａ ( ｉｎ Ｃｈｉ￣
ｎｅｓｅ) [ Ｊ] . Ｓｃｉｅｎｔｉａ Ａｇｉｃｕｌｔｕｒａ Ｓｉｎｉｃａ (中国农业科
学)ꎬ ２００６ꎬ ３９(６): １１５９－１１６５.
[２７] Ｓｈａｆａｇｈ Ｎꎬ Ｒａｓｔｅｇａｒ Ｍ Ｆꎬ Ｊａｆａｒｐｏｕｒ Ｂ. Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ
ｒａｃｅ ａｎｄ ｇｅｎｅｔｉｃ ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ Ｆｕｓａｒｉｕｍ
ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ ｆ. ｓｐ. Ｍｅｌｏｎｉｓ ｂｙ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ ｈｏｓｔｓ ａｎｄ
ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｍａｒｋｅｒ ＲＡＰＤ ｉｎ Ｎｏｒｔｈｅｒｎ ａｎｄ Ｒｚａｚｖｉ Ｋｈｏ￣
ｒａｓａｎ Ｐｒｏｖｉｎｃｅｓ [ Ｊ] . Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ
Ｓｃｉｅｎｃｅｓꎬ ２００８ꎬ ３(７): ７９０－７９３.
[２８] Ｂａｙｓａｌ Öꎬ Ｓｉｒａｇｕｓａ Ｍꎬ Ｚｅｎｇｉｎ Ｓꎬ ｅｔ ａｌ. Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ
ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ ｆ. ｓｐ. ｍｅｌｏｎ￣
ｇｅｎａｅ ｂｙ ＩＳＳＲ ａｎｄ ＲＡＰＤ ｍａｒｋｅｒｓ ｏｎ ｅｇｇｐｌａｎｔ [ Ｊ] .
Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｇｅｎｅｔｉｃｓꎬ ２０１０ꎬ ４８(５－６): ５２４－５３７.
[２９] Ｂｅｌａｂｉｄ Ｌꎬ Ｂａｕｍ Ｍꎬ Ｆｏｒｔａｓ Ｚꎬ ｅｔ ａｌ. Ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ ａｎｄ
ｇｅｎｅｔｉｃ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ Ａｌｇｅｒｉａｎ ｉｓｏｌａｔｅｓ ｏｆ Ｆｕｓａｒｉ￣
ｕｍ ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ ｆ. ｓｐ. ｌｅｎｔｉｓ ｂｙ ＲＡＰＤ ａｎｄ ＡＦＬＰ ａｎａｌｙ￣
ｓｉｓ [ Ｊ] . Ａｆｒｉｃａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙꎬ ２００４ꎬ ３
(１): ２５－３１.
[３０] Ｖａｋａｌｏｕｎａｋｉｓ Ｄ Ｊꎬ Ｗａｎｇ Ｚꎬ Ｆｒａｇｋｉａｄａｋｉｓ Ｇ Ａꎬ ｅｔ ａｌ.
Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ ｉＩｓｏｌａｔｅｓ ｏｂ￣
ｔａｉｎｅｄ ｆｒｏｍ Ｃｕｃｕｍｂｅｒ ｉｎ Ｃｈｉｎａ ｂｙ ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃｉｔｙꎬ
ＶＣＧꎬ ａｎｄ ＲＡＰＤ[ Ｊ] . Ｐｌａｎｔ Ｄｉｓｅａｓｅꎬ ２００４ꎬ ８８(６):
６４５－６４９.
[３１] Ｖａｋａｌｏｕｎａｋｉｓ Ｄ Ｊꎬ Ｆｒａｇｋｉａｄａｋｉｓ Ｇ Ａ. Ｇｅｎｅｔｉｃ Ｄｉｖｅｒｓｉ￣
ｔｙ ｏｆ Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ Ｉｓｏｌａｔｅｓ ｆｒｏｍ Ｃｕｃｕｍｂｅｒ:
Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｂｙ Ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃｉｔｙꎬ Ｖｅｇｅｔａｔｉｖｅ Ｃｏｍｐａｔｉ￣
ｂｉｌｉｔｙꎬ ａｎｄ ＲＡＰＤ Ｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔｉｎｇ[ Ｊ] . Ｐｈｙｔｏｐｈｏｌｏｇｉｃａｌꎬ
１９９９ꎬ ８９(２):１６１－１６８.
[３２] Ｗａｎｇ Ｐ Ｈꎬ Ｌｏ Ｈ Ｓꎬ Ｙｅｈ Ｙ. Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ Ｆ. ｏ. ｃｕ￣
ｃｕｍｅｒｉｎｕｍ ａｎｄ Ｆ. ｏ. ｌｕｆｆａｅ ｂｙ ＲＡＰＤ￣ｇｅｎｅｒａｔｅｄ ＤＮＡ
ｐｒｏｂｅｓ[Ｊ]. Ａｐｐｌｉｅｄ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙꎬ ２００１ꎬ ３３(５): ３９７－
４０１.
[３３] Ｌｉｅｖｅｎｓ Ｂꎬ Ｃｌａｅｓ Ｌꎬ Ｖａｋａｌｏｕｎａｋｉｓ Ｄ Ｊꎬ ｅｔ ａｌ. Ａ ｒｏｂｕｓｔ
ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ａｓｓａｙ ｔｏ ｄｉｓｃｒｉｍｉｎａｔｅ ｔｈｅ
ｃｕｃｕｍｂｅｒ ｐａｔｈｏｇｅｎｓ Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ ｆ. ｓｐ. ｃｕ￣
ｃｕｍｅｒｉｎｕｍ ａｎｄ ｆ. ｓｐ. ｒａｄｉｃｉｓ￣ｃｕｃｕｍｅｒｉｎｕｍ [ Ｊ] . Ｅｎｖｉ￣
ｒｏｎｍｅｎｔａｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙꎬ ２００７ꎬ ９(９): ２１４５－２１６１.
责任编辑:张宗英
５４