全 文 ：第２１卷　第３期
　Vol．２１　 No．３
草　地　学　报
ACTA AGRESTIA SINICA
　　　　　 ２０１３年 ５月
　 May　２０１３
doi:１０．１１７３３/j．issn．１００７Ｇ０４３５．２０１３．０３．０２７
白羊草NAC转录因子基因的克隆及表达分析
方志红１,王学敏２,李　俊２,董　洁２,高洪文２,董宽虎１∗
(１．山西农业大学动物科技学院,山西 太谷　０３０８０１;２．中国农业科学院北京畜牧兽医研究所,北京　１００１９３)
摘要:NAC转录因子是植物特有的转录因子并在植物的生长发育过程中发挥重要的作用,根据其他植物 NAC转
录因子基因的氨基酸保守序列设计简并引物,通过RTＧPCR和RACE技术从白羊草(Bothriochloaischaemum)中
获得了全长cDNA,命名为BiNAC.序列分析表明,该cDNA片段全长为１５４９bp,开放阅读框１１２５bp,编码３７４
个氨基酸,具有典型的NAC类蛋白的结构特征.进化树分析表明,该蛋白属于 ATAF亚族,与高粱(SorghumbiＧ
color)亲缘关系最近,同源性达到９４％.RealＧtimePCR检测结果表明,BiNAC基因在茎中的表达量最高,根中表
达量最少,并且受NaCl胁迫表达上调.同时成功构建了植物表达载体pBI１２１ＧBiNACＧGUS,为进一步开展 NAC
基因的功能研究创造了条件.
关键词:白羊草;NAC转录因子;表达分析;基因序列
中图分类号:Q９４３．２　　　　文献标识码:A　　　　　文章编号:１００７Ｇ０４３５(２０１３)０３Ｇ０５９０Ｇ０８
CloningandExpressionAnalysesofNACTranscription
FactorGeneinBothriochloaischaemum
FANGZhiＧhong１,WANGXueＧmin２,LIＧJun２,DONGJie２,GAOHongＧwen２,DONGKuanＧhu１∗
(１．ColegeofAnimalScienceandTechnology,ShanxiAgriculturalUniversity,Taigu,ShanxiProvince０３０８０１,China;
２．InstituteofAnimalScience,ChineseAcademyofAgricultureSciences,Beijing１００１９３,China)
Abstract:NACtranscriptionfactorsarespecifictoplantsandplayanimportantroleinadiversesetofdeＧ
velopmentalprocesses．UsingRTＧPCRandRACEtechnologywithapairofdegenerateprimerdesigned
baseonthesequenceofthehomologousgenefromotherplants,acDNAofNACgenewasclonedfrom
Bothriochloaischaemum,namedBiNAC．SequenceanalysisshowedthatthefulＧlengthofcDNAsequence
was１５４９bpincludingan１１２５bpopenreadingframewhichencodeda３７４ＧaminoＧacidpolypeptideandhad
thetypicalcharacteristicsofNACfamily．PhylogenetictreeanalysisindicatedthatNACgenebelongedto
theATAFsubfamily,andtheBiNACgeneofB．ischaemumwascloselyrelatedtothatofSorghumbicolＧ
orwith９４％homology．RealＧtimePCRresultsrevealedthattheexpressionofBiNACwasthemostabunＧ
dantinstemandtheleastinroot．TheexpressionlevelofBiNACgenewasincreasedinleaveswithNaCl
stress．Meanwhile,theplantexpressionplasmidpBI１２１ＧBiNACＧGUSwasconstructedsuccessfuly,which
willayafoundationforthefunctionalanalysisofBiNACgeneinthefuture．
Keywords:Bothriochloaischaemum;NACtranscriptionfactor;Expressionanalysis;Genesequence
　　转录因子(transcriptionfactor)是一类调节基
因表达水平上的重要调控基因,已经在非生物胁迫
方面发挥了重要作用[１Ｇ３].迄今为止,已经发现了一
系列 来 自 不 同 家 族 的 转 录 因 子,如 bZIP[４],
MYB[５Ｇ６],AP２/ERF 和 WRKY[７Ｇ８]等转录因子.
NAC(NAM,ATAF１/２,CUC２)转录因子是植物
特有的一类转录因子,广泛存在于植物中[９Ｇ１１].它
最早是由Souer等[１２]在矮牵牛(Petuniahybrida)
中发现的,随后 Aida等[１３]在拟南芥(Arabidopsis
thaliana)中发现了具有类似功能的ATAF１/２和
CUC２基因,它们编码蛋白的N端都有一段保守的
氨基酸序列,命名为NAC.有研究表明,NAC转录
收稿日期:２０１３Ｇ０３Ｇ１９;修回日期:２０１３Ｇ０４Ｇ２１
基金项目:教育部高等学校博士学科点专项科研基金项目(２０１０１４０３１１０００２);山西省科技公关项目(２０１２０３１１０１１Ｇ１);山西省科技基础条
件平台建设项目(２０１２０９１００４Ｇ０１０１)资助
作者简介:方志红(１９８３Ｇ),女,内蒙古赤峰人,博士Ｇ硕士研究生,研究方向为饲料作物生产与利用,EＧmail:fangzhihong２００７＠１２６．com;
∗通信作者Authorforcorrespondence,EＧmail:dongkuanhu＠１２６．com
第３期 方志红等:白羊草NAC转录因子基因的克隆及表达分析
因子参与植物对非生物胁迫信号的应答过程,且其
超量表达能够影响植物的耐逆性.拟南芥NAC转
录因子ATAF１基因的表达受干旱和ABA处理诱
导,通过负调控渗透胁迫反应基因的表达在抗旱反
应中起作用[１４];水稻(Oryzasativa)NAC转录因子
基因SNAC１主要在气孔保卫细胞中被诱导表达,
植物经受干旱胁迫时,该基因通过促进气孔关闭,减
少水分流失,来提高植物的抗旱能力[１５];拟南芥
ANAC０７２基因的表达受干旱、高盐和 ABA 的诱
导,且过表达植株对 ABA极度敏感,使 ABA和逆
境响应基因表达上调[１６Ｇ１８].
白羊草(Bothriochloaischaemum),禾本科孔颖
草属多年生草本植物,具有固土保水、生活力强,高
产耐牧、耐践踏、适口性好等优点,广泛分布于我国
暖温带落叶阔叶林地带,是控制水土流失和提供家
畜饲草的重要禾本科牧草[１９].近几年来,已经在很
多植物中发现了NAC基因,尤其是在模式植物拟
南芥和水稻中研究的比较多,但是目前尚未发现有
关白羊草NAC转录因子基因的相关报道.本试验
首次从白羊草中克隆到一个 NAC转录因子基因
BiNAC,利用RACE技术获得全长cDNA,进一步
分析了BiNAC基因的核苷酸序列和编码的蛋白序
列,进行了基因表达特性分析,并构建了植物表达载
体,为进一步研究该基因的功能奠定了基础.
１　材料与方法
１．１　试验材料
１．１．１　植物材料　白羊草种子采自山西省平定县,
地理位置为E１１３°４０′３５．３″,N３７°４３′０７．３″,海拔
８６３m,由山西农业大学草业科学实验室保存.
１．１．２　菌株、试剂和质粒　感受态大肠杆菌菌株
E．coliDH５α由北京天根生化科技有限公司提供;
DNAMaker、pMD􀆾１８ＧTvector、限制性内切酶Xba
Ⅰ和BamHⅠ及T４连接酶购自Takara公司;凝胶
DNA 回 收 试 剂 盒 购 自 Axygen 公 司;农 杆 菌
GV３１０１和转化载体pBI１２１为本实验室保存;其他
常用试剂采用进口分装或国产分析纯.
１．２　试验方法
１．２．１　材料的处理及总RNA的提取　将白羊草种
子播种于装有灭菌土的花盆(蛭石∶珍珠岩＝３∶１)
中,出苗后培养４５d,采集植株,Trizol法提取总
RNA后用于克隆BiNAC基因的全长cDNA序列;
用１５％的PEG溶液和２００mM 的NaCl溶液分别
处理幼苗０,２,４,８,１２和２４h,分别提取总RNA,用
于RealＧtimePCR分析.
１．２．２　白羊草BiNAC 基因的克隆　根据 GenＧ
Bank上已经登录的近缘植物的 NAC转录因子基
因,将它们的核苷酸序列进行比对,用Primer５．０
软件设计一对简并引物P１ 和P２(表１),以白羊草植
株的cDNA为模版,进行PCR扩增,PCR扩增程序
如下:９４℃预变性５min,９４℃变性３０s,５６℃复性
３０s,７２℃延伸１min,共３０个循环,最后７２℃下延
伸１０min,目的条带经切胶回收纯化后,连接到
pMD􀆾１８ＧT载体上,转化E．coliDH５α,送InvitroＧ
gen公司进行测序,获得BiNAC基因的中间序列;
再根据获得的中间序列设计３′ＧRACE引物P３ 和
５′ＧRACE引物P４ 扩增目的基因的３′端序列和５′端
序列,根据预测得到的开放阅读框设计特异性引物
P５ 和P６(表１),以cDNA为模版扩增开放阅读框,
构建重组质粒 BiNACＧpMD􀆾 １８ＧT,转化 E．coli
DH５α感受态细胞,进行PCR检测,阳性克隆送InＧ
vitrogen公司进行测序验证.
表１　试验中的引物序列
Table１　Sequenceofprimerusedintheexperiment
引物名称
Nameof
primer
引物序列
Sequence
ofprimer
P１ CSGTSCCSATCATCRCCGAG
P２ CTTGTTGTASAKSCGRCASAGSACCC
P３ ACGAGCTGGTGGAGCACTACCTGTG
P４ CCCTGGGCGTGAAGAAGTACCACTC
P５ AAGCAACCAGCCAGACCA
P６ AATGAGCCGTGCCAACA
P７ TGGATGACTGGGTGCTGTG
P８ CGCCTCCTCTTTGGTTGTG
P９ ATTCCTAGTAAGCGCGAGTCATCAG
P１０ CAATGATCCTTCCGCAGGTTCAC
P１１ GCTCTAGAATGGGAGTGCCGGTGGTGAGGAGG
P１２ CGGGATCCGAAGGGTCCCAACCCG
１．２．３　BiNAC基因的生物信息学分析　核苷酸及
氨基酸序列分析、开放阅读框 ORF的查找和翻译
使用DNAStar软件进行分析;利用NCBI数据库中
的 ORFfinder(http://www．ncbi．nlm．nih．gov/
gorf．html)分析 BiNAC 基因的 ORF;利用 ExＧ
PASy在线工具对BiNAC蛋白序列进行理化性质、
高级结构及其生物学功能的预测分析;采用 TMＧ
HMM (http://www．cbs．dtu．dk/services/TMＧ
HMM/)对BiNAC蛋白的跨膜结构域进行分析;
１９５
草　地　学　报 第２１卷
Blastx搜索其他物种的相似蛋白,用 DNAMAN
６．０软件进行氨基酸序列多重序列比对,并通过
MEGA５．０软件进行系统发育树的构建.
１．２．４　RealＧtimePCR检测BiNAC基因的组织表
达特异性　分别提取白羊草的根、茎、叶总RNA,反
转录为cDNA.根据白羊草BiNAC 基因的全长
cDNA 序 列 设 计 特 异 性 引 物 P７ 和 P８.以
１８SrRNA 基因做内参,设计特异性引物P９ 和P１０.
参考TaKaRa公司的SYBRPremixExTaqTM 试
剂盒说明书,使用ABIPRISM７５００RealＧtimePCR
System(ABI,USA)进行 RealＧtimePCR扩增,扩
增程序为:９５℃３０s;９５℃５s;６０℃ ３４s,４０个循
环,每个样品３次重复.
利用２－△△Ct方法[２０],公式为△△Ct＝(CtTarget－
CtActin)处理－(CtTarget－CtActin)对照,分别计算BiNAC
基因在根、茎、叶中的表达量,利用Excel２００７进行
数据处理并绘出柱形图.
１．２．５　RealＧtimePCR检测BiNAC基因在不同逆
境胁迫下的表达量　将经过PEG和 NaCl胁迫处
理的白羊草幼苗,提取叶片总 RNA,反转录后用
１􀆰２．４的方法,对不同逆境胁迫下的表达量进行分
析,分别计算BiNAC基因在PEG和 NaCl处理下
不同时间段的表达量,每个样品３次重复.
１．２．６　植物表达载体pBI１２１ＧBiNACＧGUS的构建
　利用引物P１１和P１２扩增BiNAC基因的全长cDＧ
NA,１％琼脂糖凝胶电泳分析后切胶回收,回收产
物与质粒pBI１２１分别进行XbaⅠ和BamH Ⅰ双酶
切后回收.将回收的目的片段插入线性化的
pBI１２１载体,构成重组质粒pBI１２１ＧBiNACＧGUS,
之后进行大肠杆菌的转化,涂布于含有卡那霉素抗
性的LB固体培养基上,３７℃培养１２~１６h后,挑取
单克隆菌落摇菌后进行菌液PCR检测,将含有目的
基因条带的阳性克隆送去Invitrogen公司测序
(图１).
图１　植物表达载体pBI１２１ＧBiNACＧGUS的构建
Fig．１　ConstructionofplantexpressionvectorpBI１２１ＧBiNACＧGUS
２　结果与分析
２．１　总RNA的提取
总RNA的质量是关系反转录cDNA完整性的
重要因素.提取的白羊草总RNA,用１．０％的琼脂
糖凝胶电泳鉴定,结果如图２所示,２８SRNA 和
１８SRNA条带清晰,表明提取的 RNA 完整性较
好.RNA的OD２６０/OD２８０都介于１．８~２．０之间,说
明RNA的纯度比较高,可以用于后续的试验.
２．２　BiNAC基因全长cDNA的克隆及鉴定
根据同源克隆的原理,利用RTＧPCR技术从白羊
２９５
第３期 方志红等:白羊草NAC转录因子基因的克隆及表达分析
草中克隆得到了４７９bp的目的基因中间片段(图４),
片段大小与预期相符,测序后经NCBI上Blastx分析
后发现与已知NAC转录因子基因(如玉米SNAC１、
水稻NAC１、高粱NAC１、大麦NAC、短柄草NAC以
及小麦NAC１)都具有较高的同源性,推测该中间片
段为白羊草的NAC转录因子基因片段.
图２　白羊草总RNA检测结果
Fig．２　TotalRNAfromB．ischaemumtestes
　　根据３′ＧRACE引物和５′ＧRACE引物,进行３′
端和５′端片段的扩增,分别扩增出１１２７bp的３′末
端片段和４５７bp的５′末端片段(图 ４).利用
DNAStar软件拼接获得全长cDNA,长度为１５４９
bp.利用NCBI及SMART服务器对所编码的蛋
白质进行结构域搜索,发现该序列的N端含有一个
１２６个(７４~２００)氨基酸的NAC结构域(图３).
　　进一步进行同源性比较发现,该序列与已经克
隆的其他植物的NAC转录因子基因核苷酸序列有
较高的相似性,其中与高粱(Sorghumbicolor)的相
似性最高.这表明克隆得到的序列是白羊草 NAC
转录因子基因的全长cDNA序列,命名为BiNAC.
２．３　白羊草BiNAC蛋白的生物信息学分析
利用ExPASy在线工具ProtParam软件对BiNAC
蛋白序列进行预测分析,结果表明,该基因序列编码
３７４个氨基酸,分子式为C１８３１H２８１６N５２２O５４４S１３,相对分
子量为４１．２６kDa,理论等电点为６􀆰８５,含有碱性氨
基酸(K,R)４７个;酸性氨基酸(D,E)４８个;疏水氨基
酸(A,I,L,F,W,V)１１７个;极性氨基酸(N,C,Q,S,
T,Y)７５个.该蛋白中相对含量比较多的氨基酸是
Ala(４１个,１１％),Pro(３４个,９．１％)和 Gly(３１个,
８􀆰３％),含量比较少的氨基酸是Pyl(０个,０％),Sec(０
个,０％),Cys(２个,０􀆰５％);总的带负电荷的残基
(Asp＋Glu)为４８;总的带正电荷的残基(Arg＋Lys)
为４７;亲水性平均数为－０．６１８,脂肪指数为６１．４２.
图３　BiNAC蛋白的功能结构域
Fig．３　TheconserveddomainsoftheBiNACprotein
图４　BiNAC基因的RTＧPCR结果、３′末端片段、５′末端片段和全长ORF
Fig．４　RTＧPCRproducts,３′RACE,５′RACEresultsandfulＧlengthORFofBiNACgene
注:１:RTＧPCR结果;２:３′末端片段;３:５′末端片段;４:全长ORF
Note:M:DNADL２０００Marker;１:RTＧPCRproducts;２:３′RACEresultofBiNACgene;
３:５′RACEresultofBiNACgene;４:ThefulＧlengthORFofBiNACgene
３９５
草　地　学　报 第２１卷
　　采用TMHMM(http://www．cbs．dtu．dk/servＧ
ices/TMHMM/)分析表明,该蛋白不含跨膜结构域.
利用NCBI、Uniprot及DNAMAN分析表明,白羊草
BiNAC与其他植物的 NACs具有很高的序列相似
性.其中,BiNAC与高粱、玉米(Zeamays)、水稻、小
麦(Triticumaestivum)和大麦(Hordeumvulgare)的
NAC氨基酸序列高度同源,同源性分别为９４％,
９０％,８４％,７４％和７３％(图５).
图５　BiNAC蛋白的氨基酸序列与其他植物NAC蛋白氨基酸序列的多重比对
Fig．５　SequencemultiplealignmentoftheBiNACproteinwithhomologyfromotherplants
注(Note):玉米(Zeamays,NAC１,B５A４B４);大麦(Hordeumvulgare,SNAC１,F６MEL２);小麦(Triticumaestivum,
NAC２B,F８QMB６);高粱(Sorghumbicolor,NAC１,J７FIP２);水稻(Oryzasativa,SNAC１,Q２７JE５)
　　运用ExAPSy软件中的SOPMA对BiNAC的
二级结构进行预测,发现αＧ螺旋占２９．４１％,βＧ转角
占４．５５％,无规则卷曲占５４．０１％,βＧ折叠占１２．０３％
(图６).
　　利用 MEGA５．０构建了系统进化树,进化树分
析表明,BiNAC基因属于ATAF亚族,且与高粱的
亲缘关系比较近(图７).
２．４　BiNAC基因组织特异性表达
利用２－△△Ct方法计算BiNAC基因在白羊草不
同组织中的相对表达量(图８),结果表明,BiNAC
基因在白羊草根、茎和叶中均有表达,但是在茎中的
表达水平显著高于其他组织,以根中的表达量为对
照,茎、叶中的表达量分别是根中的１３．１９倍和
３􀆰５１倍.
２．５　BiNAC基因在不同逆境胁迫下的表达分析
以未经过处理的白羊草叶片为对照,通过定量
RTＧPCR分析了PEG和 NaCl胁迫条件下白羊草
叶片中BiNAC基因表达水平的变化(图９).NaCl
４９５
第３期 方志红等:白羊草NAC转录因子基因的克隆及表达分析
处理２h后,白羊草叶片中BiNAC基因的表达上
升,于４h时达到最大值,为对照的１６．０９倍,随着
处理时间的延长,表达量下降,２４h时基本回到对
照的水平;１５％的PEG处理对BiNAC基因表达影
响不明显.
图６　BiNAC蛋白的二级结构
Fig．６　PredictedsecondarystructureofBiNACprotein
图７　BiNAC蛋白与其他相关蛋白序列的进化树分析
Fig．７　PhylogenetictreeofBiNACproteinwithsomeotherrelatedproteinssequencesbasedonanalignment
注(Note):高粱NAC１(AFO８５３７４．１);拟南芥ATAF１(NP_１７１６７７),ATAF２(Q９C５９８),ANAC０８３(D７M５７７),
ATNAP１４(D７M６００),ATNAP９(D７M７R８),CUC１(B２CU２２),CUC２(B２CU４６);水稻OsNAC５(Q９FTY７);
向日葵 HaNAC１(Q５IGR９);陆地棉NST２(G４V２F９),NST３(G４V２G１)
２．６　植物表达载体的构建
用酶切鉴定检测pBI１２１ＧBiNACＧGUS构建的
正确性(图１０).在表达载体pBI１２１ＧBiNACＧGUS
上有XbaⅠ和BamH Ⅰ这２个酶切位点,双酶切后
琼脂糖凝胶电泳后得到大约１２００bp左右的目的片
段和大约１００００bp左右的载体片段,与预期的大小
相符,测 序 后 发 现 无 碱 基 突 变,证 明 pBI１２１Ｇ
BiNACＧGUS重组质粒构建成功.
３　讨论与结论
本研究利用同源克隆的原理,获得了白羊草一
个NAC转录因子基因,利用相关的生物信息学软
件对该基因的氨基酸序列进行分析后发现,其结构
５９５
草　地　学　报 第２１卷
图８　BiNAC基因的组织表达特异性
Fig．８　OrganＧspecificexpressionpatternofBiNAC
上具有植物NAC转录因子的典型特征,如蛋白 N
端具有保守的１２６个氨基酸的NAC功能结构域,
但是BiNAC基因的氨基酸序列比其他植物 NAC
转录因子基因的氨基酸序列多５６个氨基酸,这可能
与它的功能特异性有关;进化树分析表明,BiNAC
蛋白属于ATAF亚家族,与其他植物的NAC转录
因子蛋白相似度比较高.
　　利用RealＧtimePCR方法对BiNAC基因在白
羊草中的组织表达特异性进行分析,结果发现
BiNAC基因在根、茎、叶中均有表达,但表达峰度不
同,茎中表达量最高,叶次之,根中最低.Han等[２１]
研究发现SlNAC３基因在番茄(SolanumlycoperＧ
sicum)不同器官中均有表达,其中在花、果实和根部
的表达量明显高于茎和叶,表明该基因参与了花、果
实和根的发育.本研究中BiNAC基因主要在茎中
表达,这与油菜(Brassicanapus)BnNAC５基因[２２]
类似,说明NAC转录因子在不同的物种、不同的组
织中表达方式不同.
图９　BiNAC基因受到NaCl和PEG诱导后的相对表达量
Fig．９　TherelativeexpressionofBiNACgeneinducedbyNaClandPEG
图１０　表达载体pBI１２１ＧBiNACＧGUS的酶切鉴定
Fig．１０　ConstructingexpressionvectorofpBI１２１ＧBiNACＧGUS
注:M１:DNADL１５０００Marker;１:对照;
２:酶切pBI１２１ＧBiNACＧGUS;M２:DNADL２０００Marker
Note:M１:DNADL１５０００Marker;１:Control;
２:DigestionofpBI１２１ＧBiNACＧGUS;M２:DNADL２０００Marker
　　众多研究发现,大部分 NAC转录因子基因受
多种生物和非生物胁迫影响[１８,２３],这说明它们在胁
迫应答和信号转导中起到了至关重要的作用.过表
达拟南芥中３个 NAC转录因子基因(ANAC０１９,
ANAC０５５和ANAC０７２)可以增强转基因植株的耐
旱能力[２３];水稻OsNAC６基因对高温、低温、高盐、
干旱和ABA都有响应,而转OsNAC６基因水稻对
干旱和高温有很好的耐受性[２４];小麦TaNAC２基
因受干旱、高盐和冷处理诱导表达,过量表达TaNＧ
AC２可以提高植株的耐寒、耐盐和耐旱性[２５];干旱、
ABA、盐和 NaCl胁迫可以诱导菊花(ChrysantheＧ
mummorifolium)DgNAC１基因的表达,过表达该
基因可增强烟草(Nicotianatabacum)的耐盐性[２６];
高世庆等[２７]对长穗偃麦草(Elytrigiaelongata)
EeNAC９基因研究发现,过表达EeNAC９转基因烟
草表现出对ABA的敏感性,同时可增强对干旱、高
盐的胁迫耐性.本研究的结果显示,BiNAC基因的
表达受 NaCl胁迫的诱导,但模拟干旱(PEG)不能
６９５
第３期 方志红等:白羊草NAC转录因子基因的克隆及表达分析
诱导BiNAC 基因的表达上调.在 NaCl胁迫下,
BiNAC基因的表达量在短时间内迅速增高,随着胁
迫时间的延长,表达量逐渐降低,说明该基因的表达
受盐胁迫的诱导,推测该基因在响应盐胁迫反应中
起作用,参与白羊草的盐胁迫早期应答.以上结果
说明NAC类转录因子基因对不同非生物胁迫的调
控应答以及调控的程度在不同物种间存在差异.
BiNAC基因可能参与了植物对盐胁迫的响应,
但是在白羊草中的具体作用机制还不清楚,这需要
深入研究BiNAC基因与其他转录因子及调控蛋白
质之间的相互作用,从而阐明BiNAC基因在白羊
草中的生物学功能及其分子机制,为下一步研究该
基因的抗逆机理及其在非生物胁迫调控中的重要作
用提供理论依据.
参考文献
[１]　QinF,ShinozakiK,YamaguchiＧShinozakiK．Achievements
andchalengesinunderstandingplantabioticstressresponses
andtolerance[J]．PlantandCel Physiology,２０１１,５２(９):
１５６９Ｇ１５８２
[２]　ShinozakiK,YamaguchiＧShinozakiK．Genenetworksinvolvedin
droughtstressresponseandtolerance[J]．JournalofExperiＧ
mentalBotany,２００７,５８(２):２２１Ｇ２２７
[３]　LataC,Prasad M．RoleofDREBsinregulationofabiotic
stressresponsesinplants[J]．JournalofExperimentalBotaＧ
ny,２０１１,６２(１４):４７３１Ｇ４７４８
[４]　JakobyM,WeisshaarB,DrögeＧLaserW,etal．bZIPtranＧ
scriptionfactorsinArabidopsis[J]．TrendsinPlantScience,
２００２,７(３):１０６Ｇ１１１
[５]　LiuJ,ZhuJK．Acalciumsensorhomologrequiredforplant
salttolerance[J]．Science,１９９８,２８０(５３７１):１９４３Ｇ１９４５
[６]　AbeH,YamaguchiＧShinozakiK,UraoT,etal．RoleofAraＧ
bidopsis MYCand MYB homologsindroughtＧandabscisic
acidＧregulatedgeneexpression[J]．PlantCel,１９９７,９(１０):
１８５９Ｇ１８６８
[７]　EulgemT,RushtonPJ,RobatzekS,etal．TheWRKYsuＧ
perfamilyofplanttranscriptionfactors[J]．TrendsinPlant
Science,２０００,５(５):１９９Ｇ２０６
[８]　SinghKB,FoleyRC,OñateＧSánchezL．TranscriptionfacＧ
torsinplantdefenseandstressresponses[J]．CurrentOpinion
inPlantBiology,２００２,５(５):４３０Ｇ４３６
[９]　DuvalM,HsiehTF,KimSY,etal．MolecularcharacterizaＧ
tionofAtNAM:A memberoftheArabidopsisNACdomain
superfamily[J]．PlantMolecularBiology,２００２,５０(２):２３７Ｇ２４８
[１０]OokaH,SatohK,DoiK,etal．Comprehensiveanalysisof
NACfamilygenesinOryzasativaandArabidopsisthaliana
[J]．DNAResearch,２００３,１０(６):２３９Ｇ２４７
[１１]OlsenAN,ErnstHA,LeggioLL,etal．NACtranscription
factors:structuralydistinct,functionalydiverse[J]．Trends
inPlantScience,２００５,１０(２):７９Ｇ８７
[１２]SouerE,HouwelingenA V,KloosD,etal．Thenoapical
meristemgeneofPetuniaisrequiredforpatternformationin
embryosandflowersandisexpressedatmeristemandprimorＧ
diaboundaries[J]．Cel,１９９６,８５(２):１５９Ｇ１７０
[１３]AidaM,IshidaT,FukakiH,etal．Genesinvolvedinorgan
separationinArabidopsis:AnanalysisofthecupＧshapedcotyＧ
ledonmutant[J]．PlantCel,１９９７,９(６):８４１Ｇ８５７
[１４]LuPL,ChenNZ,AnR,etal．AnoveldroughtＧinducible
gene,ATAF１,encodesaNACfamilyproteinthatnegatively
regulatestheexpressionofstressＧresponsivegenesinArabiＧ
dopsis[J]．PlantMolecularBiology,２００７,６３(２):２８９Ｇ３０５
[１５]HuH,DaiM,YaoJ,etal．OverexpressingaNAM,ATAF,
andCUC(NAC)transcriptionfactorenhancesdroughtresistＧ
anceandsalttoleranceinrice[J]．ProceedingsoftheNational
AcademyofSciences,２００６,１０３(３５):１２９８７Ｇ１２９９２
[１６]GreenR,FluhrR．UVＧBＧinducedPRＧ１accumulationismediaＧ
tedbyactiveoxygenspecies[J]．ThePlantCel,１９９５,７(２):
２０３Ｇ２１２
[１７]NarusakaY,NarusakaM,SekiM,etal．ThecDNAmicroarＧ
rayanalysisusinganArabidopsispad３mutantrevealstheexＧ
pressionprofilesandclassificationofgenesinducedbyAlterＧ
nariabrassicicolaattack[J]．PlantCel Physiology,２００３,４４
(４):３７７Ｇ３８７
[１８]FujitaM,FujitaY,MaruyamaK,etal．AdehydrationＧinＧ
ducedNACprotein,RD２６,isinvolvedinanovelABAＧdeＧ
pendentstressＧsignaling pathway[J]．The PlantJournal,
２００４,３９(６):８６３Ｇ８７６
[１９]董宽虎．山西白羊草草地生产性能种群生态位及草地培育的研
究[D]．北京:中国农业大学,２００４:１Ｇ３
[２０]LivakKJ,SchmittgenTD．AnalysisofrelativegeneexpresＧ
siondatausingRealＧTimeQuantitativePCRandthe２－ΔΔCT
method[J]．Methods,２００１,２５(４):４０２Ｇ４０８
[２１]HanQ,ZhangJ,LiH,etal．Identificationandexpression
patternofonestressＧresponsiveNACgenefromSolanumlyＧ
copersicum[J]．MolecularBiologyReports,２０１２,３９(２):１７１３Ｇ
１７２０
[２２]ZhongH,GuoQ Q,ChenL,etal．TwoBrassicanapus
genesencodingNACtranscriptionfactorsareinvolvedinreＧ
sponsetohighＧsalinitystress[J]．PlantCelReports,２０１２,３１
(１１):１９９１Ｇ２００３
[２３]TranLS,NakashimaK,SakumaY,etal．IsolationandfuncＧ
tionalanalysisofArabidopsisstressＧinducibleNACtranscripＧ
tionfactorsthatbindtoadroughtＧresponsivecisＧelementinthe
earlyresponsivetodehydrationstress１promoter[J]．The
PlantCel,２００４,１６(９):２４８１Ｇ２４９８
[２４]OhnishiT,SugaharaS,YamadaT,etal．OsNAC６,amemＧ
beroftheNACgenefamily,isinducedbyvariousstressesin
rice[J]．GenesGeneticSystems,２００５,８０(２):１３５Ｇ１３９
[２５]TangY,LiuM,GaoS,etal．Molecularcharacterizationof
novelTaNACgenesinwheatandoverexpressionofTaNAC２a
confersdroughttoleranceintobacco[J]．PhysiologaPlantaＧ
rum,２０１２,１４４(３):２１０Ｇ２２４
[２６]LiuQL,XuKD,ZhaoLJ,etal．Overexpressionofanovel
chrysanthemum NACtranscriptionfactorgeneenhancessalt
toleranceintobacco[J]．BiotechnologyLetters,２０１１,３３(１０):
２０７３Ｇ２０８２
[２７]高世庆,王永波,唐益苗,等．长穗偃麦草EeNAC９基因功能初
步研究[J]．生物技术通报,２０１１(６):４７Ｇ５２
(责任编辑　李美娟)
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