全 文 ：书体外研究反刍兽新月形单胞菌及与酵母
联用对瘤胃微生物发酵的影响
毛胜勇，龙黎明，朱伟云
（南京农业大学动物科技学院，江苏 南京２１００９５）
摘要：利用体外批次培养技术，分别以羊草、玉米和淀粉为底物，研究了反刍兽新月形单胞菌Ｌ９菌株及其与酵母联
用对瘤胃微生物发酵的影响。结果显示，以羊草为底物时，添加酵母可显著提高乙酸、丙酸、丁酸、戊酸、异戊酸和
ＴＶＦＡ浓度（犘＜０．０５），降低乳酸浓度（犘＜０．０５），有降低乙丙比值的趋势（犘＝０．０８２），但对异丁酸及ｐＨ值无显
著影响（犘＞０．１０），添加Ｌ９菌可显著提高ｐＨ值、乙酸、丙酸、丁酸、异戊酸和ＴＶＦＡ浓度（犘＜０．０５），降低乳酸浓
度和乙丙比值（犘＜０．０５），但对异丁酸及戊酸浓度无显著影响（犘＞０．１０），在影响ｐＨ值、丙酸、丁酸、异丁酸、异戊
酸、ＴＶＦＡ浓度及乙丙比值方面，酵母与Ｌ９菌株间无显著的互作关系（犘＞０．１０）；在降低乳酸及戊酸浓度方面，酵
母与Ｌ９菌株之间有显著的互作作用（犘＜０．０５），在影响ｐＨ值及乙酸产量方面，酵母与Ｌ９菌之间有互作效应趋
势。以玉米为底物时，添加酵母可显著提高ｐＨ值、乙酸、丙酸、丁酸、异戊酸和ＴＶＦＡ浓度（犘＜０．０５），降低乳酸浓
度和乙丙比值（犘＜０．０５），有提高戊酸浓度的趋势（犘＝０．０８２），但对异丁酸无显著影响（犘＞０．１０），添加Ｌ９菌可显
著提高ｐＨ值、乙酸、丙酸、丁酸、戊酸、异戊酸和ＴＶＦＡ浓度（犘＜０．０５），降低乳酸浓度和乙丙比值（犘＜０．０５），但
对异丁酸浓度无显著影响（犘＞０．１０），在影响ｐＨ值、乳酸、乙酸、丙酸、丁酸、异戊酸、ＴＶＦＡ浓度及乙丙比值方面，
酵母与Ｌ９菌株间有显著的互作关系（犘＜０．０５）；在影响异丁酸及戊酸浓度方面，酵母与Ｌ９菌株之间无显著的互
作作用（犘＞０．１０）。以淀粉为底物时，添加酵母可显著提高ｐＨ 值、乙酸、丙酸、丁酸、异戊酸和ＴＶＦＡ浓度（犘＜
０．０５），降低乳酸浓度 （犘＜０．０５），但对戊酸、异丁酸浓度和乙丙比值无显著影响（犘＞０．１０），添加Ｌ９菌可显著提高
ｐＨ值、乙酸、丙酸、丁酸、戊酸和ＴＶＦＡ浓度（犘＜０．０５），降低乳酸浓度和乙丙比值（犘＜０．０５），但对异丁酸和异戊
酸浓度无显著影响（犘＞０．１０），在影响ｐＨ值、乳酸、乙酸、丙酸、丁酸、异戊酸、ＴＶＦＡ浓度及乙丙比值方面，酵母与
Ｌ９菌株间有显著的互作关系（犘＜０．０５）；在影响异丁酸及戊酸浓度方面，酵母与Ｌ９菌株之间无显著的互作作用
（犘＞０．１０）。结果说明，添加酵母与Ｌ９菌株均可有效降低乳酸产量，且均可有效提高玉米及淀粉条件下发酵体系
中的ｐＨ值，酵母与Ｌ９菌株联用更有助于发酵前期ｐＨ值的稳定。
关键词：反刍兽新月形单胞菌；酵母培养物；瘤胃；体外发酵
中图分类号：Ｓ８１６．３２ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００４５７５９（２０１０）０４０１７６１１
在反刍动物生产中，莫能霉素等离子载体类抗生素常被用做提高动物生产性能和预防瘤胃酸中毒。但随着
人们对使用饲用抗生素带来的食品安全及环境问题的关注，饲料中禁用抗生素已是大势所趋。因而，寻求新的瘤
胃调控剂成为国际上反刍动物营养研究的热点问题之一。一些报道表明，在奶牛与肉牛生产中使用酵母培养物，
可提高瘤胃细菌总数和丙酸比例，降低乳酸浓度［１，２］。另一些研究显示，在奶牛瘤胃内接种乳酸利用菌可预防瘤
胃乳酸累积，维持ｐＨ值稳定［３］。反刍兽新月形单胞菌（犛犲犾犲狀狅犿狅狀犪狊狉狌犿犻狀犪狀狋犻狌犿）是瘤胃内一类重要的瘤胃微
生物，有研究表明，这类微生物在瘤胃乳酸代谢中起着重要作用［４］；因此，提高瘤胃中该类菌的数量与比例，可望
降低瘤胃内乳酸累积。为深入了解反刍兽新月形单胞菌对不同底物下瘤胃微生物发酵能力的影响，以及查明在
影响瘤胃发酵参数方面，该类菌与酵母培养物之间是否存在互作效应；本研究利用从反刍动物瘤胃内分离到１株
具有较强代谢乳酸能力的反刍兽新月形单胞菌，利用体外法研究了添加该菌及其与酵母联用时对瘤胃微生物体
外发酵参数的影响，拟进一步探讨该菌在瘤胃微生态中的功能及其与酵母联用时的瘤胃调控效果。
１７６－１８６
２０１０年８月
草 业 学 报
ＡＣＴＡＰＲＡＴＡＣＵＬＴＵＲＡＥＳＩＮＩＣＡ
第１９卷 第４期
Ｖｏｌ．１９，Ｎｏ．４
收稿日期：２００９０９１４；改回日期：２００９１１２５
基金项目：国家自然科学基金项目（３０３７１０４１）资助。
作者简介：毛胜勇（１９７３），男，四川仪陇人，副教授。Ｅｍａｉｌ：ｍａｏｓｈｅｎｇｙｏｎｇ＠１６３．ｃｏｍ
通讯作者。
１ 材料与方法
１．１ 反刍兽新月形单胞菌菌株和酵母培养物
反刍兽新月形单胞菌Ｌ９菌株分离自山羊瘤胃［５］，将Ｌ９菌活化后，接种至培养基中，３９℃厌氧培养１２ｈ，取
发酵液作为接种物；同时，取培养物经１００００ｒ／ｍｉｎ离心，取上清液作为菌株Ｌ９无细胞接种物。
本试验所用酵母为产朊假丝酵母（犆犪狀犱犻犱犪狌狋犻犾犻狊），购自中国工业微生物菌种保存中心。将酵母接种到麦芽
浸膏培养基中，３０℃培养，培养４８ｈ后，取培养物经５０００ｒ／ｍｉｎ离心，将菌泥无菌转移至无菌厌氧生理盐水中，
混合均匀后，以此作为酵母接种物。
１．２ 瘤胃液的采集
本试验选用３头装有永久性瘤胃瘘管的本地成年公山羊，自由采食青干草，同时每日每头补饲精料３００ｇ（由
７０％玉米＋３０％豆粕组成），自由饮水。喂料２ｈ后经瘤胃瘘管抽取瘤胃内容物，放入充满ＣＯ２ 的保温瓶内。将
取得的瘤胃液经４层纱布过滤，取过滤后的瘤胃液作为接种物。厌氧培养基成分与配制同Ｌｏｎｇｌａｎｄ等［６］的方法。
１．３ 试验设计
试验于２００８年３－５月进行，采用析因试验设计，应用体外批次培养技术，分别于３次完成（每次完成１种底
物）。试验具体操作方法如下：将瘤胃液和提前预热至３９℃的厌氧培养基混合（体积比１∶５），取混合液６０ｍＬ
分装于体积为１６０ｍＬ的发酵瓶中，发酵底物分别为羊草、玉米与淀粉，底物重为０．８ｇ。菌株Ｌ９单独培养时，根
据菌株Ｌ９接种量（０，４和８ｍＬ）分为３组，即Ｙ０Ｌ９０ 组、Ｙ０Ｌ９４ 组、Ｙ０Ｌ９８ 组，菌株Ｌ９接种量不足８ｍＬ的发酵
瓶，用菌株Ｌ９无细胞发酵液补足８ｍＬ，同时每瓶另添加５ｍＬ无菌厌氧生理盐水，以保证整个试验中每个发酵
瓶体积一致；菌株Ｌ９与酵母联合接种时，每瓶添加５ｍＬ酵母接种物，根据菌株Ｌ９接种量（０，４和８ｍＬ）分为３
组，即Ｙ５Ｌ９０ 组、Ｙ５Ｌ９４ 组、Ｙ５Ｌ９８ 组，菌株Ｌ９接种量不足８ｍＬ的发酵瓶，用菌株Ｌ９无细胞发酵液补足８ｍＬ。
试验预设０，３，６，９，１２，１５和１８ｈ各时间点，每时间点设４个重复，接种后发酵瓶用异丁基橡胶塞密封，以铝盖封
口，随后置于３９℃恒温培养箱中培养。发酵至各预设时间点，立即测定该点该批次发酵瓶中发酵液的ｐＨ值，并
保存样品以备测乳酸和挥发性脂肪酸（ｖｏｌａｔｉｌｅｆａｔｔｙａｃｉｄ，ＶＦＡ）浓度，取样后该时间点发酵瓶弃用。乳酸浓度的
测定采用比色法［５］，ＶＦＡ浓度［７９］测定采用气相色谱法（岛津生产，毛细管柱）。
１．４ 数据分析
所有数据经Ｅｘｃｅｌ２００３初步整理后，采用ＳＰＳＳ（１６．０）软件中ＧＬＭ模块中Ｒｅｐｅａｔｅｄｍｅａｓｕｒｅ法进行方差分
析，检验添加Ｌ９或酵母是否有显著的处理效应，同时检测Ｌ９与酵母间是否存在显著的互作效应。对同一时间
点数据，采用ＡＮＯＶＡ模块进行单因子方差分析，方差检测各处理间存在显著性差异后，再采用Ｔｕｋｅｙ法进行多
重比较，显著性水平置于０．０５，趋势水平置于０．０５＜犘＜０．１０。
２ 结果与分析
２．１ 羊草底物条件下添加Ｌ９菌株或其与酵母联用对瘤胃微生物发酵特性的影响
２．１．１ 反刍兽新月形单胞菌及其与酵母联用对ｐＨ值、乳酸浓度、乙丙比、总挥发性脂肪酸（ｔｏｔａｌｖｏｌａｔｉｌｅｆａｔｔｙ
ａｃｉｄ，ＴＶＦＡ）产量及其各组分的影响 添加酵母可显著提高乙酸、丙酸、丁酸、戊酸、异戊酸和ＴＶＦＡ浓度（犘＜
０．０５）（表１），降低乳酸浓度（犘＜０．０５），有使乙丙比降低的趋势（犘＝０．０８２），但对异丁酸及ｐＨ值无显著影响（犘
＞０．１０），添加Ｌ９菌可显著提高ｐＨ值、乙酸、丙酸、丁酸、异戊酸和ＴＶＦＡ浓度（犘＜０．０５），降低乳酸浓度和乙丙
比值（犘＜０．０５），但对异丁酸及戊酸浓度无显著影响（犘＞０．１０）。在影响ｐＨ 值、丙酸、丁酸、异丁酸、异戊酸、
ＴＶＦＡ浓度及乙丙比值方面，酵母与Ｌ９菌株间无显著的互作关系（犘＞０．１０）；在降低乳酸及戊酸浓度方面，酵母
与Ｌ９菌株之间有显著的互作效应（犘＜０．０５）。
２．１．２ 添加反刍兽新月形单胞菌及其与酵母联用对ｐＨ值、乳酸、乙酸、丙酸及ＴＶＦＡ产量的动态影响 在接
种初始时，各指标间无显著差异（犘＞０．０５）（图１）。接种后３ｈ，ｐＨ 值统计结果显示，Ｙ５Ｌ９８、Ｙ０Ｌ９８、Ｙ５Ｌ９４、
Ｙ０Ｌ９４ 四组间ｐＨ 值无显著差异（犘＞０．０５），但均显著低于 Ｙ０Ｌ９０ 组（犘＜０．０５）。乳酸方面，Ｙ０Ｌ９０、Ｙ０Ｌ９４、
Ｙ５Ｌ９０三组间无显著差异（犘＞０．０５），但均显著高于其余３组（犘＜０．０５），各组中Ｙ５Ｌ９８ 显著低于其余５组（犘＜
０．０５）。乙酸方面，各组间无显著差异（犘＞０．０５）。丙酸方面，Ｙ５Ｌ９８ 最高，显著高于除Ｙ０Ｌ９８ 外其余各组（犘＜
７７１第１９卷第４期 草业学报２０１０年
０．０５），各组中，Ｙ０Ｌ９０ 与 Ｙ５Ｌ９０ 显著低于其余各组（犘＜０．０５）。ＴＶＦＡ上，Ｙ５Ｌ９８ 显著高于 Ｙ０Ｌ９０、Ｙ０Ｌ９４ 和
Ｙ５Ｌ９０ 组（犘＜０．０５），但与Ｙ５Ｌ９４ 和Ｙ０Ｌ９８ 两组间无显著差异（犘＞０．０５），Ｙ０Ｌ９０、Ｙ０Ｌ９４ 和Ｙ５Ｌ９０ 三组间也无显
著差异（犘＞０．０５）。
接种后６ｈ统计结果显示，各组ｐＨ值间无显著差异（犘＞０．０５）。乳酸统计结果显示，Ｙ０Ｌ９０ 和Ｙ５Ｌ９０ 组间
无显著差异（犘＞０．０５），但均显著高于其余４组（犘＜０．０５），各组中Ｙ５Ｌ９８ 最低，显著低于Ｙ０Ｌ９８、Ｙ０Ｌ９４、Ｙ０Ｌ９０、
Ｙ５Ｌ９０ 组（犘＜０．０５），但与 Ｙ５Ｌ９４ 组间无显著差异（犘＞０．０５）。乙酸方面，Ｙ５Ｌ９８ 组最高，显著高于 Ｙ０Ｌ９０、
Ｙ０Ｌ９４、Ｙ５Ｌ９４（犘＜０．０５）组，与其余２组无显著差异（犘＞０．０５）。丙酸方面，Ｙ５Ｌ９４ 最高，显著高于 Ｙ０Ｌ９０、
Ｙ０Ｌ９４、Ｙ５Ｌ９０ 组（犘＜０．０５），但与Ｙ０Ｌ９８ 和Ｙ５Ｌ９８ 间无显著差异（犘＞０．０５）。ＴＶＦＡ上，各组间无显著差异（犘
＞０．０５）。
接种后９ｈ，各组ｐＨ 值间无显著差异（犘＞０．０５）。乳酸统计结果显示，Ｙ０Ｌ９０ 组显著高于其余组（犘＜
０．０５），Ｙ５Ｌ９８ 组显著低于Ｙ０Ｌ９８、Ｙ０Ｌ９４、Ｙ５Ｌ９０（犘＜０．０５），但与Ｙ５Ｌ９４ 组间无显著差异（犘＞０．０５）。乙酸方面，
Ｙ５Ｌ９８ 组最高，显著高于Ｙ０Ｌ９０、Ｙ０Ｌ９４、Ｙ５Ｌ９０ 组。丙酸方面，Ｙ５Ｌ９８ 显著高于Ｙ５Ｌ９０ 组（犘＜０．０５），但与其余４
组间无显著差异（犘＞０．０５）。ＴＶＦＡ上，Ｙ５Ｌ９８ 组显著高于Ｙ０Ｌ９０ 和Ｙ０Ｌ９４ 两组（犘＜０．０５），但与其他各组间无
显著差异（犘＞０．０５）。
接种后１２ｈ，ｐＨ值方面，Ｙ０Ｌ９０、Ｙ０Ｌ９８ 和Ｙ５Ｌ９０ 三组间无显著差异（犘＞０．０５），但均显著高于其余３组（犘
＜０．０５），且其余３组间无显著差异（犘＞０．０５）。乳酸结果显示，Ｙ５Ｌ９８ 组显著低于 Ｙ０Ｌ９８、Ｙ０Ｌ９４、Ｙ５Ｌ９０ 和
Ｙ５Ｌ９４ 组（犘＜０．０５），但与Ｙ０Ｌ９０ 组无显著差异（犘＞０．０５）。乙酸方面，各组间无显著差异（犘＞０．０５）。丙酸方
面，Ｙ５Ｌ９８ 组显著高于Ｙ０Ｌ９０、Ｙ０Ｌ９４、Ｙ５Ｌ９０ 组，但与其余２组间无显著差异（犘＞０．０５）。ＴＶＦＡ上，各组间无显
著差异（犘＞０．０５）。
接种后１５ｈ，ｐＨ值方面，各组间无显著差异（犘＞０．０５）。乳酸结果显示，Ｙ５Ｌ９８ 组显著低于其余各组（犘＜
０．０５）。乙酸方面，Ｙ０Ｌ９４ 显著低于Ｙ０Ｌ９０、Ｙ５Ｌ９０、Ｙ５Ｌ９４，但与Ｙ０Ｌ９８ 和Ｙ５Ｌ９８ 两组间无显著差异（犘＞０．０５）。
丙酸方面，各组间无显著差异（犘＞０．０５）。ＴＶＦＡ上，各组间无显著差异（犘＞０．０５）。
接种后１８ｈ，ｐＨ值方面，Ｙ５Ｌ９８ 显著低于 Ｙ０Ｌ９８ 和 Ｙ０Ｌ９４（犘＜０．０５），但与其余３组间无显著差异（犘＞
０．０５）。乳酸统计结果显示，Ｙ５Ｌ９８ 组显著低于Ｙ５Ｌ９０、Ｙ０Ｌ９０、Ｙ５Ｌ９４ 组（犘＜０．０５），但与其余２组间无显著差异
（犘＞０．０５）。乙酸方面，除显著高于Ｙ０Ｌ９８ 组外（犘＜０．０５），Ｙ５Ｌ９８ 组与其余各组间无显著差异（犘＞０．０５）。丙
酸方面，各组间无显著差异（犘＞０．０５）。ＴＶＦＡ上，各组间无显著差异（犘＞０．０５）。
表１ 羊草底物条件下反刍兽新月形单胞菌及其与酵母联用对狆犎值、乳酸浓度、乙丙比、犜犞犉犃产生及其各组分的影响
犜犪犫犾犲１ 犈犳犳犲犮狋狅犳犛．狉狌犿犻狀犪狀狋犻狌犿犪犱犱犻狋犻狅狀犪狀犱犻狋狊犮狅犿犫犻狀犪狋犻狅狀狑犻狋犺狔犲犪狊狋犮狌犾狋狌狉犲狊狅狀狆犎狏犪犾狌犲，犾犪犮狋犪狋犲犮狅狀犮犲狀狋狉犪狋犻狅狀，
狋犺犲狉犪狋犻狅狀狅犳犪犮犲狋犪狋犲狋狅狆狉狅狆犻狅狀犪狋犲，犜犞犉犃狆狉狅犱狌犮狋犻狅狀犪狀犱犻狋狊犮狅犿狆狅狀犲狀狋狊狑犻狋犺狋犺犲犔犲狔犿狌狊犮犺犻狀犲狀狊犻狊犪狊狊狌犫狊狋狉犪狋犲
指标
Ｉｎｄｅｘ
Ｙ０Ｌ９０ Ｙ０Ｌ９４ Ｙ０Ｌ９８ Ｙ５Ｌ９０ Ｙ５Ｌ９４ Ｙ５Ｌ９８ 标准误
Ｓ．Ｅ．Ｍ
处理效应Ｔｒｅａｔｅｄｅｆｆｅｃｔ（犘值Ｖａｌｕｅ）
酵母Ｙｅａｓｔ（Ｙ） Ｌ９ Ｙ×Ｌ９
ｐＨ值Ｖａｌｕｅ ６．０９ ６．０８ ６．０７ ６．１０ ６．０７ ６．０６ ０．００４ １．０００ ＜０．００１ ０．０７５
乳酸Ｌａｃｔａｔｅ（ｍｍｏｌ／Ｌ） １．０１ ０．７９ ０．６０ ０．９６ ０．６６ ０．５２ ０．０４４ ＜０．００１ ＜０．００１ ＜０．００１
乙酸Ａｃｅｔａｔｅ（Ａ，ｍｍｏｌ／Ｌ） ３５．３０ ３３．７５ ３５．０４ ３６．４６ ３６．１２ ３８．６５ ０．３７６ ＜０．００１ ０．００２ ０．０７２
丙酸Ｐｒｏｐｉｏｎａｔｅ（Ｐ，ｍｍｏｌ／Ｌ） １８．９８ ２０．０８ ２１．８６ １９．４７ ２１．４１ ２３．０６ ０．３５８ ０．００１ ＜０．００１ ０．４２８
正丁酸ｎｂｕｔｙｒａｔｅ（ｍｍｏｌ／Ｌ） ３．７０ ３．３０ ３．３７ ３．８４ ３．５７ ３．７４ ０．０５１ ＜０．００１ ＜０．００１ ０．３４４
异丁酸Ｉｓｏｂｕｔｙｒａｔｅ（ｍｍｏｌ／Ｌ） ０．３８ ０．４２ ０．３６ ０．２９ ０．３８ ０．５６ ０．０３６ ０．６７２ ０．２５６ ０．１６２
戊酸Ｖａｌｅｒａｔｅ（ｍｍｏｌ／Ｌ） ０．４０ ０．４０ ０．３６ ０．４５ ０．４５ ０．５２ ０．０１４ ＜０．００１ ０．６７６ ０．００３
异戊酸Ｉｓｏｖａｌｅｒａｔｅ（ｍｍｏｌ／Ｌ） ０．８２ ０．８５ ０．８９ ０．８８ ０．９９ １．０１ ０．０１８ ＜０．００１ ０．００５ ０．３９４
总挥发性脂肪酸ＴＶＦＡ（ｍｍｏｌ／Ｌ）５７．９８ ５７．１３ ６０．２７ ５９．０２ ５９．１２ ６２．８７ ０．６６８ ＜０．００１ ＜０．００１ ０．２２３
乙丙比Ａ∶Ｐ １．８８ １．７１ １．６５ １．９１ １．７１ １．７０ ０．０２５ ０．０８２ ＜０．００１ ０．４５３
８７１ ＡＣＴＡＰＲＡＴＡＣＵＬＴＵＲＡＥＳＩＮＩＣＡ（２０１０） Ｖｏｌ．１９，Ｎｏ．４
图１ 羊草底物条件下反刍兽新月形单胞菌及其与酵母联用
对狆犎、乳酸、乙酸、丙酸和犜犞犉犃浓度的动态影响
犉犻犵．１ 犈犳犳犲犮狋狅犳犛．狉狌犿犻狀犪狀狋犻狌犿犪犱犱犻狋犻狅狀犪狀犱犻狋狊犮狅犿犫犻狀犪狋犻狅狀
狑犻狋犺狔犲犪狊狋犮狌犾狋狌狉犲狊狅狀狋犺犲犱狔狀犪犿犻犮犮犺犪狀犮犲狊狅犳狆犎，犾犪犮狋犪狋犲，
犪犮犲狋犪狋犲，狆狉狅狆犻狅狀犪狋犲犪狀犱犜犞犉犃犮狅狀犮犲狀狋狉犪狋犻狅狀
狑犻狋犺狋犺犲犔犲狔犿狌狊犮犺犻狀犲狀狊犻狊犪狊狊狌犫狊狋狉犪狋犲
２．２ 玉米底物条件下添加Ｌ９菌株或其与酵母联用对瘤胃微生物发酵的影响
２．２．１ 添加反刍兽新月形单胞菌或其与酵母联用对ｐＨ值、乳酸浓度、乙丙比、ＴＶＦＡ产量及其各组分的影响
添加酵母可显著提高ｐＨ值、乙酸、丙酸、丁酸、异戊酸和ＴＶＦＡ浓度（犘＜０．０５）（表２），降低乳酸浓度和乙丙比
值（犘＜０．０５），有提高戊酸浓度的趋势（犘＝０．０８２），但对异丁酸无显著影响（犘＞０．１０），添加Ｌ９菌可显著提高
ｐＨ值、乙酸、丙酸、丁酸、戊酸、异戊酸和ＴＶＦＡ浓度（犘＜０．０５），降低乳酸浓度和乙丙比值（犘＜０．０５），但对异丁
酸无显著影响（犘＞０．１０），在影响ｐＨ值、乳酸、乙酸、丙酸、丁酸、异戊酸、ＴＶＦＡ浓度及乙丙比值方面，酵母与
Ｌ９菌株间有显著的互作关系（犘＜０．０５）；在影响异丁酸及戊酸浓度方面，酵母与Ｌ９菌株之间无显著的互作作用
（犘＞０．１０）。
２．２．２ 添加反刍兽新月形单胞菌或其与酵母联用对ｐＨ值、乳酸、乙酸、丙酸及ＴＶＦＡ产量的动态影响 在接
种初始时，各指标间无显著差异（犘＞０．０５）（图２）。接种后３ｈ，ｐＨ值统计结果显示，Ｙ５Ｌ９０ 组显著高于Ｙ５Ｌ９８、
Ｙ０Ｌ９８、Ｙ５Ｌ９４ 和Ｙ０Ｌ９４ 四组（犘＜０．０５），但与Ｙ０Ｌ９０ 组无显著差异（犘＞０．０５），各组中，Ｙ５Ｌ９８ 组显著低于其余
各组（犘＜０．０５），Ｙ５Ｌ９４ 组次之。乳酸方面，Ｙ５Ｌ９８ 组显著低于其余各组（犘＜０．０５），而Ｙ５Ｌ９０ 组显著高于其余各
９７１第１９卷第４期 草业学报２０１０年
组。乙酸方面，Ｙ０Ｌ９０、Ｙ５Ｌ９０ 与Ｙ０Ｌ９４ 三组间无显著差异（犘＞０．０５），但均显著低于其余３组，且其余３组间无
显著差异（犘＞０．０５）。丙酸方面，Ｙ５Ｌ９４ 与Ｙ５Ｌ９８ 两组间无显著差异（犘＞０．０５），但均显著高于其余４组（犘＜
０．０５），而Ｙ０Ｌ９０ 与 Ｙ５Ｌ９０ 两组间无显著差异（犘＞０．０５），但均显著低于 Ｙ０Ｌ９８、Ｙ５Ｌ９４ 与 Ｙ５Ｌ９８ 三组（犘＜
０．０５）。ＴＶＦＡ上，Ｙ５Ｌ９４、Ｙ５Ｌ９８ 与Ｙ０Ｌ９８ 三组间无显著差异（犘＞０．０５），但均显著高于其余３组（犘＜０．０５），且
其余３组间无显著差异（犘＞０．０５）。
接种后６ｈ，ｐＨ值统计结果显示，Ｙ５Ｌ９８ 组显著高于除Ｙ０Ｌ９８ 组外其余４组（犘＜０．０５），而Ｙ０Ｌ９０ 与Ｙ０Ｌ９４
组均显著低于其余４组（犘＜０．０５），且二者之间无显著差异（犘＞０．０５）。乳酸统计结果显示，Ｙ５Ｌ９８ 组显著低于
其余各组（犘＜０．０５），而Ｙ０Ｌ９０ 组显著高于其余４组（犘＜０．０５）。乙酸方面，Ｙ５Ｌ９４ 与Ｙ５Ｌ９８ 组间无显著差异（犘
＞０．０５），但前者显著高于其余４组（犘＜０．０５），且其余４组间无显著差异（犘＞０．０５）。丙酸方面，Ｙ５Ｌ９８ 显著高
于其余５组（犘＜０．０５），而Ｙ０Ｌ９０ 与Ｙ５Ｌ９０ 两组间无显著差异（犘＞０．０５），但均显著低于其余４组。ＴＶＦＡ上，
Ｙ５Ｌ９４ 和Ｙ５Ｌ９８ 两组间无显著差异（犘＞０．０５），但均显著高于其余４组，且其余４组间无显著差异（犘＞０．０５）。
接种后９ｈ，ｐＨ值方面，Ｙ０Ｌ９０、Ｙ０Ｌ９８ 和Ｙ５Ｌ９０ 三组间无显著差异（犘＞０．０５），但均显著低于其余３组（犘＜
０．０５），且其余３组间无显著差异（犘＞０．０５）。乳酸结果显示，Ｙ５Ｌ９８ 组显著低于其余５组，而Ｙ０Ｌ９０ 组显著高于
其余５组（犘＜０．０５）。乙酸方面，Ｙ５Ｌ９８ 组显著高于除Ｙ５Ｌ９４ 组外其余４组（犘＜０．０５），且与Ｙ５Ｌ９４ 组无显著差
异（犘＞０．０５），而Ｙ０Ｌ９０ 组最低，但其与Ｙ５Ｌ９０ 和Ｙ０Ｌ９８ 两组间无显著差异（犘＞０．０５）。丙酸方面，Ｙ５Ｌ９８ 显著
高于除Ｙ５Ｌ９４ 外其余４组（犘＜０．０５），且与Ｙ５Ｌ９４ 组无显著差异（犘＞０．０５），而Ｙ０Ｌ９０ 与Ｙ５Ｌ９０ 两组均显著低于
其余４组，且这２组间无显著差异（犘＞０．０５）。ＴＶＦＡ上，Ｙ５Ｌ９８ 组最高，显著高于其余５组（犘＜０．０５），而
Ｙ０Ｌ９０ 组显著低于除Ｙ５Ｌ９０ 外其余４组（犘＜０．０５），且其与Ｙ５Ｌ９０ 组间无显著差异（犘＞０．０５）。
接种后１２ｈ，ｐＨ值方面，Ｙ０Ｌ９０、Ｙ０Ｌ９８ 和Ｙ５Ｌ９０ 三组间无显著差异（犘＞０．０５），但均显著低于其余３组（犘
＜０．０５），且其余３组间无显著差异（犘＞０．０５）。乳酸结果显示，Ｙ５Ｌ９８ 组显著低于其余各组（犘＜０．０５），而
Ｙ０Ｌ９０ 组显著高于其余４组（犘＜０．０５）。乙酸方面，Ｙ５Ｌ９４ 组显著高于其余各组（犘＜０．０５），但与Ｙ５Ｌ９８ 组无显
著差异（犘＞０．０５），而Ｙ０Ｌ９０ 显著低于除Ｙ５Ｌ９０ 组外其余４组（犘＜０．０５），且其与 Ｙ５Ｌ９０ 组无显著差异（犘＞
０．０５）。丙酸方面，Ｙ５Ｌ９８ 显著高于除Ｙ５Ｌ９４ 外其余４组（犘＜０．０５），且与Ｙ５Ｌ９４ 组无显著差异（犘＞０．０５），而
Ｙ０Ｌ９０与Ｙ５Ｌ９０ 两组则显著低于其余４组（犘＜０．０５），且２组间无显著差异（犘＞０．０５）。ＴＶＦＡ上，Ｙ５Ｌ９４ 和
Ｙ５Ｌ９８ 两组间无显著差异（犘＞０．０５），但均显著高于其余４组，Ｙ０Ｌ９０ 与Ｙ５Ｌ９０ 两组则显著低于其余４组（犘＜
０．０５），且两者间无显著差异（犘＞０．０５）。
表２ 玉米底物条件下反刍兽新月形单胞菌及其与酵母联用对狆犎值、乳酸浓度、乙丙比、犜犞犉犃产量及其各组分的影响
犜犪犫犾犲２ 犈犳犳犲犮狋狅犳犛．狉狌犿犻狀犪狀狋犻狌犿犪犱犱犻狋犻狅狀犪狀犱犻狋狊犮狅犿犫犻狀犪狋犻狅狀狑犻狋犺狔犲犪狊狋犮狌犾狋狌狉犲狊狅狀狆犎狏犪犾狌犲，犾犪犮狋犪狋犲犮狅狀犮犲狀狋狉犪狋犻狅狀，
狋犺犲狉犪狋犻狅狀狅犳犪犮犲狋犪狋犲狋狅狆狉狅狆犻狅狀犪狋犲，犜犞犉犃狆狉狅犱狌犮狋犻狅狀犪狀犱犻狋狊犮狅犿狆狅狀犲狀狋狊狑犻狋犺狋犺犲犮狅狉狀犪狊狊狌犫狊狋狉犪狋犲
指标
Ｉｎｄｅｘ
Ｙ０Ｌ９０ Ｙ０Ｌ９４ Ｙ０Ｌ９８ Ｙ５Ｌ９０ Ｙ５Ｌ９４ Ｙ５Ｌ９８ 标准误
Ｓ．Ｅ．Ｍ
处理效应Ｔｒｅａｔｅｄｅｆｆｅｃｔ（犘值Ｖａｌｕｅ）
酵母Ｙｅａｓｔ（Ｙ） Ｌ９ Ｙ×Ｌ９
ｐＨ值Ｖａｌｕｅ ５．５７ ５．５８ ５．６６ ５．６２ ５．６３ ５．６４ ０．００８ ＜０．００１ ＜０．００１ ＜０．００１
乳酸Ｌａｃｔａｔｅ（ｍｍｏｌ／Ｌ） ７．８３ ５．３９ ３．６８ ６．７５ ３．５０ ２．０７ ０．４８２ ＜０．００１ ＜０．００１ ＜０．００１
乙酸Ａｃｅｔａｔｅ（ｍｍｏｌ／Ｌ） ２９．７９ ３８．６３ ３６．１４ ３３．０９ ４６．２３ ４５．７１ １．４８８ ＜０．００１ ＜０．００１ ＜０．００１
丙酸Ｐｒｏｐｉｏｎａｔｅ（ｍｍｏｌ／Ｌ） １９．８７ ３５．８４ ３３．８０ ２１．８４ ４２．２２ ４７．０３ ２．４００ ＜０．００１ ＜０．００１ ＜０．００１
正丁酸ｎｂｕｔｙｒａｔｅ（ｍｍｏｌ／Ｌ） ４．０１ ３．８７ ３．４３ ４．６１ ５．０７ ４．３４ ０．１３２ ＜０．００１ ＜０．００１ ０．００６
异丁酸Ｉｓｏｂｕｔｙｒａｔｅ（ｍｍｏｌ／Ｌ） ０．２６ ０．１４ ０．２０ ０．３３ ０．１８ ０．１５ ０．０３１ ０．６６８ ０．１４３ ０．７１８
戊酸Ｖａｌｅｒａｔｅ（ｍｍｏｌ／Ｌ） ０．１２ ０．１７ ０．０４ ０．１９ ０．１５ ０．０６ ０．０１５ ０．０６０ ＜０．００１ ０．１１３
异戊酸Ｉｓｏｖａｌｅｒａｔｅ（ｍｍｏｌ／Ｌ） ０．３４ ０．３７ ０．２０ ０．３６ ０．５０ ０．４９ ０．０２５ ＜０．００１ ＜０．００１ ＜０．００１
总挥发性脂肪酸ＴＶＦＡ（ｍｍｏｌ／Ｌ）５３．６７ ７８．３３ ７３．３７ ５９．５４ ９３．５２ ９７．０８ ３．８８７ ＜０．００１ ＜０．００１ ＜０．００１
乙丙比Ａ∶Ｐ １．５７ １．２３ １．１７ １．５８ １．２１ １．１１ ０．０４６ ０．０３７ ＜０．００１ ０．０４０
０８１ ＡＣＴＡＰＲＡＴＡＣＵＬＴＵＲＡＥＳＩＮＩＣＡ（２０１０） Ｖｏｌ．１９，Ｎｏ．４
图２ 玉米底物条件下反刍兽新月形单胞菌及其与酵母联用
对狆犎、乳酸、乙酸、丙酸和犜犞犉犃浓度的动态影响
犉犻犵．２ 犈犳犳犲犮狋狅犳犛．狉狌犿犻狀犪狀狋犻狌犿犪犱犱犻狋犻狅狀犪狀犱犻狋狊犮狅犿犫犻狀犪狋犻狅狀
狑犻狋犺狔犲犪狊狋犮狌犾狋狌狉犲狊狅狀狋犺犲犱狔狀犪犿犻犮犮犺犪狀犮犲狊狅犳狆犎，犾犪犮狋犪狋犲，
犪犮犲狋犪狋犲，狆狉狅狆犻狅狀犪狋犲犪狀犱犜犞犉犃犮狅狀犮犲狀狋狉犪狋犻狅狀
狑犻狋犺狋犺犲犮狅狉狀犪狊狊狌犫狊狋狉犪狋犲
接种后１５ｈ，ｐＨ值方面，Ｙ５Ｌ９４、Ｙ０Ｌ９８ 和 Ｙ５Ｌ９８ 三组间无显著差异（犘＞０．０５），但均显著高于 Ｙ０Ｌ９０ 和
Ｙ５Ｌ９０两组（犘＜０．０５），Ｙ０Ｌ９０ 组显著低于除Ｙ５Ｌ９０ 外其余４组。乳酸统计结果显示，Ｙ５Ｌ９０ 组显著高于其余各
组（犘＜０．０５），而Ｙ０Ｌ９８ 组显著高于其余各组（犘＜０．０５）。乙酸方面，Ｙ５Ｌ９４ 组显著高于除Ｙ５Ｌ９８ 组外其余各组
（犘＜０．０５），但与Ｙ５Ｌ９８ 组无显著差异（犘＞０．０５），而Ｙ０Ｌ９０ 显著低于其余５组（犘＜０．０５）。丙酸方面，Ｙ５Ｌ９８ 显
著高于其余５组（犘＜０．０５），而Ｙ０Ｌ９０ 与Ｙ５Ｌ９０ 两组则显著低于其余４组（犘＜０．０５），且２组间无显著差异（犘＞
０．０５）；ＴＶＦＡ上，Ｙ５Ｌ９４ 和Ｙ５Ｌ９８ 两组间无显著差异（犘＞０．０５），但均显著高于其余４组，Ｙ０Ｌ９０ 与Ｙ５Ｌ９０ 两组
则显著低于其余４组，且两者间无显著差异（犘＞０．０５）。
接种后１８ｈ，ｐＨ值方面，Ｙ０Ｌ９０、Ｙ０Ｌ９４ 和Ｙ０Ｌ９８ 三组间无显著差异（犘＞０．０５），但均显著低于其余３组（犘
＜０．０５），且其余３组间无显著差异（犘＞０．０５）。乳酸统计结果显示，Ｙ０Ｌ９０ 和Ｙ５Ｌ９０ 两组间无显著差异（犘＞
０．０５），但均显著高于其余各组（犘＜０．０５），而Ｙ５Ｌ９８、Ｙ５Ｌ９４ 及Ｙ０Ｌ９８ 三组间无显著差异（犘＞０．０５）。乙酸方面，
Ｙ５Ｌ９８、Ｙ５Ｌ９４、Ｙ０Ｌ９４ 组均显著高于Ｙ０Ｌ９０ 和Ｙ５Ｌ９０ 两组（犘＜０．０５），而Ｙ０Ｌ９０ 与Ｙ５Ｌ９０ 两组则显著低于其余４
组（犘＜０．０５），且两者间无显著差异（犘＞０．０５）。丙酸方面，Ｙ５Ｌ９８ 显著高于其余５组（犘＜０．０５），而Ｙ０Ｌ９０ 与
１８１第１９卷第４期 草业学报２０１０年
Ｙ５Ｌ９０ 两组则显著低于其余４组（犘＜０．０５），且２组间无显著差异（犘＞０．０５）。ＴＶＦＡ上，Ｙ５Ｌ９４ 显著高于除
Ｙ０Ｌ９４外其余４组（犘＜０．０５），Ｙ０Ｌ９０ 与Ｙ５Ｌ９０ 两组则显著低于其余４组（犘＜０．０５），且两者间无显著差异（犘＞
０．０５）。
２．３ 淀粉底物条件下添加Ｌ９菌株或其与酵母联用对瘤胃微生物发酵的影响
２．３．１ 添加反刍兽新月形单胞菌或其与酵母联用对ｐＨ值、乙丙比、乳酸、ＴＶＦＡ产量及其各组分的影响 添加
酵母可显著提高ｐＨ值、乙酸、丙酸、丁酸、异戊酸和ＴＶＦＡ浓度（犘＜０．０５）（表３），降低乳酸浓度 （犘＜０．０５），但
对戊酸、异丁酸浓度和乙丙比值无显著影响（犘＞０．１０），添加Ｌ９菌可显著提高ｐＨ值、乙酸、丙酸、丁酸、戊酸和
ＴＶＦＡ浓度（犘＜０．０５），降低乳酸浓度和乙丙比值（犘＜０．０５），但对异丁酸和异戊酸浓度无显著影响（犘＞０．１０），
在影响ｐＨ值、乳酸、乙酸、丙酸、丁酸、异戊酸、ＴＶＦＡ浓度及乙丙比值方面，酵母与Ｌ９菌株间有显著的互作关
系（犘＜０．０５）；在影响异丁酸及戊酸浓度方面，酵母与Ｌ９菌株之间无显著的互作作用（犘＞０．１０）。
２．３．２ 反刍兽新月形单胞菌及其与酵母联用对ｐＨ值、乳酸、乙酸、丙酸及ＴＶＦＡ产量的动态影响 在接种初
始时，各指标间无显著差异（犘＞０．０５）（图３）。接种后３ｈ，ｐＨ值结果显示，Ｙ５Ｌ９８ 和Ｙ０Ｌ９４ 显著低于其余４组
（犘＜０．０５），Ｙ０Ｌ９０ 组显著高于除Ｙ５Ｌ９０ 外其余各组（犘＜０．０５），且其与Ｙ５Ｌ９０ 组无显著差异（犘＞０．０５）。乳酸
方面，Ｙ５Ｌ９８ 组显著低于其余各组（犘＜０．０５），而Ｙ５Ｌ９０ 组显著高于其余５组（犘＜０．０５）。乙酸方面，Ｙ５Ｌ９４ 与
Ｙ５Ｌ９８两组间无显著差异（犘＞０．０５），但均显著高于其余４组（犘＜０．０５），且其余４组间无显著差异（犘＞０．０５）。
丙酸方面，Ｙ０Ｌ９０、Ｙ５Ｌ９０ 与Ｙ０Ｌ９４ 三组间无显著差异（犘＞０．０５），但均显著低于其余３组（犘＜０．０５），且其余３
组间无显著差异（犘＞０．０５）。ＴＶＦＡ上，Ｙ５Ｌ９４ 与Ｙ５Ｌ９８ 两组间无显著差异（犘＞０．０５），但均显著高于其余４
组，而Ｙ０Ｌ９０、Ｙ０Ｌ９４ 和Ｙ５Ｌ９０ 三组间无显著差异（犘＞０．０５）。
接种后６ｈ统计结果显示，ｐＨ 值方面，Ｙ０Ｌ９８ 组显著高于其余各组（犘＜０．０５），而 Ｙ５Ｌ９０ 组显著低于除
Ｙ５Ｌ９４ 外其余各组（犘＜０．０５），且２组间无显著差异（犘＞０．０５）。乳酸统计结果显示，Ｙ５Ｌ９８ 组显著低于其余各
组，而Ｙ０Ｌ９０ 组显著高于其余４组（犘＜０．０５），Ｙ５Ｌ９４、Ｙ０Ｌ９４、Ｙ０Ｌ９８ 三组间无显著差异（犘＞０．０５）。乙酸方面，
Ｙ５Ｌ９８ 组显著高于其余５组（犘＜０．０５），Ｙ０Ｌ９０、Ｙ０Ｌ９４、Ｙ５Ｌ９０ 三组间无显著差异（犘＞０．０５），但均显著低于其余
３组（犘＜０．０５）。丙酸方面，Ｙ５Ｌ９８ 显著高于除Ｙ５Ｌ９４ 外其余４组（犘＜０．０５），且与Ｙ５Ｌ９４ 组无显著差异（犘＞
０．０５），而Ｙ０Ｌ９０ 与Ｙ５Ｌ９０ 两组间无显著差异（犘＞０．０５），但均显著低于其余４组（犘＜０．０５）。ＴＶＦＡ上，Ｙ５Ｌ９８
显著高于其余５组（犘＜０．０５），而Ｙ０Ｌ９０、Ｙ０Ｌ９４ 与Ｙ５Ｌ９０ 三组间无显著差异（犘＞０．０５），但均显著低于其余３组
（犘＜０．０５）。
表３ 淀粉底物条件下反刍兽新月形单胞菌及其与酵母联用对狆犎值、乳酸浓度、乙丙比、犜犞犉犃产量及其各组分的影响
犜犪犫犾犲３ 犈犳犳犲犮狋狅犳犛．狉狌犿犻狀犪狀狋犻狌犿犪狀犱犻狋狊犮狅犿犫犻狀犪狋犻狅狀狑犻狋犺狔犲犪狊狋犮狌犾狋狌狉犲狊狅狀狆犎狏犪犾狌犲，犾犪犮狋犪狋犲犮狅狀犮犲狀狋狉犪狋犻狅狀，
狋犺犲狉犪狋犻狅狀狅犳犪犮犲狋犪狋犲狋狅狆狉狅狆犻狅狀犪狋犲，犜犞犉犃狆狉狅犱狌犮狋犻狅狀犪狀犱犻狋狊犮狅犿狆狅狀犲狀狋狊狑犻狋犺狋犺犲狊狋犪狉犮犺犪狊狊狌犫狊狋狉犪狋犲
指标
Ｉｎｄｅｘ
Ｙ０Ｌ９０ Ｙ０Ｌ９４ Ｙ０Ｌ９８ Ｙ５Ｌ９０ Ｙ５Ｌ９４ Ｙ５Ｌ９８ 标准误
Ｓ．Ｅ．Ｍ
处理效应Ｔｒｅａｔｅｄｅｆｆｅｃｔ（犘值Ｖａｌｕｅ）
酵母Ｙｅａｓｔ（Ｙ） Ｌ９ Ｙ×Ｌ９
ｐＨ值Ｖａｌｕｅ ５．０９ ５．１５ ５．２５ ５．０３ ４．９９ ５．１０ ０．０２０ ＜０．００１ ＜０．００１ ＜０．００１
乳酸Ｌａｃｔａｔｅ（ｍｍｏｌ／Ｌ） １１．７２ ９．３６ ７．６１ １４．３５ ９．００ ６．２８ ０．６５０ ０．０２９ ＜０．００１ ＜０．００１
乙酸Ａｃｅｔａｔｅ（ｍｍｏｌ／Ｌ） ２８．７０ ３２．０３ ３６．７０ ２８．５１ ３６．０３ ４２．４０ １．２１９ ＜０．００１ ＜０．００１ ＜０．００１
丙酸Ｐｒｏｐｉｏｎａｔｅ（ｍｍｏｌ／Ｌ） １８．０９ ２５．１８ ３２．４８ １７．６８ ２８．１２ ３７．１９ １．７３３ ＜０．００１ ＜０．００１ ＜０．００１
正丁酸ｎｂｕｔｙｒａｔｅ（ｍｍｏｌ／Ｌ） ３．４０ ３．１５ ３．２６ ３．５４ ３．４９ ３．７５ ０．０４８ ＜０．００１ ＜０．００１ ＜０．００１
异丁酸Ｉｓｏｂｕｔｙｒａｔｅ（ｍｍｏｌ／Ｌ） ０．４０ ０．３４ ０．４７ ０．４９ ０．２６ ０．２６ ０．０３８ ０．２２８ ０．１５６ ０．１２１
戊酸Ｖａｌｅｒａｔｅ（ｍｍｏｌ／Ｌ） ０．２０ ０．１２ ０．０５ ０．１９ ０．０９ ０．０９ ０．０１５ ０．９０４ ＜０．００１ ０．４００
异戊酸Ｉｓｏｖａｌｅｒａｔｅ（ｍｍｏｌ／Ｌ） ０．３８ ０．３４ ０．３３ ０．４０ ０．４２ ０．４５ ０．０１３ ＜０．００１ ０．６７４ ０．０２０
总挥发性脂肪酸ＴＶＦＡ（ｍｍｏｌ／Ｌ）５０．１９ ６０．３６ ７２．４４ ４９．７３ ６７．６４ ８３．３４ ２．９４８ ＜０．００１ ＜０．００１ ＜０．００１
乙丙比Ａ∶Ｐ １．６０ １．３５ １．２４ １．６３ １．３２ １．２１ ０．０４１ ０．２５０ ＜０．００１ ０．０１５
２８１ ＡＣＴＡＰＲＡＴＡＣＵＬＴＵＲＡＥＳＩＮＩＣＡ（２０１０） Ｖｏｌ．１９，Ｎｏ．４
图３ 淀粉底物条件下反刍兽新月形单胞菌及其与酵母联用
对狆犎、乳酸、乙酸、丙酸和犜犞犉犃浓度的动态影响
犉犻犵．３ 犈犳犳犲犮狋狅犳犛．狉狌犿犻狀犪狀狋犻狌犿犪犱犱犻狋犻狅狀犪狀犱犻狋狊犮狅犿犫犻狀犪狋犻狅狀
狑犻狋犺狔犲犪狊狋犮狌犾狋狌狉犲狊狅狀狋犺犲犱狔狀犪犿犻犮犮犺犪狀犮犲狊狅犳狆犎，犾犪犮狋犪狋犲，
犪犮犲狋犪狋犲，狆狉狅狆犻狅狀犪狋犲犪狀犱犜犞犉犃犮狅狀犮犲狀狋狉犪狋犻狅狀
狑犻狋犺狋犺犲狊狋犪狉犮犺犪狊狊狌犫狊狋狉犪狋犲
接种后９ｈ，ｐＨ值方面，Ｙ５Ｌ９０ 组显著低于Ｙ５Ｌ９８ 和Ｙ０Ｌ９８ 组（犘＜０．０５），Ｙ０Ｌ９０、Ｙ０Ｌ９４ 与Ｙ５Ｌ９４ 组间无显
著差异（犘＞０．０５）。乳酸结果显示，Ｙ５Ｌ９８ 与Ｙ０Ｌ９８ 组间无显著差异（犘＞０．０５），但二者均显著高于其余４组（犘
＜０．０５），而Ｙ５Ｌ９０ 组显著高于其余５组。乙酸方面，Ｙ５Ｌ９８ 组显著高于其余５组，Ｙ０Ｌ９０、Ｙ０Ｌ９４、Ｙ５Ｌ９０ 三组间
无显著差异（犘＞０．０５），但均显著低于其余３组。丙酸方面，Ｙ５Ｌ９８ 显著高于其余５组，而Ｙ０Ｌ９０ 与Ｙ５Ｌ９０ 则显
著低于其余４组（犘＜０．０５），且２组间无显著差异（犘＞０．０５）。ＴＶＦＡ上，Ｙ５Ｌ９８ 组最高，显著高于除Ｙ５Ｌ９４ 外
其余４组（犘＜０．０５），而Ｙ０Ｌ９０ 组显著低于除Ｙ５Ｌ９０ 外其余４组（犘＜０．０５），且其与Ｙ５Ｌ９０ 组间无显著差异（犘＞
０．０５）。
接种后１２ｈ，ｐＨ值方面，Ｙ０Ｌ９０、Ｙ０Ｌ９４ 和 Ｙ５Ｌ９０ 三组间无显著差异（犘＞０．０５），但均显著低于 Ｙ０Ｌ９８ 与
Ｙ５Ｌ９８ 组（犘＜０．０５），且其余４组间无显著差异（犘＞０．０５）。乳酸结果显示，Ｙ５Ｌ９８ 组显著低于其余各组（犘＜
０．０５），而Ｙ０Ｌ９０ 组显著高于其余４组（犘＜０．０５）。乙酸方面，Ｙ５Ｌ９８ 与Ｙ０Ｌ９８ 两组间无显著差异（犘＞０．０５），但
均显著高于Ｙ０Ｌ９０、Ｙ５Ｌ９０ 与Ｙ５Ｌ９４ 三组（犘＜０．０５），且后３组之间无显著差异（犘＞０．０５）。丙酸方面，Ｙ５Ｌ９８ 与
Ｙ５Ｌ９４组间无显著差异（犘＞０．０５），但显著高于除Ｙ０Ｌ９８ 外其余３组（犘＜０．０５），而Ｙ０Ｌ９０ 与Ｙ５Ｌ９０ 两组则显著
３８１第１９卷第４期 草业学报２０１０年
低于其余４组（犘＜０．０５），且２组间无显著差异（犘＞０．０５）。ＴＶＦＡ上，Ｙ０Ｌ９８ 和Ｙ５Ｌ９８ 两组间无显著差异（犘＞
０．０５），但均显著高于其余４组（犘＜０．０５），Ｙ０Ｌ９０ 与Ｙ５Ｌ９０ 两组则显著低于其余４组，且两者间无显著差异（犘＞
０．０５）。
接种后１５ｈ，ｐＨ 值方面，Ｙ０Ｌ９０ 与 Ｙ５Ｌ９０ 两组间无显著差异（犘＞０．０５），但均显著低于其余４组（犘＜
０．０５），Ｙ０Ｌ９８ 与Ｙ５Ｌ９８ 组间无显著差异（犘＞０．０５），但前者显著高于其余４组（犘＜０．０５）。乳酸统计结果显示，
Ｙ５Ｌ９０ 组显著高于其余各组（犘＜０．０５），而Ｙ０Ｌ９８ 和Ｙ５Ｌ９８ 两组间无显著差异（犘＞０．０５），但均显著低于其余各
组（犘＜０．０５）。乙酸方面，Ｙ５Ｌ９８ 组显著高于Ｙ０Ｌ９０ 和Ｙ５Ｌ９０ 两组（犘＜０．０５），其余３组均与Ｙ０Ｌ９０ 和Ｙ５Ｌ９０ 组
无显著差异（犘＞０．０５）。丙酸方面，Ｙ５Ｌ９８ 与 Ｙ０Ｌ９８ 组间无显著差异（犘＞０．０５），但显著高于其余４组（犘＜
０．０５），而Ｙ０Ｌ９０ 与Ｙ５Ｌ９０ 两组则显著低于其余４组（犘＜０．０５），且２组间无显著差异（犘＞０．０５）。Ｙ５Ｌ９８ 显著
高于Ｙ５Ｌ９０ 组（犘＜０．０５），但与其余４组间无显著差异（犘＞０．０５）。ＴＶＦＡ上，Ｙ５Ｌ９８、Ｙ５Ｌ９４、Ｙ０Ｌ９８ 和Ｙ０Ｌ９４
组间无显著差异（犘＞０．０５），但均显著高于Ｙ０Ｌ９０ 组（犘＜０．０５），Ｙ０Ｌ９０、Ｙ５Ｌ９０ 和Ｙ０Ｌ９４ 三组间无显著差异（犘
＞０．０５）。
接种后１８ｈ，ｐＨ值方面，Ｙ０Ｌ９０、Ｙ５Ｌ９０ 与 Ｙ５Ｌ９４ 三组间无显著差异（犘＞０．０５），但均显著低于 Ｙ０Ｌ９８ 与
Ｙ５Ｌ９８ 组（犘＜０．０５），Ｙ０Ｌ９８ 与Ｙ５Ｌ９８ 两组间无显著差异（犘＞０．０５），但前者显著高于其余４组（犘＜０．０５）。乳
酸方面，Ｙ０Ｌ９０ 和Ｙ５Ｌ９０ 两组间无显著差异（犘＞０．０５），但均显著高于其余各组（犘＜０．０５），而Ｙ５Ｌ９８、Ｙ５Ｌ９４ 及
Ｙ０Ｌ９８ 三组间无显著差异（犘＞０．０５）。乙酸方面，Ｙ５Ｌ９０、Ｙ０Ｌ９０、Ｙ０Ｌ９４ 三组间无显著差异（犘＞０．０５），但均显著
低于Ｙ０Ｌ９８ 与Ｙ５Ｌ９８ 两组，且Ｙ０Ｌ９８ 与Ｙ５Ｌ９８ 组间无显著差异（犘＞０．０５）。丙酸方面，Ｙ５Ｌ９８ 显著高于其余５
组（犘＜０．０５），而Ｙ０Ｌ９０ 与Ｙ５Ｌ９０ 两组则显著低于其余４组（犘＜０．０５），且２组间无显著差异（犘＞０．０５），其余３
组间也无显著差异（犘＞０．０５）。ＴＶＦＡ上，Ｙ５Ｌ９４ 显著高于除Ｙ０Ｌ９４ 外其余４组（犘＜０．０５），Ｙ０Ｌ９０ 与Ｙ５Ｌ９０ 两
组则显著低于其余４组（犘＜０．０５），且两者间无显著差异（犘＞０．０５）。
３ 讨论
在当前集约化饲养条件下，为最大程度的发挥奶牛及肉牛的生产潜力，日粮常以高精料为主［１０，１１］。研究表
明，当奶牛及肉牛长期采食大量高精料时，极易引起瘤胃酸中毒。瘤胃酸中毒是一类主要由饲料中精料含量过
高，导致瘤胃内有机酸尤其是乳酸产量过多，从而导致瘤胃功能紊乱的一类疾病。在瘤胃内，乳酸主要由一些乳
酸产生菌如牛链球菌、乳酸杆菌、厌氧真菌产生，而乳酸利用菌主要包括反刍兽新月型单胞菌和埃氏巨球型菌，这
２类微生物群平衡与否决定了瘤胃内乳酸是否累积。本研究结果表明，添加乳酸利用菌反刍兽新月形单胞菌可
显著降低发酵体系中的乳酸浓度，提高ｐＨ值，同时丙酸浓度显著增高。结合所用菌株的理化特性结果，初步认
为在高精料条件下，应用本研究所用菌株，可稳定高精料发酵体系中的ｐＨ值，降低乳酸产量，因而具有缓解瘤胃
酸中毒的作用。
本研究结果表明，添加Ｌ９菌株不仅可提高丙酸产量，还可显著提高乙酸、正丁酸和ＴＶＦＡ浓度，分析丙酸增
加量及乳酸降低量的具体变化数值，发现丙酸的增加量不仅仅源自于乳酸转化，还可能与Ｌ９菌株直接发酵底物
有关。同时，该菌株纯培养结果也表明，Ｌ９菌株可利用葡萄糖和乳酸为碳源，但当葡萄糖匮乏时，其可加快乳酸
向丙酸的转化［５］。因此，Ｌ９菌株自身代谢特性是导致发酵体系中的挥发性脂肪酸增多的主要因素。
体内外研究显示，添加活酵母可稳定瘤胃ｐＨ值，缓解瘤胃酸中毒［１，２，１２］。本研究结果表明，在分别以羊草、
玉米及淀粉为底物时，添加酵母均可显著降低乳酸浓度，且在以玉米和淀粉为底物时，可显著提高ｐＨ值。结合
他人报道，本研究结果显示，应用活酵母来调控乳酸生成的机制可能与以下几方面有关：１）底物竞争机制；一些研
究表明，接种的活酵母可通过与瘤胃微生物竞争淀粉及可溶性糖底物，从而降低有机酸的生成速率，达到稳定瘤
胃ｐＨ值的效应［１３］；２）与纤毛虫数量增加有关。一些报道表明，添加活酵母可提高瘤胃内毛虫的数量，由于内毛
虫可吞噬淀粉颗粒，并可利用部分乳酸，因而内毛虫数量的增加可减缓瘤胃内乳酸形成的速度，从而阻止瘤胃内
乳酸累积［１４］；３）与瘤胃总菌量增多有关。一些研究显示，添加活酵母可显著提高瘤胃总菌数量，由于总菌数量的
增多意味着需要更多的ＶＦＡ碳架用于微生物细胞的生成，而微生物细胞数量的增多则可稳定瘤胃ｐＨ 值［１５］。
４）添加活酵母可促进乳酸利用菌对乳酸的利用。本试验结果表明，在以玉米及淀粉为底物条件下，在接种后３～
４８１ ＡＣＴＡＰＲＡＴＡＣＵＬＴＵＲＡＥＳＩＮＩＣＡ（２０１０） Ｖｏｌ．１９，Ｎｏ．４
１２ｈ，较单独使用活酵母或使用乳酸利用菌相比，酵母与乳酸利用菌之间联合使用更能显著降低乳酸浓度。该结
果也佐证了 Ｍａｒｔｉｎ和Ｎｉｓｂｅｔ［９］有关乳酸利用菌与活酵母共培养的研究结果，其在讨论中指出，活酵母可产生一
些氨基酸、肽、维生素和有机酸，而这些物质可促进乳酸利用菌如埃氏巨球型菌或反刍兽新月形单胞菌生长，进而
加强后者对乳酸代谢作用［１６］。
综上可知，本研究利用体外法研究不同底物条件下Ｌ９菌株单独培养及与酵母联用对混合瘤胃微生物发酵
的影响，结果表明添加菌株Ｌ９能降低３种底物条件下乳酸浓度、提高ＴＶＦＡ和丙酸产量并降低乙丙比，与酵母
联用条件下这些有益的效果得到进一步改善。结果表明，菌株Ｌ９对瘤胃发酵能起到有益调控作用，但与酵母联
用条件下在控制乳酸及ｐＨ值方面与发酵底物有关。
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ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍｏｆｔｈｅｒｕｍｉｎａｌｂａｃｔｅｒｉａ犕犲犵犪狊狆犺犪犲狉犪犲犾狊犱犲狀犻犻［Ｊ］．ＡｎｉｍａｌＲｅｓｅａｒｃｈ，２００４，５３：１７７１８６．
５８１第１９卷第４期 草业学报２０１０年
犈犳犳犲犮狋狅犳犛犲犾犲狀狅犿狅狀犪狊狉狌犿犻狀犪狀狋犻狌犿犪犾狅狀犲，狅狉犻狀犮狅犿犫犻狀犪狋犻狅狀狑犻狋犺狔犲犪狊狋
犮狌犾狋狌狉犲狊，狅狀犻狀狏犻狋狉狅狉狌犿犲狀犫犪犮狋犲狉犻犪犾犳犲狉犿犲狀狋犪狋犻狅狀
ＭＡＯＳｈｅｎｇｙｏｎｇ，ＬＯＮＧＬｉｍｉｎｇ，ＺＨＵ Ｗｅｉｙｕｎ
（ＣｏｌｅｇｅｏｆＡｎｉｍａｌＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ＮａｎｊｉｎｇＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｉｓｔｙ，Ｎａｎｊｉｎｇ２１００９５，Ｃｈｉｎａ）
犃犫狊狋狉犪犮狋：犐狀狏犻狋狉狅ｂａｔｃｈｃｕｌｔｕｒｅｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓｗｅｒｅｕｓｅｄｔｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｅｆｆｅｃｔｏｆ犛．狉狌犿犻狀犪狀狋犻狌犿ａｌｏｎｅａｎｄｉｎ
ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｗｉｔｈｙｅａｓｔｃｕｌｔｕｒｅｓｏｎｒｕｍｅｎｂａｃｔｅｒｉａｌｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ．Ｗｈｅｎ犔犲狔犿狌狊犮犺犻狀犲狀狊犻狊ｗａｓｕｓｅｄａｓａｓｕｂ
ｓｔｒａｔｅ，ｙｅａｓｔｃｕｌｔｕｒｅａｄｄｉｔｉｏｎｉｎｃｒｅａｓｅｄｔｈｅａｃｅｔａｔｅ，ｐｒｏｐｉｏｎａｔｅ，ｂｕｔｙｒａｔｅ，ｖａｌｅｒｉｃａｃｉｄ，ｉｓｏｖａｌｅｒｉｃａｃｉｄａｎｄ
ＴＶＦＡｃｏｎｔｅｎｔｓ（犘＜０．０５），ａｎｄｒｅｄｕｃｅｄｌａｃｔｉｃａｃｉｄｃｏｎｔｅｎｔ，ｂｕｔｈａｄｎｏｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｅｆｆｅｃｔｓｏｎｐＨｖａｌｕｅ，ｉｓｏｂｕ
ｔｙｒａｔｅｏｒｒａｔｉｏｏｆａｃｅｔａｔｅｔｏｐｒｏｐｉｏｎａｔｅ（犘＜０．０５）．Ｔｈｅｒａｔｉｏｏｆａｃｅｔａｔｅｔｏｐｒｏｐｉｏｎａｔｅａｎｄｔｈｅｌａｃｔａｔｅｃｏｎｃｅｎｔｒａ
ｔｉｏｎｗｅｒｅｒｅｄｕｃｅｄ（犘＜０．０５），ａｎｄａｃｅｔａｔｅ，ｐｒｏｐｉｏｎａｔｅ，ｎｂｕｔｙｒａｔｅ，ｉｓｏｂｕｔｙｒａｔｅ，ｉｓｏｖａｌｅｒｉｃａｃｉｄ，ＴＶＦＡｃｏｎｔｅｎｔ
ａｎｄｐＨｖａｌｕｅｗｅｒｅｉｍｐｒｏｖｅｄｂｙ犛．狉狌犿犻狀犪狀狋犻狌犿ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔａｔｉｏｎ（犘＜０．０５）．Ｔｈｅｒｅｗａｓｎｏｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｉｎｔｅｒａｃ
ｔｉｏｎｂｅｔｗｅｅｎｐＨｖａｌｕｅ，ａｃｅｔａｔｅ，ｐｒｏｐｉｏｎａｔｅ，ｂｕｔｙｒａｔｅ，ｉｓｏｖａｌｅｒｉｃａｃｉｄｏｒＴＶＦＡｃｏｎｔｅｎｔｂｅｔｗｅｅｎ犛．狉狌犿犻狀犪狀狋犻
狌犿ａｎｄｙｅａｓｔｃｕｌｔｕｒｅｓ（犘＞０．１０）．Ｗｈｅｎｍａｉｚｅｗａｓｕｓｅｄａｓａｓｕｂｓｔｒａｔｅ，ｌｉｖｅｙｅａｓｔｃｕｌｔｕｒｅａｄｄｉｔｉｏｎｉｎｃｒｅａｓｅｄｐＨ
ｖａｌｕｅ，ａｃｅｔａｔｅ，ｐｒｏｐｉｏｎａｔｅ，ｎｂｕｔｙｒａｔｅ，ｉｓｏｂｕｔｙｒａｔｅ，ｉｓｏｖａｌｅｒｉｃａｃｉｄａｎｄＴＶＦＡｃｏｎｔｅｎｔ（犘＜０．０５），ａｎｄｒｅ
ｄｕｃｅｄｌａｃｔａｔｅｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎａｎｄｔｈｅｒａｔｉｏｏｆａｃｅｔａｔｅｔｏｐｒｏｐｉｏｎａｔｅ（犘＜０．０５），ｂｕｔｔｈｅｒｅｗａｓｎｏｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｅｆｆｅｃｔ
ｏｎｉｓｏｂｕｔｙｒａｔｅｃｏｎｔｅｎｔ（犘＞０．１０）．ｐＨｖａｌｕｅ，ａｃｅｔａｔｅ，ｐｒｏｐｉｏｎａｔｅ，ｂｕｔｙｒａｔｅ，ｉｓｏｖａｌｅｒｉｃａｃｉｄａｎｄＴＶＦＡｃｏｎｔｅｎｔ
ｗｅｒｅｉｍｐｒｏｖｅｄｂｙ犛．狉狌犿犻狀犪狀狋犻狌犿，ａｎｄ犛．狉狌犿犻狀犪狀狋犻狌犿ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔｓｌｏｗｅｒｅｄｌａｃｔａｔｅｃｏｎｔｅｎｔａｎｄｔｈｅｒａｔｉｏｏｆ
ａｃｅｔａｔｅｔｏｐｒｏｐｉｏｎａｔｅ（犘＜０．０５）．ＴｈｅｒｅｗａｓａｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｅｆｆｅｃｔｏｎｐＨｖａｌｕｅ，ｌａｃｔａｔｅ，ａｃｅｔａｔｅ，ｐｒｏ
ｐｉｏｎａｔｅｂｕｔｙｒａｔｅ，ＴＶＦＡｃｏｎｔｅｎｔａｎｄｔｈｅｒａｔｉｏｏｆａｃｅｔａｔｅｔｏｐｒｏｐｉｏｎａｔｅｂｅｔｗｅｅｎ犛．狉狌犿犻狀犪狀狋犻狌犿Ｌ９ａｎｄｙｅａｓｔ
ｃｕｌｔｕｒｅｓ（犘＜０．０５）．Ｗｈｅｎｓｔａｒｃｈｗａｓｕｓｅｄａｓａｓｕｂｓｔｒａｔｅ，犛．狉狌犿犻狀犪狀狋犻狌犿ｈａｄａｎｉｎｃｒｅａｓｅｉｎｐＨｖａｌｕｅａｎｄａｃ
ｅｔａｔｅ，ｐｒｏｐｉｏｎａｔｅ，ｂｕｔｙｒａｔｅａｎｄＴＶＦＡｃｏｎｔｅｎｔ（犘＜０．０５），ｂｕｔａｄｅｃｒｅａｓｅｉｎｌａｃｔａｔｅｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎａｎｄｔｈｅｒａｔｉｏ
ｏｆａｃｅｔａｔｅｔｏｐｒｏｐｉｏｎａｔｅ（犘＜０．０５）．ＹｅａｓｔｃｕｌｔｕｒｅｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔｉｎｃｒｅａｓｅｄｐＨｖａｌｕｅａｎｄａｃｅｔａｔｅ，ｐｒｏｐｉｏｎａｔｅ，ｂｕ
ｔｙｒａｔｅａｎｄＴＶＦＡｃｏｎｔｅｎｔ（犘＜０．０５），ｂｕｔｈａｄｎｏｅｆｆｅｃｔｏｎｖａｌｅｒｉｃａｃｉｄ，ｉｓｏｂｕｔｙｒａｔｅｃｏｎｔｅｎｔｏｒｔｈｅｒａｔｉｏｏｆａｃｅ
ｔａｔｅｔｏｐｒｏｐｉｏｎａｔｅ（犘＞０．１０）．ＡｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｅｆｆｅｃｔｗａｓｏｂｓｅｒｖｅｄｏｎｐＨｖａｌｕｅ，ａｃｅｔａｔｅ，ｐｒｏｐｉｏｎａｔｅ，
ｂｕｔｙｒａｔｅ，ＴＶＦＡ，ｌａｃｔａｔｅｃｏｎｔｅｎｔａｎｄｔｈｅｒａｔｉｏｏｆａｃｅｔａｔｅｔｏｐｒｏｐｉｏｎａｔｅｂｅｔｗｅｅｎ犛．狉狌犿犻狀犪狀狋犻狌犿ａｎｄｙｅａｓｔｃｕｌ
ｔｕｒｅｓ（犘＜０．０５）．犛．犮犲狉犲狏犻狊犻犪犲Ｌ９ｃａｎｂｅｃｏｎｓｉｄｅｒｅｄａｇｏｏｄｓｔｒａｉｎｗｈｉｃｈｍｉｇｈｔｔｏｌｅｒａｔｅｔｈｅａｄｖｅｒｓｅｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ
ｉｎｔｈｅｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔｉｎａｌｔｒａｃｔｗｈｅｎｕｓｅｄａｓａｌｉｖｅｍｉｃｒｏｂｉａｌｆｅｅｄｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔｉｎｔｈｅｄｉｅｔｏｆｔｈｅａｎｉｍａｌｓ．Ｃｏｍｐａｒｅｄ
ｗｉｔｈｔｈｅａｄｄｉｔｉｏｎｏｆｙｅａｓｔｏｒ犛．犮犲狉犲狏犻狊犻犪犲ａｌｏｎｅ，ｔｈｅｌｉｖｅｙｅａｓｔｃｕｌｔｕｒｅｓｃｏｍｂｉｎｅｄｗｉｔｈ犛．犮犲狉犲狏犻狊犻犪犲Ｌ９ｍｏｒｅ
ｅｆｆｅｃｔｉｖｅｌｙｔｏｒｅｄｕｃｅｌａｃｔａｔｅａｎｄｍａｉｎｔａｉｎａｓｔａｂｌｅｒｕｍｉｎａｌｐＨ．
犓犲狔狑狅狉犱狊：犛犲犾犲狀狅犿狅狀犪狊狉狌犿犻狀犪狀狋犻狌犿；ｙｅａｓｔｃｕｌｔｕｒｅｓ；ｒｕｍｅｎ；犻狀狏犻狋狉狅ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ
６８１ ＡＣＴＡＰＲＡＴＡＣＵＬＴＵＲＡＥＳＩＮＩＣＡ（２０１０） Ｖｏｌ．１９，Ｎｏ．４