全 文 ：植物病理学报
ＡＣＴＡ ＰＨＹＴＯＰＡＴＨＯＬＯＧＩＣＡ ＳＩＮＩＣＡ　 ４４(３): ２５４￣２６４(２０１４)
收稿日期: ２０１３￣０８￣０７ꎻ 修回日期: ２０１４￣０１￣２１
基金项目: 国家高技术研究发展计划(“８６３”计划)(２０１１ＡＡ１０Ａ２０５)
通讯作者: 杨秀芬ꎬ研究员ꎬ主要从事微生物农药研究与利用工作ꎻ Ｔｅｌ:０１０￣８２１０９５６２ꎬ Ｅ￣ｍａｉｌ: Ｙａｎｇｘｉｕｆｅｎ＠ｃａａｓ.ｃｎ
第一作者: 卜冰武ꎬ男ꎬ山东滨州人ꎬ硕士ꎬ主要从事真菌蛋白激发子诱导植物抗病作用机理研究ꎻ Ｅ￣ｍａｉｌ: ｂｕｂｉｎｇｗｕ＿１１５＠１６３.ｃｏｍꎮ
大丽轮枝菌蛋白激发子 ＰｅｖＤ１诱导
棉花抗病性及作用机理
卜冰武ꎬ 邱德文ꎬ 曾洪梅ꎬ 郭立华ꎬ 袁京京ꎬ 杨秀芬∗
(中国农业科学院植物保护研究所 /农业部作物有害生物综合治理重点实验室ꎬ 北京 １０００８１)
摘要:ＰｅｖＤ１是一种大丽轮枝菌(Ｖｅｒｔｉｃｉｌｌｉｕｍ ｄａｈｌｉａｅ)分泌蛋白ꎬ具有激发烟草过敏反应(ＨＲ)和系统获得性抗病(ＳＡＲ)的
功能ꎮ 为明确蛋白 ＰｅｖＤ１诱导棉花抗病性及其作用机制ꎬ本文利用大肠杆菌表达、纯化的 ＰｅｖＤ１诱导棉苗植株ꎬ检测棉苗
对大丽轮枝菌的抗性及免疫应答反应ꎮ 结果表明ꎬ大肠杆菌表达的 ＰｅｖＤ１重组蛋白不是棉花品种“新陆早 ４２号”的致萎因
子ꎬ叶片注射 ８ μｇ / ｍＬ ＰｅｖＤ１蛋白诱导 ３ ｄ后根部接种大丽轮枝菌ꎬ１５ ｄ后 ＰｅｖＤ１处理组病害减轻率达 ３５.０４％ꎮ ＰｅｖＤ１能
诱导棉花叶片抗性早期信号分子 Ｈ２Ｏ２ 产生和 ＮＯ积累ꎬ维管束细胞壁加厚、木质素和酚类物质的积累ꎮ 另外ꎬＰｅｖＤ１处理
能提高防御酶 ＰＡＬ、ＰＯＤ 和 ＰＰＯ 活性ꎬ提高棉花抗性基因和木质素合成相关基因 ＰＡＬ、Ｃ４Ｈ１、４ＣＬ 的转录水平ꎮ 说明
ＰｅｖＤ１通过激发棉花免疫系统而提高抗病性ꎬ该研究不仅为利用 ＰｅｖＤ１ 蛋白激发子控制棉花黄萎病提供了科学依据ꎬ同时
也为阐明棉花与大丽轮枝菌互作机理提供了理论基础ꎮ
关键词:蛋白激发子 ＰｅｖＤ１ꎻ 棉花黄萎病ꎻ 大丽轮枝菌ꎻ 诱导抗病性ꎻ 抗病防御反应
Ｉｎｄｕｃｅｄ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ａｎｄ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎ ｅｌｉｃｉｔｏｒ ＰｅｖＤ１ ａｇａｉｎｓｔ Ｖｅｒｔｉｃｉｌｌｉｕｍ
ｄａｈｌｉａｅ ｉｎ ｃｏｔｔｏｎ 　 ＢＵ Ｂｉｎｇ￣ｗｕꎬ ＱＩＵ Ｄｅ￣ｗｅｎꎬ ＺＥＮＧ Ｈｏｎｇ￣ｍｅｉꎬ ＧＵＯ Ｌｉ￣ｈｕａꎬ ＹＵＡＮ Ｊｉｎｇ￣ｊｉｎｇꎬ
ＹＡＮＧ Ｘｉｕ￣ｆｅｎ　 (Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ Ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄ Ｐｅｓｔ Ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ ｉｎ Ｃｒｏｐꎬ Ｍｉｎｉｓｔｒｙ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅꎬ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｐｌａｎｔ Ｐｒｏｔｅｃ￣
ｔｉｏｎꎬ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅꎬ Ｂｅｉｊｉｎｇ １０００８１ꎬ Ｃｈｉｎａ)
Ａｂｓｔｒａｃｔ: ＰｅｖＤ１ꎬ ａ ｓｅｃｒｅｔｅ ｅｌｉｃｉｔｏｒ ｆｒｏｍ Ｖｅｒｔｉｃｉｌｌｉｕｍ ｄａｈｌｉａｅꎬ ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｈｙｐｅｒｓｅｎｓｉｔｉｖｅ ｒｅｓｐｏｎｓｅ (ＨＲ) ａｎｄ ｓｙｓ￣
ｔｅｍｉｃ ａｃｑｕｉｒｅｄ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ (ＳＡＲ) ｉｎ ｔｏｂａｃｃｏ. Ｉｎ ｏｒｄｅｒ ｔｏ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ ｔｈｅ ｉｎｄｕｃｅｄ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ａｎｄ ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ ｏｆ
ＰｅｖＤ１ ｉｎ ｃｏｔｔｏｎꎬ ｔｈｅ ＰｅｖＤ１ ｗａｓ ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ｉｎ Ｅ. ｃｏｌｉ ａｎｄ ａｓｓａｙｅｄ ｔｈｅ ｃｏｔｔｏｎ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ａｇａｉｎｓｔ Ｖ. ｄａｈｌｉａｅ ａｎｄ ｉｍ￣
ｍｕｎｅ ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ. Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｐｕｒｉｆｉｅｄ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ｐｒｏｔｅｉｎ ＰｅｖＤ１ ｗａｓ ｎｏｔ ａ ｐｈｙｔｏｔｏｘｉｃ ｆａｃｔｏｒ ｉｎ Ｎｏ.
４２ Ｘｉｎ￣ｌｕｚａｏ ｃｏｔｔｏｎ ｖａｒｉｅｔｙ. Ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ＰｅｖＤ１ ｉｎ ｌｅａｖｅｓ ｉｍｐｒｏｖｅｄ ｃｏｔｔｏｎ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ａｔ ａ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ａｓ ｌｏｗ ａｓ
８ μｇ / ｍＬꎬ ｔｈｅ ｈｉｇｈｅｓｔ ｄｉｓｅａｓｅ ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ ｗａｓ ３５.０４％ ａｔ ｔｈｅ １５ｔｈ ｄａｙ ｐｏｓｔ Ｖ. ｄａｈｌｉａｅ ｉｎｏｃｕｌａｔｉｏｎ. Ｔｈｉｓ ｐｒｏｔｅｉｎ ｗａｓ
ａｂｌｅ ｔｏ ｓｙｓｔｅｍｉｃａｌｌｙ ｉｎｄｕｃｅ ｈｙｄｒｏｇｅｎ ｐｅｒｏｘｉｄｅ ａｎｄ ｎｉｔｒｉｃ ｏｘｉｄｅ ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎꎬ ｖｅｓｓｅｌ ｒｅｉｎｆｏｒｃｅｍｅｎｔꎬ ｌｉｇｎｉｎ ａｎｄ ｔｅｒ￣
ｐｅｎｏｉｄｓ ｄｅｐｏｓｉｔｉｏｎ. ＰｅｖＤ１ ｅｎｈａｎｃｅｄ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ￣ｒｅｌａｔｅｄ ｇｅｎｅｓ ａｎｄ ｌｉｇｎｉｎ ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ￣ｒｅｌａｔｅｄ
ｇｅｎｅｓ ＰＡＬꎬ Ｃ４Ｈ１ ａｎｄ ４ＣＬꎬ ａｎｄ ａｌｓｏ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｅｎｚｙｍｅ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ＰＡＬꎬ ＰＯＤ ａｎｄ ＰＰＯ. Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｄｅｍｏｎｓｔｒａ￣
ｔｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ＰｅｖＤ１ ｐｒｏｔｅｉｎ ｔｒｉｇｇｅｒｅｄ ｔｈｅ ｐｌａｎｔ ｉｍｍｕｎｅ ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ ａｎｄ ｉｍｐｒｏｖｅｄ ｄｉｓｅａｓｅ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｉｎ ｃｏｔｔｏｎ. Ｔｈｅ
ｒｅｓｅａｒｃｈ ｎｏｔ ｏｎｌｙ ｌａｙ ａ ｔｈｅｏｒｅｔｉｃａｌ ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ ｆｏｒ ｃｏｔｔｏｎ Ｖｅｒｔｉｃｉｌｌｉｕｍ ｗｉｌｔ ｄｉｓｅａｓｅ ｃｏｎｔｒｏｌ ｂｕｔ ａｌｓｏ ｐｒｏｖｉｄｅｄ
ａ ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ ｂａｓｉｓ ｆｏｒ ｅｌｕｃｉｄａｔｉｎｇ ｐｌａｎｔ￣ｅｌｉｃｉｔｏｒ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ.
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ: ｐｒｏｔｅｉｎ ｅｌｉｃｉｔｏｒ ＰｅｖＤ１ꎻ ｃｏｔｔｏｎ Ｖｅｒｔｉｃｉｌｌｉｕｍ ｗｉｌｔꎻ Ｖｅｒｔｉｃｉｌｌｉｕｍ ｄａｈｌｉａｅꎻ ｉｎｄｕｃｅｄ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅꎻ
ｄｅｆｅｎｓｅ ｒｅｓｐｏｎｓｅ
中图分类号: Ｓ４３２.２３　 　 　 　 　 文献标识码: Ａ　 　 　 　 　 文章编号: ０４１２￣０９１４(２０１４)０３￣０２５４￣１１
　
　 ３期 卜冰武ꎬ等:大丽轮枝菌蛋白激发子 ＰｅｖＤ１诱导棉花抗病性及作用机理
　 　 在自然界长期进化过程中ꎬ植物已经形成了一
套复杂的免疫系统以抵御病原菌侵染和不良环境
的胁迫ꎮ 植物免疫反应主要包括早期的 ＲＯＳ、ＮＯ
产生、离子流变化等抗病信号反应ꎬ以及通过这些
信号分子传递产生的抗病相关基因转录上调、防御
酶活性增强和抗性物质的产生等[１ꎬ２]ꎮ 当植物受
到病原菌侵染、昆虫取食和极端环境刺激时均可产
生免疫反应ꎬ但调控分子机制不同ꎮ 植物与病原菌
互作产生的免疫反应有二层含义ꎬ第一层为病原相
关分子模式 ( ｐａｔｈｏｇｅｎ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｐａｔ￣
ｔｅｒｎｓꎬ ＰＡＭＰｓ)激发的免疫反应 ( ＰＡＭＰ￣ｔｒｉｇｇｅｒｅｄ
ｉｍｍｕｎｉｔｙꎬ ＰＴＩ)ꎬ 即植物通过细胞表面受体 (ｐａｔ￣
ｔｅｒｎ ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓꎬ ＰＲＲｓ) 识别病原菌的
ＰＡＭＰｓ而启动的植物防卫反应ꎻ 第二层为病原菌
效应子激发的免疫反应(ＥＴＩ)ꎬ 即病原菌通过产
生效应子( ｅｆｆｅｃｔｏｒｓ)抑制植物的 ＰＴＩ 来突破植物
的第一道防线ꎬ 而植物又进化出新的分子受体(例
如 Ｒ 基因编码的 ＮＢＳ￣ＬＲＲ 蛋白质)识别病原菌效
应子并启动第二道防卫反应[３ꎬ４]ꎮ 植物与病原菌
的互作就像“军备竞赛”一样ꎬ植物对病原菌侵染
的免疫应答机制是复杂的调控网络ꎬ而且随着互作
分子性质不同而发生变化[５]ꎮ
大丽轮枝菌(Ｖｅｒｔｉｃｉｌｌｉｕｍ ｄａｈｌｉａｅ)引起的棉花
黄萎病严重影响棉花产量和棉纤维品质ꎬ目前国内
外尚缺乏有效的控制措施ꎬ并且由于棉花栽培品种
遗传背景复杂ꎬ抗病基因克隆及功能研究进展缓
慢ꎬ使抗黄萎病育种尚未取得显著进展[６]ꎮ 以抗
(耐)病品种为基础ꎬ 改善土壤生态条件及诱导棉
株抗病性相结合的综合措施是当前控制棉花黄萎
病的基本策略ꎬ其中提高植物自身免疫抗病性是研
究重点之一ꎮ
ＰｅｖＤ１是从大丽轮枝菌(Ｖ. ｄａｈｌｉａｅ)培养液中
分离纯化的一种蛋白激发子(ＧｅｎＢａｎｋ ａｃｃｅｓｓｉｏｎ
Ｎｏ. ＡＢＪＥ ０１０００４４５.１)ꎬ前期研究表明ꎬＰｅｖＤ１ 能
引起烟草叶片过敏反应( ｈｙｐｅｒｓｅｎｓｉｔｉｖｅ ｒｅｓｐｏｎｓｅꎬ
ＨＲ)ꎬ诱导烟草获得系统抗性 ( ｓｙｓｔｅｍｉｃ ａｃｑｕｉｒｅｄ
ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅꎬ ＳＡＲ)ꎬ提高烟草对 ＴＭＶ抗性[７]ꎮ 本文
以棉花和大丽轮枝菌为研究系统ꎬ探讨 ＰｅｖＤ１ 诱
导棉花抗病性及其作用机制ꎬ为进一步评价 ＰｅｖＤ１
诱导植物抗病性功能提供科学依据ꎮ
１　 材料与方法
１.１　 棉花植株和大丽轮枝菌的培养
供试棉花品种(新陆早 ４２ 号)和大丽轮枝菌
菌株 ＨＸ￣８均由新疆农垦科学院棉花所提供ꎮ 脱
绒棉籽用 ０.０１％升汞消毒 ３０ ｍｉｎ 后用无菌水冲洗
２~ ３ 遍ꎬ置于铺有湿润滤纸的培养皿中 ２８℃过夜
催芽ꎬ发芽种子播种于盛满灭菌营养土(营养土 /
蛭石＝１ / １)的纸钵中ꎬ在 ２８℃ / ２５℃(白天 /夜晚)ꎬ
１６ ｈ光照 / ８ ｈ黑暗培养室中培养ꎮ 当植株长至四
叶期时ꎬ挑选长势一致的植株用于试验ꎮ
棉花愈伤组织的培养参照 Ｊｉａ 等[８]的方法ꎮ 诱
导形成的棉花愈伤组织转移到液体培养基中ꎬ除琼
脂外ꎬ 培养基所含的无机营养和有机营养与愈伤组
织诱导培养基相同ꎬ悬浮细胞培养 ２ ｄ用于试验ꎮ
将斜面保存的大丽轮枝菌菌株 ＨＸ￣８ 在 ＰＤＡ
培养基上培养一周ꎬ用灭菌打孔器在菌落边缘切取
直径 ５ ｍｍ的菌块接种到 ２５０ ｍＬ灭菌的 Ｃｚａｐｅｋ’ｓ
液体培养基中ꎬ 在 ２５℃ꎬ １５０ ｒ / ｍｉｎ 振荡培养 ４~ ５
ｄꎬ 培养液用双层无菌纱布过滤ꎬ用血球计数板计
数孢子浓度ꎬ用于接种的孢子浓度调整为 １０７ 个孢
子 / ｍＬꎮ
１.２　 激发子 ＰｅｖＤ１的表达与纯化
将实验室保存的重组表达载体 ｐＥＴ￣３０ａ￣Ｐｅ￣
ｖＤ１转化大肠杆菌 ＢＬ２１ (ＤＥ３) 中ꎬ挑取单克隆ꎬ
在 ＬＢ液体培养基中活化ꎬ３７℃ꎬ２００ ｒ / ｍｉｎ 振荡培
养过夜后按 １％接种量转至含 Ｋａｎ (５０ μｇ / ｍＬ) 的
ＬＢ液体培养基中培养ꎬ待 ＯＤ６００达到 ０.５ ~ ０.７ꎬ加
入 ０.１ ｍｍｏｌ / Ｌ ＩＰＴＧꎬ在 １６℃ꎬ ２００ ｒ / ｍｉｎ 条件下
继续培养 １２ ｈꎮ 离心收集菌体(５ ０００ ｇꎬ１５ ｍｉｎ)并
用结合缓冲液 ( ２５ ｍｍｏｌ / Ｌ Ｔｒｉｓꎬ ３００ ｍｍｏｌ / Ｌ
ＮａＣｌꎬ ｐＨ ７.４)重悬ꎬ超声破碎(２００ Ｗꎬ ２ ｓ、 ４ ｓ 间
隔ꎬ 共 ３０ ｍｉｎ)后ꎬ１２ ０００ ｒ / ｍｉｎ离心 ２０ ｍｉｎꎬ收集
的上清液即为重组蛋白粗提液ꎮ 蛋白粗提液的纯
化参照Ｗａｎｇ等[７]的方法ꎮ 用 ＢＣＡ蛋白含量分析
试剂盒(ＰＩＥＲＣＥꎬ ＵＳＡ) 测定蛋白质浓度ꎬ用 ＳＤＳ￣
ＰＡＧＥ考马斯亮蓝染色法检验蛋白分子量和纯度ꎮ
１.３　 ＰｅｖＤ１对棉苗致萎作用测定
将长势均一的棉苗从纸钵中取出并用无菌水
轻轻冲洗根部组织ꎬ分别浸入 １０ μｇ / ｍＬ ＰｅｖＤ１、
５５２
　
植物病理学报 ４４卷
１􀆰 ０ ｍｇ / ｍＬ ＰｅｖＤ１ 蛋白液、大丽轮枝菌总蛋白液
和菌株发酵液中ꎬ４８ ｈ 观察不同处理棉苗的萎蔫
情况ꎮ
１.４　 蛋白激发子 ＰｅｖＤ１不同诱导方式、诱导时间
和诱导浓度对棉花植株抗病性的影响
１.４.１　 不同诱导方式　 用 ２０ μｇ / ｍＬ ＰｅｖＤ１ 纯化
蛋白液分别对棉苗进行叶面喷雾ꎬ１０ μＬ 茎部注射
和 １０ μＬ叶面注射处理ꎬ３ ｄ 后用纸钵撕底蘸根法
接种病菌孢子液[９]ꎬ 以不做任何处理的棉苗为对
照ꎬ接种后的棉苗置于原塑料盆中继续培养ꎮ
１.４. ２ 　 不同诱导时间 　 棉花叶片注射 １０ μＬ
ＰｅｖＤ１纯化蛋白液 ( ２０ μｇ / ｍＬ)ꎬ分别在处理后
３ ｄ、５ ｄ和 ７ ｄ 接种病菌孢子ꎬ以注射 １０ μＬ无菌水
为对照ꎮ
１.４.３　 蛋白不同诱导浓度　 棉花叶片注射 １０ μＬ
不同浓度 ( １. ０、 ４. ０、 ８. ０、 １６. ０、 ３２. ０ μｇ / ｍＬ)的
ＰｅｖＤ１纯化蛋白液ꎬ以注入 １０ μＬ 无菌水为空白对
照ꎬ所有棉苗处理后 ３ ｄ 接种病菌ꎮ
以上处理棉苗接菌后第 １５ ｄ 按 ５ 级病级标准
调查黄萎病病情[９]ꎮ 计算病情指数和防治效果ꎮ
病情指数＝ [∑(各级病株数×相应病级) /调查总
株数×最高病级]×１００ꎬ相对防治效果(％)＝ (对照
病情指数－处理病情指数) /对照病情指数×１００％ꎮ
１.５　 蛋白激发子 ＰｅｖＤ１ 诱导棉花细胞 ＲＯＳ 和
ＮＯ的产生
取四叶期棉花叶片ꎬ洗净后用打孔器取直径为
１ ｍｍ的叶盘ꎬ置于盛有蒸馏水的 ９６孔板圆孔中浸
泡过夜 (目的是除去机械损伤引起的活性氧物
质)ꎬ检测棉花细胞活性氧积累ꎬ 测量方法参照
Ｃｈｅｎ等[１０]的方法ꎬ同时以 ＢＳＡ 为阴性对照ꎬ以无
菌水为空白对照ꎬ每次试验重复 ３次ꎮ
ＮＯ的产生测定参照Ｗａｎｇ 等[１１]的方法ꎬ将棉
花悬浮细胞与 ＮＯ 荧光探针充分混合后ꎬ用 ＰＢＳ
缓冲液洗涤细胞 ３ 次ꎬ然后加入 ＰｅｖＤ１ꎬ使其终浓
度为 １０ μｇ / ｍＬꎬ孵育 ２０ ｍｉｎ后在荧光显微镜下观
察细胞颜色变化ꎬ激发波长 ４９５ ｎｍꎬ发射波长 ５１５
ｎｍꎮ 以无菌水处理作为空白对照ꎮ
１.６　 棉花茎部组织结构变化及棉酚的积累
分别用 ＰｅｖＤ１蛋白激发子和无菌水处理四叶
期棉苗ꎬ处理后第 ５ ｄ横切茎部长约 ２ ｍｍ的组织ꎬ
在含有 ２％戊二醛的磷酸缓冲液(ｐＨ ７.３)中室温
固定 ２４ ｈꎬ 在不同浓度梯度的乙醇溶液 (２５％、
５０％、７０％、 ８５％、 ９５％和 １００％) 中分别脱水 １０
ｍｉｎꎬ乙酸异戊酯置换ꎬ临界点干燥ꎬ表面喷金后用
日立 Ｓ￣４８００ 扫描电镜进行观察拍照ꎬ观察维管束
组织结构变化[１２]ꎮ
将 ＰｅｖＤ１ 处理 ３ ｄ 后的棉苗茎部组织进行徒
手切片(大约厚 １００ μｍ)ꎬ置于载玻片上ꎬ滴入几
滴饱和的三氯化锑￣高氯酸溶液染色(三氯化锑溶
于 ４０％的高氯酸溶液)ꎮ 盖上盖玻片并在 ５ ｍｉｎ 内
在光学显微镜下观察并拍照棉苗组织中酚类物质
的分布情况[１２]ꎬ以无菌水处理的棉苗为对照ꎮ
１.７　 棉花茎部木质素的积累
用激发子 ＰｅｖＤ１叶部注射棉花幼苗并在处理
后不同时间(０、８、１２、２４、４８、７２ 和 ９６ ｈ)取茎部组
织ꎬ液氮冷冻后于－８０℃冰箱保存备用ꎮ 将棉苗茎
部组织研磨并依次在甲苯￣乙醇(２ / １ꎬｖ / ｖ)、乙醇
和水中抽提 ２４ ｈꎬ在 ６０℃下干燥样品 ２４ ｈꎮ 根据
Ｗａｎｇ等[７]的方法测定木质素含量ꎮ 以无菌水处
理的棉苗为空白对照ꎬ每处理 ３次重复ꎮ
１.８　 酶活力测定
分别用蛋白激发子 ＰｅｖＤ１ 叶部注射和大丽轮
枝菌孢子悬浮液根部接种棉苗ꎬ以叶部注射无菌水
为空白对照ꎬ处理后不同时间(０、１２、２４、４８、７２、９６、
１２０、１４４和 １６８ ｈ)取植株上部未经处理的叶片ꎬ液
氮冷冻后于－８０℃冰箱保存备用ꎮ 分别测定苯丙
氨酸解氨酶(ＰＡＬ)ꎬ多酚氧化酶(ＰＰＯ)和过氧化
物酶(ＰＯＤ)活性[１３~１５]ꎮ ３种酶分别以每毫克蛋白
每分钟 ＯＤ２９０、ＯＤ４００和 ＯＤ４７０变化 ０. ０１个单位为一
个酶活力单位(Ｕ)ꎮ
１.９　 抗病相关基因转录水平检测
分别用激发子 ＰｅｖＤ叶部注射和大丽轮枝菌孢
子悬浮液根部接种棉苗ꎬ处理后不同时间(０、８、１２、
２４、４８、７２和 ９６ ｈ) 取未处理的上部叶片并置于液氮
冷冻后于－８０℃冰箱保存备用ꎮ 在液氮中充分研磨
叶片组织ꎬ按照植物 ＲＮＡ 提取试剂盒 (Ｏｍｅｇａꎬ
ＵＳＡ)的步骤提取总ＲＮＡ并调成相同浓度ꎮ 第一链
ｃＤＮＡ的合成ꎬ按照 ＴｒａｎｓＳｃｒｉｐｔ Ｏｎｅ￣Ｓｔｅｐ ｇＤＮＡ Ｒｅ￣
ｍｏｖａｌ ａｎｄ ｃＤＮＡ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ Ｓｕｐｅｒ Ｍｉｘ Ｋｉｔ (ＴｒａｎｓＧｅｎ
Ｂｉｏｔｅｃｈꎬ 北京)说明书进行ꎮ 取 ５００ ｎｇ总 ＲＮＡꎬ 用
６５２
　
　 ３期 卜冰武ꎬ等:大丽轮枝菌蛋白激发子 ＰｅｖＤ１诱导棉花抗病性及作用机理
ＴｒａｎｓＳｃｒｉｐｔ ＲＴ / ＲＩ Ｅｎｚｙｍｅ Ｍｉｘꎬ以 Ａｎｃｈｏｒｅｄ Ｏｌｉｇｏ
(ｄＴ)１８为引物ꎬ ４２℃孵育 ３０ ｍｉｎꎬ８５℃加热 ５ ｍｉｎ
使酶失活ꎮ 取 １ μＬ 反转录产物ꎬ 以 ｕｂｉｑｕｉｔｉｎ 为内
标基因ꎬ进行抗性相关基因 ＰＣＲ扩增ꎮ ＰＣＲ反应体
系:ｃＤＮＡ 各 １ μＬꎬ１０ μｍｏｌ / Ｌ 的正反引物各 ０.５
μＬꎬ１２.５ μＬ的 ２×ＴｒａｎｓＳｃｒｉｐｔ ＨｉＦｉ ＰＣＲ ＳｕｐｅｒＭｉｘⅡ
用 ｄｄＨ２Ｏ补足至 ２５ μＬꎻＰＣＲ反应程序:９４°Ｃ 预变
性 ４ ｍｉｎꎻ９４°Ｃ变性 ３０ ｓꎬ ５５°Ｃ退火 ３０ ｓꎬ７２°Ｃ延伸
３０ ｓꎬ３０~３５个循环ꎻ ７２°Ｃ延伸 １０ ｍｉｎꎬ 保存于 ４°Ｃ
用于电泳检测ꎮ
２　 结果与分析
２.１　 ＰｅｖＤ１对棉苗致萎作用
棉花幼苗浸入大丽轮枝菌发酵液和发酵液提
取的总蛋白液中 ４８ ｈꎬ均出现严重的萎蔫现象ꎬ 而
浸入 １０ μｇ / ｍＬ和 １.０ ｍｇ / ｍＬ ＰｅｖＤ１ 蛋白纯化液
的棉花幼苗未出现萎蔫现象(图 １)ꎬ说明 ＰｅｖＤ１不
是引起供试棉花品种萎蔫的致萎因子ꎮ
２.２　 激发子 ＰｅｖＤ１提高棉株对大丽轮枝菌抗性
ＰｅｖＤ１不同诱导方式对棉花黄萎病病情指数
有显著影响ꎮ 与叶面喷洒和茎部注射方式比较ꎬ叶
面注射诱导的棉花幼苗病情指数最低(２６.９１)ꎬ因
Ｆｉｇ. １　 Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ＰｅｖＤ１ ｏｎ ｃｏｔｔｏｎ ｓｅｅｄｉｎｇ ｗｉｌｔ ａｔ
４８ ｈ ａｆｔｅｒ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ
１: Ｃｕｌｔｕｒｅ ｆｉｌｔｒａｔｅ ｏｆ Ｖ. ｄａｈｌｉａｅꎻ ２: Ｔｏｔａｌ ｐｒｏｔｅｉｎ ｏｆ Ｖ. ｄａｈｌｉ￣
ａｅ ｃｕｌｔｕｒｅꎻ ３: １０ μｇ / ｍＬ ＰｅｖＤ１ꎻ ４: １.０ ｍｇ / ｍＬ ＰｅｖＤ１.
此ꎬ后续试验均采用叶面注射的诱导方式ꎮ 从表 １
可见ꎬＰｅｖＤ１通过叶部注射诱导棉苗 ３ ｄ 接种病菌
的病情指数为 ２８.９８ꎬ均低于诱导 ５ ｄ 和 ７ ｄ 的病情
指数ꎮ 此外ꎬ不同浓度 ＰｅｖＤ１ 诱导棉花抗性效应
也有显著影响ꎬ 当激发子浓度 ４ μｇ / ｍＬ 时ꎬ棉花
病情指数比对照明显降低ꎬ且 ８ μｇ / ｍＬ、１６ μｇ / ｍＬ
和 ３２ μｇ / ｍＬ激发子诱导的病情指数无显著差异ꎬ
最高相对诱抗效果达３８ .１６％ (表２) ꎮ表１和表２
Ｔａｂｌｅ １　 Ｔｈｅ ｃｏｔｔｏｎ Ｖｅｒｔｉｃｉｌｌｉｕｍ ｗｉｌｔ ｄｉｓｅａｓｅ ｉｎｄｅｘ ｉｎ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ＰｅｖＤ１
Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ Ｄｉｓｅａｓｅ ｉｎｄｅｘ (ＤＩ) Ｔｉｍｅ ａｆｔｅｒ ｌｅａｆ ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ (ｄａｙ) Ｄｉｓｅａｓｅ ｉｎｄｅｘ (ＤＩ)
Ｃｏｎｔｒｏｌ ４３.５０±２.０１ ａ Ｃｏｎｔｒｏｌ ４５.０９±０.６５ ａ
Ｓｐｒａｙ ３８.２８±１.２３ ｂ ３ ２８.９８±１.７３ ｃ
Ｓｔｅｍ ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ ３４.３８±１.２８ ｂ ５ ４２.１９±１.１６ ｂ
Ｌｅａｆ ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ ２６.９１±２.８７ ｃ ７ ４５.２６±１.６２ ａ
Ｖａｌｕｅｓ ａｒｅ ｍｅａｎｓ±ＳＤ ｏｆ ｔｈｒｅｅ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓ. Ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｔｈｅ ｄａｔａ ｗａｓ ｐｅｒｆｏｒｍｅｄ ｕｓｉｎｇ Ｄｕｎｃａｎｓ ｔｅｓｔ ｓｏｆｔｗａｒｅ
ＳＡＳ. Ｖａｌｕｅｓ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｓａｍｅ ｌｅｔｔｅｒ ｉｎ ｔｈｅ ｓａｍｅ ｃｏｌｕｍｎ ａｒｅ ｎｏｔ ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌｌｙ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ａｔ ５％ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ ｌｅｖｅｌ.
Ｔａｂｌｅ ２　 Ｃｏｔｔｏｎ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｔｏ Ｖｅｒｔｉｃｉｌｌｉｕｍ ｄａｈｌｉａｅ ｉｎ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ＰｅｖＤ１ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ ｏｆ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ
Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ (μｇ / ｍＬ) Ｄｉｓｅａｓｅ ｉｎｄｅｘ (ＤＩ) Ｄｉｓｅａｓｅ ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ(％)
０ (ｗａｔｅｒ) ４４.６０±１.５２ ａ －
１.０ ４１.１４±２.４５ ａ ７.８０±２.６４ ａ
４.０ ３６.０４±０.６６ ｂ １９.１６±１.２８ ｂ
８.０ ２８.９８±１.７３ ｃ ３５.０４±１.９３ ｃ
１６.０ ２７.６２±２.６８ ｃ ３８.１６±３.９６ ｃ
３２.０ ２９.４８±２.３９ ｃ ３３.９６±３.４２ ｃ
Ｖａｌｕｅｓ ａｒｅ ｍｅａｎｓ± ＳＤ ｏｆ ｔｈｒｅｅ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓ. Ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｔｈｅ ｄａｔａ ｗａｓ ｐｅｒｆｏｒｍｅｄ ｕｓｉｎｇ Ｄｕｎｃａｎｓ ｔｅｓｔ ｓｏｆｔｗａｒｅ
ＳＡＳ. Ｖａｌｕｅｓ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｓａｍｅ ｌｅｔｔｅｒ ｉｎ ｔｈｅ ｓａｍｅ ｃｏｌｕｍｎ ａｒｅ ｎｏｔ ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌｌｙ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ａｔ ５％ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ ｌｅｖｅｌ.
７５２
　
植物病理学报 ４４卷
结果说明ꎬＰｅｖＤ１诱导棉花产生抗病性的最低有效
浓度为 ８ μｇ / ｍＬꎬ最佳处理方式为叶面注射ꎬ最佳
诱导时间为 ３ ｄꎮ
２.３　 ＰｅｖＤ１激发棉株早期信号分子的产生
活性氧能杀死病菌并在激活植物防御反应中发
挥重要作用ꎮ ＰｅｖＤ１ 处理叶片 １０ ｍｉｎ 内明显可见
活性氧物质积累ꎬ而阴性对照(ＢＳＡ处理)和空白对
照(无菌水处理)则无活性氧产生(图 ２￣Ａ)ꎬ表明
ＰｅｖＤ１激发子可以诱导棉花组织积累活性氧物质ꎮ
ＮＯ不仅在木质素形成过程中起调控作用ꎬ而且能
激发植物的先天免疫反应ꎮ 荧光探针 ＤＡＦ￣ＦＭ ＤＡ
穿过细胞膜后被细胞内的酯酶催化形成不能穿过细
胞膜的 ＤＡＦ￣ＦＭꎬ而 ＤＡＦ￣ＦＭ与胞内生成的 ＮＯ 分
子发生反应ꎬ产生强烈荧光ꎬ可以通过荧光显微镜观
察检测 ＮＯ的存在ꎮ 由图 ２￣Ｂ可知ꎬ经 ＰｅｖＤ１ 处理
后的棉花细胞有明显荧光ꎬ而经无菌水处理的对照
组棉花细胞则没有ꎬ表明蛋白激发子能诱导棉花细
胞产生大量的 ＮＯ分子ꎮ
２.４　 ＰｅｖＤ１ 诱导棉株茎部组织棉酚积累和维管
束细胞壁加厚
棉花体内存在 ２种形式的酚类物质ꎬ一种为结
合态ꎬ一种为游离态ꎬ后者具有毒性ꎬ对侵入的病原
菌产生毒害作用ꎬ 是棉花抗病的主要物质ꎮ ＳｂＣｌ３￣
ＨＣｌＯ４ 溶液能将棉花体内不同浓度的游离态酚染
成粉红色、深橘色和红褐色ꎮ 用 ＳｂＣｌ３￣ＨＣｌＯ４ 溶液
对 ＰｅｖＤ１诱导 ３ ｄ 后的棉苗茎部组织进行染色处
理ꎬ观察发现激发子处理的棉花维管束中产生大量
的红褐色沉淀(图 ３￣Ａ￣ｂ、ｄ)ꎬ而经无菌水处理的对
照组则没有颜色(图 ３￣Ａ￣ａ、ｃ)ꎬ说明激发子 ＰｅｖＤ１
诱导棉花维管束产生和积累了大量的酚类物质ꎮ
已有研究证明ꎬ维管束细胞壁增厚和导管周围
细胞中产生的颗粒状物质对阻碍棉花黄萎病菌的
扩展具有重要作用[１２]ꎮ 激发子 ＰｅｖＤ１ 处理棉苗
５ ｄ 后ꎬ不仅诱导维管束细胞壁增厚而且促进导管
周围细胞中产生大量的颗粒状物质(图 ３￣Ｂ)ꎬ表明
ＰｅｖＤ１激发子诱发棉花对黄萎病菌的抗性可能与
棉酚积累和维管束细胞壁结构变化有关ꎮ
２.５　 激发子 ＰｅｖＤ１ 诱导棉株茎部组织中木质素
的积累
植物在细胞壁、胞间层、细胞质等不同部位产
生和积累木质素ꎬ能够提高植物细胞壁的机械压
力ꎬ阻止病原菌的侵入ꎬ同时降低细胞壁通透性ꎬ阻
断植物组织输送给病原菌水分和养分ꎮ 本研究结
果表明ꎬ激发子 ＰｅｖＤ１处理棉花幼苗 １２ ｈꎬ茎部组
织内木质素含量开始增加(图 ４)ꎬ９６ ｈ木质素含量
为对照组的 ２ ~ ３ 倍ꎬ激发子 ＰｅｖＤ１ 诱导棉花抗病
性可能与木质素的积累有关ꎮ
Ｆｉｇ. ２　 ＲＯＳ ｂｕｒｓｔ ａｎｄ ＮＯ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｉｎ ｃｏｔｔｏｎ ｌｅａｆ ｔｉｓｓｕｅ ｉｎｄｕｃｅｄ ｂｙ ＰｅｖＤ１
Ａ: Ｔｈｅ ＲＯＳ ｂｕｒｓｔ ａｔ ６ ｍｉｎ ａｆｔｅｒ ＰｅｖＤ１ ｔｒｅａｔｍｅｎｔꎻ Ｂ: ＮＯ ｒｅｌｅａｓｅ ｉｎ ｃｏｔｔｏｎ ｃｅｌｌ ｃｕｌｔｕｒｅｓꎬ
ａ ａｎｄ ｃ ａｒｅ ｃｅｌｌｓ ｔｒｅａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｗａｔｅｒꎬ ｂ ａｎｄ ｄ ａｒｅ ｃｅｌｌ ｔｒｅａｔｅｄ ｗｉｔｈ １０ μｇ / ｍＬ ＰｅｖＤ１.
８５２
　
　 ３期 卜冰武ꎬ等:大丽轮枝菌蛋白激发子 ＰｅｖＤ１诱导棉花抗病性及作用机理
Ｆｉｇ. ３　 Ｔｅｒｐｅｎｏｉｄｓ ｄｅｐｏｓｉｔｉｏｎ ａｎｄ ｃｅｌｌ ｗａｌｌ ｔｈｉｃｋｅｎｉｎｇ ｉｎ ｓｔｅｍ ｔｉｓｓｕｅｓ ｐｏｓｔ ＰｅｖＤ１ ｅｌｉｃｉｔａｔｉｏｎ
Ａ: Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｔｅｒｐｅｎｏｉｄｓ ｉｎ ｃｏｔｔｏｎ ｆｒｅｓｈ ｔｉｓｓｕｅ ３ ｄ ｐｏｓｔ ＰｅｖＤ１ ｔｒｅａｔｍｅｎｔꎬ ａ ａｎｄ ｃ ａｒｅ ｔｒｅａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｗａｔｅｒꎬ
ｂ ａｎｄ ｄ ａｒｅ ｔｒｅａｔｅｄ ｗｉｔｈ ＰｅｖＤ１ꎻ Ｂ: Ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｃｅｌｌ ｗａｌｌ ａｎｄ ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ ｃｈａｎｇｅｓ ｉｎ ｒｅｓｐｏｎｓｅ
ｔｏ ＰｅｖＤ１ ａｔ ５ ｄ ａｆｔｅｒ ＰｅｖＤ１ ｔｒｅａｔｍｅｎｔꎬ ａ ｉｓ ｃｏｎｔｒｏｌꎬ ｂ ｉｓ ＰｅｖＤ１ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ.
Ｆｉｇ. ４ 　 Ｌｉｇｎｉｎ ｄｅｐｏｓｉｔｉｏｎ ｉｎ ｃｏｔｔｏｎ ｓｔｅｍｓ
ａｆｔｅｒ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｗｉｔｈ ＰｅｖＤ１
Ｃｏｎｔｒｏｌ ｉｓ ｔｒｅａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｗａｔｅｒ.
２.６　 ＰｅｖＤ１提高棉花防御酶活性
激发子是病原菌￣植物相互识别的重要信号分
子ꎬ为明确激发子 ＰｅｖＤ１ 在棉花与大丽轮枝菌互
作中的作用ꎬ分别用 ＰｅｖＤ１ 和大丽轮枝菌孢子悬
浮液处理棉花ꎬ测定相关防御酶 ＰＡＬ、ＰＰＯ和 ＰＯＤ
的活性ꎬ结果表明ꎬ３ 种酶活性增强趋势与孢子侵
染后酶活性变化一致(图 ５)ꎮ ＰＡＬ 活性在 ＰｅｖＤ１
处理后 ９６ ｈ达到最高ꎬＰＰＯ 和 ＰＯＤ 处理后 １２０ ｈ
活性最高(图 ５￣Ａ)ꎮ 大丽轮枝菌孢子悬浮液侵染
后 １２０ ｈꎬＰＡＬ 活性达到最高ꎬＰＰＯ 和 ＰＯＤ 在接种
后 １４４ ｈ活性最高(图 ５￣Ｂ)ꎮ 大丽轮枝菌孢子侵
染后酶活高峰期均滞后于 ＰｅｖＤ１ 处理ꎬ这些结果
说明蛋白激发子 ＰｅｖＤ１ 和大丽轮枝菌孢子侵染一
样能诱导棉花体内防御酶活性的提高ꎬ可能在棉花
与大丽轮枝菌互作中发挥重要作用ꎮ
２.７　 ＰｅｖＤ１提高棉花抗病相关基因转录水平
为了进一步明确激发子 ＰｅｖＤ１ 在棉花与大丽
轮枝菌互作中的作用ꎬ分别用激发子 ＰｅｖＤ１ 和大
丽轮枝菌孢子悬浮液处理棉株ꎬ观察棉株体内相关
抗性基因转录水平的变化情况ꎮ 植物受病原物侵
染时常产生一些 ＰＲ蛋白ꎬ其中 β￣１ꎬ３￣葡聚糖酶属
于 ＰＲ２类ꎬβ￣１ꎬ３￣葡聚糖酶在植物抗病过程中发挥
重要作用ꎮ 诱导植物分泌几丁质酶能增强植物抵
抗病原菌侵染的能力ꎮ 激发子 ＰｅｖＤ１ 和大丽轮枝
菌孢子悬浮液接种均能引起棉花植株体内相关抗
性基因 β￣１ꎬ３￣ｇｌｕｃａｎａｓｅ、 ｂａｓｉｃ ｃｈｉｔｉｎａｓｅ 和 ａｃｉｄｉｃ
ｃｈｉｔｉｎａｓｅ 转录水平提高ꎮ β￣１ꎬ３￣ｇｌｕｃａｎａｓｅ 和 ｂａｓｉｃ
ｃｈｉｔｉｎａｓｅ的表达量在处理后 ２４ ｈ 达到最高ꎬａｃｉｄｉｃ
ｃｈｉｔｉｎａｓｅ 表达量在 ２４ ｈ ~ ４８ ｈ 内达到峰值 (图
６￣Ａ)ꎮ 病原菌孢子悬浮液接种后也能诱导这 ３ 个
基因转录水平提高 (图６ ￣Ｂ ) ꎮＣａｄｉｎｅｎｅ ｓｙｎｔｈａｓｅ
９５２
　
植物病理学报 ４４卷
Ｆｉｇ. ５　 Ｋｉｎｅｔｉｃｓ ｏｆ ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ ｏｆ ＰＡＬꎬ ＰＰＯ ａｎｄ ＰＯＤ
Ａ: Ｔｈｅ ｅｎｚｙｍｅ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ＰＡＬꎬ ＰＰＯ ａｎｄ ＰＯＤ ａｆｔｅｒ ＰｅｖＤ１ ｔｒｅａｔｍｅｎｔꎻ
Ｂ: Ｔｈｅ ｅｎｚｙｍｅ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ＰＡＬꎬ ＰＰＯ ａｎｄ ＰＯＤ ａｆｔｅｒ Ｖ. ｄａｈｌｉａｅ ｉｎｏｃｕｌａｔｉｏｎ.
基因是棉花体内合成棉酚的关键基因ꎬＰｅｖＤ１ 处理
和大丽轮枝菌侵染都能激活棉花体内的 ｃａｄｉｎｅｎｅ
ｓｙｎｔｈａｓｅ 基因的表达ꎬ其表达水平分别在处理后
８ ｈ~２４ ｈ和 ２４ ｈ~７２ ｈ达到最高ꎮ
ＰＡＬ、Ｃ４Ｈ１ 和 ４ＣＬ 是棉花体内苯丙烷类代谢
途径的关键基因ꎬ而苯丙烷类代谢途径是棉花抗病
的重要途径[１６]ꎮ 本研究中ꎬ激发子 ＰｅｖＤ１和大丽轮
枝菌孢子悬浮液处理后ꎬ都能诱导棉花体内这 ３个基因
的表达(图 ６)ꎮ 上述结果表明ꎬＰｅｖＤ１可诱发棉花抗病
相关基因转录水平提高ꎬ增强棉花对大丽轮枝菌抗性ꎮ
０６２
　
　 ３期 卜冰武ꎬ等:大丽轮枝菌蛋白激发子 ＰｅｖＤ１诱导棉花抗病性及作用机理
Ｆｉｇ. ６　 Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ＰｅｖＤ１ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ａｎｄ Ｖｅｒｔｉｃｉｌｌｉｕｍ ｄａｈｌｉａｅ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ｏｎ ｔｈｅ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ
ｏｆ ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ￣ｒｅｌａｔｅｄ ｇｅｎｅｓ ａｎｄ ｋｅｙ ｇｅｎｅｓ ｉｎ ｔｈｅ ｌｉｇｎｉｎ ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ ｐａｔｈｗａｙ
Ａ: Ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｇｅｎｅｓ ｉｎ ＰｅｖＤ１ ｔｒｅａｔｍｅｎｔꎻ Ｂ: Ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｇｅｎｅｓ ｉｎ Ｖ. ｄａｈｌｉａｅ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ.
３　 讨论
植物受病原菌侵染后ꎬ激活体内的免疫反应ꎬ
能减轻或阻止第 ２个病原菌的侵染ꎬ利用植物获得
性免疫保护植物健康生长是绿色植保的新途径和
新措施ꎮ 植物与病原菌互作是通过病原菌产生的
各种效应子来实现的ꎬ大量研究表明ꎬ无论是病原
菌产生的 ＰＡＭＰ还是 ｅｆｆｅｃｔｏｒｓ 均能激发植物不同
层面的免疫防御反应(ＰＴＩ 或 ＥＴＩ)ꎬ使植株获得系
统抗病性ꎬ阻止或减轻病原菌的后续侵染[３]ꎮ 本
试验结果表明ꎬ 蛋白激发子 ＰｅｖＤ１ 诱导棉花获得
系统抗性ꎬ减轻大丽轮枝菌对棉花植株的危害程
度ꎬ说明激发子 ＰｅｖＤ１ 可能在大丽轮枝菌与棉花
互作过程中发挥重要作用ꎬ但尚不明确 ＰｅｖＤ１ 如
何被棉花细胞识别ꎬ今后需要利用蛋白互作技术鉴
定 ＰｅｖＤ１ 在植物上的识别受体ꎬ并通过受体功能
研究进一步阐明 ＰｅｖＤ１ 激发植物免疫的作用机
制ꎮ
大丽轮枝菌产生的激发子诱导植物抗性已有
研究报道ꎮ １９９６ 年 Ｓｍｉｔ 证实大丽轮枝菌细胞壁
碎片能诱导棉花抵抗黄萎病菌侵染ꎬ并与木质素多
聚物积累的时间和强度有关[１７]ꎮ Ｄａｖｉｓ 等从大丽
轮枝菌发酵液中纯化出能诱导棉花植保素形成的
６５ ｋＤ糖蛋白[１８]ꎮ Ｍｅｙｅｒ等分离的一种 １９７ ｋＤ脂
多糖蛋白质(ＰＬＰＣ)能激发棉花植保素的合成和
ＰＡＬ活性ꎬ同时也导致棉花枯萎和坏死[１９]ꎮ 另据
报道ꎬ一种由 ２３３ 个氨基酸组成的蛋白激发子
ＶｄＮＥＰꎬ作用于拟南芥植株后ꎬ可以诱导活性氧物
质的积累和病程相关基因(ＰＲ￣ｇｅｎｅｓ)的表达ꎬ同时
可以引起棉花过敏性细胞死亡和 ＤＮＡ片段化[２０]ꎮ
ＰｅｖＤ１是分泌型小分子效应蛋白ꎬ不含糖基ꎬ此蛋
白能引起烟草叶片 ＨＲ反应ꎬ诱导烟草获得系统抗
病性[７]ꎮ 本文研究证明ꎬ激发子 ＰｅｖＤ１ 同样也能
诱导棉花获得系统抗病性ꎬ且对棉花品种新陆早
４２号没有致萎作用ꎮ 致萎毒素在大丽轮枝菌致病
性中发挥重要作用并对不同抗病品种产生的效应
不同ꎬ因此需要进一步研究 ＰｅｖＤ１ 蛋白对不同抗
性棉花品种的致萎作用ꎬ以期揭示 ＰｅｖＤ１ 在大丽
轮枝菌与不同棉花品种互作中的作用ꎮ
植物细胞快速产生 Ｈ２Ｏ２ꎬ不但可以直接杀灭
真菌ꎬ而且还可以作为第 ２ 信使激活植株防卫反
应ꎮ ＮＯ分子同样能激发并参与植物的先天免疫
反应ꎬ并能诱导植保素的积累、激活苯丙氨酸解氨
酶编码基因和病原相关蛋白编码基因的表达[２１]ꎮ
激发子 ＰｅｖＤ１ 诱导棉花组织中快速产生 Ｈ２Ｏ２ 和
ＮＯ分子ꎬ标志着触发了棉花抗病早期信号反应ꎮ
１６２
　
植物病理学报 ４４卷
棉花植株自身组织结构的强化是提高棉花抗
病性的主要机制之一[２２]ꎮ 大量研究表明ꎬ 棉花受
真菌、细菌或环境刺激后能激发棉花基础防御反
应、萜类化合物和苯丙烷类等植保素的快速积
累[２３~２５]ꎮ 木质化作用是植物物理抗病性因素之
一ꎬ能提高植物细胞壁的坚韧度ꎬ抵抗真菌酶类对
植物胞壁的降解作用ꎬ从而阻滞病原菌扩展ꎮ 本试
验结果表明ꎬ经蛋白激发子 ＰｅｖＤ１ 处理的棉花植
株体内木质素含量明显提高(图 ４)ꎬ维管束细胞壁
增厚ꎬ维管束周围的细胞中积累大量的颗粒状物
质ꎬ这与提高植株抗病性和抑制病原菌侵染有密切
联系[２６]ꎮ 植物次生代谢物是植物在长期进化过程
中适应生态环境产生的ꎬ是抵御恶劣的非生物和生
物因素危害所形成的特殊功能物质ꎮ 其中棉酚是
棉花植株内重要的次生物质ꎬ在提高棉花抗病性ꎬ
抑制病原菌侵染方面发挥重要的作用[１２]ꎮ 利用
ＳｂＣｌ３￣ＨＣｌＯ４ 溶液染色表明ꎬＰｅｖＤ１ 处理棉花植株
后能诱导产生大量的酚类物质(图 ３￣Ａ)ꎬ对提高棉
花抗病力起重要作用ꎮ
ＰＯＤ和 ＰＡＬ 是植物清除活性氧的保护酶系
统中的关键酶ꎮ ＰＯＤ 不仅参与植物细胞木质素类
物质的合成ꎬ 也参与酚类物质在胞壁及侵染点表
皮胞壁内侧含胼胝质乳突中的沉积ꎬ还能还原体内
过多的过氧化物ꎬ使 Ｈ２Ｏ２ 进一步转变成无毒的
Ｈ２Ｏ[２７]ꎻＰＡＬ是苯丙烷类代谢途径的关键酶和限
速酶ꎬ 参与木质素、酚类及多种类黄酮类植保素抗
菌化合物的合成ꎻＰＰＯ 能将植物体内的酚类物质
氧化成醌类ꎬ从而提高对微生物的抑制作用[２８]ꎮ
蛋白激发子 ＰｅｖＤ１处理和大丽轮枝菌孢子悬浮液
处理后ꎬ都能诱导棉花体内 ＰＡＬ、ＰＯＤ和 ＰＰＯ ３ 种
酶活性的提高ꎬ表明激发子和病原菌侵染一样能触
发棉花免疫防御反应ꎬ从而提高棉花抗病能力ꎮ
Ｃａｄｉｎｅｎｅ ｓｙｎｔｈａｓｅ 是棉酚合成途径中的关键
基因ꎬ而 β￣１ꎬ３￣ｇｌｕｃａｎａｓｅ 和 ｃｈｉｔｉｎａｓｅ 在增强细胞
壁厚度、抑制病原菌侵染中发挥重要的作用[２６ꎬ２９]ꎮ
苯丙烷类代谢途径在棉花抗大丽轮枝菌防御反应
中发挥重要作用ꎬ其代谢产物木质素和类黄酮类植
保素有明显的抗菌作用ꎬ在抑制病原菌侵染中发挥
重要作用ꎬＰＡＬ、Ｃ４Ｈ１ 和 ４ＣＬ 是苯丙烷类代谢途
径的关键基因[１６]ꎮ 本研究证明大丽轮枝菌侵染和
ＰｅｖＤ１处理棉花植株均能提高棉花体内的抗病相
关基因 ( ｃａｄｉｎｅｎｅ ｓｙｎｔｈａｓｅ、 ａｃｉｄｉｃ ｃｈｉｔｉｎａｓｅ、 ｂａｓｉｃ
ｃｈｉｔｉｎａｓｅ、β￣１ꎬ３￣ｇｌｕｃａｎａｓｅ) 以及苯丙烷类代谢途
径关键基因(ＰＡＬ、Ｃ４Ｈ１ 和 ４ＣＬ)转录水平(图 ６￣
Ａ、图 ６￣Ｂ)ꎬ 进一步说明ꎬＰｅｖＤ１ 在大丽轮枝菌与
棉花互作中发挥重要作用ꎮ
总之ꎬ蛋白激发子 ＰｅｖＤ１ 激发棉花组织中
Ｈ２Ｏ２ 和 ＮＯ信号分子的快速产生ꎬ提高木质素含
量和植保素棉酚的积累ꎬ维管束细胞壁的增厚ꎬ防
御酶活性增强以及抗病相关基因上调表达ꎬ这些不
同层次的抗病反应是提高棉花基础抗性的重要机
制之一ꎮ 植物免疫调控机制是非常复杂的网络系
统ꎬ激发子 ＰｅｖＤ１ 是大丽轮枝菌分泌的蛋白ꎬ在棉
花与大丽轮枝菌互作中起重要作用ꎬ今后需要进一
步研究 ＰｅｖＤ１作为一种效应蛋白激发植物免疫抗
性的信号传导途径ꎮ
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ｒｅｓｐｏｎｓｅ￣ｉｎｄｕｃｉｎｇ ｅｌｉｃｉｔｏｒ ｆｒｏｍ Ｖｅｒｔｉｃｉｌｌｉｕｍ ｄａｈｌｉａｅ ｔｈａｔ
２６２
　
　 ３期 卜冰武ꎬ等:大丽轮枝菌蛋白激发子 ＰｅｖＤ１诱导棉花抗病性及作用机理
ｉｎｄｕｃｅｓ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ ｉｎ ｔｏｂａｃｃｏ [ Ｊ] . Ａｐｐｌｉｅｄ
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报)ꎬ ２００７ꎬ ５２(８): ９１１－９１７.
[９] 　 Ｓｈｉ Ｌ Ｙꎬ Ｆｅｎｇ Ｊꎬ Ｗａｎｇ Ｌ Ｍꎬ ｅｔ ａｌ. Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｄｉｆ￣
ｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｏｆ Ｖｅｒｔｉｃｉｌｌｉｕｍ ｄａｈｌｉａｅ ｏｎ ｃｏｔｔｏｎ ｉｎ
ｎｏｒｔｈｅｒｎ Ｃｈｉｎａ ( ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ) [Ｊ] . Ａｃｔａ Ｇｏｓｓｙｐｉｉ Ｓｉｎｉ￣
ｃａ (棉花学报)ꎬ １９９７ꎬ ９(５): ２７３－２８０.
[１０] Ｃｈｅｎ Ｍ Ｊꎬ Ｚｅｎｇ Ｈ Ｍꎬ Ｑｉｕ Ｄ Ｗ ｅｔ ａｌ. Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ
ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ａ ｎｏｖｅｌ ｈｙｐｅｒｓｅｎｓｉｔｉｖｅ ｒｅｓｐｏｎｓｅ￣
ｉｎｄｕｃｉｎｇ ｅｌｉｃｉｔｏｒ ｆｒｏｍ Ｍａｇｎａｐｏｒｔｈｅ ｏｒｙｚａｅ ｔｈａｔ ｔｒｉｇｇｅｒｓ
ｄｅｆｅｎｓｅ ｒｅｓｐｏｎｄｅ ｉｎ ｒｉｃｅ[ Ｊ] . ＰＬｏｓ ＯＮＥꎬ２０１２ꎬ７(５):
ｅ３７６５４.
[１１] Ｗａｎｇ Ｂ Ｎꎬ Ｗａｎｇ Ｓ Ｃꎬ Ｓｈａｎ Ｂ Ｂꎬ ｅｔ ａｌ. Ｓｙｓｔｅｍｉｃ
ａｃｑｕｉｒｅｄ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｔｏ ｔｏｂａｃｃｏ ｍｏｓａｉｃ ｖｉｒｕｓ ( ＴＭＶ)
ｉｎｄｕｃｅｄ ｂｙ ｐｒｏｔｅｉｎ ｅｌｉｃｉｔｏｒ ｆｒｏｍ Ｖｅｒｔｉｃｉｌｌｉｕｍ ｄａｈｌｉａｅ
(ｐｅｖＤ１)ａｎｄ ｉｔｓ Ｍｅｃｈａｓｎｉｓｍｅ ｉｎ ｔｏｂａｃｃｏ( ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ)
[Ｊ] . Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ(农业生物
技术学报)ꎬ ２０１２ꎬ ２０(２): １８８－１９５.
[１２] Ｈａｌｌ Ｃꎬ Ｈｅａｔｈ Ｒꎬ Ｇｕｅｓｔ Ｄ Ｉ. Ｒａｐｉｄ ａｎｄ ｉｎｔｅｎｓｅ ａｃｃｕ￣
ｍｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｅｒｐｅｎｏｉｄ ｐｈｙｔｏａｌｅｘｉｎｓ ｉｎ ｉｎｆｅｃｔｅｄ ｘｙｌｅｍ
ｔｉｓｓｕｅｓ ｏｆ ｃｏｔｔｏｎ (Ｇｏｓｓｙｐｉｕｍ ｈｉｒｓｕｔｕｍ) ｒｅｓｉｓｔａｎｔ ｔｏ Ｆｕ￣
ｓａｒｉｕｍ ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ ｆ.ｓｐ. ｖａｓｉｎｆｅｃｔｕｍ [Ｊ] . Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ
ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｌａｎｔ Ｐａｔｈｏｌｏｇｙꎬ ２０１１ꎬ ７６(３): １８２－
１８８.
[１３] Ｈａｎｏ Ｃꎬ Ａｄｄｉ Ｍꎬ Ｆｌｉｎｉａｕｘ Ｏꎬ ｅｔ ａｌ. Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ
ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｃｅｌｌ ｄｅａｔｈ ｉｎｄｕｃｅｄ ｂｙ ａ ｃｏｍｐａｔｉｂｌｅ
ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ ｂｅｔｗｅｅｎ Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ ｆ. ｓｐ. ｌｉｎｉｉ ａｎｄ
ｆｌａｘ (Ｌｉｎｕｍ ｕｓｉｔａｔｉｓｓｉｍｕｍ) ｃｅｌｌｓ [Ｊ] . Ｐｌａｎｔ Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ
ａｎｄ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙꎬ ２００８ꎬ ４６(５): ５９０－６００.
[１４] Ｇａｏ Ｆꎬ Ｌｉ Ｇ Ｙꎬ Ｗａｎｇ Ｑ Ｙ. Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ
ｏｆ ＳＡ￣ｉｎｄｕｃｅｄ ｃｏｔｔｏｎ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｔｏ Ｖｅｒｔｉｃｉｌｌｉｕｍ ｗｉｌｔ ( ｉｎ
Ｃｈｉｎｅｓｅ) [Ｊ] . Ｘｉｎｊｉａｎｇ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ (新疆农
业科学)ꎬ ２００４ꎬ ４１(５): ３３３－３３６.
[１５] Ｚｈａｎｇ Ｙ Ｓꎬ Ｌｉｕ Ｂ Ｙꎬ Ｌｉ Ｚ Ｑꎬ ｅｔ ａｌ. Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｃｌｏｎｉｎｇ
ｏｆ ａ ｃｌａｓｓｉｃａｌ ｐｌａｎｔ ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ ｆｒｏｍ Ａｒｔｅｍｉｓｉａ ａｎｎｕａ
ａｎｄ ｉｔｓ ｅｆｆｅｃｔ ｏｎ ｔｈｅ ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ ａｒｔｅｍｉｓｉｎｉｎ ｉｎ ｖｉｔｒｏ
[Ｊ] . Ａｃｔａ Ｂｏｔａｎｉｃａ Ｓｉｎｉｃａ (植物学报)ꎬ ２００４ꎬ ４６
(１１): １３３８－１３４６.
[１６] Ｘｕ Ｌꎬ Ｚｈｕ Ｌꎬ Ｔｕ Ｌꎬ ｅｔ ａｌ. Ｌｉｇｎｉｎ ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ ｈａｓ ａ
ｃｅｎｔｒａｌ ｒｏｌｅ ｉｎ ｔｈｅ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｏｆ ｃｏｔｔｏｎ ｔｏ ｔｈｅ ｗｉｌｔ ｆｕｎｇｕｓ
Ｖｅｒｔｉｃｉｌｌｉｕｍ ｄａｈｌｉａｅ ａｓ ｒｅｖｅａｌｅｄ ｂｙ ＲＮＡ￣Ｓｅｑ￣ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ
ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌ ａｎａｌｙｓｉｓ ａｎｄ ｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ [Ｊ] . Ｊｏｕｒｎａｌ
ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｂｏｔａｎｙꎬ ２０１１ꎬ ６２(１５): ５６０７－５６２１.
[１７] Ｓｍｉｔ Ｆꎬ Ｄｕｂｅｒｙ Ｉ Ａ. Ｃｅｌｌ ｗａｌｌ ｒｅｉｎｆｏｒｃｅｍｅｎｔ ｉｎ ｃｏｔｔｏｎ
ｈｙｐｏｃｏｔｙｌｓ ｉｎ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｔｏ ａ Ｖｅｒｔｉｃｉｌｌｉｕｍ ｄａｈｌｉａｅ ｅｌｉｃｉｔｏｒ
[Ｊ] . Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙꎬ １９９７ꎬ ４４(５): ８１１－８１５.
[１８] Ｄａｖｉｓ Ｄꎬ Ｌｏｗ Ｐꎬ Ｈｅｉｎｓｔｅｉｎ Ｐ. Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ａ ｇｌｙｃｏ￣
ｐｒｏｔｅｉｎ ｅｌｉｃｉｔｏｒ ｏｆ ｐｈｙｔｏａｌｅｘｉｎ ｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｆｒｏｍ Ｖｅｒｔｉｃｉｌｌｉ￣
ｕｍ ｄａｈｌｉａｅ [Ｊ] . Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｌａｎｔ Ｐａ￣
ｔｈｏｌｏｇｙꎬ １９９８ꎬ ５２(４): ２５９－２７３.
[１９] Ｍｅｙｅｒ Ｒꎬ Ｓｌａｔｅｒ Ｖꎬ Ｄｕｂｅｒｙ Ｉ Ａ. Ａ ｐｈｙｔｏｔｏｘｉｃ ｐｒｏｔｅｉｎ￣
ｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ ｃｏｍｐｌｅｘ ｐｒｏｄｕｃｅｄ ｂｙ Ｖｅｒｔｉｃｉｌｌｉｕｍ
ｄａｈｌｉａｅ [ Ｊ] . Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙꎬ １９９４ꎬ ３５ ( ６): １４４９ －
１４５３.
[２０] Ｗａｎｇ Ｊ Ｙꎬ Ｃａｉ Ｙꎬ Ｇｏｕ Ｊ Ｙꎬ ｅｔ ａｌ. ＶｄＮＥＰꎬ ａｎ ｅｌｉｃｉｔｏｒ
ｆｒｏｍ Ｖｅｒｔｉｃｉｌｌｉｕｍ ｄａｈｌｉａｅꎬ ｉｎｄｕｃｅｓ ｃｏｔｔｏｎ ｐｌａｎｔ ｗｉｌｔｉｎｇ
[Ｊ] . Ａｐｐｌｉｅｄ ａｎｄ Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙꎬ ２００４ꎬ
７０(８): ４９８９－４９９５.
[２１] Ｄｅｌｌｅｄｏｎｎｅ Ｍꎬ Ｚｅｉｅｒ Ｊꎬ Ｍａｒｏｃｃｏ Ａꎬ ｅｔ ａｌ. Ｓｉｇｎａｌ ｉｎ￣
ｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ ｂｅｔｗｅｅｎ ｎｉｔｒｉｃ ｏｘｉｄｅ ａｎｄ ｒｅａｃｔｉｖｅ ｏｘｙｇｅｎ
ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａｔｅｓ ｉｎ ｔｈｅ ｐｌａｎｔ ｈｙｐｅｒｓｅｎｓｉｔｉｖｅ ｄｉｓｅａｓｅ ｒｅｓｉｓ
ｔａｎｃｅ ｒｅｓｐｏｎｓｅ [Ｊ] . Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ａｃａｄｅ￣
ｍｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅｓꎬ ２００１ꎬ ９８(２３): １３４５４－１３４５９.
[２２] Ｚｈｏｕ Ｔ ＨꎬＤａｉ Ｘ Ｆ. Ｒｅｓｅａｒｃｈ ｏｎ ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ ａｎｄ
ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｏｆ ｃｏｔｔｏｎ ａｇａｉｎｓｔ Ｖｅｒｔｉｃｉｌｌｉｕｍ
ｗｉｌｔ ( ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ) [ Ｊ] . Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｌａｎｔ Ｂｒｅｅｄｉｎｇ (分
子育种)ꎬ ２００６ꎬ ４(４): ５９３－６００.
[２３] Ｃｕｉ Ｙꎬ Ｂｅｌｌ Ａ Ａꎬ Ｊｏｏｓｔ Ｏꎬ ｅｔ ａｌ. Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｐｏｔｅｎ￣
ｔｉａｌ ｄｅｆｅｎｓｅ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｇｅｎｅｓ ｉｎ ｃｏｔｔｏｎ [Ｊ] . Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ
ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｌａｎｔ Ｐａｔｈｏｌｏｇｙꎬ ２０００ꎬ ５６(１): ２５－３１.
[２４] Ｔａｎ Ｘ Ｐꎬ Ｌｉａｎｇ Ｗ Ｑꎬ Ｌｉｕ Ｃ Ｊꎬ ｅｔ ａｌ. Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｐａｔ￣
ｔｅｒｎ ｏｆ (＋) ￣δ￣ｃａｄｉｎｅｎｅ ｓｙｎｔｈａｓｅ ｇｅｎｅｓ ａｎｄ ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ
ｏｆ ｓｅｓｑｕｉｔｅｒｐｅｎｅ ａｌｄｅｈｙｄｅｓ ｉｎ ｐｌａｎｔｓ ｏｆ Ｇｏｓｓｙｐｉｕｍ ａｒ￣
ｂｏｒｅｕｍ Ｌ. [Ｊ] . Ｐｌａｎｔａꎬ ２０００ꎬ ２１０(４): ６４４－６５１.
[２５] Ｍｃ Ｆａｄｄｅｎ Ｈ Ｇꎬ Ｃｈａｐｐｌｅ Ｒꎬ Ｄｅ Ｆｅｙｔｅｒ Ｒꎬ ｅｔ ａｌ. Ｅｘ￣
ｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ￣ｒｅｌａｔｅｄ ｇｅｎｅｓ ｉｎ ｃｏｔｔｏｎ ｓｔｅｍｓ
ｉｎ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｔｏ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ｂｙ Ｖｅｒｔｉｃｉｌｌｉｕｍ ｄａｈｌｉａｅ [ Ｊ] .
Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｌａｎｔ Ｐａｔｈｏｌｏｇｙꎬ ２００１ꎬ ５８
(３): １１９－１３１.
３６２
　
植物病理学报 ４４卷
[２６] Ｍｕｅｌｌｅｒ Ｗꎬ Ｍｏｒｇｈａｍ Ａ. Ｕｌｔｒａｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｏｆ ｔｈｅ ｖａｓｃｕｌａｒ
ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ ｏｆ ｃｏｔｔｏｎ ｔｏ Ｖｅｒｔｉｃｉｌｌｉｕｍ ｄａｈｌｉａｅ [ Ｊ] . Ｃａｎａ￣
ｄｉａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｏｔａｎｙꎬ １９９３ꎬ ７１(１): ３２－３６.
[２７] Ｔｅｍｍｅ Ｎꎬ Ｔｕｄｚｙｎｓｋｉ Ｐ. Ｄｏｅｓ Ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｃｉｎｅｒｅａ ｉｇｎｏｒｅ
Ｈ２Ｏ２ ￣ｉｎｄｕｃｅｄ ｏｘｉｄａｔｉｖｅ ｓｔｒｅｓｓ ｄｕｒｉｎｇ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ?
Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ Ｂｏｔｒｙｔｉｓ ａｃｔｉｖａｔｏｒ ｐｒｏｔｅｉｎ １ [ Ｊ] .
Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｌａｎｔ￣Ｍｉｃｒｏｂｅ Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓꎬ ２００９ꎬ ２２(８):
９８７－９９８.
[２８] Ｍａｎｄａｌ Ｓꎬ Ｍｉｔｒａ Ａ. Ｒｅｉｎｆｏｒｃｅｍｅｎｔ ｏｆ ｃｅｌｌ ｗａｌｌ ｉｎ ｒｏｏｔｓ
ｏｆ Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ ｔｈｒｏｕｇｈ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ
ｐｈｅｎｏｌｉｃ ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ ａｎｄ ｌｉｇｎｉｎ ｂｙ ｅｌｉｃｉｔｏｒｓ [ Ｊ ] .
Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｌａｎｔ Ｐａｔｈｏｌｏｇｙꎬ ２００７ꎬ ７１
(４): ２０１－２０９.
[２９] Ｃｈｅｎ Ｓꎬ Ｄｏｎｇ Ｈꎬ Ｆａｎ Ｙꎬ ｅｔ ａｌ. Ｄｒｙ ｍｙｃｅｌｉｕｍ ｏｆ
Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｃｈｒｙｓｏｇｅｎｕｍ ｉｎｄｕｃｅｓ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ
ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ￣ｒｅｌａｔｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎ ｇｅｎｅｓ ａｎｄ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ
ａｇａｉｎｓｔ ｗｉｌｔ ｄｉｓｅａｓｅｓ ｉｎ Ｂｔ ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ ｃｏｔｔｏｎ [ Ｊ ] .
Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｏｎｔｒｏｌꎬ ２００６ꎬ ３９(３): ４６０－４６４.
责任编辑:于金枝
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４６２