全 文 ：第 wt卷 第 u期
u s s x年 v 月
林 业 科 学
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¤µqou s s x
应用 • „°⁄标记技术探讨枣与酸枣的分类学关系 3
刘 平 彭建营 彭士琪 周俊义 代 丽
k河北农业大学园艺学院 保定 sztsstl
关键词 } 枣 ~酸枣 ~群体遗传 ~分类 ~ • „°⁄
中图分类号 }≥zt{1w| ~≥zt{1wy 文献标识码 }„ 文章编号 }tsst p zw{{kussxlsu p st{u p sw
收稿日期 }ussv p s| p sx ∀
基金项目 }河北省自然科学基金kvsstuvl ∀
3 彭建营为通讯作者 ∀
tl阎桂军 qt|{w q枣细胞学研究 q河北农业大学硕士学位论文
Στυδψ ον Σψστεµατιχ Ρελατιονσηιπσ οφ Ζιζιπηυσϕυϕυβα ανδ Ζιζιπηυσσπινοσα
Υσινγ ΡΑΠ∆ Τεχηνιθυε
¬∏°¬±ª °¨ ±ª¬¤±¼¬±ª °¨ ±ª≥«¬´¬ «²∏∏±¼¬ ⁄¤¬¬
k Χολλεγε οφ Ηορτιχυλτυρε o Αγριχυλτυραλ Υνιϖερσιτψοφ Ηεβει Βαοδινγ sztsstl
Αβστραχτ } Š¨ ±¨ ·¬¦µ¨ ¤¯·¬²±¶«¬³¶¥¨·º¨ ±¨ Ζιζιπηυσϕυϕυβα ¤±§ Ζιζιπηυσσπινοσα ³²³∏¯¤·¬²±¶º¨ µ¨ ¶·∏§¬¨§∏¶¬±ª • „°⁄ §¤·¤¬±
³²³∏¯¤·¬²± ª¨ ±¨·¬¦¶q uzx ²¯¦¬ º¨ µ¨ ª¤¬±¨ § ¤°²±ª º«¬¦« uw| ²¯¦¬ º¨ µ¨ ³²¯¼°²µ³«¬¦¥¼ uu ³µ¬°¨ µ¶q ׫¨ ³²¯¼°²µ³«¬¦ ²¯¦¬
³¨µ¦¨±·¤ª¨ º¤¶{| h ¤°²±ª Ζ qσπινοσα ³²³∏¯¤·¬²± º«¬¯¨ ·«¤·²© Ζ qϕυϕυβα³²³∏¯¤·¬²± º¤¶xy h qvt ¶³¨¦¬©¬¦• „°⁄ °¤µ®¨µ¶º¨ µ¨
§¨·¨¦·¨§²± v Ζ qϕυϕυβα √¤µ¬¨·¬¨¶¤±§tx Ζ qσπινοσα©²µ°¶q≤¯ ∏¶·¨µ¤±¤¯¼¶¬¶¶«²º¨ §}º«¨ ±Κ€ tu o·«¨ ©²µ°¶·¨¶·¨§º¨ µ¨ §¬√¬§¨§
¬±·²u ªµ²∏³¶q’±¨ ¬±¦¯∏§¨§ Ζ qϕυϕυβα¦√ q¤±«∏¤±ª§¤½¤²o≠∏§¬¦«∏¤±ª¤±o≠∏¤±¶«¬¦«∏¤±ª¤±o÷¬¤²¦«∏¤±ª¤±o±¬¤±·¤¬‘²qt o
∏½«∏¤±ª¦«∏¤±ª¤±~·«¨ ²·«¨µ¬±¦¯∏§¨§ Ζ qϕυϕυβα¦√ q¬¯¬±ª§¤± ¤±§uy Ζ q σπινοσα©²µ°¶q „¯¯¤¥²√¨ ¬±§¬¦¤·¨§·«¤·Ζ qϕυϕυβα
¤±§ Ζ qσπινοσᶫ²∏¯§¥¨ µ¨ª¤µ§¨§¤¶·º²¶¨³¤µ¤·¨¶³¨¦¬¨¶q
Κεψ ωορδσ} Ζιζιπηυσϕυϕυβα~ Ζιζιπηυσσπινοσα~³²³∏¯¤·¬²± ª¨ ±¨·¬¦¶~¶¼¶·¨°¤·¬¦µ¨ ¤¯·¬²±¶«¬³~• „°⁄
我国枣树k Ζιζιπηυσϕυϕυβαl !酸枣k Ζιζιπηυσ σπινοσαl 资源丰富 o枣树以无性繁殖为主 o酸枣除有性繁殖外 o
也可进行根蘖繁殖 o枣和酸枣均为多年生植物 ∀赞皇大枣是目前发现的惟一的自然三倍体品种tl o其他枣品
种和酸枣均为二倍体 ∀河北省赞皇县是赞皇大枣的原产地 o于 usss年对赞皇县及附近的枣品种和酸枣进行
了普查 o除酸枣外 o还有赞皇大枣 !榆底串杆 !吕庄串杆 !紫铃蛋 !前台 t号 !元氏串杆 !小串杆 z个枣品种 ∀
群体遗传学以居群k³²³∏¯¤·¬²±l为研究对象 o研究居群遗传组成变化 o最终阐明生物进化的机制 ∀ • „°⁄
技术在探测群体的遗传多样性 !了解群体的遗传学结构 !探讨系统发育和进化等方面发挥越来越重要的作用
k王中仁 ot||yl ∀枣和酸枣的分类学关系一直是学者们关注的问题 o但由于试验手段和取材的原因 o得到的
结果不一 ∀本研究以河北省赞皇县及附近的枣群体和酸枣群体为试材 o对枣和酸枣进行群体遗传关系研究 o
以期从群体遗传学角度 o揭示枣和酸枣的分类学关系 ∀
1 材料与方法
t1t 材料 z个枣品种和 uy个酸枣类型均取自河北省赞皇县 o树龄从 ts ∗ uss年不等 ∀酸枣处于野生状
态 o枣树生长良好 ∀供试枣品种有赞皇大枣 !榆底串杆 !吕庄串杆 !紫铃蛋 !前台 t号 !元氏串杆 !小串杆 ~供试
酸枣有¶t ∗ ¶uy共 uy个类型 o年龄在 ts ∗ uss年不等 ∀usst年 w月下旬取幼嫩叶片kus片左右l放入冰壶中
带回实验室 o液氮处理后立即放入 p zs ε 冰箱保存 o以备 • „°⁄分析之用 ∀
t1u 方法 优化的枣和酸枣 • „°⁄反应体系为 }us ˏ反应体系中 o模板 ws ∗ ys ±ªoפ´ 酶为 t1u ˜ o§‘×°¶浓
度 tss Λ°²¯#pt oªun浓度 u1s °°²¯#pt o引物浓度为 s1u Λ°²¯#pt ∀利用 uu个多态引物k≥z !≥{ !≥tu !≥uz !
≥vw !≥wv !≥tsw !≥tsx !≥tsz !≥ts{ !≥tzt !≥tzw !≥tzy !≥vst !≥vsv !≥vsw !≥vsx !≥vtw !≥vyy !≥vy{ !≥vzx !≥vzyl对供试 u
个群体进行扩增 ∀ • „°⁄谱带有记为 t o无记为 s ∀
利用统计软件 ≥°≥≥k¶·¤·¬¶·¬¦¤¯ ³µ²ªµ¤°©²µ¶²¦¬¤¯ ¶¦¬¨±¦¨l©²µ•¬±§²º¶计算两两类型之间的欧氏距离 o利用离
差平方和法k • ¤µ§. ¶°¨ ·«²§l对数据进行聚类分析 o以度量群体间遗传学关系 ∀
2 结果与分析
u1t 枣及酸枣的 • „°⁄扩增结果 利用 uu个引物对 z个枣品种和 uy个酸枣类型进行了扩增 o部分扩增结
果见图 t ∀共扩增出 uzx个位点 o其中多态位点为 uw|个 o多态位点百分率为 |t h k表 tl ∀z个枣品种共扩增
出 t{v个位点 o多态位点占 xy h ~uy个酸枣类型共扩增出 uyx个位点 o多态位点占 {| h ∀共有 v个枣品种和
tx个酸枣类型共扩增出 vt个特异位点 o这些特异位点为枣品种和酸枣类型的鉴别提供了依据k表 ul ∀
图 t 引物 ≥ts{的 • „°⁄扩增结果
ƒ¬ªqt • „°⁄ ³¤·¨µ± ¤°³¯¬©¬¨§¥¼ ³µ¬° µ¨≥ts{
 }标准 ¤µ®¨µ~t ∗ z }分别为赞皇大枣 !榆底串杆 !前台 t号 !元氏串杆 !小串杆 !紫铃蛋 !吕庄串杆 ¤±«∏¤±ª§¤½¤²o≠∏§¬¦«∏¤±ª¤±o
±¬¤±·¤¬‘²qt o≠∏¤±¶«¬¦«∏¤±ª¤±o ÷¬¤²¦«∏¤±ª¤±o¬¯¬±ª§¤±o∏½«∏¤±ª¦«∏¤±ª¤±¬± ²µ§¨µ~{ ∗ vv }分别为 ¶t ∗ ¶uy ¶t ∗ ¶uy ¬± ²µ§¨µq
表 1 22 个多态引物对枣群体和酸枣群体扩增的多态位点比例 ≠
Ταβ . 1 Προπορτιον οφ πολψµ ορπηιχ λοχι οφ Ζ .ϕυϕυβα ποπυλατιον ανδ Ζ . σπινοσα ποπυλατιον βψ 22 πριµερσ
引物
°µ¬° µ¨
酸枣 Ζ q σπινοσα 枣 Ζ qϕυϕυβα
 ° •Πh  ° •Πh ׏ ×° „•Πh
≥z tz ty |w | w ww tz ty |w
≥{ tu tu tss z x zt tu tu tss
≥vsv ts ts tss z y {y ts ts tss
≥tu tv tu |u ts { {s tv tv tss
≥uz t{ tz |w { x yv t| t| tss
≥vw | { {| | x xy tt ts |t
≥wv ts z zs ts x xs tt { zv
≥tsw ty tw {{ tt | {u tz tx {{
≥tsx | y yz z u u| ts z zs
≥tsz tx tv {z | w ww tx tv {z
≥ts{ tt | {u z u u| tt | {u
≥tzt tt tt tss ts | |s tu tu tss
≥tzw ty ty tss tu | zx ty ty tss
≥tzy x v ys w t ux x v ys
≥vst tx tx tss z w xz tx tx tss
≥vsw tu tu tss z w xz tu tu tss
≥vsx ts y ys { w xs ts { {s
≥vtw tt | {u | w ww tt | {u
≥vyy tt | {u | t tt tt | {u
≥vy{ tx tw |v ts { {s ty tx |w
≥vzx tt | {u z v wv tu ts {v
≥vzy | { {| y v xs | { {|
总和 ײ·¤¯ uyx uvy {| t{v tsv xy uzx uw| |t
≠ }扩增位点数量 ²¦∏¶±∏°¥¨µ¤°³¯¬©¬¨§~° }多态位点数量 °²¯¼°²µ³«¬¦¯ ²¦¬±∏°¥¨µ~• }多态位点比例 •¤·¬²²©³²¯¼°²µ³«¬¦±∏°¥¨µ~׏}总扩增
位点数量 ײ·¤¯ ²¯¦∏¶±∏°¥¨µ¤°³¯¬©¬¨§~×° }总多态位点数量 ײ·¤¯ ³²¯¼°²µ³«¬¦ ²¯¦¬±∏°¥¨µ~„• }平均多态位点比例 „√¨ µ¤ª¨ µ¤·¬²²©³²¯¼°²µ³«¬¦±∏°¥¨µq
u1u 枣和酸枣群体间的遗传学关系 利用 ≥°≥≥软件计算供试类型间的欧氏距离 o前台 t号和 ¶{的欧氏距
离最远 o为 ts1sxs o元氏串杆和小串杆的欧氏距离最近 o为 w1tuv o平均欧氏距离为 z1xtv ∀枣品种平均欧氏距
v{t 第 u期 刘 平等 }应用 • „°⁄标记技术探讨枣与酸枣的分类学关系
表 2 供试品种或类型的特有标记
Ταβ . 2 Σπεχιφιχ Ρ ΑΠ∆ µαρκερσ οφ ϖαριετιεσ ορ φορµστεστεδ
品种或类型
∂¤µ¬¨·¼ ²µ©²µ°
特有标记
≥³¨¦¬©¬¦°¤µ®¨µk¶l
品种或类型
∂¤µ¬¨·¼ ²µ©²µ°
特有标记
≥³¨¦¬©¬¦°¤µ®¨µk¶l
紫铃蛋 ¬¯¬±ª§¤± ≥uz p txxs ~≥tsw p usss 前台 t号 ±¬¤±·¤¬‘²qt ≥vy{ p xvs
元氏串杆 ≠∏¤±¶«¬¦«∏¤±ª¤± ≥vw p |zs ~≥wv p usxs ¶v ≥tu p tsss ~≥vw p tzxs
¶w ≥vzx p xus ¶y ≥tu p y{s ~≥vst p tzxs
¶z ≥vy{ p {xs ¶tt ≥vsv p yzs ~≥vtw p wxs
¶tv ≥z p tyxs ~≥tsw p tvxs ≥{ p tsss ~≥uz p tuzs
¶tu ≥z p tsxs ¶tx ≥uz p t{ss
¶tw ≥tsw p ttzs ~≥z p {ss ¶ty ≥z p w{s
¶tz ≥vsv p |ss ~≥vsw p uuss ~ ¶t{ ≥{ p t{ss ~≥tzw p tszx
≥vy{ p y{s ~≥{ p txss ¶us ≥tzy p xxs
¶uu ≥tsw p twxs ¶uy ≥tsz p uwss
图 u 供试枣品种 !酸枣类型的聚类图k离差平方和法l
ƒ¬ªqu ≤ ∏¯¶·¨µ¬±ª©²µ Ζ qϕυϕυβα ¦∏¯·¬√¤µ¶¤±§ Ζ q σπινοσα©²µ°¶
·¨¶·¨§k • ¤µ§. ¶° ·¨«²§l
t ∗ z }分别为赞皇大枣 !榆底串杆 !前台 t号 !元氏串杆 !
小串杆 !紫铃蛋 !吕庄串杆 z个枣品种 Ζ qϕυϕυβα ¦√ q
¤±«∏¤±ª§¤½¤²o≠∏§¬¦«∏¤±ª¤±o ±¬¤±·¤¬‘²qt o
≠∏¤±¶«¬¦«∏¤±ª¤±o÷¬¤²¦«∏¤±ª¤±o¬¯¬±ª§¤±o
∏½«∏¤±ª¦«∏¤±ª¤±¬± ²µ§¨µq
离为 y1xsu o其中小串杆与紫铃蛋最远 o为 {1ysu o元氏串
杆和小串杆的欧氏距离最近 o为 w1tuv ~酸枣平均欧氏距
离为 {1w{z o其中 ¶v与 ¶{最远 o为 |1{|| o¶t与 ¶u最近 o
为 y1w{t ~枣与酸枣间的平均欧氏距离大于酸枣平均欧
氏距离和枣平均欧氏距离 o为 {1yzy o其中赞皇大枣与¶v
最近 o为 z1twt o前台 t号与 ¶{最远 o达 ts1sxsk数据未
列出l ∀
根据欧氏距离 o利用离差平方和法k • ¤µ§方法l对
供试品种 !类型的聚类结果见图 u ∀截取 Κ€ tu o可将供
试类型分为 u类 }第 t类包括赞皇大枣 !榆底串杆 !元氏
串杆 !小串杆 !前台 t号 !吕庄串杆 y个枣品种 ~第 u类
包括枣品种紫铃蛋和 uy个酸枣类型 ∀从聚类图看 o同
样生长在赞皇县的枣品种和酸枣基本可以分开 ∀
tl阎桂军 qt|{w q枣细胞学研究 q河北农业大学硕士学位论文
ul李树林 qt|{x q枣花粉形态的研究 ) ) ) 论枣的品种分类与进化 q河北农业大学硕士学位论文
vl宋 婉 qt||| q中国枣优良品种 ⁄‘„指纹图谱的研究 q北京林业大学博士学位论文
wl刘孟军 qt||v q中国枣属植物的分类学研究 q北京医科大学博士学位论文
3 讨论
关于枣和酸枣的分类学关系 o前人已经作过多方面
研究 ∀目前有 u种观点 ∀一些学者认为枣和酸枣为一
个种 ∀阎桂军tl根据细胞学研究结果 o将枣和酸枣定为
同一种 o酸枣为原生种 o枣为栽培类型 ∀李树林ul认为
枣和酸枣在花粉形态上极度相似 o中间类型大马枣k Ζ q
ϕυϕυβα¦√ q⁄¤°¤½¤²l的出现说明二者划为一个种是颇为
符合自然规律的 ∀宋婉vl分析了 yz个枣优良品种和 t
个酸枣类型的 „ƒ°谱带 o认为枣和酸枣应为一个种 ∀
另一些学者将枣和酸枣定为 u个种 ∀酸枣在枝条
弯曲度 !托刺 !叶片 !花 !果实 !外k中l果皮厚度 !果实风
味 !种仁饱满度等方面与枣存在显著差异 o刘孟军wl对
分布于各省 !市的 uss多个枣品种和 txs个酸枣类型的

w{t 林 业 科 学 wt卷
部分数量性状进行了统计分析表明 }枣和酸枣在各性状的极端数值上均有交叉 o但从标准偏差看 o在果实长
度 !中果皮厚度与果核直径的比及果核长度等性状上存在明显间断 ∀另外 o酸枣与枣的果肉 ∂¦含量 !花蕾的
芦丁和桑色素含量及花粉的k异l丙氨酸含量 !花粉形态 !枝皮过氧化物同工酶谱带差异显著 ∀建议把枣和酸
枣定为 u个独立的种 ∀
以上结果多以一个或少数几个酸枣类型作为研究对象 ∀ • „°⁄可应用于遗传多样性和系统学研究k洪
棋滨等 ousst ~施苏华等 ot||{ ~„¼µ¨¶ ετ αλqot||| ~‹∏¤±ª ετ αλqot||{l ∀本研究利用 uu个引物对赞皇县的 z个
枣品种和 uy个酸枣类型进行了 • „°⁄分析 o从聚类图上可以看出 }截取 Κ€ tu o可把供试的品种和类型分为 u
类 ∀一类由赞皇大枣 !榆底串杆 !元氏串杆 !小串杆 !前台 t号 !吕庄串杆 y个枣品种组成 ~另一类由 uy个酸
枣类型 !紫铃蛋k枣品种l组成 ∀说明 o同样生长在赞皇县境内的枣和酸枣基本可以分开 ∀从群体遗传学角
度 o⁄‘„水平的研究表明 o枣和酸枣宜作为 u个独立的种 ∀
参 考 文 献
洪棋滨 o侯 磊 o罗小英 o等 qusst q应用 • „°⁄分析川西北高原青稞的遗传背景 q中国农业科学 ovwkul }tvv p tv{
施苏华 o唐绍清 o陈月琴 o等 qt||{ qtt种金花茶植物的 • „°⁄分析及其系统学意义 q植物分类学报 ovykwl }vtz p vuu
王中仁 qt||y q植物等位酶分析 q北京 }科学出版社
„¼µ¨¶⁄ • o •¼¤± ƒ qt||| q Š¨ ±¨ ·¬¦§¬√¨ µ¶¬·¼ ¤±§¶·µ∏¦·∏µ¨ ²©·«¨ ±¤µµ²º ±¨§¨ °¬¦ Ωψετηια ρετιχυλατα ¤±§¬·¶¦²±ª¨ ±¨ µ Ω qβολανδεριk„¶·¨µ¤¦¨¤¨ l ∏¶¬±ª • „°⁄
¤±§¤¯ ²¯½¼°¨ ·¨¦«±¬´∏¨¶q „°¨ µ¬¦¤± ²∏µ±¤¯ ²© …²·¤±¼o{ykvl }vww p vxv
‹∏¤±ª ‹ • o⁄¤±¨ ƒ oŽ∏¥¬¶¬¤® × qt||{ q „¯ ²¯½¼°¨ ¤±§ • „°⁄ ¤±¤¯¼¶¬¶²©·«¨ ª¨ ±¨ ·¬¦§¬√¨ µ¶¬·¼ ¤±§ª¨²ªµ¤³«¬¦√¤µ¬¤·¬²± ¬± º¬¯§³²³∏¯¤·¬²±¶²©·«¨ „°¨ µ¬¦¤±
¦«¨¶·±∏·kƒ¤ª¤¦¨¤¨ l q „°¨ µ¬¦¤± ²∏µ±¤¯ ²© …²·¤±¼o{xkzl }tstv p tsut
x{t 第 u期 刘 平等 }应用 • „°⁄标记技术探讨枣与酸枣的分类学关系