全 文 ：园 艺 学 报 2004，31(4)：540～542
Acta Horticuhurae Sinica
． ． ． ． ． ． — —
杏黄兜兰和硬叶兜兰的种子试管培养
陈之林 叶秀 梁承邺 段 俊
(中国科学院华南植物园，广州 510650)
摘 要：杏黄兜兰 (Paphiopedilum armeniacum)和硬叶兜兰 (P．micranthum)受粉后 120 d和180 d的
种子接种到1／4 MS，Ms，R，Kc，Vw和花宝 1号培养基 进行试管培养。低盐浓度的培养基较适宜兜兰
种子萌发，R培养基效果最好，萌发率可达30％以上；果荚采收的时间对种子萌发有重要的影响；添加
200 mL．I| 的椰子乳可促进种子萌发。育苗培养基中添加活性炭2 mg·L 和香蕉匀浆 100 g。I 有利于
种子苗生长。
关键词：兜兰；杏黄兜兰；硬叶兜兰；试管培养
中图分类号：S 68 文献标识码：A 文章编号：0513-353X (2004)04-0540-03
Seed Germination in Vitro of Paphiopedilum armeniacum and P．micranthum
Chen Zhilin，Ye Xiulin ，Liang Chengye，and Duan Jun
(South China Botarf Garden，Academia Sinica，Guangzhou 510650，China )
Abstract：The seeds take from capsules harvested 1 20 days and 1 80 days after pollination of Paphiopedi—
lum armeniacum and P．micranthum．These were inoculated on 1／4MS， MS， R， KC，VW and “Hyponex
1” media．AU the germination was recorded in 120 days after polination for both two species．The higher
germination rate get in lower salt concentration medium than higher salt concentration medium．R medium iS
the best for germ ination in test．Coconut milk stimulate germination．The addition of activated charcoal 2 g·
L‘。and banana homogenate 100 g·L iS benefit for growth and development of seedlings．
Key words：Paphiopedilum；P．armeniacum ；P．micranthum；Germ ination in vitro
1 目的、材料与方法
杏黄兜兰 (Paphiopedilum armeniacum)和硬叶兜兰 (P．micranthum)是我国特有的兜兰原生种，
是国家一级重点保护的濒危物种，具有极高的观赏价值。兰科植物种子没有胚乳，萌发时需要共生真
菌提供营养，在自然条件下萌发困难，利用人工培养基可以代替共生真菌使种子萌发。兜兰属是兰科
植物中种子试管培养最困难的属之一，目前国内未见杏黄兜兰和硬叶兜兰种子培养的报道，开展这两
种兜兰的试管培养，有利于其保护和开发。
试验材料为华南植物园温室栽培的杏黄兜兰和硬叶兜兰。种子萌发培养基分别为 1／4MS、MS、
R ¨
、 KC、Vw和花宝 1号 (3 L)无机盐成分，附加 B5维生素成分 (肌醇 100 mg·L +V l0
mg·L～+VB6 1 mg·L +烟酸 1 mg·L )，蔗糖 15 g·L～，Gelan gum 3 g·L～，pH 5．4。其中
KC培养基再分别加入椰子乳200 mL·L～、胰蛋白胨 1 g·L～、酵母提取物 1 g·L～。育苗培养基
为 R萌发培养基。壮苗培养基为育苗培养基中加入活性炭 2 g·L～、香蕉匀浆 100 g·L～、NAA 1
mg·L～。
于2000年3月选取生长强健、整齐的植株在花开放 1 d后进行 白花授粉，分别在授粉后 120 d和
180 d时取下荚果置于70％酒精浸泡30 S，0．1％升汞灭菌15 min，无菌水清洗5遍，切开果荚，将种
收稿 日期：2003—09—20；修回日期：2003—11—17
基金项目：广东科技 计划项目 (c203o4、2002A2(MOS01、2003A2010401)；中国科学院知识创新工程重要方向项目 (kscx2一sw一319)
}通讯作者 Author for correspondence
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4期 陈之林等：杏黄兜兰和硬叶兜兰的种子试管培养
子均匀地撒到培养基表面。培养条件：(25±1)c【=，暗培养3周后转到光下培养，光照 12 h／d，光照
强度 1500～2000 lx。种子培养4周后，在解剖镜下观察，以种子膨大形成白色原球茎为发芽标准，
进行萌发率统计，待原球茎转绿出芽后，将原球茎转入育苗培养基中培养，在小苗出现两片叶后，转
接到壮苗培养基上培养，3～4个月后出瓶栽培。
2 结果与讨论
2．1 果荚成熟度和培养基对兜兰种子萌发的影响
两种兜兰种子在 R培养基上萌发率最高，硬
叶兜兰 (图版，1)和杏黄兜兰分别可达 32．4％
和25．2％；在 MS培养基上萌发率最低，硬叶兜
兰仅有极少种子萌发，而杏黄兜兰没有萌发；但
采用 1／4MS培养基则分别有 l1．0％和 8．1％的萌
发率。可见培养基的盐分组成和盐浓度是影响种
子萌发的重要因素。果荚采收的时间对种子萌发
有重要的影响，生长 120 d的种子可萌发，而
180 d的种子，果荚已近开裂，种子为黑色，在本
试验中没有萌发，这可能是因为完全成熟的种子
进入了休眠期或产生了某些抑制物质的原因。胚
的发育阶段对种子萌发的影响有待进一步研究。
试验结果表明授粉 120 d后播种，杏黄兜兰的萌
发率在各供试培养基上较硬叶兜兰的低 (表 1)。
表 1 果荚成熟度和培养基对兜兰种子萌发的影响
Table 1 Efect of capsule’S matu~ty and medium composition
on seed germination in vitro of Paphiopedilum spp． (％ )
培养基
Medium
硬叶兜兰 杏黄兜兰
Pnnhiopedilum micranthum Paphiopedilum (trtt~ni(t~tztu
120 d果龄 180 d果龄 120 d果龄 180 d果龄
Fruit growth Fruit growth Fruit growth Fruit growth
time l20 d time l80 d time l2O(1 time l80 d
注：数字后不同大、小写字母表示差异达 0．Ol、0．05显著
水平， F同
Note：The different capital and small letter after figures indicated
significance at P=0．05 or 0．0l leve1．respeeti~el>． The same below．
种子萌发后形成原球茎，播种 3周后可见白色原球茎出现，及时转到光下培养，多数原球茎
长大并转绿。8周后有芽长出。如种子萌发后不及时转到光下培养而继续暗培养4周，则原球茎可
生长膨大，颜色为白色，转到光下后大多数原球茎不能转绿成苗。这可能是在兜兰种子萌发过程
中需要光的缘故。部分萌发的种子出现褐死现象，推测供试培养基仍然不是其最佳生长培养基所
致。
2．2 有机添加物对兜兰种子萌发的影响
一 般认为在兰花及其它植物的胚培养基中加
入适量 的椰子乳对种子 的萌发有利，本试验中
200 mL·L 椰子乳对两种兜兰种子的萌发都有
较好的促进作用，但在后期成苗时会产生一胚多
苗现象，部分苗生长不正常。椰子乳中含有大量
的植物激素，可能引起种子形态发育的改变。胰
蛋白胨和酵母提取物的添加对种子的萌发没有显
著的影响，但种子的萌发和苗的生长较快。试验
表明，在培养基中添加适当的有机添加物有利于
兜兰种子的萌发和生长 (表2)。在兰科植物组织
表 2 椰子乳、胰蛋白胨和酵母提取物对兜兰种子萌发率的影响
Table 2 The efection of coconut milk，tryptone and yeast
extract on germination rate of Paphiopedilum spp． (％ )
注：基本培养基为KC培养基。Note：Use KC treditun as I】}lse mediⅢlL
培养时常常添加各种有机物，促进培养物的生长与分化，虽然添加物的成分复杂，难以确定其有效因
素，但效果显著，在生产上有较高的应用价值。
2．3 育苗与移栽
在兜兰原球茎转绿出芽后进行 1次转瓶，培养基采用萌发效果最好的R萌发培养基，1个月后可
见兜兰叶片伸展及有根长出 (图版，2)。及时转移到壮苗培养基上，添加活性碳 2 g·L 和香蕉匀
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