全 文 ：林业科学研究摇 圆园员猿渊专刊冤院园猿猿 园猿愿云燥则藻泽贼 砸藻泽藻葬则糟澡
摇 摇 文章编号院员园园员鄄员源怨愿渊圆园员猿冤专刊鄄园园猿猿鄄园远
黑杨三倍体与二倍体叶片中 皂蚤砸晕粤表达差异研究
王摇 楠袁 胡宝全袁 王春国袁 宋文芹袁 陈成彬鄢
渊南开大学生命科学学院袁天津摇 猿园园园苑员冤
收稿日期院 圆园员猿鄄园愿鄄圆园
基金项目院 国家野怨苑猿冶计划项目渊圆园园怨悦月员员怨员园缘冤袁国家自然科学基金重点项目渊猿员猿苑员圆源怨冤
作者简介院 王摇 楠渊员怨愿源要冤袁女袁陕西西安人袁硕士研究生
鄢通讯作者院 耘鄄皂葬蚤造院糟澡藻灶糟遭岳 灶葬灶噪葬蚤援 藻凿怎援 糟灶袁电话院园圆圆鄄圆猿缘园愿圆源员
摘要院本文以改进 悦栽粤月法提取的总 砸晕粤为模板袁通过设计茎环反转录引物袁利用定量 砸栽鄄孕悦砸 技术从黑杨幼嫩叶
片尧成熟叶片中均检测到 皂蚤砸晕粤遥 结果表明袁皂蚤砸员缘怨尧皂蚤砸员远苑尧皂蚤砸员苑员尧皂蚤砸猿员怨 在三倍体幼叶中表达量均高于二倍
体袁皂蚤砸员远源 在三倍体成熟叶片中的表达量高于二倍体表达量遥 除 皂蚤砸猿员怨 外袁其余 皂蚤砸晕粤 与其相应的靶基因在二
倍体和三倍体黑杨不同阶段叶片中表达的消长关系都较为典型遥 暗示这些 皂蚤砸晕粤 靶基因可能与黑杨三倍体的速
生性状形成相关遥
关键词院黑杨曰叶片组织曰酝蚤糟则燥砸晕粤曰荧光定量 孕悦砸曰差异表达
中图分类号院杂苑员愿援 源远 文献标识码院粤
杂贼怎凿赠 燥灶 贼澡藻 阅蚤枣枣藻则藻灶糟藻 蚤灶 耘曾责则藻泽泽蚤燥灶 孕则燥枣蚤造藻泽 燥枣 皂蚤糟则燥砸晕粤 粤皂燥灶早 蕴藻葬枣
韵则早葬灶泽 燥枣 栽则蚤责造燥蚤凿 葬灶凿 阅蚤责造燥蚤凿 孕燥责怎造怎泽 伊 藻怎则葬皂藻则蚤糟葬灶葬 糟造援 耶在澡燥灶早造蚤灶源远爷
宰粤晕郧 晕葬灶袁匀哉 月葬燥鄄择怎葬灶袁宰粤晕郧 悦澡怎灶鄄早怎燥袁 杂韵晕郧 宰藻灶鄄择蚤灶 袁 悦匀耘晕 悦澡藻灶早鄄遭蚤灶
渊悦燥造造藻早藻 燥枣 蕴蚤枣藻 杂糟蚤藻灶糟藻泽袁 晕葬灶噪葬蚤 哉灶蚤增藻则泽蚤贼赠袁 栽蚤葬灶躁蚤灶摇 猿园园园苑员袁 悦澡蚤灶葬冤
粤遭泽贼则葬糟贼院 哉泽蚤灶早 贼燥贼葬造 砸晕粤 藻曾贼则葬糟贼藻凿 遭赠 悦栽粤月 皂藻贼澡燥凿 葬泽 贼藻皂责造葬贼藻泽袁 贼澡藻 藻曾责则藻泽泽蚤燥灶 责则燥枣蚤造藻泽 燥枣 缘 皂蚤砸晕粤泽 蚤灶 赠燥怎灶早
葬灶凿 皂葬贼怎则藻 造藻葬枣 燥则早葬灶泽 燥枣 孕燥责怎造怎泽 伊 藻怎则葬皂藻则蚤糟葬灶葬 糟造援 耶在澡燥灶早造蚤灶源远爷 憎藻则藻 泽贼怎凿蚤藻凿 遭赠 则藻葬造鄄贼蚤皂藻 泽贼藻皂鄄造燥燥责 砸栽鄄孕悦砸援
栽澡藻 则藻泽怎造贼泽 泽澡燥憎藻凿 贼澡葬贼 贼澡藻 藻曾责则藻泽泽蚤燥灶 燥枣 皂蚤砸员缘怨袁 皂蚤砸员远苑袁 皂蚤砸员苑员袁 葬灶凿 皂蚤砸猿员怨 蚤灶 贼则蚤责造燥蚤凿 赠燥怎灶早 造藻葬增藻泽 憎藻则藻
澡蚤早澡藻则 贼澡葬灶 贼澡燥泽藻 蚤灶 凿蚤责造燥蚤凿袁 澡燥憎藻增藻则袁 贼澡藻 藻曾责则藻泽泽蚤燥灶 燥枣 皂蚤砸员远源 蚤灶 皂葬贼怎则藻 造藻葬增藻泽 燥枣 贼则蚤责造燥蚤凿 憎葬泽 澡蚤早澡藻则 贼澡葬灶 贼澡葬贼 蚤灶
凿蚤责造燥蚤凿援 陨灶 葬凿凿蚤贼蚤燥灶袁 贼澡藻 藻曾责则藻泽泽蚤燥灶 葬灶葬造赠泽蚤泽 燥枣 贼澡藻 糟燥则则藻泽责燥灶凿蚤灶早 皂蚤砸晕粤 贼葬则早藻贼 早藻灶藻泽 泽澡燥憎藻凿 贼澡葬贼 贼澡藻 藻曾责则藻泽泽蚤燥灶 燥枣
贼澡藻 皂蚤砸晕粤泽 葬灶凿 贼澡藻蚤则 糟燥则则藻泽责燥灶凿蚤灶早 贼葬则早藻贼泽 憎藻则藻 灶藻早葬贼蚤增藻 糟燥则则藻造葬贼蚤燥灶 蚤灶 凿蚤责造燥蚤凿 葬灶凿 贼则蚤责造燥蚤凿 孕援 伊 藻怎则葬皂藻则蚤糟葬灶葬 糟造援
耶在澡燥灶早造蚤灶源远爷援 贼澡藻泽藻 枣蚤灶凿蚤灶早泽 泽怎早早藻泽贼藻凿 贼澡葬贼 贼澡藻泽藻 皂蚤砸晕粤 贼葬则早藻贼 早藻灶藻泽 皂葬赠 遭藻 则藻造葬贼藻凿 贼燥 贼澡藻 枣燥则皂葬贼蚤燥灶 燥枣 枣葬泽贼鄄早则燥憎鄄
蚤灶早 贼则葬蚤贼泽 泽澡燥憎藻凿 遭赠 贼则蚤责造燥蚤凿 孕燥责怎造怎泽援
运藻赠 憎燥则凿泽院 孕燥责怎造怎泽 伊 藻怎则葬皂藻则蚤糟葬灶葬 糟造援 耶在澡燥灶早造蚤灶源远爷曰造藻葬枣 贼蚤泽泽怎藻曰酝蚤糟则燥砸晕粤曰砸藻葬造 贼蚤皂藻 砸栽鄄孕悦砸曰藻曾责则藻泽泽蚤燥灶
蕴藻藻和 宰蚤早澡贼皂葬灶 等咱员 原 圆暂首次于 员怨怨猿 年在对秀
丽新小杆线虫突变体进行遗传分析时发现一个 圆圆
灶贼的小分子 砸晕粤 造蚤灶鄄源袁随后许多实验室相继都发现
了此类 皂蚤砸晕粤的存在袁并证明此类小 砸晕粤 在进化
上具有很高的保守性遥 在植物中袁小 砸晕粤 最早是
砸藻蚤澡葬则贼等咱猿暂从拟南芥的小分子文库中获得的袁之后
的研究发现 皂蚤砸晕粤 的靶基因广泛存在于植物的各
个生长阶段和各种代谢途径中袁在植物的生命周期
中参与植物的花尧叶片和根的发育袁响应生物非生物
胁迫等过程遥 如过表达 皂蚤砸员缘远 和 皂蚤砸员缘怨袁其靶基
因分别是 杂孕蕴和 酝再月转录因子家族袁引起拟南芥开
花时间推迟咱源 原 缘暂 遥 过表达 皂蚤砸员远园袁其靶基因是 粤砸云
转录因子家族袁使拟南芥根缺失向地性袁侧根增
多咱远暂 遥 过表达 皂蚤砸员远远袁引起拟南芥叶片辐射状袁顶
林摇 业摇 科摇 学摇 研摇 究 第 圆远 卷
端分生组织不伸展和雌性不育咱苑暂等遥
杨树具有早期速生尧适应性强尧分布广袁容易无
性繁殖等特点袁作为主要的经济木材树种而被广泛
栽培遥 陈成彬等咱愿暂利用染色体分析技术发现许多速
生杨树品系都为三倍体袁如沙兰杨袁银中杨袁中林
源远袁中林 圆园园员 等袁而且在欧洲山杨尧银中杨等杨树的
天然群体中也发现三倍体个体遥 与相应二倍体相
比袁三倍体拥有更快的生长速度袁更大的叶片和更高
的生命活力遥 然而对杨树三倍体速生性状形成的分
子基础研究较少遥 本文以黑杨渊孕燥责怎造怎泽 藻怎则葬皂藻则蚤糟葬鄄
灶葬 糟造援 耶在澡燥灶早造蚤灶 源远冤三倍体和二倍体为材料袁利用
砸栽鄄择孕悦砸对黑杨二倍体和三倍体幼叶和成熟叶片中
的 缘 种 皂蚤砸晕粤渊皂蚤砸猿员怨尧皂蚤砸员苑员尧皂蚤砸员远苑尧皂蚤砸员缘怨 和
皂蚤砸员远源冤的差异表达进行分析袁旨在为进一步揭示
皂蚤砸晕粤在黑杨三倍体速生性状形成过程中的重要
作用奠定基础遥
员摇 材料和方法
员援 员摇 植物材料
实验材料为自然条件下生长的黑杨渊孕燥责怎造怎泽
藻怎则葬皂藻则蚤糟葬灶葬 糟造援 耶在澡燥灶早造蚤灶 源远爷冤二倍体和黑杨三倍
体的幼叶和成熟叶片袁幼叶为顶芽下完全展开的第
员 片叶袁成熟叶片指叶片形态完全建成袁叶片完全展
开且呈深绿色的第 怨 片叶遥 在 远 月下旬采集幼叶和
成熟的叶片袁用无菌水冲洗后迅速放入液氮中冷冻袁
原 愿园益保存袁用于后续的总 砸晕粤提取遥
员援 圆摇 引物
依据探针对应的 郧藻灶藻月葬灶噪序列设计引物袁参照
悦澡藻灶等的方法咱怨暂 袁自行设计黑杨中 缘 种 皂蚤砸晕粤泽 的
引物和探针渊表 员冤遥 并优化提高引物特异性遥 所有
引物均由上海生工合成袁引物序列见表 员遥
表 员摇 皂蚤砸晕粤的引物序列
名称 引物序列渊缘 忆寅猿 忆冤
皂蚤砸员缘怨
杂贼藻皂鄄造燥燥责 孕则蚤皂藻则院
悦栽悦粤粤悦栽郧郧栽郧栽悦郧栽郧郧粤郧栽悦悦郧郧悦粤粤栽栽悦粤郧栽栽郧粤郧郧郧郧粤郧悦栽悦
孕则蚤皂藻则 云院 粤悦粤悦栽悦悦粤郧悦栽郧郧郧悦栽栽郧郧粤栽栽郧粤
孕则蚤皂藻则 砸院 粤粤悦栽郧郧栽郧栽悦郧栽郧郧粤郧栽悦悦郧 渊通用引物冤
孕悦砸 责则蚤皂藻则泽 燥枣 贼葬则早藻贼 早藻灶藻泽院孕则蚤皂藻则 云院 栽郧悦悦栽栽悦栽栽悦悦栽悦悦栽悦悦粤栽悦
孕则蚤皂藻则 砸院栽粤郧栽悦悦栽栽悦郧郧悦栽悦悦悦栽悦粤悦
皂蚤砸员远源
杂贼藻皂鄄造燥燥责 孕则蚤皂藻则院
悦栽悦粤粤悦栽郧郧栽郧栽悦郧栽郧郧粤郧栽悦悦郧郧悦粤粤栽栽悦粤郧栽栽郧粤郧栽郧悦粤悦郧栽郧
孕则蚤皂藻则 云院 粤悦粤悦栽悦悦粤郧悦栽郧郧郧栽郧郧粤郧粤粤郧悦粤
孕悦砸 责则蚤皂藻则 燥枣 贼葬则早藻贼 早藻灶藻泽院孕则蚤皂藻则 云院 栽悦粤粤栽栽悦粤粤郧粤悦悦郧悦栽悦粤郧栽栽
孕则蚤皂藻则 砸院 粤粤郧郧栽郧郧栽郧悦悦栽悦栽栽郧栽栽悦粤
皂蚤砸员远苑
杂贼藻皂鄄造燥燥责 孕则蚤皂藻则院
悦栽悦粤粤悦栽郧郧栽郧栽悦郧栽郧郧粤郧栽悦悦郧郧悦粤粤栽栽悦粤郧栽栽郧粤郧悦粤郧粤栽悦粤栽
孕则蚤皂藻则 云院 粤悦粤悦栽粤悦粤悦悦栽郧粤悦栽郧粤粤郧悦栽郧悦悦
孕悦砸 责则蚤皂藻则 燥枣 贼葬则早藻贼 早藻灶藻泽院孕则蚤皂藻则 云院 悦郧粤粤郧粤粤栽郧悦悦栽粤悦悦栽粤粤栽郧郧
孕则蚤皂藻则 砸院 栽栽栽郧栽郧粤粤悦栽郧郧粤郧郧粤悦粤郧悦栽
皂蚤砸员苑员
杂贼藻皂鄄造燥燥责 孕则蚤皂藻则院
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孕则蚤皂藻则 云院 粤悦粤悦栽栽悦粤郧悦栽粤郧郧栽郧粤栽栽郧粤郧悦悦
孕悦砸 责则蚤皂藻则 燥枣 贼葬则早藻贼 早藻灶藻泽院孕则蚤皂藻则 云院 郧悦悦栽悦悦粤郧粤郧栽栽郧栽栽栽悦栽栽悦悦
孕则蚤皂藻则 砸院 悦栽郧悦栽栽悦郧栽粤粤栽悦粤栽栽悦悦悦栽郧
皂蚤砸猿员怨
杂贼藻皂鄄造燥燥责 孕则蚤皂藻则院
悦栽悦粤粤悦栽郧郧栽郧栽悦郧栽郧郧粤郧栽悦悦郧郧悦粤粤栽栽悦粤郧栽栽郧粤郧郧郧郧粤郧悦栽悦
孕则蚤皂藻则 云院 粤悦粤悦栽悦悦粤郧悦栽粤郧郧栽栽郧郧粤悦栽郧粤粤
孕悦砸 责则蚤皂藻则 燥枣 贼葬则早藻贼 早藻灶藻泽院孕则蚤皂藻则 云院 栽粤粤郧悦悦栽粤悦栽悦郧粤栽栽粤粤粤郧悦粤悦粤郧
孕则蚤皂藻则 砸院 悦栽悦郧栽栽粤郧栽栽郧栽悦栽悦郧栽悦悦栽悦栽郧
员愿杂 则砸晕粤 孕则蚤皂藻则 云院 栽悦粤粤悦栽栽栽悦郧粤栽郧郧栽粤郧郧粤栽粤郧栽郧
孕则蚤皂藻则 砸院 悦悦郧栽郧栽悦粤郧郧粤栽栽郧郧郧栽粤粤栽栽栽
源猿
专刊 王摇 楠等院黑杨三倍体与二倍体叶片中 皂蚤砸晕粤表达差异研究
员援 猿摇 总 砸晕粤提取
参照 运蚤藻枣藻则等人的方法咱员园暂 袁分别提取 猿 株黑杨
二倍体和三倍体 砸晕粤 混匀形成 砸晕粤 池遥 用 员援 园豫
琼脂糖凝胶和 晕阅鄄员园园园 分光光度仪检测 砸晕粤 的质
量和浓度遥
员援 源摇 实时定量 砸栽鄄孕悦砸渊砸栽鄄择孕悦砸冤检测
员援 源援 员摇 反转录摇 取 缘 滋早总 砸晕粤袁加入 员 滋蕴 缘园园 滋早
窑皂蕴 原员 燥造蚤早燥 渊凿栽冤员愿袁员 滋蕴 员园 皂皂燥造窑蕴 原员 凿晕栽孕泽袁无砸晕粤酶水补至 员圆 滋蕴遥 于 远缘益保温 缘 皂蚤灶 后袁迅速
置于冰上遥 然后加入 缘 伊反应缓冲液 源 滋蕴尧园援 员 皂燥造
窑蕴 原员二硫苏糖醇渊阅栽栽冤圆 滋蕴 和 员 滋蕴 无 砸晕粤 酶尧
阅晕粤酶水袁轻微混匀袁并于 源圆益保温 圆 皂蚤灶遥 在反应
体系中加入 杂怎责藻则杂糟则蚤责贼 陨陨 反转录酶渊 陨灶增蚤贼则燥早藻灶袁美
国冤员 滋蕴袁上下颠倒几次袁轻微混匀遥 源圆益下保温 缘园
皂蚤灶袁苑园益终止酶反应 员缘 皂蚤灶遥
员援 源援 圆摇 砸栽鄄择孕悦砸摇 定量 孕悦砸 反应采用罗氏公司的
云葬泽贼杂贼葬则贼 杂再月砸 郧则藻藻灶 酝葬泽贼藻则试剂盒袁反应体系如下遥
反应程序在伯乐公司的 酝赠 蚤匝缘 定量 孕悦砸 仪上进
行袁反应体积为 圆缘 滋蕴袁包括院员 滋蕴 糟阅晕粤渊砸晕粤 为
员园园 灶早冤袁圆 伊 杂再月砸 郧则藻藻灶 酝蚤曾 员圆援 缘 滋蕴袁正向 孕悦砸
引物 园援 缘 滋蕴袁反向 孕悦砸 引物 园援 缘 滋蕴袁超纯水补足至
圆缘 滋蕴遥 每个反应重复 猿 次遥 定量 孕悦砸 反应程序院
怨缘益预变性 猿园 泽袁怨缘益变性 缘 泽袁远园益退火 圆缘 泽袁苑圆益
延伸 猿园 泽袁源缘 个循环袁怨缘益变性 员 皂蚤灶袁缘缘益 员 皂蚤灶袁
缘缘益开始 愿员 个循环袁每个循环上升 园援 缘益到 怨缘益遥
以 员愿 杂 则砸晕粤 基因作为内参袁清水模板为阴性对照袁
定量数据分析使用 月蚤燥 原 砸葬凿 蚤匝缘 软件袁采用 圆 原 驻驻悦栽
的分析方法计算相对表达值遥
员援 缘摇 孕悦砸产物的克隆和测序
利用 阅晕粤 凝胶回收试剂盒从琼脂糖凝胶中回
收扩增片段袁与 责耘粤杂再鄄栽 载体连接后袁转化 阅匀缘琢
感受态细胞袁挑取阳性克隆袁鉴定后由北京六合华大
基因科技公司进行核苷酸序列测定遥 结合公布的
皂蚤砸晕粤 序列对测序结果进行分析遥
员援 远摇 皂蚤砸晕粤靶基因的 砸栽鄄择孕悦砸
靶基因的序列由 澡贼贼责院 辕 辕 责造葬灶贼早则灶援 灶燥遭造藻援 燥则早 辕
责泽砸晕粤栽葬则早藻贼 辕获得袁在 晕悦月陨 进行比对袁根据所参考
的一些文献及靶基因的功能袁筛选出合适的基因遥
靶基因的反转录所用引物为 燥造蚤早燥渊凿栽冤员愿袁所设计的孕悦砸引物见表 员遥 反转录程序参照 员援 源援 员袁孕悦砸扩增
为 圆园 滋蕴体系袁包括 糟阅晕粤模板 员 滋蕴袁正反向引物各
员 滋蕴袁凿晕栽孕 园援 源 滋蕴袁 则栽葬择 园援 圆 滋蕴袁 员园 伊 孕悦砸 月怎枣枣藻则 圆
滋蕴袁 超纯水补足至 圆园 滋蕴遥 孕悦砸 反应程序院怨源益 圆
皂蚤灶曰怨源益 猿园 泽袁远园益 猿园 泽袁苑圆益 猿园 泽袁猿缘 个循环曰苑圆益
延伸 缘 皂蚤灶遥 之后用 猿豫的琼脂糖凝胶电泳检测遥
克隆测序步骤同 员援 缘袁若克隆测序验证正确袁则进行
砸栽鄄择孕悦砸遥 砸栽鄄择孕悦砸所用引物同表 员袁程序同 员援 源袁
程序为院怨缘益 缘 皂蚤灶曰怨缘益 猿园 泽袁远园益 猿园 泽 缘园 伊 砸藻鄄
责藻葬贼泽袁怨缘益 员 皂蚤灶袁缘缘益 员 皂蚤灶袁缘缘益 怨缘益 以每循环
园援 缘益温度上升 愿员 伊 砸藻责藻葬贼泽渊荧光检测冤袁反应后所
得到的数据用 月蚤燥鄄砸葬凿 蚤匝缘 软件进行分析遥
圆摇 结果与分析
圆援 员摇 黑杨叶片总 砸晕粤的分离
采用 悦栽粤月 法成功地从黑杨幼叶和成熟叶片中
分离出总 砸晕粤袁员援 园豫的琼脂糖凝胶电泳检测结果
表明袁圆愿杂和 员愿杂 则砸晕粤 谱带清晰渊图 员冤袁未见到蛋
白与 阅晕粤的谱带袁纯度较高袁没有出现降解袁韵阅圆远园 辕
韵阅圆愿园在 员援 怨苑 圆援 园圆 之间袁说明提取出来的 砸晕粤质
量较高袁能够成功用于后续实验遥
员院黑杨二倍体幼叶曰 圆院黑杨二倍体成熟叶片曰 猿院黑杨三倍体
幼叶曰 源院黑杨三倍体成熟叶片
图 员摇 黑杨叶片总 砸晕粤 的电泳图谱
圆援 圆摇 皂蚤砸晕粤及靶基因的反转录鄄择孕悦砸鉴定
圆援 圆援 员摇 皂蚤砸晕粤的反转录鄄择孕悦砸摇 由于 皂蚤砸晕粤 序列
较短袁并且同一家族内的 皂蚤砸晕粤 只有几个碱基的差
异袁 给设计 砸栽鄄择孕悦砸引物带来一定的困难遥 本实验
采用通过带有颈环结构的引物对 皂蚤砸晕粤 进行反转
录袁颈环引物一般长约 源缘 遭责袁缘忆端的序列为通用序
列袁能够形成颈环结构袁猿忆端的序列则与 皂蚤砸晕粤 的
一端互补袁反转录之后的 砸栽鄄择孕悦砸袁反向引物为通用
引物渊缘忆粤粤悦栽郧郧栽郧栽悦郧栽郧郧粤郧栽悦悦郧 猿忆冤袁根据通用
的颈环结构部分设计袁正向引物为 皂蚤砸晕粤 特异的引
物遥 通过 孕悦砸 产物的克隆测序来鉴定是否含有该
种 皂蚤砸晕粤遥 笔者采用这种方法成功地对黑杨叶片
组织的 皂蚤砸晕粤泽 进行了扩增袁结果表明袁 针对
皂蚤砸员缘怨尧皂蚤砸员远源尧皂蚤砸员远苑尧皂蚤砸员苑员 和 皂蚤砸猿员怨 这 缘 种
皂蚤砸晕粤泽袁以总 砸晕粤为模版袁均得到了一条大小约 愿园
遭责的扩增片段渊图 圆援 员 缘冤遥 经与 责耘粤杂再鄄栽 载体
缘猿
林摇 业摇 科摇 学摇 研摇 究 第 圆远 卷
连接后克隆测序袁结果证明扩增片段包含 皂蚤砸晕粤泽
的完整序列遥
酝院缘园 遭责 阅晕粤 分子标记曰泳道 员 缘院 皂蚤砸员缘怨尧皂蚤砸员远源尧皂蚤砸员远苑尧
皂蚤砸员苑员尧皂蚤砸猿员怨
图 圆摇 采用颈环引物反转录 孕悦砸扩增 皂蚤砸晕粤片段
圆援 圆援 圆 摇 皂蚤砸晕粤 靶基因的反转录鄄择孕悦砸摇 因各 皂蚤砸鄄
晕粤靶基因长度不同袁为保证 砸栽鄄择孕悦砸 效果最佳袁选
取各靶基因中 员园园 圆园园 遭责 的片段进行 孕悦砸扩增遥
扩增的 皂蚤砸员缘怨 靶基因渊贼鄄皂蚤砸员缘怨冤长度应为 员圆愿 遭责袁
皂蚤砸员远源 靶基因渊贼鄄皂蚤砸员远源冤长度应为 员缘园 遭责袁皂蚤砸员远苑
靶基因渊贼鄄皂蚤砸员远苑冤长度应为 员猿缘 遭责袁皂蚤砸员苑员 靶基因
渊贼鄄皂蚤砸员苑员冤长度应为 员园怨 遭责袁 皂蚤砸猿员怨 靶基因 渊 贼鄄
皂蚤砸猿员怨冤长度应为 员缘圆 遭责遥 用 猿豫的琼脂糖凝胶电
泳检测扩增片段袁结果均得到预期大小的扩增片段
渊图 猿冤遥 经与 责耘粤杂再鄄栽 载体连接后进行克隆测序袁
结果证明扩增出来的片段包含各 皂蚤砸晕粤泽 靶基因所
选取片段的完整序列遥
酝院缘园 遭责 阅晕粤 分子标记曰泳道 员 缘院 贼鄄皂蚤砸员缘怨尧贼鄄皂蚤砸员远源尧贼鄄皂蚤砸员远苑尧
贼鄄皂蚤砸员苑员尧贼鄄皂蚤砸猿员怨
图 猿摇 皂蚤砸晕粤靶基因扩增片段
圆援 猿摇 候选 皂蚤砸晕粤和 皂蚤砸晕粤靶基因的差异表达
以 员愿杂 则砸晕粤 为内参袁实时荧光定量 孕悦砸 检测
皂蚤砸员缘怨尧皂蚤砸员远源尧皂蚤砸员远苑尧皂蚤砸员苑员 及 皂蚤砸猿员怨 在二倍
体尧三倍体黑杨各阶段叶片中的相对表达量遥 扩增
完成后进行熔解曲线分析袁结果均为单峰袁表明无非
特异性扩增和引物二聚体的产生袁扩增特异性较好遥
根据 皂蚤砸员缘怨尧皂蚤砸员远源尧皂蚤砸员远苑尧皂蚤砸员苑员 及 皂蚤砸猿员怨 和
内参 员愿杂 则砸晕粤 的 悦栽 值袁以各 皂蚤砸晕粤 及 皂蚤砸晕粤 靶
基因在二倍体幼叶中的表达量为对照袁圆 原 驻驻悦栽法计算
各基因的相对表达量遥 从图 源 中可以看出院皂蚤砸员缘怨
在三倍体幼叶中的相对表达量最高袁为二倍体幼叶
中的 圆援 愿怨苑 倍袁相应的袁所选择的靶基因 酝再月 家族
中的 酝再月猿猿 在三倍体幼叶中的表达量相对最低袁仅
为二倍体幼叶中的 园援 员猿远 倍袁应该是由于三倍体幼
叶中丰富的 皂蚤砸员缘怨 介导了其靶基因 酝再月猿猿 的降
解袁使其表达量较低袁而在 皂蚤砸员缘怨 表达少的时期袁如
二倍体老叶中袁其靶基因被降解较少袁从而表达量较
为丰富袁为二倍体新叶中的 员援 源员苑 倍遥 皂蚤砸员远苑渊图
源冤在三倍体的幼叶阶段显著高于二倍体同期袁表达
量为二倍体幼叶中的 圆援 缘员 倍袁而老叶阶段略低于二
倍体袁而相对应的靶基因 粤砸云愿 的表达随着 皂蚤砸员远苑
的表达下降而上调袁在幼叶阶段低于二倍体同期袁为
二倍体幼叶中表达量的 园援 猿缘源 倍袁在老叶阶段高于
二倍体遥 皂蚤砸员苑员渊图 源冤在三倍体幼叶阶段的表达量
为二倍体幼叶阶段中的 员援 猿怨 倍袁且三倍体中各个阶
段都比二倍体中表达量高曰而靶基因 郧砸粤杂缘怨 在三
倍体中表达降低的程度略小袁为二倍体的 园援 远源 倍袁
并且相应的袁郧砸粤杂缘怨 在二倍体和三倍体老叶中的表
达量较幼叶中均有增加袁且在三倍体各阶段的表达
量都比二倍体更少遥 皂蚤砸猿员怨渊图 源冤在三倍体幼叶中
的表达量为二倍体中的 员援 怨源愿 倍袁且三倍体中各个
阶段都比二倍体中表达量高袁相应的袁其靶基因 悦陨晕
在三倍体中的表达量较低袁为二倍体的 园援 员圆源袁但是
皂蚤砸猿员怨 在三倍体老叶中的表达量相对二倍体幼叶
较低袁为 园援 苑苑源 倍袁但是 悦陨晕的表达量也相对二倍体
幼叶较低袁为 园援 圆源远 倍袁这可能是由于 皂蚤砸猿员怨 除了
调控 栽悦孕转录因子家族外袁也调控酝再月转录因子家
族的部分成员袁同时 栽悦孕 家族也受到本身的内含子
的剪切作用的影响袁因此其表达量的消长关系不能
完全对应遥 但是由定量结果可见袁二倍体幼叶阶段
及三倍体各生长阶段 悦陨晕 基因的表达量都较低遥
皂蚤砸员远源渊图 源冤和其他几个 皂蚤砸晕粤 不同袁在二倍体
中袁老叶中的表达量较幼叶叶中增加袁为二倍体幼叶
的 员援 远源圆 倍袁在三倍体中也是类似的情况袁三倍体老
叶中的表达量为三倍体幼叶的 员郾 员源苑 倍袁相应的袁其
靶基因 晕粤酝蛋白的表达量在二倍体和三倍体老叶
中较幼叶中均有减少遥
猿摇 讨论
植物中的 皂蚤砸晕粤 及其对植物生长发育的影响
远猿
专刊 王摇 楠等院黑杨三倍体与二倍体叶片中 皂蚤砸晕粤表达差异研究
粤院皂蚤砸晕粤 砸栽鄄择孕悦砸曰月院皂蚤砸晕粤靶基因 砸栽鄄择孕悦砸袁圆曾鄄员尧 猿曾鄄员 代表幼嫩的叶片袁圆曾鄄圆尧猿曾鄄圆 代表成熟叶片
图 源摇 皂蚤砸晕粤及 皂蚤砸晕粤靶基因在二倍体和三倍体叶片不同阶段的差异表达
是植物生物学研究领域中的一个热点袁植物 皂蚤砸晕粤
可以调节生长机制袁维持正常生理活动袁影响植物发
育过程遥 如 孕葬造葬贼灶蚤噪 等发现 皂蚤砸猿员怨 在野生型植株
的芽顶端组织尧花器官和果实中均有表达袁通过对
躁葬憎鄄阅基因进行突变研究袁发现 皂蚤砸猿员怨 能通过靶向
作用于 栽悦孕 转录因子渊 栽月员 辕 悦再悦 辕 孕悦云泽袁栽悦孕冤基因
家族成员来调控植物叶片的形态建成袁皂蚤砸猿员怨 过量
表达导致植物的叶片偏上生长尧果实畸形尧叶片边缘
锯状化和开花期延迟等一系列异常的多效表型
渊责造藻蚤燥贼则燥责蚤糟 责澡藻灶燥贼赠责藻冤袁尤其是 栽悦孕源 转录因子的靶
向结合咱员员暂 遥 作者的试验表明袁 皂蚤砸猿员怨 可能与控制
叶片生长发育有关遥 皂蚤砸员缘怨渊图 源冤在三倍体幼叶中
的相对表达量最高袁所选择的靶基因 酝再月 家族中的
酝再月猿猿 在三倍体幼叶中的表达量相对最低袁仅为二
倍体幼叶中的 园援 员猿远 倍袁应该是由于三倍体幼叶中
丰富的 皂蚤砸员缘怨 介导了其靶基因 酝再月猿猿 的降解袁使
其表达量较低袁而在 皂蚤砸员缘怨 表达低的时期袁如二倍
体成熟叶中袁其靶基因被降解较少袁从而表达量较为
丰富袁为二倍体新叶中的 员援 源员苑 倍遥 有研究表明
酝再月转录因子家族的几个成员 酝再月猿猿尧酝再月远缘尧和
酝再月员园员 等是脱落酸 粤月粤 应激反应中的正调控因
子袁粤月粤对细胞的分裂与伸长起抑制作用袁是一种
较强的生长抑制剂袁可抑制整株植物或离体器官的
生长咱员圆暂 遥 皂蚤砸员缘怨 的高表达可以抑制 酝再月 转录因
子的表达水平袁使植物对 粤月粤 的敏感性降低袁从而
促进植物迅速生长遥 皂蚤砸员远苑渊图 源冤在三倍体的幼叶
阶段显著高于二倍体同期袁而成熟叶阶段略低于二
倍体袁而相对应的靶基因 粤砸云愿 的表达随着 皂蚤砸员远苑
的表达下降而上调袁在幼叶阶段低于二倍体同期袁在
成熟叶阶段高于二倍体遥 其靶基因 粤砸云 家族是调
节生长素应答反应尧控制基因表达的直接分子袁是生
长素信号向下传导的开关遥 粤砸云愿 可以调节 韵泽郧匀
猿鄄圆 的表达袁而 韵泽郧匀猿鄄圆 催化内源生长素和氨基酸
的结合袁这表明了 皂蚤砸员远苑鄄粤砸云愿鄄韵泽郧匀猿鄄圆 通路对平
衡活性 陨粤粤 的水平起重要作用遥 游离 陨粤粤 含量的
变化不仅影响生长发育袁还影响水稻对生物和非生
物胁迫的抗性咱员猿暂 遥 三倍体幼叶高表达的 皂蚤砸员远苑 有
利于幼叶的生长袁而其成熟叶阶段的下调则可以增
强三倍体对环境胁迫的耐受性遥 皂蚤砸员苑员渊图 源冤在三
倍体中各个阶段都比二倍体中表达量高曰而靶基因
郧砸粤杂缘怨 在三倍体中表达降低的程度略小袁为二倍体
的 园援 远源 倍袁并且相应的袁郧砸粤杂缘怨 在二倍体和三倍体
成熟叶中的表达量较幼叶中均有增加袁且在三倍体
各阶段的表达量都比二倍体更少遥 皂蚤砸员苑员 可以调
控 郧砸粤杂转录因子家族的基因袁郧砸粤杂家族是植物特
有的转录因子袁有研究证明该家族基因在植物根的
发育尧分生组织的形成尧成霉素信号转导过程中起着
非常重要的作用咱员源 原 员缘暂 袁郧砸粤杂缘怨 调控生长素输出载
体 孕陨晕基因的表达遥 三倍体两个生长阶段的叶片中
皂蚤砸员苑员 的表达都较二倍体高袁并且在幼叶中的表达
高于成熟叶袁说明 皂蚤砸员苑员 可能通过负调控 郧砸粤杂 转
录因子家族的表达袁进而调节输出载体 孕陨晕 的基因
表达以影响生长素的运输遥 皂蚤砸猿员怨渊图 源冤在三倍体
幼叶中的表达量为二倍体中的 员援 怨源愿 倍袁其靶基因
悦陨晕在三倍体中的表达量较低袁但 皂蚤砸猿员怨 在三倍体
成熟叶中的表达量相对二倍体幼叶较低袁 靶基因
苑猿
林摇 业摇 科摇 学摇 研摇 究 第 圆远 卷
悦陨晕的表达量也相对二倍体幼叶较低袁这可能是由
于 皂蚤砸猿员怨 除了调控 栽悦孕 转录因子家族外袁也调控
酝再月转录因子家族的部分成员袁同时 栽悦孕家族也受
到本身的内含子的剪切作用的影响袁其表达量的消
长关系不能完全对应遥 定量结果可以看出袁二倍体
幼叶阶段及三倍体各生长阶段 悦陨晕基因的表达量都
较低袁有研究表明植物叶片的表型是由 皂蚤砸晕粤 对
栽悦孕基因的多重调控引起的袁悦陨晕 属于 栽悦孕 基因的
悦再悦 辕 栽月陨亚家族的 悦陨晕 亚类遥 在拟南芥中袁植株在
皂蚤砸猿员怨 过表达时表现出同金鱼草 糟蚤灶突变体相同的
性状袁即相对于野生型叶片更大咱员远 原 员愿暂 遥 这也就解释
了 皂蚤砸猿员怨 在三倍体叶片中高表达袁致使三倍体黑杨
的叶片比二倍体叶片大几倍的原因遥 皂蚤砸员远源渊图 源冤
和其他几个 皂蚤砸晕粤 不同袁在二倍体中袁成熟叶中的
表达量较幼叶中高袁其靶基因 晕粤酝蛋白的表达量在
二倍体和三倍体成熟叶中较幼叶中均有降低遥 有研
究指出袁皂蚤砸员远源 通过调控 晕粤悦 转录因子家族来调
节器官边界的大小遥 晕粤酝 蛋白是 晕粤悦 转录因子家
族中的一员袁参与顶端分生组织的形成和发
育咱员怨 原 圆员暂 遥 在幼叶中靶基因的表达低于成熟叶中的
表达袁推测三倍体的叶片的生长优势可能与幼叶中
皂蚤砸员远源 的高表达相关遥 运蚤皂 等人在拟南芥的研究
中发现袁皂蚤砸员远源 还调控 晕粤悦 转录因子 韵砸耘员袁韵砸耘员
是一个在叶片衰老和死亡过程中的正调控因子遥
皂蚤砸员远源 在叶片衰老过程中起负调控作用咱圆圆暂 袁这样
就可以解释在成熟叶中 皂蚤砸员远源 在三倍体中的表达
量高于二倍体的原因袁从而使三倍体叶片延缓衰老
的效果更为明显遥
上述的结果表明 皂蚤砸晕粤 在黑杨早期对生长起
着非常重要的作用袁并且可能对植物的生长发育起
着正调控作用袁相关的功能研究正在进行中遥
参考文献院
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咱圆员暂 谭建新袁孙玉洁援 表观基因组学研究方法进展与评价咱 允暂 援 遗
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咱圆圆暂 运蚤皂 允袁 宰燥燥 匀袁 运蚤皂 允袁 藻贼 葬造援 栽则蚤枣怎则糟葬贼藻 枣藻藻凿鄄枣燥则憎葬则凿 则藻早怎造葬贼蚤燥灶 燥枣
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