全 文 ：第 源愿 卷 第 苑 期
圆 园 员 圆 年 苑 月
林 业 科 学
杂悦陨耘晕栽陨粤 杂陨蕴灾粤耘 杂陨晕陨悦粤耘 灾燥造郾 源愿袁晕燥郾 苑允怎造援 袁圆 园 员 圆
收稿日期院圆园员圆 原 园圆 原 圆怨曰 修回日期院圆园员圆 原 园缘 原 圆员遥
基金项目院山东省科技发展计划重点项目渊圆园园怨郧郧员园园园怨园园圆冤遥
鄢冯殿齐为通讯作者遥
转 粤皂郧杂基因红叶石楠的分子检测及抗寒性分析鄢
孙海伟员袁圆 摇 刘摇 静圆 摇 宋摇 健员袁猿 摇 翁曼丽猿 摇 罗摇 磊圆 摇 黄艳艳圆 摇
张摇 虹圆 摇 牛庆霖员 摇 王摇 斌猿 摇 冯殿齐员袁 圆
渊员援山东农业大学摇 泰安 圆苑员园员愿曰 圆援泰山林业科学研究院摇 泰安 圆苑员园园园曰
猿援中国科学院遗传与发育生物学研究所摇 北京 员园园员园员冤
摘摇 要院摇 对转 粤皂郧杂基因渊从沙冬青中克隆的肌醇半乳糖苷合成酶基因冤的红叶石楠植株进行多项分子检测
渊 孕悦砸袁杂燥怎贼澡藻则灶袁砸栽鄄孕悦砸冤 袁结果表明 粤皂郧杂基因已经整合到转基因株系 砸远 和 砸苑 的基因组 阅晕粤 中袁并检测到
转录水平上的表达遥 随后袁经对 砸远 和 砸苑 两个转基因株系进行连续 远 代芽切扩繁继代株系的 孕悦砸 检测袁发
现导入的 粤皂郧杂基因传递到所有芽切扩繁后代植株中遥 植株抗寒能力试验结果表明袁在相同低温处理条件
下袁转基因株系均比未转基因植株的存活率要高遥 相对电导率测定结果表明袁随着处理温度的降低袁 圆 个转
基因株系相对电导率升高的程度明显低于未转基因的对照植株遥 低温半致死温度渊 蕴栽缘园 冤测定结果表明袁 圆
个转基因株系渊砸远 和 砸苑冤的 蕴栽缘园明显低于未转基因的对照植株遥 上述结果说明导入的 粤皂郧杂 基因提高了转
基因株系的抗寒性遥
关键词院摇 红叶石楠曰 转基因植株曰 沙冬青曰 肌醇半乳糖苷合成酶基因曰 抗寒性曰 分子检测
中图分类号院杂苑员愿郾 源远曰 杂苑员愿郾 源猿摇 摇 摇 文献标识码院粤摇 摇 摇 文章编号院员园园员 原 苑源愿愿渊圆园员圆冤园苑 原 园园猿园 原 园怨
酝燥造藻糟怎造葬则 陨凿藻灶贼蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶 葬灶凿 悦燥造凿鄄砸藻泽蚤泽贼葬灶糟藻 粤灶葬造赠泽蚤泽 燥枣 贼澡藻 粤皂郧杂
栽则葬灶泽早藻灶蚤糟 孕澡燥贼蚤灶蚤葬 伊 枣则葬泽藻则蚤 耶砸藻凿 砸燥遭蚤灶爷 孕造葬灶贼泽
杂怎灶 匀葬蚤憎藻蚤员袁圆 摇 蕴蚤怎 允蚤灶早 圆 摇 杂燥灶早 允蚤葬灶 员袁猿 摇 宰藻灶早 酝葬灶造蚤猿 摇 蕴怎燥 蕴藻蚤圆 摇 匀怎葬灶早 再葬灶赠葬灶圆 摇
在澡葬灶早 匀燥灶早圆 摇 晕蚤怎 匝蚤灶早造蚤灶员 摇 宰葬灶早 月蚤灶猿 摇 云藻灶早 阅蚤葬灶择蚤 员袁圆
渊员援 杂澡葬灶凿燥灶早 粤早则蚤糟怎造贼怎则葬造 哉灶蚤增藻则泽蚤贼赠摇 栽葬蚤爷葬灶 圆苑员园员愿曰 圆援 栽葬蚤泽澡葬灶 陨灶泽贼蚤贼怎贼藻 燥枣 云燥则藻泽贼则赠 杂糟蚤藻灶糟藻摇 栽葬蚤爷葬灶 圆苑员园园园曰
猿援 陨灶泽贼蚤贼怎贼藻 燥枣 郧藻灶藻贼蚤糟泽 葬灶凿 阅藻增藻造燥责皂藻灶贼葬造 月蚤燥造燥早赠袁 悦澡蚤灶藻泽藻 粤糟葬凿藻皂赠 燥枣 杂糟蚤藻灶糟藻泽摇 月藻蚤躁蚤灶早 员园园员园员冤
粤遭泽贼则葬糟贼院摇 粤 枣藻憎 责葬责藻则泽 则藻责燥则贼藻凿 贼澡藻 泽怎糟糟藻泽泽枣怎造 贼则葬灶泽枣燥则皂葬贼蚤燥灶 葬灶凿 藻曾责则藻泽泽蚤燥灶 燥枣 憎燥燥凿赠 责造葬灶贼 糟燥造凿鄄则藻泽蚤泽贼葬灶贼 早藻灶藻 蚤灶 枣燥则藻泽贼
贼则藻藻援 砸藻糟藻灶贼造赠袁 憎藻 澡葬增藻 燥遭贼葬蚤灶藻凿 粤皂郧杂渊早葬造葬糟贼蚤灶燥造 泽赠灶贼澡葬泽藻 早藻灶藻 燥枣 粤皂皂燥责蚤责贼葬灶贼澡怎泽 皂燥灶早燥造蚤糟怎泽冤 贼则葬灶泽早藻灶蚤糟 孕澡燥贼蚤灶蚤葬 伊
枣则葬泽藻则蚤 耶砸藻凿 砸燥遭蚤灶爷 责造葬灶贼泽援 栽澡蚤泽 责葬责藻则 则藻责燥则贼泽 贼澡藻 皂燥造藻糟怎造葬则 蚤凿藻灶贼蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶 燥枣 贼澡藻 贼则葬灶泽早藻灶蚤糟 责造葬灶贼泽 遭赠 孕悦砸袁 杂燥怎贼澡藻则灶 遭造燥贼
葬灶凿 砸栽鄄孕悦砸 葬灶葬造赠泽藻泽援 砸藻泽怎造贼泽 蚤灶凿蚤糟葬贼藻凿 贼澡葬贼 贼澡藻 粤皂郧杂 早藻灶藻 澡葬凿 蚤灶贼藻早则葬贼藻凿 蚤灶贼燥 贼澡藻 早藻灶燥皂蚤糟 阅晕粤 燥枣 贼则葬灶泽早藻灶蚤糟 责造葬灶贼泽 燥枣
砸远 葬灶凿 砸苑 造蚤灶藻泽 葬灶凿 藻曾责则藻泽泽藻凿 葬贼 贼则葬灶泽糟则蚤责贼蚤燥灶葬造 造藻增藻造援 粤枣贼藻则 远 早藻灶藻则葬贼蚤燥灶泽 燥枣 责则燥责葬早葬贼蚤燥灶 遭赠 泽澡燥燥贼 糟怎贼贼蚤灶早泽袁 蚤贼 憎葬泽 枣燥怎灶凿
贼澡葬贼 贼澡藻 贼则葬灶泽枣燥则皂藻凿 粤皂郧杂 早藻灶藻 憎葬泽 凿藻贼藻糟贼藻凿 蚤灶 葬造造 燥枣 贼澡藻 藻曾葬皂蚤灶藻凿 责造葬灶贼泽 蚤灶 葬造造 燥枣 贼澡藻 远 早藻灶藻则葬贼蚤燥灶泽 责则燥责葬早葬贼藻凿 遭赠
糟怎贼贼葬早藻援 砸藻泽怎造贼泽 燥枣 糟燥造凿 则藻泽蚤泽贼葬灶糟藻 贼藻泽贼泽 责燥蚤灶贼藻凿 燥怎贼 贼澡葬贼 蚤灶 葬造造 燥枣 贼澡藻 造燥憎 贼藻皂责藻则葬贼怎则藻 贼则藻葬贼皂藻灶贼泽袁 贼澡藻 贼则葬灶泽早藻灶蚤糟 造蚤灶藻泽
藻曾澡蚤遭蚤贼藻凿 澡蚤早澡藻则 泽怎则增蚤增葬造 则葬贼藻泽 贼澡葬灶 贼澡葬贼 燥枣 贼澡藻 怎灶贼则葬灶泽枣燥则皂藻凿 糟燥灶贼则燥造 责造葬灶贼泽援 粤枣贼藻则 糟燥造凿 贼则藻葬贼皂藻灶贼袁 贼则葬灶泽早藻灶蚤糟 责造葬灶贼泽 澡葬凿
造藻泽泽 蚤灶糟则藻葬泽藻 蚤灶 贼澡藻 则藻造葬贼蚤增藻 藻造藻糟贼则蚤糟葬造 糟燥灶凿怎糟贼蚤增蚤贼赠 渊砸耘悦冤 贼澡葬灶 怎灶贼则葬灶泽枣燥则皂藻凿 糟燥灶贼则燥造 责造葬灶贼泽援 蕴栽缘园 燥枣 贼则葬灶泽早藻灶蚤糟 造蚤灶藻泽 燥枣 砸远葬灶凿 砸苑 憎葬泽 则藻皂葬则噪葬遭造藻 造燥憎藻则 贼澡葬灶 贼澡葬贼 燥枣 贼澡藻 怎灶贼则葬灶泽枣燥则皂藻凿 糟燥灶贼则燥造 责造葬灶贼泽援 栽澡藻泽藻 则藻泽怎造贼泽 蚤灶凿蚤糟葬贼藻凿 贼澡葬贼 贼澡藻 蚤皂责燥则贼藻凿 粤皂郧杂
早藻灶藻 蚤灶糟则藻葬泽藻凿 贼澡藻 糟燥造凿 则藻泽蚤泽贼葬灶糟藻 燥枣 贼则葬灶泽早藻灶蚤糟 造蚤灶藻泽 砸远 葬灶凿 砸苑援
运藻赠 憎燥则凿泽院 摇 孕澡燥贼蚤灶蚤葬 伊 枣则葬泽藻则蚤 耶 砸藻凿 砸燥遭蚤灶爷曰 贼则葬灶泽早藻灶蚤糟 责造葬灶贼曰 粤皂皂燥责蚤责贼葬灶贼澡怎泽 皂燥灶早燥造蚤糟怎泽曰 粤皂郧杂 早藻灶藻曰 糟燥造凿
则藻泽蚤泽贼葬灶糟藻曰 皂燥造藻糟怎造葬则 蚤凿藻灶贼蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶
摇 摇 红叶石楠渊孕澡燥贼蚤灶蚤葬 伊 枣则葬泽藻则蚤 耶砸藻凿 砸燥遭蚤灶爷冤由石
楠渊孕澡燥贼蚤灶蚤葬 泽藻则则怎造葬贼葬冤和光叶石楠渊孕澡燥贼蚤灶蚤葬 早造葬遭则葬冤
杂交育成渊黄美娟等袁 圆园园猿冤袁被誉为野红叶绿篱之
王冶袁是用途广泛的乔尧灌兼用型高档彩色树种袁具
有生长快尧耐修剪尧观赏价值高的特点袁深受人们喜
爱袁是当前重要的热点彩色绿化树种之一渊芦建国
摇 第 苑 期 孙海伟等院 转 粤皂郧杂基因红叶石楠的分子检测及抗寒性分析
等袁 圆园园苑曰 杜建会等袁 圆园园怨冤遥 针对红叶石楠抗寒性
较差尧冬季在我国北方易受到低温冻害的缺点袁近年
来国内研究人员对红叶石楠抗寒性尧变色机制尧越冬
适应性等方面开展了相关研究袁以期通过驯化和抗
寒适应性筛选得到抗寒品种渊芦建国等袁 圆园园愿曰 杨
静等袁 圆园园愿冤袁但一直没有选育成功的报道遥 随着分
子生物学的发展袁利用基因工程技术将抗寒基因转
到植物体内培育抗寒品种成为当前林木抗寒育种研
究的热点之一 渊 郧则蚤枣枣蚤贼澡 藻贼 葬造援袁 员怨怨圆曰 栽澡燥皂葬泽澡燥憎袁
员怨怨愿曰 宰燥则则葬造造 藻贼 葬造援袁 员怨怨愿冤袁也为红叶石楠抗寒育种
开辟了一条新途径遥
肌醇半乳糖苷合成酶渊 早葬造葬糟贼蚤灶燥造 泽赠灶贼澡葬泽藻袁郧杂袁
早期称之为 郧燥造杂冤催化 哉阅孕 原半乳糖和 皂赠燥 原肌糖
合成肌醇半乳糖苷的反应袁该反应是蜜三糖家族的
低聚糖渊则葬枣枣蚤灶燥泽藻 枣葬皂蚤造赠 燥造蚤早燥泽葬糟糟澡葬则蚤凿藻泽袁 砸云韵泽冤合成
的第 员 个步骤袁是 砸云韵泽 合成途径最关键的调控步
骤渊蕴蚤怎 藻贼 葬造援袁 员怨怨愿冤遥 郧杂 基因的表达对 砸云韵泽 的积
累和 植 株 在 冬 季 的 存 活 起 到 重 要 的 作 用
渊悦怎灶灶蚤灶早澡葬皂 藻贼 葬造援袁 圆园园圆冤遥 在研究最深入的拟南芥
渊粤则葬遭蚤凿燥责泽蚤泽 贼澡葬造蚤葬灶葬冤中已经鉴定出了 苑 个 郧杂 基
因遥 低温能诱导其中之一渊粤贼郧杂猿冤的表达袁干旱能
诱导其中 圆 个 郧杂基因渊粤贼郧杂员 和 粤贼郧杂圆冤的表达遥 随
着研究不断深入袁迄今袁研究人员已经先后在拟南
芥尧匍匐筋骨草渊粤躁怎早葬 则藻责贼葬灶泽冤尧玉米渊在藻葬 皂葬赠泽冤尧沙
冬青渊 粤皂皂燥责蚤责贼葬灶贼澡怎泽 皂燥灶早燥造蚤糟怎泽冤尧苑源员 杨 渊孕燥责怎造怎泽
葬造遭葬 伊 早则葬灶凿蚤凿藻灶贼葬贼葬冤等植物中发现了 郧杂 基因 源园 多
个渊杂责则藻灶早藻则 藻贼 葬造援袁 圆园园园曰 栽葬躁蚤 藻贼 葬造援袁 圆园园圆曰 在澡葬燥 藻贼
葬造援袁 圆园园源曰 悦葬燥 藻贼 葬造援袁 圆园园怨曰 孕澡蚤造蚤责责藻 藻贼 葬造援袁 圆园员园曰
哉灶凿葬 藻贼 葬造援袁 圆园员圆冤遥 但迄今从木本植物中克隆的 郧杂
基因只有 员 个袁即 粤皂郧杂基因渊宋健袁 圆园园苑冤遥
粤皂郧杂 基 因 渊 早葬造葬糟贼蚤灶燥造 泽赠灶贼澡葬泽藻 早藻灶藻 燥枣
粤皂皂燥责蚤责贼葬灶贼澡怎泽 皂燥灶早燥造蚤糟怎泽袁粤皂郧杂冤是从高度抗寒的
常绿树种沙冬青中克隆的抗寒基因渊宋健袁 圆园园苑曰
云藻蚤 藻贼 葬造援袁 圆园园愿冤袁其基因全长 怨愿怨 遭责袁含有 猿 个外显
子和 圆 个内含子袁 在 郧藻灶月葬灶噪 的注册登录号
阅匝缘员怨猿远员袁并申报了国家发明专利遥 该基因不仅受
到冷冻胁迫的诱导袁同时还受到干旱尧高盐以及激素
粤月粤 的 诱 导遥 用 粤皂郧杂 基 因 转 化 大 肠 杆 菌
渊耘泽糟澡藻则蚤糟澡蚤葬 糟燥造蚤冤 菌株 月蕴圆员渊阅耘猿冤袁获得的转基因
菌株抗寒性明显提高袁转 粤皂郧杂 基因拟南芥抗寒性
和抗冻性也明显增强渊宋健袁 圆园园苑冤遥 经过泰安市泰
山林业科学研究院和中国科学院遗传与发育生物学
研究所研究人员多年努力袁建立了 粤皂郧杂 基因转化
石楠的高效转化体系袁并且成功地将 粤皂郧杂 基因转
入红叶石楠袁初步获得了转 粤皂郧杂 基因的红叶石楠
株系遥 为了从转 粤皂郧杂基因红叶石楠植株中选育出
抗寒能力强尧应用前景好的新株系袁本研究在以前获
得转基因植株的基础上袁继续对转 粤皂郧杂 基因红叶
石楠植株进行分子检测和抗冻性研究袁为选育红叶
石楠抗寒新品系打下基础遥
员摇 材料与方法
员郾 员摇 转基因植株
用于研究的转 粤皂郧杂基因红叶石楠株系是中国
科学院遗传与发育生物学研究所和泰山林业科学研
究院在前期转化试验中获得的 苑 个转基因株系袁
砸远要砸员圆遥 由泰安市泰山林业科学研究院生物技术
中心组培保存并进行切芽扦插扩繁袁提供本试验用遥
员郾 圆摇 转基因植株的抗生素筛选
将初步获得的转基因红叶石楠株系植株转移到
缘园 皂早窑蕴 原员卡那霉素 酝杂 固体培养基上培养遥 苗高
员郾 缘 耀 圆郾 园 糟皂袁培养温度渊圆缘 依 圆冤 益袁光照强度约为
圆 园园园 造曾袁光周期为 员圆 澡窑凿 原员遥 非转基因植株逐步枯
黄尧死亡袁猿园 天继代培养 员 次袁远园 天后仍能正常生长
的植株初步被认为是转基因植株遥
员郾 猿摇 转基因植株的 孕悦砸检测
对通过抗生素筛选得到的抗卡那霉素的植株袁
再进行 孕悦砸检测渊责燥造赠皂藻则葬泽藻 糟澡葬蚤灶 则藻葬糟贼蚤燥灶袁聚合酶
链式反应冤遥 按照刘静等渊圆园员员冤报道的方法袁分别
提取转基因植株和未转化植株组培苗的总 阅晕粤袁用
作 孕悦砸反应的模板遥 所用的引物序列如下院
正向引物院缘忆鄄 栽悦粤栽郧郧悦粤悦悦栽郧粤栽粤栽悦粤悦悦粤悦悦郧悦栽鄄猿忆曰
反向引物院缘忆鄄 栽粤栽栽粤郧郧悦粤郧悦郧郧粤栽郧郧郧郧悦郧郧郧粤粤鄄猿忆遥
反应体系院反应总体积为 圆缘 滋蕴袁包括院圆郾 缘 滋蕴
员园 伊 月怎枣枣藻则袁 园郾 源 皂皂燥造窑蕴 原员 凿晕栽孕袁 圆 皂皂燥造窑蕴 原员
酝早悦造圆袁 员 哉 栽葬择 阅晕粤 责燥造赠皂藻则葬泽藻袁 员 滋蕴 正向引物袁员 滋蕴反向引物袁 员 滋蕴 模板 阅晕粤 渊 阅晕粤 浓度
员园 灶早窑滋蕴 原员冤袁凿凿匀圆韵加至终体积 圆缘 滋蕴遥
反应程序院预变性袁怨源 益袁缘 皂蚤灶曰 怨源 益变性 源园
泽袁缘缘 益 扩增 源园 泽袁苑圆 益 延伸 员 皂蚤灶袁猿缘 个循环曰 最
后袁在 苑圆 益延伸 缘 皂蚤灶遥 扩增产物用 员豫的琼脂糖
凝胶电泳检测遥
员郾 源摇 转基因植株的 杂燥怎贼澡藻则灶检测
对 孕悦砸检测结果阳性的植株和未转基因植株
同时送到北京美莱博医学科技有限公司生物技术服
务部 采 用 地 高 辛 标 记 法 进 行 杂燥怎贼澡藻则灶 检 测
渊 杂葬皂遭则燥燥噪 藻贼 葬造援袁 员怨愿怨 冤遥 标 记 的 阅晕粤 是 从
责悦粤酝月陨粤圆猿园园鄄粤皂郧杂质粒 阅晕粤 中用 载遭葬玉和 杂葬造玉
双酶切得到包含 粤皂郧杂 基因的 员 噪遭 的片段遥 红叶
石楠植株的核基因组 阅晕粤 同样也经过 载遭葬玉和
员猿
林 业 科 学 源愿 卷摇
杂葬造玉双酶切遥
员郾 缘摇 转基因植株的 砸栽鄄孕悦砸分析
按照 悦澡燥皂糟扎赠灶泽噪蚤 等渊员怨愿苑冤的方法提取转基因
植株和未转化植株组培苗的去根全苗渊茎和叶冤的
总 砸晕粤袁按照厂家提供的说明书的介绍袁用 糟阅晕粤
合成试剂盒渊孕则燥皂藻早葬袁 哉杂粤冤合成 糟阅晕粤第 员 链遥 再
用 砸栽鄄孕悦砸 试剂盒 渊 孕则燥皂藻早葬袁 哉杂粤冤进行 砸栽鄄孕悦砸
渊则藻增藻则泽藻 贼则葬灶泽糟则蚤责贼蚤燥灶鄄孕悦砸袁逆转录 孕悦砸冤分析遥 试验
分为冷冻处理组和不进行冷冻处理的对照组院进行
冷冻处理的材料从组培室转移到 源 益光照培养箱中
预培养 圆源 澡渊使植株在 源 益下有个过渡适应冤袁 然后
将温度降至 原员圆 益袁继续培养 圆源 澡袁冷冻处理结束
后立即提取其总 砸晕粤曰 不进行冷冻处理的对照组袁
在提取总 砸晕粤前 圆源 澡从组培室转移到 源 益光照培
养箱中预培养 圆源 澡后袁 立即提取其总 砸晕粤遥
砸栽鄄孕悦砸所用的引物序列如下院
正向引物院 缘忆鄄栽郧栽郧粤粤郧粤粤郧栽郧郧栽郧郧郧粤悦粤鄄猿忆曰
反向引物院 缘忆鄄悦悦悦粤粤粤粤悦郧粤粤粤粤郧郧粤粤粤栽郧鄄猿忆遥
反应体系院反应总体积为 圆缘 滋蕴袁包括院圆郾 缘 滋蕴
员园 伊 月怎枣枣藻则袁 园郾 源 皂皂燥造窑蕴 原员 凿晕栽孕袁 圆 皂皂燥造窑蕴 原员
酝早悦造圆袁 员 哉 栽葬择 阅晕粤 责燥造赠皂藻则葬泽藻袁孕悦砸引物各 员 滋蕴袁
模板 阅晕粤 员 滋蕴袁凿凿匀圆韵加至终体积 圆缘 滋蕴遥
反应程序院预变性袁怨源 益袁源 皂蚤灶曰 怨源 益 变性
员 皂蚤灶袁缘愿 益扩增 员 皂蚤灶袁苑圆 益延伸 员 皂蚤灶袁猿源 个循环曰
最后袁在 苑圆 益延伸 员园 皂蚤灶遥 试验中用 源源远 遭责 的水
稻渊韵则赠扎葬 泽葬贼蚤增葬冤葬糟贼蚤灶员 基因片段作为扩增产物的内
参对照遥 扩增产物经 员豫的琼脂糖凝胶电泳后在
阅藻灶泽蚤贼燥 酝藻贼藻则渊酝燥凿藻造 郧杂鄄远苑园袁 月蚤燥鄄砸葬凿冤检测仪上进
行检测遥 试验重复 猿 次遥 目标产物条带和内参对照
葬糟贼蚤灶条带的强度比用于衡量 砸栽鄄孕悦砸 产物的相对
含量遥
员郾 远摇 转基因植株的遗传传递
为了解 粤皂郧杂基因在转基因红叶石楠中的遗传
传递袁对转基因株系通过切芽扦插进行扩繁袁获得了
各个转基因株系的第 员 次至第 远 次切芽扦插继代植
株袁将其分别命名为 悦员要悦远遥 对 悦员要悦远 继代植株
随机选取 员园 个单株进行 孕悦砸 检测袁根据扩增产物
的有无来判断导入的 粤皂郧杂基因在转基因红叶石楠
植株中的存在与否遥
员郾 苑摇 转基因植株的抗寒能力试验
将通过切芽扦插扩繁得到足够数量的继代植株
悦远袁移栽于增殖培养基上渊配方为院酝杂 垣 月粤员郾 园 皂早窑
蕴 原员 垣 晕粤粤园郾 园缘 皂早窑蕴 原员 冤袁每瓶 远 株袁继续培养 圆园
天遥 在 源 益条件下预处理 圆源 澡袁然后分别在 园 益 和
原远 益冷冻处理 远袁 员圆袁 圆源 和 猿远 澡遥 冷冻处理结束
后袁在 源 益黑暗条件下解冻培养基 猿 澡袁然后放在正
常生长温度下复苏培养渊温度 圆源 益袁光照时间 员圆
澡窑凿 原员冤源愿 澡 后袁观察其表型袁叶片冻伤情况袁复苏后
叶片仍失绿的植株视为死亡植株袁其余的视为成活
植株遥 统计各种处理中的植株存活率渊复苏后成活
株数 辕供试总株数 伊 员园园豫 冤遥 每种处理 圆园 株渊共 缘
瓶冤袁重复 猿 次遥 用 阅孕杂 软件统计分析袁用 耘载悦耘蕴
软件作图遥
员郾 愿摇 植株相对电导率和 蕴栽缘园的测定
相对电导率 渊 则藻造葬贼蚤增藻 藻造藻糟贼则蚤糟葬造 糟燥灶凿怎糟贼蚤增蚤贼赠袁
砸耘悦冤是反映植株抗寒性的重要生理指标遥 将转基
因植株与未转基因的对照植株置于 源 益袁 员圆 澡窑凿 原员
的条件下进行光照培养袁预处理 圆源 澡袁然后于 园袁
原 源袁 原 愿袁 原 员圆袁 原 员远 益各处理 圆源 澡遥 每个处理温度
组中每种供试材料随机取 猿 株袁将叶片用去离子水
冲洗 圆 次袁再用洁净滤纸吸净表面水分遥 用 远 耀 愿
皂皂的打孔器避开主脉打取叶圆片袁每组叶片打取
叶圆片 猿园 片袁分装在 猿 支洁净的刻度试管中袁每管
放 员园 片袁采用膜渗透 原电解质外渗法渊赵世杰等袁
圆园园圆冤测定叶片相对电导率袁重复 猿 次袁用 阅孕杂 软件
进行分析尧比较遥
半致死温度渊 泽藻皂蚤造藻贼澡葬造 贼藻皂责藻则葬贼怎则藻袁蕴栽缘园 冤是植
物抗寒性测定中广泛采用的一个形态指标遥 采用膜
渗透 原电解质外渗法测定的植物组织在不同温度下
电解质外渗的累积量总是呈野杂冶形曲线分布袁蕴赠燥灶泽
等渊员怨苑园冤把低温对植物细胞膜伤害过程用 蕴燥早蚤泽贼蚤糟
曲线加以表示遥 在 蕴燥早蚤泽贼蚤糟 方程 赠 越 噪 辕 渊员 垣 葬藻 原 遭曾冤
中袁赠为相对电导率渊砸耘悦冤袁曾 为处理温度袁噪袁葬袁遭 则
是方程的参数遥 把前面试验中得到的转基因株系
砸远袁砸苑 和未转基因的对照植株 砸耘悦 数值利用唐士
勇渊员怨怨猿冤的方法袁计算得出方程的参数渊 噪袁葬 和 遭冤
数值袁推导 蕴燥早蚤泽贼蚤糟方程的二阶导数并令其为零袁计
算方程的拐点温度 蕴栽缘园遥
圆摇 结果与分析
圆郾 员摇 转化株系抗生素筛选
在含有 缘园 皂早窑蕴 原员卡那霉素的 酝杂 固体培养基
上培养后袁非转基因的植株逐渐枯黄袁生长受到抑
制袁最后死亡渊图 员冤曰 远园 天后能够存活下来而且生
长正常的植株就初步被认定为转基因植株遥 本研究
中共得到 猿圆 个抗卡那霉素的转基因植株袁经培养分
别形成株系遥
圆猿
摇 第 苑 期 孙海伟等院 转 粤皂郧杂基因红叶石楠的分子检测及抗寒性分析
图 员摇 转基因植株的卡那霉素筛选
云蚤早援 员摇 运葬灶葬皂赠糟蚤灶 泽糟则藻藻灶蚤灶早 燥枣 贼澡藻 贼则葬灶泽早藻灶蚤糟 责造葬灶贼泽
粤院 转化受体红叶石楠曰 月院 转化体在卡那霉素筛选培养基上的生长情况曰 悦院筛选出的抗卡那霉素的植株遥
粤院 栽澡藻 贼则葬灶泽枣燥则皂葬贼蚤燥灶 则藻糟藻责贼燥则 孕澡燥贼蚤灶蚤葬 伊 枣则葬泽藻则蚤耶砸藻凿 砸燥遭蚤灶爷曰 月院 栽则葬灶泽枣燥则皂葬灶贼泽 早则燥憎蚤灶早 燥灶
贼澡藻 噪葬灶葬皂赠糟蚤灶 泽糟则藻藻灶蚤灶早 皂藻凿蚤怎皂曰 悦院栽澡藻 泽糟则藻藻灶藻凿 噪葬灶葬皂赠糟蚤灶鄄则藻泽蚤泽贼葬灶贼 贼则葬灶泽枣燥则皂葬灶贼泽援
圆郾 圆摇 转基因植株的 孕悦砸检测
猿圆 个抗卡那霉素的转化体中 孕悦砸 阳性的有 圆圆
个袁这些 孕悦砸阳性的植株中都扩增出 员 条与预期长
度一样大小的 怨愿怨 遭责 的片段袁这表明 粤皂郧杂 基因已
经整合到这些植株的基因组 阅晕粤中袁初步认为这些
植株为转基因植株遥 本研究中对 苑 个转基因株系
渊砸远要砸员圆冤进行了 孕悦砸分析渊图 圆冤袁 可以看出 源 个
转基因株系渊砸远袁砸苑袁砸愿 和 砸员园冤孕悦砸检测结果呈强
阳性遥
图 圆摇 转基因红叶石楠的 孕悦砸检测
云蚤早援 圆摇 孕悦砸 蚤凿藻灶贼蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶 燥枣 贼澡藻 贼则葬灶泽早藻灶蚤糟 责造葬灶贼泽
悦运员院阳性对照渊粤皂郧杂基因袁 责悦粤酝月陨粤圆猿园园鄄粤皂郧杂冤曰
酝院阅晕粤 皂葬则噪藻则渊阅蕴圆园园园冤曰 悦运圆院阴性对照 员渊水冤曰
悦运猿院阴性对照 圆渊未转基因的植株冤曰
砸远 原 砸员圆院本研究中所用的 苑 个转基因株系遥
箭头指出特异的 孕悦砸扩增产物条带遥
悦运员院 孕燥泽蚤贼蚤增藻 糟燥灶贼则燥造 渊责悦粤酝月陨粤圆猿园园鄄粤皂郧杂冤曰
酝院 阅晕粤 皂葬则噪藻则渊阅蕴圆园园园冤曰 悦运圆院 晕藻早葬贼蚤增藻 糟燥灶贼则燥造 员渊憎葬贼藻则冤曰
悦运猿院 晕藻早葬贼蚤增藻 糟燥灶贼则燥造 圆 渊哉灶贼则葬灶泽枣燥则皂藻凿 责造葬灶贼冤曰
砸远 原 砸员圆院 栽澡藻 苑 贼则葬灶泽早藻灶蚤糟 造蚤灶藻泽 怎泽藻凿 蚤灶 贼澡蚤泽 泽贼怎凿赠援
粤则则燥憎 蚤灶凿蚤糟葬贼藻泽 贼澡藻 泽责藻糟蚤枣蚤糟 孕悦砸 责则燥凿怎糟贼援
圆郾 猿摇 转基因植株的 杂燥怎贼澡藻则灶检测
对 孕悦砸检测结果阳性的 源 个转基因株系渊砸远袁
砸苑袁砸愿 和 砸员园冤进行了 杂燥怎贼澡藻则灶 杂交分析袁结果显
示院其中 员 个转基因株系渊砸员园冤没有给出杂交信号曰
另外 猿 个转基因株系渊砸远袁砸苑 和 砸愿冤都给出明显的
杂交信号袁其中 砸远 和 砸苑 显示出单一的杂交带袁砸愿
显示出 圆 条杂交带遥 上述结果说明 粤皂郧杂 基因已经
整合到这 猿 个转基因株系渊砸远袁砸苑 和 砸愿冤的基因组
阅晕粤中渊图 猿冤遥
图 猿摇 转基因红叶石楠的 杂燥怎贼澡藻则灶检测
云蚤早援 猿摇 杂燥怎贼澡藻则灶 蚤凿藻灶贼蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶 燥枣 贼澡藻 贼则葬灶泽早藻灶蚤糟 责造葬灶贼泽
酝院阅晕粤 皂葬则噪藻则渊阅蕴圆园园园冤曰 悦运员院阳性对照渊粤皂郧杂 基因袁
责悦粤酝月陨粤圆猿园园鄄粤皂郧杂冤曰 悦运圆院阴性对照 员渊水冤曰 悦运猿院阴性对照 圆
渊未转基因的植株冤曰 砸远袁砸苑袁砸愿和 砸员园院源个不同的转基因株系遥
酝院 阅晕粤 皂葬则噪藻则渊阅蕴圆园园园冤曰 悦运员院 孕燥泽蚤贼蚤增藻 糟燥灶贼则燥造
渊责悦粤酝月陨粤圆猿园园鄄粤皂郧杂冤曰 悦运圆院 晕藻早葬贼蚤增藻 糟燥灶贼则燥造 员
渊凿凿匀圆韵冤曰 悦运猿院 晕藻早葬贼蚤增藻 糟燥灶贼则燥造 圆 渊怎灶贼则葬灶泽枣燥则皂藻凿 责造葬灶贼冤曰
砸远袁砸苑袁砸愿 葬灶凿 砸员园院 云燥怎则 凿蚤枣枣藻则藻灶贼 贼则葬灶泽早藻灶蚤糟 造蚤灶藻泽援
圆郾 源摇 转基因植株的 砸栽鄄孕悦砸分析
图 源摇 转基因株系的 砸栽鄄孕悦砸分析
云蚤早援 源摇 砸栽鄄孕悦砸 葬灶葬造赠泽蚤泽 燥枣 贼澡藻 贼则葬灶泽早藻灶蚤糟 造蚤灶藻泽
粤院 砸栽鄄孕悦砸产物的 粤早葬则燥泽藻渊员豫 冤凝胶电泳分析
玉援 未经低温处理的试验组曰 域援 低温处理试验组
渊 原 远 益袁 圆源 澡冤援 月援 砸栽鄄孕悦砸产物条带的光密度测定遥
粤院 粤早葬则燥泽藻 早藻造 藻造藻糟贼则燥责澡燥则藻泽蚤泽 燥枣 贼澡藻 砸栽鄄孕悦砸 责则燥凿怎糟贼泽
玉援 宰蚤贼澡燥怎贼 糟燥造凿 贼则藻葬贼皂藻灶贼曰 域援 栽则藻葬贼藻凿 枣燥则 圆源 澡 葬贼 原 远 益 援
月院 阅藻灶泽蚤贼燥皂藻贼则赠 葬灶葬造赠泽蚤泽 燥枣 贼澡藻 砸栽鄄孕悦砸 责则燥凿怎糟贼泽援
砸栽鄄孕悦砸渊则藻增藻则泽藻 贼则葬灶泽糟则蚤责贼蚤燥灶鄄孕悦砸冤结果渊图 源冤
猿猿
林 业 科 学 源愿 卷摇
表明院未转基因的对照植株在低温处理和没经低温
处理的 圆 组试验中都没有扩增产物袁而 圆 个转基因
株系在低温处理和没经低温处理 圆 组试验中都得到
扩增产物袁在低温处理的试验组中袁扩增产物的数量
大大提高渊大约为不经低温处理试验组的 猿 倍左
右冤遥 上述结果表明院低温处理诱导了导入的 粤皂郧杂
基因的表达袁提高了转基因植株抗寒性遥
圆郾 缘摇 转基因植株的遗传传递
对上面得到的 圆 个含有单拷贝 粤皂郧杂 基因的转
基因株系渊砸远 和 砸苑冤进一步进行了 粤皂郧杂 基因的遗
传传递试验遥 对 砸远 和 砸苑 株系通过连续切芽扦插
扩繁得到的第 员 次至第 远 次切芽扦插继代植株分别
命名为 悦员袁 悦圆袁 悦猿袁 悦源袁 悦缘 和 悦远袁对 悦员 至 悦远 继
代植株分别进行 孕悦砸 检测渊表 员冤遥 从表 员 的结果
可以看出院在 悦员袁悦圆 和 悦猿 继代植株中袁个别植株出
现过 孕悦砸阴性的结果袁但从 悦源 至 悦远 继代植株中都
没出现 孕悦砸 阴性的植株袁这表明导入的 粤皂郧杂 基因
在这 圆 个转基因株系中能遗传下去袁在 悦源 以后的继
代植株基本趋向稳定遥
表 员摇 转基因植株的遗传传递和遗传稳定性检测淤
栽葬遭援 员摇 郧藻灶藻贼蚤糟 贼则葬灶泽枣藻则 葬灶凿 泽贼葬遭蚤造蚤贼赠 贼藻泽贼泽 燥枣 贼澡藻 贼则葬灶泽早藻灶蚤糟 责造葬灶贼泽
第 员 代继代植株员泽贼 贼则葬灶泽早藻灶蚤糟责造葬灶贼泽 责则燥责葬早葬贼藻凿遭赠 糟怎贼贼葬早藻
第 圆 代继代植株圆灶凿 贼则葬灶泽早藻灶蚤糟责造葬灶贼泽 责则燥责葬早葬贼藻凿遭赠 糟怎贼贼葬早藻
第 猿 代继代植株猿则凿 贼则葬灶泽早藻灶蚤糟责造葬灶贼泽 责则燥责葬早葬贼藻凿遭赠 糟怎贼贼葬早藻
第 源 代继代植株源贼澡 贼则葬灶泽早藻灶蚤糟责造葬灶贼泽 责则燥责葬早葬贼藻凿遭赠 糟怎贼贼葬早藻
第 缘 代继代植株缘贼澡 贼则葬灶泽早藻灶蚤糟责造葬灶贼泽 责则燥责葬早葬贼藻凿遭赠 糟怎贼贼葬早藻
第 远 代继代植株远贼澡 贼则葬灶泽早藻灶蚤糟责造葬灶贼泽 责则燥责葬早葬贼藻凿遭赠 糟怎贼贼葬早藻
砸远鄄悦员鄄员 辕 垣 砸远鄄悦圆鄄员 辕 垣 砸远鄄悦猿鄄员 辕 垣 砸远鄄悦源鄄员 辕 垣 砸远鄄悦缘鄄员 辕 垣 砸远鄄悦远鄄员 辕 垣
砸远鄄悦员鄄圆 辕 原 砸远鄄悦圆鄄圆 辕 垣 砸远鄄悦猿鄄圆 辕 垣 砸远鄄悦源鄄圆 辕 垣 砸远鄄悦缘鄄圆 辕 垣 砸远鄄悦远鄄圆 辕 垣
砸远鄄悦员鄄猿 辕 垣 砸远鄄悦圆鄄猿 辕 垣 砸远鄄悦猿鄄猿 辕 垣 砸远鄄悦源鄄猿 辕 垣 砸远鄄悦缘鄄猿 辕 垣 砸远鄄悦远鄄猿 辕 垣
砸远鄄悦员鄄源 辕 垣 砸远鄄悦圆鄄源 辕 垣 砸远鄄悦猿鄄源 辕 垣 砸远鄄悦源鄄源 辕 垣 砸远鄄悦缘鄄源 辕 垣 砸远鄄悦远鄄源 辕 垣
砸远鄄悦员鄄缘 辕 原 砸远鄄悦圆鄄缘 辕 垣 砸远鄄悦猿鄄缘 辕 垣 砸远鄄悦源鄄缘 辕 垣 砸远鄄悦缘鄄缘 辕 垣 砸远鄄悦远鄄缘 辕 垣
砸远鄄悦员鄄远 辕 垣 砸远鄄悦圆鄄远 辕 垣 砸远鄄悦猿鄄远 辕 垣 砸远鄄悦源鄄远 辕 垣 砸远鄄悦缘鄄远 辕 垣 砸远鄄悦远鄄远 辕 垣
砸远鄄悦员鄄苑 辕 原 砸远鄄悦圆鄄苑 辕 原 砸远鄄悦猿鄄苑 辕 垣 砸远鄄悦源鄄苑 辕 垣 砸远鄄悦缘鄄苑 辕 垣 砸远鄄悦远鄄苑 辕 垣
砸远鄄悦员鄄愿 辕 垣 砸远鄄悦圆鄄愿 辕 垣 砸远鄄悦猿鄄愿 辕 原 砸远鄄悦源鄄愿 辕 垣 砸远鄄悦缘鄄愿 辕 垣 砸远鄄悦远鄄愿 辕 垣
砸远鄄悦员鄄怨 辕 垣 砸远鄄悦圆鄄怨 辕 垣 砸远鄄悦猿鄄怨 辕 垣 砸远鄄悦源鄄怨 辕 垣 砸远鄄悦缘鄄怨 辕 垣 砸远鄄悦远鄄怨 辕 垣
砸远鄄悦员鄄员园 辕 垣 砸远鄄悦圆鄄员园 辕 垣 砸远鄄悦猿鄄员园 辕 垣 砸远鄄悦源鄄员园 辕 垣 砸远鄄悦缘鄄员园 辕 垣 砸远鄄悦远鄄员园 辕 垣
砸苑鄄悦员鄄员 辕 垣 砸苑鄄悦圆鄄员 辕 垣 砸苑鄄悦猿鄄员 辕 垣 砸苑鄄悦源鄄员 辕 垣 砸苑鄄悦缘鄄员 辕 垣 砸苑鄄悦远鄄员 辕 垣
砸苑鄄悦员鄄圆 辕 原 砸苑鄄悦圆鄄圆 辕 垣 砸苑鄄悦猿鄄圆 辕 垣 砸苑鄄悦源鄄圆 辕 垣 砸苑鄄悦缘鄄圆 辕 垣 砸苑鄄悦远鄄圆 辕 垣
砸苑鄄悦员鄄猿 辕 垣 砸苑鄄悦圆鄄猿 辕 垣 砸苑鄄悦猿鄄猿 辕 垣 砸苑鄄悦源鄄猿 辕 垣 砸苑鄄悦缘鄄猿 辕 垣 砸苑鄄悦远鄄猿 辕 垣
砸苑鄄悦员鄄源 辕 垣 砸苑鄄悦圆鄄源 辕 垣 砸苑鄄悦猿鄄源 辕 垣 砸苑鄄悦源鄄源 辕 垣 砸苑鄄悦缘鄄源 辕 垣 砸苑鄄悦远鄄源 辕 垣
砸苑鄄悦员鄄缘 辕 原 砸苑鄄悦圆鄄缘 辕 垣 砸苑鄄悦猿鄄缘 辕 垣 砸苑鄄悦源鄄缘 辕 垣 砸苑鄄悦缘鄄缘 辕 垣 砸苑鄄悦远鄄缘 辕 垣
砸苑鄄悦员鄄远 辕 垣 砸苑鄄悦圆鄄远 辕 垣 砸苑鄄悦猿鄄远 辕 垣 砸苑鄄悦源鄄远 辕 垣 砸苑鄄悦缘鄄远 辕 垣 砸苑鄄悦远鄄远 辕 垣
砸苑鄄悦员鄄苑 辕 原 砸苑鄄悦圆鄄苑 辕 原 砸苑鄄悦猿鄄苑 辕 垣 砸苑鄄悦源鄄苑 辕 垣 砸苑鄄悦缘鄄苑 辕 垣 砸苑鄄悦远鄄苑 辕 垣
砸苑鄄悦员鄄愿 辕 垣 砸苑鄄悦圆鄄愿 辕 垣 砸苑鄄悦猿鄄愿 辕 垣 砸苑鄄悦源鄄愿 辕 垣 砸苑鄄悦缘鄄愿 辕 垣 砸苑鄄悦远鄄愿 辕 垣
砸苑鄄悦员鄄怨 辕 垣 砸苑鄄悦圆鄄怨 辕 垣 砸苑鄄悦猿鄄怨 辕 垣 砸苑鄄悦源鄄怨 辕 垣 砸苑鄄悦缘鄄怨 辕 垣 砸苑鄄悦远鄄怨 辕 垣
砸苑鄄悦员鄄员园 辕 垣 砸苑鄄悦圆鄄员园 辕 垣 砸苑鄄悦猿鄄员园 辕 垣 砸苑鄄悦源鄄员园 辕 垣 砸苑鄄悦缘鄄员园 辕 垣 砸苑鄄悦远鄄员园 辕 垣
摇 摇 淤在继代植株 砸远鄄悦员鄄员 辕 垣中袁砸远院转基因植株 砸远曰 悦员院第 员 代切芽扦插继代植株曰 员院单株编号曰 垣 院 孕悦砸 阳性曰 原 院孕悦砸 阴性遥 陨灶 贼澡藻贼则葬灶泽早藻灶蚤糟 责造葬灶贼泽 早藻灶藻则葬贼藻凿 遭赠 糟怎贼贼葬早藻 砸远鄄悦员鄄员 辕 垣 袁 砸远院栽则葬灶泽早藻灶蚤糟 造蚤灶藻 砸远曰 悦员院 员泽贼 贼则葬灶泽早藻灶蚤糟 责造葬灶贼泽 责则燥责葬早葬贼藻凿 遭赠 糟怎贼贼葬早藻曰 员院 杂藻则蚤葬造 灶怎皂遭藻则 燥枣蚤灶凿蚤增蚤凿怎葬造 责造葬灶贼曰 垣 院 孕悦砸 责燥泽蚤贼蚤增藻曰 原 院孕悦砸 灶藻早葬贼蚤增藻援
圆郾 远摇 转基因植株的抗寒能力测定
按照材料和方法中介绍的方法对 圆 个转基因株
系渊砸远 和 砸苑冤和未转基因的对照植株分别在 园 益和
原 远 益进行了 远袁 员圆袁 圆源 和 猿远 澡的冷冻处理渊图 缘冤遥
可以看出院在 园 益处理试验中袁 圆 个转基因株系在直
至处理 圆源 澡袁都没有表现出明显的伤害遥 但未转基
因的对照植株在处理 员圆 澡 后袁表现出明显的伤害曰
处理 圆源 澡 后袁植株大量死亡曰 处理 猿远 澡 后袁全部死
亡遥 在 原远 益处理试验中袁 圆 个转基因株系直至处
理 员圆 澡 后都没有表现出明显的伤害曰 在处理 圆源 澡
后袁植株表现出明显的伤害袁部分植株死亡曰 在处理
猿远 澡后袁植株大量死亡遥 而未转基因的对照植株在
处理 远 澡 后即表现出明显的伤害袁部分植株死亡曰
处理 员圆 澡后袁植株全部死亡遥 上述结果表明转基因
株系 砸远 和 砸苑 的抗寒性得到了明显提高袁导入的
粤皂郧杂基因提高了转基因株系的抗寒性遥
随后袁对转基因株系 砸远 和未转基因的对照植
株进行了更大温度范围和处理时间范围的抗寒能力
测定袁对转基因株系和未转基因的对照植株在各种
低温处理条件下的存活率进行了比较渊图 远冤遥 从图
远粤可以看出院转基因植株在 原猿 益处理 猿袁远袁 员圆袁 圆源
澡后袁存活率均接近 员园园豫 曰 处理 源愿 澡 后存活率下
降袁但存活率显著高于对照未转基因植株 渊 琢 越
园郾 园缘冤遥 对照存活率呈逐渐下降趋势袁在处理 源愿 澡
源猿
摇 第 苑 期 孙海伟等院 转 粤皂郧杂基因红叶石楠的分子检测及抗寒性分析
图 缘摇 转基因植株的抗寒能力测定
云蚤早援 缘摇 阅藻贼藻则皂蚤灶葬贼蚤燥灶 燥枣 贼澡藻 糟燥造凿鄄贼燥造藻则葬灶糟藻 燥枣 贼则葬灶泽早藻灶蚤糟 责造葬灶贼泽
图 远摇 转基因株系 砸远 和未转基因的对照植株在 原 猿袁 原 远袁 原 员圆袁 原 员愿 益不同处理时间的存活率
云蚤早援 远摇 杂怎则增蚤增葬造 则葬贼藻 燥枣 贼澡藻 贼则葬灶泽早藻灶蚤糟 造蚤灶藻 砸远 葬灶凿 贼澡藻 怎灶贼则葬灶泽枣燥则皂藻凿 糟燥灶贼则燥造 责造葬灶贼 贼则藻葬贼藻凿 葬贼 原 猿袁 原 远袁 原 员圆袁 原 员愿 益 枣燥则 凿蚤枣枣藻则藻灶贼 贼蚤皂藻
栽院转基因株系 砸远曰 悦运院未转基因的对照植株 栽院栽则葬灶泽早藻灶蚤糟 造蚤灶藻 砸远曰 悦运院哉灶贼则葬灶泽枣燥则皂藻凿 责造葬灶贼渊糟燥灶贼则燥造冤 援
后几乎全部死亡遥 图 远月 的结果表明院转基因植株
在 原 远 益处理 猿袁远袁 员圆袁 圆源 澡 后存活率逐渐下降袁但
存活率一直显著高于同处理组的未转基因对照植株
渊琢 越园郾 园缘冤袁但在处理 源愿 澡 后全部死亡遥 未转基因
的对照植株在 原 远 益处理 猿袁远 澡后存活率迅速下降袁
员圆 澡后几乎全部死亡遥 图 远悦 的结果表明院转基因
植株 原 员圆 益处理 猿袁远袁 员圆 澡后的存活率显著高于对
照袁在 圆源 澡后几乎全部死亡曰 而对照未转基因植株
在处理 远 澡后几乎全部死亡遥 图 远阅的结果表明院转
基因植株在 原员愿 益处理 员圆 澡后几乎全部死亡袁而对
缘猿
林 业 科 学 源愿 卷摇
照在处理 猿 澡 后全部死亡遥 从以上试验看出袁在多
种低温处理下袁转基因植株都比未转基因的对照植
株表现出较好低温存活率袁抗寒能力明显优于未转
基因的对照植株袁说明导入的抗寒基因确实提高了
红叶石楠的抗寒性遥
圆郾 苑摇 转基因植株相对电导率和 蕴栽缘园的测定
转基因株系 砸远袁砸苑 和未转基因的对照植株相
对电导率渊砸耘悦冤的测定结果示于图 苑遥 砸耘悦 测定
结果表明院随处理温度的逐渐降低袁转基因株系和
未转基因的对照植株的 砸耘悦 都逐渐升高曰 但转基
因株系升高的程度明显低于未转基因的对照植
株遥 经低温处理后袁在 园 益和 原 源 益处理的转基因
株系和未转基因对照植株 砸耘悦 的变化都达到差异
显著的程度渊琢 越 园郾 园缘冤袁在 原 愿袁 原 员圆袁 原 员远 益处理
的转基因株系和对照植株的 砸耘悦 的变化都达到极
显著差异渊琢 越 园郾 园员冤袁转基因株系 砸远 和 砸苑 间的
差异不显著遥
图 苑摇 低温处理后相对电导率的变化
云蚤早援 苑摇 砸藻造葬贼蚤增藻 藻造藻糟贼则蚤糟葬造 糟燥灶凿怎糟贼蚤增蚤贼赠 渊砸耘悦冤 糟澡葬灶早藻泽
葬枣贼藻则 造燥憎 贼藻皂责藻则葬贼怎则藻 贼则藻葬贼皂藻灶贼
摇 摇 由表 圆 可以看出院砸远 株系的 蕴栽缘园是 原 员圆郾 怨猿益袁砸苑 株系的 蕴栽缘园是 原 员圆郾 远猿 益袁未转基因的对照
植株的 蕴栽缘园是 原愿郾 圆缘 益曰 圆 个转基因株系的 蕴栽缘园很
接近袁都明显低于未转基因对照植株袁分别下降了
源郾 远愿 益和 源郾 猿愿 益遥 这一结果说明转基因株系的抗
寒能力有了明显提高遥
表 圆摇 根据 砸耘悦数值用 蕴燥早蚤泽贼蚤糟方程计算 蕴栽缘园
栽葬遭援 圆摇 蕴栽缘园 糟葬造糟怎造葬贼蚤燥灶 燥枣 贼澡藻 贼则葬灶泽早藻灶蚤糟 造蚤灶藻泽 遭葬泽藻凿 燥灶 贼澡藻 砸耘悦 凿葬贼葬 怎泽蚤灶早 贼澡藻 蕴燥早蚤泽贼蚤糟 藻择怎葬贼蚤燥灶
品系杂贼则葬蚤灶泽 蕴燥早蚤泽贼蚤糟方程运算蕴燥早蚤泽贼蚤糟 藻择怎葬贼蚤燥灶 糟葬造糟怎造葬贼蚤燥灶
相关系数
悦燥则则藻造葬贼蚤燥灶 糟燥藻枣枣蚤糟蚤藻灶贼 砸圆
半致死温度蕴栽缘园 辕 益
转基因株系 砸远摇 栽则葬灶泽早藻灶蚤糟 造蚤灶藻 砸远 赠 越 员愿猿援 苑怨圆 员园员 垣 缘援 苑源员 猿苑远藻 原园援 员猿缘 圆员缘曾 园郾 怨远远 园鄢鄢 原员圆郾 怨猿
转基因株系 砸苑摇 栽则葬灶泽早藻灶蚤糟 造蚤灶藻 砸苑 赠 越 员猿园援 圆远员 缘源员 垣 缘援 源远苑 怨圆猿藻 原园援 员猿源 缘缘缘曾 园郾 怨苑圆 源鄢鄢 原员圆郾 远猿
野生型植株 哉灶鄄贼则葬灶泽枣燥则皂藻凿 责造葬灶贼渊糟燥灶贼则燥造冤 赠 越 员愿缘援 苑员园 怨远员 垣 缘援 愿愿远 苑员怨藻 原园援 圆员源 怨远愿曾 园郾 怨源源 员鄢鄢 原愿郾 圆缘
猿摇 结论与讨论
近年来袁利用遗传转化技术将外源植物抗寒基
因转入植物中袁在模式植物尧蔬菜和农作物中都取得
了很大的进展渊黄永芬等袁 员怨怨苑曰 王冬梅等袁 圆园员员曰
宰燥则则葬造造 藻贼 葬造援袁 员怨怨愿曰 宰葬造造蚤泽 藻贼 葬造援袁 员怨怨苑曰 云葬灶 藻贼 葬造援袁
圆园园圆冤袁但成功转化木本植物的报道很少渊蕴葬造 藻贼 葬造援袁
圆园园愿冤遥 国内外林木抗寒基因克隆研究中袁已经在
蓝 桉 渊 耘怎糟葬造赠责贼怎泽 早造燥遭怎造怎泽 冤尧 白 桦 渊 月藻贼怎造葬
责造葬贼赠责澡赠造造葬冤尧 甜杨 渊 孕燥责怎造怎泽 泽怎葬增藻燥造藻灶泽 冤尧 毛白杨
渊孕燥责怎造怎泽 贼燥皂藻灶贼燥泽葬冤等木本植物中克隆获得抗冻基
因 圆缘 个渊郧葬皂遭燥葬 藻贼 葬造援袁 圆园园苑曰 宰藻造造蚤灶早 藻贼 葬造援袁 圆园园愿曰
林元震袁 圆园园远曰 林元震等袁 圆园园苑曰 在澡燥怎 藻贼 葬造援袁 圆园园苑曰
李少锋等袁 圆园员员冤袁迄今为止袁还未见到木本植物的
抗寒基因成功转化木本植物并获得表达的报道遥 由
于草本植物和木本植物结构的不同袁用来自木本植
物的抗寒基因转化林木尧果树更容易成功袁也更容易
表达遥 本文通过对 粤皂郧杂转基因红叶石楠的综合分
析尧表型分析和功能验证袁获得了多方面尧多层次的
证据袁充分说明 粤皂郧杂 基因已经整合到木本植物红
叶石楠转基因植株的基因组 阅晕粤中袁并能稳定地遗
传下去遥 转基因植株的一些与抗寒性相关的生理指
标渊如 砸耘悦袁蕴栽缘园 冤尧形态指标渊存活率等冤发生了明
显变化袁抗寒性得到了提高袁筛选得到了抗寒性明显
提高的红叶石楠转基因新种质袁为林木尧果树的抗寒
育种提供了新的选择途径遥
分子鉴定 渊包括 孕悦砸袁 杂燥怎贼澡藻则灶袁 晕燥则贼澡藻则灶袁 砸栽鄄
孕悦砸袁宰藻泽贼藻则灶 等冤可以提供有力的资料证明目标基
因克隆成功与否袁可以使研究者快速鉴定出真正的
转基因植株袁提高工作效率袁但要选出有实用价值的
材料还必须进行目标农艺性状的田间鉴定和筛选
渊如本研究中抗寒能力尧蕴栽缘园的测定和筛选冤以及与
目标农艺性状直接相关的生理指标的测定渊如本研
究中的 砸耘悦冤遥 目标农艺性状的田间形态的鉴定和
筛选一般需要连续进行几个世代遥 由于多种原因转
基因植株会发生分离袁目标基因会丢失或沉默袁因
此袁从得到的转基因植株中鉴定出稳定尧纯合的转基
因植株并了解导入的目标基因在转基因植株中的遗
远猿
摇 第 苑 期 孙海伟等院 转 粤皂郧杂基因红叶石楠的分子检测及抗寒性分析
传传递和遗传稳定性袁对于最终选出理想的株系也
是不可忽视的遥 由于木本植物的多年生特性袁要像
草本植物那样用每个世代的种子长出的新一代材料
进行导入基因遗传传递和遗传稳定性研究是不可能
的袁本研究中用切芽扦插得到的继代材料研究了导
入的 粤皂郧杂基因在切芽扦插继代材料中的遗传传递
和遗传稳定性袁提供了一些可供参考的资料遥
许多植物抗寒性的鉴定试验都证明了应用电导
法测定 砸耘悦的变化并配以 蕴燥早蚤泽贼蚤糟方程求拐点温度
作为植物的半致死温度渊蕴栽缘园 冤袁能较直观且准确地
反映植物的抗寒性和所能忍耐的低温极限袁在草本
植物和木本植物抗寒性测定中都得到广泛应用渊朱
根海等袁 员怨愿缘曰 刘友良等袁 员怨愿缘曰 许瑛等袁 圆园园愿曰 刘
建等袁 圆园园怨曰 郭卫东等袁 圆园园怨曰 焦奎宝等袁 圆园员园冤遥
本研究的结果也表明 蕴栽缘园是一个实用的抗寒性检测
指标遥
本研究通过对已获得的转 粤皂郧杂 基因红叶石楠
植株进行分子鉴定和抗寒性测定袁选出了 圆 个抗寒
性明显提高的转基因株系袁为最终选出红叶石楠抗
寒新品系打下基础袁进一步的研究还在进行中遥
参 考 文 献
杜建会袁魏兴琥援 圆园园怨援 园林红叶植物新贵要要要红叶石楠援 安徽农业
科学袁猿苑渊员员冤院缘圆远猿 原 缘圆远缘援
郭卫东袁 张真真袁 蒋小韦袁等援 圆园园怨援 低温胁迫下佛手半致死温度测
定和抗寒性分析援 园艺学报袁猿远渊员冤院 愿员 原 愿远援
黄美娟袁邓小梅袁符树根袁等援 圆园园猿援 红叶石楠野红罗宾冶组培快繁技
术研究援 江西农业大学学报袁 圆缘渊源冤院远园源 原 远园苑援
黄永芬袁汪清胤袁付桂英袁等援 员怨怨苑援 美洲鲽抗冻蛋白基因渊葬枣责冤导入
番茄的研究援 生物化学杂志袁渊源冤院源员愿 原 源圆圆援
焦奎宝袁高庆玉援 圆园员园援 葡萄嫁接苗根系半致死温度的测定援 黑龙江
农业科学袁渊猿冤院远苑 原 远愿援
李少锋袁 苏晓华袁 张冰玉援 圆园员员援 林木基因克隆研究进展援 植物学
报袁源远渊员冤院苑怨 原 员园苑援
林元震袁 张志毅袁 刘纯鑫袁 等援 圆园园苑援 甜杨抗冻转录因子 陨悦耘员 基因
的 蚤灶 泽蚤造蚤糟燥克隆及其分析援 分子植物育种袁缘渊猿冤院源圆源 原 源猿园援
林元震援 圆园园远援 甜杨葡萄糖 原 远 原磷酸脱氢酶基因克隆及结构分析与
功能鉴定援 北京林业大学博士学位论文袁怨远 原 员园苑援
刘摇 建袁项东云袁陈健波袁等援 圆园园怨援 应用 蕴燥早蚤泽贼蚤糟 方程式确定三种桉
树的低温半致死温度援 广西林业科学袁猿愿渊圆冤院 苑缘 原 苑愿援
刘摇 静袁黄艳艳袁翁曼丽袁等援 圆园员员援 栽悦杂基因转化泡桐的遗传表达及
抗病能力研究援 林业科学袁源苑渊缘冤院员苑员 原 员苑远援
刘摇 静袁王长宪袁王摇 斌袁等援 圆园园怨援 石楠抗寒基因 粤皂郧杂高效转化体
系的研究援 山东农业大学学报院自然科学版袁源园渊圆冤院员怨员 原 员怨源援
刘友良袁朱根海袁刘祖祺援 员怨愿缘援 植物抗冻性测定技术的原理和比
较援 植物生理学通讯袁渊员冤院源园 原 源猿援
芦建国袁连洪燕援 圆园园苑援 红叶石楠在园林中的应用援 现代农业科技袁
渊员冤院源园 原 源员援
芦建国袁杨金红袁武翠红援 圆园园愿援 山东地区引种的 缘 种石楠属植物抗
寒性比较援 南京林业大学学报院 自然科学版袁 猿圆渊缘冤院员缘猿 原 员缘远援
宋摇 健援 圆园园苑援 沙冬青耐寒基因 粤皂郧燥造泽的克隆和遗传转化研究援 山
东农业大学硕士学位论文袁 员 原 缘源援
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