全 文 ：第 wu卷 第 z期
u s s y年 z 月
林 业 科 学
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∏¯ qou s s y
w个品种李树果实对李实蜂酶活力的影响
黄大庄t 张 爽t 张彦广t 阎海霞t 苏金浩u
kt q河北农业大学 保定 sztsss ~ u q保定职业技术学院 保定 sztsssl
摘 要 } 通过野外调查并进行方差分析发现 o大石早生等 w个李品种受李实蜂危害程度存在显著差异 ∀对取食 w
个品种李果实的李实蜂幼虫进行羧酸酯酶 !谷胱甘肽 p ≥ p芳基转移酶活力测定 o结果表明 }不同品种对李实蜂羧
酸酯酶 !谷胱甘肽 p ≥ p芳基转移酶酶活力存在显著差异 ~进行酯酶同工酶及过氧化物酶电泳也显示 }取食不同品
种李果的李实蜂酶谱有显著差异 o且酶活力大小与抗虫性强弱有关系 ∀
关键词 } 李 ~李实蜂 ~酶活力 ~抗虫性
中图分类号 }≥{{{ 文献标识码 }„ 文章编号 }tsst p zw{{kussylsz p ssxy p sw
收稿日期 }ussw p sz p sz ∀
基金项目 }河北省林业厅/李实蜂发生规律与无公害治理技术0k|zttt p ul ∀
Ινφλυενχε οφ Φρυιτσ οφ 4 Πλυµ ς αριετιεσ ον τηε Ενζψµιχ
Αχτιϖιτψ οφ Ηοπλοχοµπα φυλϖιχονισ
‹∏¤±ª⁄¤½«∏¤±ªt «¤±ª≥«∏¤±ªt «¤±ª ≠¤±ª∏¤±ªt ≠¤± ‹¤¬¬¬¤t ≥∏¬±«¤²u
kt q Αγριχυλτυρε Υνιϖερσιτψοφ Ηεβει Βαοδινγ sztsss ~ u q ςοχατιοναλανδ Τεχηνολογιχαλ Χολλεγε οφ Βαοδινγ Βαοδινγ sztsssl
Αβστραχτ } ׫¨µ¨ º¤¶¶¬ª±¬©¬¦¤±·§¬©©¨µ¨±¦¨ ¬± §¤°¤ª¨ ¥¨·º¨ ±¨ ©²∏µ√¤µ¬¨·¬¨¶ ²© ³¯∏° ·«µ²∏ª« ·«¨ °¨ ·«²§¶ ²© ²∏·¶¬§¨
¬±√¨ ¶·¬ª¤·¬²±¤±§√¤µ¬¤±¦¨ ¤±¤¯¼¶¬¶q׫¨ ±¨½¼°¨ ¤¶¶¤¼ ²©¦¤µ¥²¬¼¯ ¶¨·¨µ¤¶¨ ¤±§ª¯∏·¤·«¬²±¨ 2≥2¤µ²°¤·¬¦·µ¤±¶©¨µ¤¶¨ ²© Ηοπλοχοµπα
φυλϖιχονισ ¤¯µ√¤©¨ §¨¬±ª²±©²∏µ³¯∏° √¤µ¬¨·¬¨¶º¨ µ¨ ¦²±§∏¦·¨§q• ¶¨∏¯·¶¶«²º¨ §·«¤··«¨µ¨ º¤¶±²·¤¥¯¨§¬©©¨µ¨±¦¨ ¥¨·º¨ ±¨ ±¨½¼°¨
¤¦·¬√¬·¼q∞¯ ¦¨·µ²³«²µ¨¶¬¶²©¦¤µ¥²¬¼¯ ¶¨·¤±§ ³¨µ²¬¬§¤¶¨ ¤¯¶² ¶«²º¨ §·«¨ §¬©©¨µ¨±¦¨ q • ¨¯¤·¬²±¶«¬³ º¤¶ ¬¨¬¶·¨§ ¥¨·º¨ ±¨ ±¨½¼°¨
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Κεψ ωορδσ} ³¯∏°~ Ηοπλοχοµπαφυλϖιχονισ~ ±¨½¼°¨ ¤¦·¬√¬·¼~³¨¶·2µ¨¶¬¶·¤±¦¨
李实蜂k Ηοπλοχαµπα φυλϖιχονισl属膜翅目 o叶蜂科 o是李k Πρυνυσ σαλιχειναl果的一种重要害虫 ∀近年来 o李
实蜂为害日趋严重 o给生产造成了巨大的经济损失 ∀国内已有一些关于李实蜂的研究报道 o但多偏重于生物
学习性和防治等方面 o本实验通过野外调查发现 o大石早生 !大石中生 !盖李 !黑宝石 w个品种李受李实蜂为
害程度存在显著差异 o并测定了李实蜂幼虫的活力 o探讨李实蜂体内解毒酶活力与李实蜂寄主植物之间的联
系 o为选育抗李实蜂品种及李实蜂的综合治理提供科学的理论依据 ∀
t 材料与方法
111 李实蜂为害不同品种李果的调查分析
在河北省易县解村林场 x年生李树园调查 o李各品种定植时采用随机区组设计 ∀分别在每株树上 !中 !
下不同方位取样枝 o统计结果数和受害果实数 ∀将调查数据进行方差分析 o以确定不同品种的受害情况 ∀
112 不同品种李果对李实蜂酶活力的影响
t1u1t 李实蜂虫果的采集 usst年 x月于易县解村林场采集李实蜂危害的大石早生 !大石中生 !盖李 !黑宝
石 w品种的李果 o放入冰箱中 p us ε 保存 ∀
t1u1u 测定酶源的制备 从虫果中取出幼虫 ots头每组 o放入玻璃匀浆器加水 w °o冰浴匀浆 o于 w ε 下
ts sss µ#°¬±pt离心 vs °¬±∀取上清液作为酶源 o浓度为 u1x头#°pt o用于谷胱甘肽 p ≥ p芳基转移酶活力测
定 ~稀释浓度至 s1u头#°pt o用于酶源蛋白质含量测定和羧酸酯酶活力测定 ∀
t1u1v 酶源蛋白质含量测定 蛋白质标准曲线的确定 }采用考马斯亮蓝染色法将试剂混匀后 o用 zuss型分
光光度计测 x|x ±°处光密度值 o重复 y次 o求蛋白质标准曲线方程 ∀酶源蛋白质含量的测定 }反应体系为
s1u头#°pt酶源 s1w °o水 u1y °os1su h ≤……p Šuxs v1s °o总体积 y °o混匀后 o用 zuss型分光光度计
测 x|x ±°处光密度值 o重复 y次 o根据蛋白质标准曲线方程求酶源蛋白质含量 ∀
t1u1w 羧酸酯酶活力测定 反应体系为 }s1sw °²¯#pt ³‹z1s磷酸缓冲液 z °os1sv °²¯#pt醋酸 p Αp萘酯
酶底物液k含s1sss t °²¯#pt水杨酸毒扁豆碱lx °os1u头#°pt酶源 s1v °o在 vz ε 水浴中震荡 vs °¬±o加
入坚固蓝显色剂 t °oux ε 恒温放置 vs °¬±ozuss型分光光度计测 yss ±°处光密度值 o重复 y次 ∀根据 Αp
萘酚标准曲线方程求出酶促生成的 Αp萘酚量 ∀对酶的比活力进行方差分析 ∀
t1u1x 谷胱甘肽 p ≥ p芳基转移酶的活力测定 反应体系为 s1sy °²¯#pt ³‹z1s磷酸缓冲液k含 s1ssu °²¯#
pt乙二胺四乙酸lx1u °os1sx °²¯#pt还原型谷胱甘肽底物液 s1y °os1sv °²¯#pt u ow p二硝基氯苯丙酮
底物液 s1u °ou1x头#°pt酶源 s1u °o总体积 y °o在 ux ε 下反应 x °¬±o分光光度计测 vws ±°处吸光度 o
重复 v次 o根据酶源蛋白质含量求出酶的比活力 o对酶的比活力进行方差分析 ∀
t1u1y 电泳酶源制备 从不同品种李虫果中取李实蜂老熟幼虫 o每组 ts头 o放入玻璃匀浆器中 o加样品提
取液k³‹ {1s ×µ¬¶p ‹≤¯ 缓冲液lt °匀浆 o再加 t °提取液冲刷匀浆器 o洗入离心管 o放入离心机中于 w ε
下 ts sss µ#°¬±pt离心 tx °¬±o取上清夜 o置于冰箱中备用 ∀
t1u1z 同功酶电泳 采用不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳 ∀分离胶浓度为 tu h !浓缩胶浓度为 v1zx h o电极缓
冲液为 ³‹{1v ×µ¬¶p甘氨酸缓冲液 ∀每个样品槽点样量为 vx ˏ∀电泳开始时为 us °„稳流 o进入分离胶后
vs °„稳流 o电泳 x «左右 ∀
t1u1{ 酯酶及过氧化物酶染色 酯酶染色 }电泳结束后 o凝胶用蒸馏水洗涤数次 o浸入底物和显色液混合液
≈醋酸 p t p 萘酯 s1sux ªo醋酸 p u p 萘酯 s1sux ªo坚牢蓝 • • s1t ªo加丙酮 w °溶解后 o加磷酸缓冲液
k³‹z1s os1t °²¯#ptl定容至 tss ° 中约 vs °¬±o到黑褐色酯酶带清晰为止 ∀用蒸馏水漂洗几次 o固定于
z h醋酸液中 ∀第 v天进行照相 ∀过氧化物酶染色 }电泳结束后 o凝胶用蒸馏水洗涤数次 o浸入染色液kzs °ª
抗坏血酸 o加入 us °联苯胺储备液 ous °s1y h ‹u ’u o‹u ’ ys °l中 o待出现酶带 o立即倒出染色液 ∀用蒸
馏水洗涤干净 o即用水保存 ∀第 u天照相 ∀
u 结果与分析
211 不同品种李树受李实蜂为害情况
将 t||{ !t|||年解村林场 w个品种调查统计结果反正弦转换 o进行统计分析 o如表 t ∀经方差分析 o李实
蜂对各品种的危害程度存在极显著差异 ∀进一步利用新复极差法对比各处理的平均值 o如表 u ∀由此可知 o
李实蜂对 w个品种的李果为害差异极其显著 o且黑宝石受害最重 o大石早生受害最轻 ∀
表 1 解村林场不同品种李树受害情况
Ταβ . 1 Συφφερ χονδιτιον οφ φουρ ϖαριετιεσ οφ
πλυµ ιν Ξιεχυν φορεστ χεντερ
黑宝石
‹ ¬¨¥¤²¶«¬
大石早生
⁄¤¶«¬½¤²¶«¨ ±ª
盖李
Š¤¬¯¬
大石中生
⁄¤¶«¬½«²±ª¶«¨±ª
株数
‘∏°¥¨µ²©·µ¨¨ vz xx v{ vx
果实受害率
⁄¤°¤ª¨ µ¤·¨Πh vz1zvy us1tws uz1yz{ uw1zvv
表 2 多重比较表
Ταβ . 2 Μυλτι−ρεπετιτιον χοµ παρισον
序号 ‘²q 品种 ∂¤µ¬¨·¬¨¶ 平均值 Ξι Ξι p Ξw Ξι p Ξv Ξι p Ξu
t 黑宝石 ‹ ¬¨¥¤²¶«¬ vz1zvy tz1x|y33 tv1ssw33 ts1sx{33
u 盖李 Š¤¬¯¬ uz1yz{ z1xv{33 u1|wx33
v 大石中生 ⁄¤¶«¬½«²±ª¶«¨±ªuw1zvv w1x|v33
w 大石早生 ⁄¤¶«¬½¤²¶«¨±ª us1tws
表 3 多重比较表
Ταβ . 3 Μυλτι−ρεπετιτιον χοµ παρισον
序号
‘²q
品种
∂¤µ¬¨·¬¨¶
平均值  ¤¨±
k¤µ¦¶¬± ΞιtΠul
Ξι p Ξw Ξι p Ξv Ξι p Ξu
t 黑宝石 ‹ ¬¨¥¤²¶«¬ zt1z| ts1yt33 y1{ x1{
u 盖李 Š¤¬¯¬ yx1|| w1{t t1s
v 大石早生 ⁄¤¶«¬½¤²¶«¨ ±ª yw1|| v1{t
w 大石中生 ⁄¤¶«¬½«²±ª¶«¨ ±ª yt1{t
usss年解村林场盖李 !黑宝石 !
大石早生 !大 生果实被害率平均值分
别是 {t1|x h o|s1sw h o{t1tx h 和
zy1ws h ∀将其进行反正弦 k¤µ¦¶¬±
ΞιtΠul转换 o方差分析结果表明果实受
害率差异显著 ∀进一步利用新复极差
法对比各处理平均值 ∀结果见表 v ∀
可知 o李实蜂对 w个品种的李果危害
差异显著 o其中黑宝石受害最重 o大石中生受害最轻 ∀且黑宝石与大石中生达极显著水平 o结果与 t||{ !t|||
年调查结果基本一致 ∀说明不同品种的李树对李实蜂的抗性存在差异 ∀
zx 第 z期 黄大庄等 }w个品种李树果实对李实蜂酶活力的影响
212 取食不同李树品种的李实蜂幼虫羧酸酯酶 !谷胱甘肽 − Σ −芳基转移酶活力测定k表 wl
羧酸酯酶比活力的大小顺序为盖李 大石早生 大石中生 黑宝石 o取食盖李的李实蜂幼虫羧酸酯酶
活性最高 o比活力为 wy1su| v ∀取食黑宝石的李实蜂羧酸酯酶活性最低 o比活力为 u|1vts s o两者相差 t1xz
倍 ∀方差分析表明 ow种李树品种对李实蜂幼虫羧酸酯酶的影响存在显著差异 ∀经多重比较 o盖李 !大石早
生 !大石中生与黑宝石之间存在显著差异 ∀
谷胱甘肽 p ≥ p芳基转移酶活力的大小顺序为黑宝石 大石中生 大石早生 盖李 o方差分析表明 ow
种李树品种对李实蜂幼虫谷胱甘肽 p ≥ p芳基转移酶的影响存在显著差异 ∀
表 4 取食不同李树品种的李实蜂幼虫羧酸酯酶 !谷胱甘肽 − Σ − 芳基转移酶活力测定结果
Ταβ . 5 Χαρβοξψλεστερασε ενζψµε(ΧΕ) , Γλυτατηιονε− Σ − αροµατιχ τρανσφερασε(ΓΤ) ασσαψ οφ Ηοπλοχοµπα φυλϖιχονισ
λαρϖα φεεδινγ ον φουρ πλυµ ϖαριετιεσ
品种
∂¤µ¬·¬¨¶
羧酸酯酶比活力 ≤∞¶³¨¦¬©¬¦¤¦·¬√¬·¼Π
≈°°²¯#°ªptkvs °¬±lpt 
⁄∏±¦¤±. ¶显著性检验
‘²·¬©¬¦¤·¬²±·¨¶·kΑ€ s1sxl
谷胱甘肽转移酶比活力
Š× ¶³¨¦¬©¬¦¤¦·¬√¬·¼Π≈’⁄#°ªptkx°¬±lpt 
⁄∏±¦¤±. ¶显著性检验
‘²·¬©¬¦¤·¬²±·¨¶·kΑ€ s1sxl
盖李 Š¤¬¯¬ wy1su| v „ s1vzs uu „
大石早生 ⁄¤¶«¬½¤²¶«¨ ±ª wu1wyv t „ s1vzw sv „ …
大石中生 ⁄¤¶«¬½«²±ª¶«¨ ±ª ws1w{t t „ s1v|w ws „ …
黑宝石 ‹ ¬¨¥¤²¶«¬ u|1vts s … s1wus yu …
表 5 酶谱分区
Ταβ . 5 Ζψµ ογραµ σεχτιον
酶区
∞±½¼°¨ ¶¨¦·¬²±
酯酶
≤¤µ¥²¬¼¯ ¶¨·
过氧化物酶
°¨ µ²¬¬§¤¶¨
´ t !u t !u
µ v !w v !w !x !
¶ x !y y !z !{ !| !
· z ts !tt !
213 酶谱分析
根据 •©值 o将酯酶同功酶酶谱划分为 w组区带 ∀如图 t及表
x o即酯酶 ´ !µ !¶ !· o分别相当于 •©s ∗ s1t !s1tt ∗ s1us !s1ut ∗
s1vs !s1vt ∗ t1ssk距负极 z1t ¦°处为溴酚蓝示踪线l ∀由酶谱图
可见 o取食大石中生的李实蜂幼虫酯酶酶谱可见 z条带 o取食其他
v种的幼虫可见 y条带 ∀第 t条带酶活性极高 o为李实蜂种的特
征酶带 ∀第 v !w !z条带均依盖李 !大石早生 !大石中生 !黑宝石的
顺序酶活性渐弱 o第 y条带为大石中生仅有 o可能是取食大石中生
的李实蜂的特征酯酶带 ∀从总的趋势看 o盖李 !大石早生的酶活性较强 o大石中生 !黑宝石的酶活性较弱 o且
大石中生与其他 v个品种存在质的差异 o证明李实蜂在不同品种上取食出现了明显的生理分化 ∀根据 •©值
将过氧化物酶酶谱划分为 w组区带 ∀如图 u及表 x o即过氧化物酶 ´ ! µ ! ¶ ! · o分别相当于 •©s ∗ s1ts !
s1tt ∗ s1vs !s1vt ∗ s1ys !s1yt ∗ t1ssk距负极 y1x ¦°处为溴酚蓝示踪线l ∀由酶谱图可见 }盖李 !大石早生酶
带数均为 ts条 o大石中生 !黑宝石均为 z条 ∀第 t !u !v !w !{ !| !tt为取食 w个李品种的李实蜂的共有带 o且第
t !u条带酶活性极高 o为特征谱带 ∀第 v !w条带大石中生 !黑宝石酶活性较强 o第 { !|条带盖李 !大石早生酶
活性较强 o第 tt条带依盖李 !大石早生 !大石中生 !黑宝石的顺序活性渐弱 ∀第 x !ts条带只有盖李 !大石早生
图 t 酯酶同功酶电泳酶谱
ƒ¬ªqt ∞¯ ¦¨·µ²³«²µ¨¶¬¶²©¦¤µ¥²¬¼¯ ¶¨·
图 u 过氧化物酶电泳酶谱
ƒ¬ªqu ∞¯ ¦¨·µ²³«²µ¨¶¬¶²©³¨µ²¬¬§¤¶¨
{x 林 业 科 学 wu卷
可见 o第 y条带仅盖李可见 o第 z条带仅大石早生可见 ∀由过氧化物酶酶谱也可反映出取食不同品种李的李
实蜂在生理上的分化 ∀
v 结论与讨论
昆虫寄主植物形成了某些取食适应机制 o寄主植物体内的一些次生代谢物质 o对昆虫的正常生理代谢具
有毒害作用 ∀同时 o许多种类的植物次生代谢物能够对昆虫的解毒酶系产生诱导作用 o使酶活性提高 ∀羧酸
酯酶 !谷胱甘肽 p ≥ p芳基转移酶是昆虫体内重要的解毒酶系 o在对外源化合物的解毒代谢中起着重要作用 ∀
解毒酶系的改变是昆虫取食适应性的重要形式之一 o也是衡量抗虫性的一个标志 ∀
本研究中从酶谱与酶活力 u个方面反映羧酸酯酶的变化 }酶活性的强弱反映在谱带的清晰度上 o而酶谱
条带的多少与清晰度又反映酶活力的大小 o两者相互一致 ∀盖李 !大石早生 !大石中生的酶活力较大 o反映在
盖李 !大石早生的谱带清晰 !大石中生较其他 v品种多 t条谱带上 ∀由于盖李的羧酸酯酶比活力最大 o则在
一定范围内盖李的抗性水平较高 o黑宝石的抗性水平较低 ∀因此不同的李品种果实对李实蜂幼虫体内的羧
酸酯酶 !谷胱甘肽转移酶的影响不同 ∀品种间羧酸酯酶活性顺序恰好与谷胱甘肽 p ≥ p芳基转移酶活性顺序
相反 o盖李由 Αp ‘„羧酸酯酶活性最高变为谷胱甘肽 p ≥ p芳基转移酶活性最低 o黑宝石由 Αp ‘„羧酸酯酶
活性最低变为谷胱甘肽 p ≥ p芳基转移酶活性最高 ∀这种酶活性顺序的改变恰恰反映了诱导李实蜂幼虫 Α
p ‘„羧酸酯酶 !谷胱甘肽 p ≥ p芳基转移酶活性改变的植物次生代谢物质的种类及含量的不同 ∀野外调查
数据分析显示 w品种中黑宝石受害最重 o所以抗虫性与酶活性差异间有一定联系 ∀
由于羧酸酯酶 !谷胱甘肽转移酶是植物次生物质降解的主要酶系 o所以寄主植物的次生物质对 u种酶的
诱导作用很强 ∀它们可能是某些抗虫品种k以次生性物质为主要抗虫机制的作物品种l失去抗虫作用的原
因 o也是某些取食不同寄主植物的害虫对杀虫剂的敏感性发生变化的原因之一 ∀这可为李实蜂的综合治理
提供依据 ∀如果对诱导李实蜂幼虫这 u种酶活性发生改变的植物次生代谢物做进一步研究 o可能揭示李树
中某些化学成分与 u种酶活力变化的联系 ∀
参 考 文 献
董向丽 o高希武 o郑炳宗 qt||{1 植物次生代谢物质对棉铃虫谷胱甘肽 p ≥ p转移酶和乙酰胆碱酯酶的影响 q植物保护学报 ovktl }zu p z{
高忠奎 qt||y1李实蜂的防治 q中国果树 oktl }w|
何忠效 o张树政 qt||s1 电泳 q北京 }科学出版社
花 蕾 qt||u1李实蜂与杏虎象对李果的为害及防治试验 q山西果树 oktl }uy p u{
姜永幸 o郭予元 qt||y1 不同棉花品种对棉蚜羧酸酯酶活性影响的研究 q棉花学报 o{kwl }utx p ut{
李怀玉 o李家福 qt|{|1 李 q北京 }中国林业出版社
李秀江 o李 锦 qt||{1 李实蜂发生规律与防治技术 q河北果树 okul }w|
南京农业大学 qt||v1昆虫生理生化实验 q北京 }农业出版社
牛连祥 qt||s1李实蜂的防治 q中国果树 okwl }wy
裴喜春 o薛河儒 qt||{1≥„≥及应用 q北京 }中国农业出版社
钦俊德 qt|{z1昆虫与植物的关系 ) ) ) 论昆虫与植物的相互作用及其演化 q北京 }科学出版社
汤德良 o王武刚 qt||y1 棉花品种对棉铃虫体内酶活性的影响 q棉花学报 o{ktl }vy p v|
王亚芝 o杨福银 qt||t1 李实蜂的防治 q北京农业 okwl }uv
张彦广 o黄大庄 o王志刚 o等 qusst1 杨树枝条韧皮部提取液对光肩星天牛羧酸酯酶的影响 q河北林果研究 ovkvl }w| p xt
…µ¤·¶·¨± …qt|{v1≤¼·²¦«µ²°¨ °2wxs ¬±√²¯√¨ ° ±¨·¬±·«¨ ¬±·µ¤¦·¬²±¶¥¨·º¨¨ ± ³¯¤±··¨µ³¨ ±¨ ¶¤±§¬±¶¨¦·«¨µ¥¬√²µ¨¶q „≤≥ ≥¼°³²¶¬∏° ≥¨ µ¬¨¶}us{
‹¬±®¶’ ƒ o≥³∏µ·⁄ × qt|{|1∞©©¨¦·²©©²²§³¯¤±·¶²±·«¨ ¶∏¶¦¨³·¬¥¬¯¬·¼ ²©·«¨ °¬ªµ¤·²µ¼ ªµ¤¶¶«²³³¨µk’µ·«²³·¨µ¤} „¦µ¬§¬§¤¨ l ·² §¨ ·¯¤°¨ ·«µ¬± ¤±§§¬° ·¨«²·¤¨ q
∞¦²± ∞±·²°²¯ o{u }zut p zuy
k责任编辑 朱乾坤l
|x 第 z期 黄大庄等 }w个品种李树果实对李实蜂酶活力的影响