全 文 ：园 　　艺 　　学 　　报 33卷
and the p revention of browning by inhibitors of polyphenol biosynthesis. B iosci. B iotechnol. B iochem. , 2001, 65: 1016～1021
9　Peiser G, López G G, CantwellM, SaltveitM E. Phenylalanine ammonia2lyase inhibitors control browning of cut lettuce. Postharvest B iology
and Technology, 1998, 14: 171～177
10　许传俊 , 李　玲 , 李　红 , 张铭光. 蝴蝶兰褐变外植体的显微结构观察以及褐变成分的初步分析. 园艺学报 , 2005, 32 ( 6) :
1111～1113
Xu C J, L i L, L i H, ZhangM G. Prelim inary studies on the elements of browning and the changes in cellular texture of leaf exp lant browning
in Phalaenopsis. Acta Horticulturae Sinica, 2005, 32 (6) : 1111～1113 ( in Chinese)
收稿日期 : 2005 - 12 - 08; 修回日期 : 2006 - 04 - 30
基金项目 : 科研院所社会公益研究专项 (2005D IB4J045)3 通讯作者 Author for correspondence ( E2mail: xllzy@2631net)
海南钻喙兰离体繁殖及植株再生
李志英 　徐 　立 3 　 (中国热带农业科学院热带作物品种资源研究所 , 海南儋州 571737)
In Vitro Propaga ion and Plant Regeneration of Rhynchostylis gigan tiea (L indl. )
Ridl.
L i Zhiying and Xu L i3 　 ( Institu te of Tropical C rops Genetic R esources, Ch inese A cadem y of Tropica l A gricu ltura l Sciences,
D anzhou, Hainan 571737, China)
关键词 : 海南钻喙兰 ; 类原球茎体 ; 植株再生
中图分类号 : S 68 　　文献标识码 : A　　文章编号 : 05132353X (2006) 0320674201
海南钻喙兰 〔Rhynchosty lis gigan tiea (L indl. ) R idl. 〕是兰科钻喙兰属植物 , 为我国云南、海南特有的野生兰花
品种。近年来由于无限制采挖 , 海南的野生海南钻喙兰数量锐减 , 严重影响了海南钻喙兰生态群的构成 , 几近濒危。
由于其种子在自然条件下不易萌发 , 分株法繁殖速度太慢 , 因此 , 作者以海南钻喙兰未成熟种子为外植体 , 通过类原
球茎体途径 , 对海南钻喙兰进行了离体快速繁殖。
分期取海南热带植物园中海南钻喙兰授粉后 90 d的蒴果 , 先用自来水冲洗表面 , 然后在超净工作台用 70%乙醇
进行表面消毒 2次 , 每次 2 m in, 吹干后 , 小心剖开蒴果 , 用镊子取出细小的种子接种在添加不同植物生长调节剂的
MS固体培养基上。培养温度 (25 ±2) ℃, 光照 12 h /d, 光照强度 1 000～1 500 lx。
结果表明 : 未成熟种子接种到 1 /2MS +BA 015 mg/L +NAA 0～012 mg/L的培养基上 40 d开始膨大 , 60 d左右开
始分化出白色愈伤组织 (图版 , 1)。诱导 60 d的愈伤组织转入添加 BA 210 mg/L和 NAA 012～210 mg/L的 1 /2MS培
养基上 , 60 d左右可形成指状胚状体 (图版 , 2) , 类似种子萌发形成的早期原球茎 , 称类原球茎 ( p rotocorm2like
bodies, PLB s)。其中以 BA 210 mg/L +NAA 110 mg/L对 PLB s的诱导率最高 , 为 7517%。降低 NAA的浓度 , 胚性愈伤
组织容易转绿 , 形成少量类原球茎并萌发成苗 ; 提高 NAA浓度 , 外植体容易玻璃化。PBL s每 50 d转入相同的新鲜培
养基可保持不断增殖的状态。PLB s在不添加任何外源生长调节剂的培养基上培养 20 d后 , 顶部膨大并分化出子叶 ,
同时在膨大部位的基部分化出假根 (图版 , 3) , 类似种子萌发形成的原球茎 ; 继续培养 , 可逐渐分化出真叶 , 培养
60 d, 可形成具有 2～3片真叶的不定芽 , 并带有已经发育的根 (图版 , 4)。分离具有 2～3片真叶的小苗 , 接种到添
加 100 g/L香蕉的 MS培养基上培养 80 d, 即可获得叶片长 1～2 cm, 根长 015～1 cm的健壮植株。离体培养的海南钻
喙兰植株洗净培养基 , 沥干水分 , 移栽到粗椰糠 ∶河沙 (1∶1) 的基质中 , 湿度保持 85%左右 , 适度遮荫 , 成活率可
达 95%以上。该体系能够使 PLB s在相同的培养基中不断增殖 , 而多种兰花的 PLB s均可用于基因的遗传转化 , 因此 ,
该体系的建立不仅为海南钻喙兰的快速繁殖提供了技术参考 , 也为海南钻喙兰的深入研究奠定了基础。
图版说明 : 1. 胚性愈伤组织 ; 2. 类原球茎体 ; 3. 类原球茎体萌发 ; 4. 芽丛。
Explana tion of pla tes: 1. Embryonic callus; 2. Protocorm2like bodies; 3. Germ inated p rotocorm s with rhizoid; 4. Shoots.
476