全 文 ：植物科学学报 ２０１４ꎬ ３２(４): ４１３~４２０
Ｐｌａｎｔ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｊｏｕｒｎａｌ
ＤＯＩ: １０ ３７２４ / ＳＰ Ｊ １１４２ ２０１４ ４０４１３
改良ＦＩＡＳＣＯ方法筛选砷超富集植物蜈蚣草ＳＳＲ分子标记
李 磊１ꎬ 敖日格乐１ꎬ 王玢琪１ꎬ 葛台明１ꎬ２∗
(１. 中国地质大学湿地演化与生态恢复湖北省重点实验室ꎬ 武汉 ４３００７４ꎻ ２. 中国地质大学(武汉)环境学院ꎬ 武汉 ４３００７４)
摘 要: 蜈蚣草(Ｐｔｅｒｉｓ ｖｉｔｔａｔａ Ｌ.)是目前用于砷污染土壤修复最好的超富集植物ꎬ 但其分子水平上的研究数据较
少ꎮ 为了开发蜈蚣草特异性 ＳＳＲ遗传标记ꎬ 本文采用改良的 ＦＩＡＳＣＯ 方法从蜈蚣草 ＡＧ 和 ＡＣ 微卫星富集文库
中随机挑选 １００个克隆ꎬ 分离得到 ５１ 个微卫星位点ꎬ 其中 ６０％为完美型(Ｐｅｒｆｅｃｔ)ＳＳＲꎮ 根据这些位点设计、
合成了 ２５对引物ꎬ 并对江西庐山及湖北恩施两地蜈蚣草种群各 ２０ 个个体进行了遗传多样性检测ꎬ 结果发现:
其中 ８个完美型及 １ 个间断型( ｉｎｔｅｒｍｉｔｔｅｎｔ)ＳＳＲ 位点的引物能够扩增出清晰、 稳定且具有多态性的条带ꎮ ９ 对
引物共扩增出 ４１个等位基因ꎬ 各位点等位基因数在 ２ ~ ７ 之间ꎬ 平均等位基因数为 ４ ５６ 个ꎻ 期望杂合度在
０ ０４９４ ~ ０ ８１６９之间ꎻ 没有连锁不平衡现象发生ꎮ 采用大叶井栏边草(Ｐｔｅｒｉｓ ｍｕｌｔｉｆｉｄａ Ｐｏｉｒ.)进行跨种扩增ꎬ
结果发现其中 ６对引物能够进行种间扩增ꎮ 这些 ＳＳＲ分子标记的开发有助于蜈蚣草生态适应性进化分析、 揭示
蜈蚣草地理分布格局以及探讨蜈蚣草遗传多样性ꎬ 还可用于品种鉴定及选育等ꎮ
关键词: 蜈蚣草ꎻ 微卫星ꎻ 多态性ꎻ ＦＩＡＳＣＯꎻ ＣｖｉＱＩ接头ꎻ ｐｉｇ￣ｔａｉｌ ＣｖｉＱＩ￣Ｎ引物
中图分类号: Ｑ７５ 文献标识码: Ａ 文章编号: ２０９５￣０８３７(２０１４)０４￣０４１３￣０８
收稿日期: ２０１３￣０７￣０９ꎬ 退修日期: ２０１３￣１１￣１３ꎮ
基金项目: 国家自然科学基金重点项目(４０９３０２１０)ꎮ
作者简介: 李磊(１９８６－ )ꎬ 男ꎬ 硕士研究生ꎬ 研究方向为分子生态学 (Ｅ￣ｍａｉｌ: ４０３２１８８４１＠ｑｑ ｃｏｍ)ꎮ
∗通讯作者(Ａｕｔｈｏｒ ｆｏｒ ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｅｎｃｅ Ｅ￣ｍａｉｌ: ｇｅｔａｉｍｉｎｇ＠ｃｕｇ ｅｄｕ ｃｎ)ꎮ
Ｕｓｉｎｇ Ｍｏｄｉｆｉｅｄ ＦＩＡＳＣＯ Ｐｒｏｔｏｃｏｌ ｔｏ Ｉｓｏｌａｔｅ Ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃ
Ｍｉｃｒｏｓａｔｅｌｌｉｔｅ Ｌｏｃｉ ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｂｒａｋｅ Ｆｅｒｎ (Ｐｔｅｒｉｓ ｖｉｔｔａｔａ Ｌ ):
ａｎ Ａｒｓｅｎｉｃ￣Ｈｙｐｅｒａｃｃｕｍｕｌａｔｉｎｇ Ｐｌａｎｔ
ＬＩ Ｌｅｉ１ꎬ ＢＡＯ Ｏｒｉｇｉｌ１ꎬ ＷＡＮＧ Ｂｉｎ￣Ｑｉ１ꎬ ＧＥ Ｔａｉ￣Ｍｉｎｇ１ꎬ２∗
(１. Ｈｕｂｅｉ Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ Ｗｅｔｌａｎｄ Ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ ａｎｄ Ｅｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｒｅｓｔｏｒａｔｉｏｎꎬ Ｃｈｉｎａ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｇｅｏｓｃｉｅｎｃｅｓꎬ
Ｗｕｈａｎ ４３００７４ꎬ Ｃｈｉｎａꎻ ２. Ｓｃｈｏｏｌ ｏｆ Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ Ｓｔｕｄｉｅｓꎬ Ｃｈｉｎａ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｇｅｏｓｃｉｅｎｃｅｓꎬ Ｗｕｈａｎ ４３００７４ꎬ Ｃｈｉｎａ)
Ａｂｓｔｒａｃｔ: Ｃｈｉｎｅｓｅ ｂｒａｋｅ ｆｅｒｎ (Ｐｔｅｒｉｓ ｖｉｔｔａｔａ Ｌ.) ｉｓ ｔｈｅ ｍｏｓｔ ｉｍｐｏｒｔａｎｔ ａｎｄ ｗｅｌｌ￣ｋｎｏｗｎ ａｒｓｅｎｉｃ￣
ｈｙｐｅｒａｃｃｕｍｕｌａｔｉｎｇ ｐｌａｎｔ ｕｓｅｄ ｉｎ ｐｈｙｔｏｒｅｍｅｄｉａｔｉｏｎ ｏｆ ａｒｓｅｎｉｃ ｃｏｎｔａｍｉｎａｔｅｄ ｓｏｉｌｓꎻ ｈｏｗｅｖｅｒꎬ
ｌｉｔｔｌｅ ｉｓ ｋｎｏｗｎ ａｂｏｕｔ ｉｔｓ ｇｅｎｅｔｉｃ ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ. Ｉｎ ｔｈｉｓ ｓｔｕｄｙꎬ １００ ｃｌｏｎｅｓ ｗｅｒｅ ｒａｎｄｏｍｌｙ ｓｅｌｅｃｔｅｄ ｆｒｏｍ
ｔｈｅ ｌｉｂｒａｒｙ ｅｎｒｉｃｈｅｄ ｆｏｒ ＡＧ ａｎｄ ＡＣ ｍｏｔｉｆｓ ｕｓｉｎｇ ａ ｍｏｄｉｆｉｅｄ ＦＩＡＳＣＯ (Ｆａｓｔ Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ｂｙ ＡＦＬＰ ｏｆ
Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ Ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ Ｒｅｐｅａｔｓ) ｐｒｏｔｏｃｏｌ ａｎｄ ｓｅｑｕｅｎｃｅｄ. Ｆｉｆｔｙ￣ｏｎｅ ｍｉｃｒｏｓａｔｅｌｌｉｔｅ ｌｏｃｉꎬ ｏｆ
ｗｈｉｃｈ ６０％ ｗｅｒｅ ｐｕｒｅ ｒｅｐｅａｔｓꎬ ｗｅｒｅ ｉｓｏｌａｔｅｄ. Ｔｗｅｎｔｙ￣ｆｉｖｅ ｐａｉｒｓ ｏｆ ｐｒｉｍｅｒｓ ｗｅｒｅ ｄｅｓｉｇｎｅｄ ａｎｄ
ｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｄ ｔｏ ｅｖａｌｕａｔｅ ｔｈｅｉｒ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ ｉｎ ２０ ｉｎｄｉｖｉｄｕａｌｓ ｐｅｒ ｓａｍｐｌｉｎｇ ｓｉｔｅ
ｏｂｔａｉｎｅｄ ｆｒｏｍ Ｌｕｓｈａｎ ａｎｄ Ｅｎｓｈｉꎬ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ. Ｐｒｉｍｅｒｓ ｏｆ ｅｉｇｈｔ ｌｏｃｉ ｏｆ ｐｕｒｅ ｒｅｐｅａｔｓ ａｎｄ ｏｎｅ
ｌｏｃｕｓ ｏｆ ｉｎｔｅｒｍｉｔｔｅｎｔ ｒｅｐｅａｔｓ ｗｅｒｅ ｆｉｎａｌｌｙ ａｍｐｌｉｆｉｅｄ ｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌｌｙ ａｎｄ ｙｉｅｌｄｅｄ ｃｌｅａｒ ｂａｎｄｓ. Ａ ｔｏｔａｌ
ｏｆ ４１ ａｌｌｅｌｅｓ ｗｅｒｅ ｄｅｔｅｃｔｅｄ. Ｔｈｅ ａｌｌｅｌｅ ｎｕｍｂｅｒ ｐｅｒ ｌｏｃｕｓ ｏｆ ｔｈｅｓｅ ｍｉｃｒｏｓａｔｅｌｌｉｔｅｓ ｒａｎｇｅｄ ｆｒｏｍ
ｔｗｏ ｔｏ ｓｅｖｅｎ (ｍｅａｎ ４ ５６) . Ｔｈｅ ｅｘｐｅｃｔｅｄ ｈｅｔｅｒｏｚｙｇｏｓｉｔｙ (Ｅｘｐ￣Ｈｅｔ) ｒａｎｇｅｄ ｆｒｏｍ ０ ０４９４ ｔｏ
０ ８１６９. Ｎｏ ｌｉｎｋａｇｅ ｄｉｓｅｑｕｉｌｉｂｒｉｕｍ ｗａｓ ｆｏｕｎｄ. Ｃｒｏｓｓ￣ｓｐｅｃｉｅｓ ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｄｅｍｏｎｓｔｒａｔｅｄ ｔｈａｔ
ｓｉｘ ｌｏｃｉ ｗｅｒｅ ａｍｐｌｉｆｉｅｄ ｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌｌｙ ｉｎ Ｐ. ｍｕｌｔｉｆｉｄａ. Ｔｈｅ ｍａｒｋｅｒｓ ｈｅｌｐｅｄ ｔｏ ｒｅｖｅａｌ ｔｈｅ ｇｅｎｅｔｉｃ
ｖａｒｉａｔｉｏｎｓ ｏｆ ａｒｓｅｎｉｃ ｔｏｌｅｒａｎｔ ｇｅｎｏｔｙｐｅｓ ａｎｄ ｕｎｄｅｒｓｔａｎｄ ｔｈｅ ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ ｐａｔｔｅｒｎ ａｎｄ ｅｃｏｌｏｇｉｃａｌ
ａｄａｐｔａｔｉｏｎ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｏｆ Ｐ. ｖｉｔｔａｔａꎬ ａｎｄ ａｌｓｏ ａｓｓｉｓｔｅｄ ｉｎ ｂｒｅｅｄｉｎｇ ｎｅｗ ｖａｒｉｅｔｉｅｓ ｏｆ ｆｅｒｎ ｆｏｒ
ｍｏｒｅ ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ ｒｅｍｅｄｉａｔｉｏｎ.
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ: Ｃｈｉｎｅｓｅ ｂｒａｋｅ ｆｅｒｎ (Ｐｔｅｒｉｓ ｖｉｔｔａｔａ Ｌ.)ꎻ Ｍｉｃｒｏｓａｔｅｌｌｉｔｅꎻ Ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍꎻ ＦＩＡＳＣＯꎻ
ＣｖｉＱＩ￣ａｄａｐｔｏｒꎻ Ｐｉｇ￣ｔａｉｌ ＣｖｉＱＩ￣Ｎ ｐｒｉｍｅｒ
Ｉｎ ｒｅｃｅｎｔ ｙｅａｒｓꎬ ａｒｓｅｎｉｃ ｐｏｌｌｕｔｉｏｎ ｈａｓ ｂｅ￣
ｃｏｍｅ ａ ｗｏｒｌｄｗｉｄｅ ｐｒｏｂｌｅｍ ａｆｆｅｃｔｉｎｇ ｈｕｍａｎ
ｈｅａｌｔｈ ｄｕｅ ｔｏ ｉｎｔｅｎｓｅ ｄｉｓｔｏｒｔｉｏｎ ｃａｕｓｅｄ ｂｙ ｃａｒｃｉ￣
ｎｏｇｅｎｉｃ ｔｏｘｉｃｉｔｙ. Ｈｏｗｅｖｅｒꎬ ｔｈｅ ｃｈｅｍｉｃａｌ ｆｏｒｍ ｏｆ
ａｒｓｅｎｉｃ ｉｎ ｓｏｉｌ ａｎｄ ｇｒｏｕｎｄｗａｔｅｒ ｖａｒｉｅｓ ｗｉｄｅｌｙꎬ
ａｎｄ ｇｏｖｅｒｎａｎｃｅ ｉｓ ｄｉｆｆｉｃｕｌｔ. Ａｃｃｏｒｄｉｎｇ ｔｏ ｔｈｅ
Ｗｏｒｌｄ Ｈｅａｌｔｈ Ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎꎬ ａｔ ｌｅａｓｔ ５０ ｍｉｌｌｉｏｎ
ｐｅｏｐｌｅ ｗｏｒｌｄｗｉｄｅ ｈａｖｅ ｆａｃｅｄ ｔｈｅ ｔｈｒｅａｔ ｏｆ ａｒｓｅ￣
ｎｉｃ ｃｏｎｔａｍｉｎａｔｉｏｎ. Ａｒｓｅｎｉｃ ｐｏｌｌｕｔｉｏｎ ｆｒｏｍ ｍａｎｕ￣
ｆａｃｔｕｒｉｎｇꎬ ｍｉｎｉｎｇꎬ ｆｅｒｔｉｌｉｚｅｒｓ ａｎｄ ｐｅｓｔｉｃｉｄｅｓ ｈａｓ
ｒｅｓｕｌｔｅｄ ｉｎ Ｃｈｉｎａ ｂｅｃｏｍｉｎｇ ｏｎｅ ｏｆ ｔｈｅ ｍｏｓｔ ｐｏｌｌｕ￣
ｔｅｄ ｃｏｕｎｔｒｉｅｓꎬ ｗｉｔｈ Ｉｎｎｅｒ Ｍｏｎｇｏｌｉａꎬ Ｇｕｉｚｈｏｕꎬ Ｈｕ￣
ｎａｎꎬ Ｓｉｃｈｕａｎ ａｎｄ ｏｔｈｅｒ ｐｒｏｖｉｎｃｅｓ ｅｘｐｅｒｉｅｎｃｉｎｇ
ｐａｒｔｉｃｕｌａｒｌｙ ｓｅｒｉｏｕｓ ｃｏｎｔａｍｉｎａｔｉｏｎ. Ｃｕｒｒｅｎｔｌｙꎬ ｔｈｅ
ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ ｍｅｔｈｏｄｓ ｏｆ ｒｅｐａｉｒｉｎｇ ａｒｓｅｎｉｃ￣ｃｏｎｔａｍｉ￣
ｎａｔｅｄ ｓｏｉｌ ａｒｅ ｔｅｃｈｎｉｃａｌｌｙ ｄｉｆｆｉｃｕｌｔ ａｎｄ ｃｏｓｔｌｙꎬ
ｗｈｉｌｅ ｐｈｙｔｏｒｅｍｅｄｉａｔｉｏｎ ｂａｓｅｄ ｏｎ ｈｙｐｅｒａｃｃｕｍｕｌａ￣
ｔｏｒｓꎬ ａｓ ｆｉｒｓｔ ｐｒｏｐｏｓｅｄ ｂｙ Ｂｒｏｏｋｓ[１] ｉｎ １９９８ꎬ ｈａｓ
ａｔｔｒａｃｔｅｄ ｇｒｏｗｉｎｇ ａｔｔｅｎｔｉｏｎ ｄｕｅ ｔｏ ｉｔｓ ｌｏｗ ｃｏｓｔ
ａｎｄ ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ ｆｒｉｅｎｄｌｉｎｅｓｓ. Ａ ｈｙｐｅｒａｃｃｕｍｕ￣
ｌａｔｏｒ ｈａｓ ｔｈｅ ｃａｐａｃｉｔｙ ｔｏ ａｂｓｏｒｂ ｈｅａｖｙ ｍｅｔａｌ １００
ｔｉｍｅｓ ｍｏｒｅ ｔｈａｎ ｔｈａｔ ｏｆ ａ ｔｙｐｉｃａｌ ｐｌａｎｔ. Ｃｈｉｎｅｓｅ
ｂｒａｋｅ ｆｅｒｎ (Ｐｔｅｒｉｓ ｖｉｔｔａｔａ Ｌ.) ｗａｓ ｔｈｅ ｆｉｒｓｔ ｉｄｅｎｔｉ￣
ｆｉｅｄ ａｒｓｅｎｉｃ ｈｙｐｅｒａｃｃｕｍｕｌａｔｏｒ ｂｙ Ｍａ ｅｔ ａｌ.[２]
ａｎｄ Ｃｈｅｎ ｅｔ ａｌ.[３] ｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓｌｙ. Ｃｕｒｒｅｎｔｌｙꎬ ｏｖｅｒ
１０ ｓｐｅｃｉｅｓ ｏｆ ａｒｓｅｎｉｃ ｈｙｐｅｒａｃｃｕｍｕｌａｔｏｒｓ ｈａｖｅ
ｂｅｅｎ ｆｏｕｎｄ ｉｎ ｔｈｅ ｗｏｒｌｄꎬ ｗｈｉｃｈ ａｒｅ ｃａｐａｂｌｅ ｏｆ
ｒｅｍｏｖｉｎｇ ａｒｓｅｎｉｃ ｐｏｌｌｕｔｉｏｎ ｆｒｏｍ ｓｏｉｌ ａｎｄ ｇｒｏｕｎｄ￣
ｗａｔｅｒ.
Ｃｈｉｎｅｓｅ ｂｒａｋｅ ｆｅｒｎ ｉｓ ｗｉｄｅｌｙ ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｅｄ ｉｎ
ｍｉｄｄｌｅ ｅａｓｔ ａｎｄ ｓｏｕｔｈ Ｃｈｉｎａ. Ｉｔ ｉｓ ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌｌｙ ｃｕｌ￣
ｔｉｖａｔｅｄ ｉｎ ｇａｒｄｅｎｓꎬ ａｎｄ ｉｓ ａｌｓｏ ｕｓｅｄ ａｓ ａｎ ｉｎｄｉｃａ￣
ｔｏｒ ｏｆ ｃａｌｃａｒｅｏｕｓ ｓｏｉｌ. Ｓｉｎｃｅ ａｒｓｅｎｉｃ ｐｏｌｌｕｔｉｏｎ ｉｎ
ｓｏｉｌ ｈａｓ ｂｅｃｏｍｅ ａ ｓｅｒｉｏｕｓ ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ ａｎｄ
ｈｅａｌｔｈ ｐｒｏｂｌｅｍ ｗｏｒｌｄｗｉｄｅꎬ Ｃｈｉｎｅｓｅ ｂｒａｋｅ ｆｅｒｎ
ｈａｓ ａｔｔｒａｃｔｅｄ ｉｎｃｒｅａｓｉｎｇ ｉｎｔｅｒｅｓｔ ｎｏｔ ｏｎｌｙ ｂｅｃａｕｓｅ
ｉｔ ｉｓ ｔｈｅ ｆｉｒｓｔ ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ ａｒｓｅｎｉｃ ｈｙｐｅｒａｃｃｕｍｕｌａｔｏｒꎬ
ｂｕｔ ａｌｓｏ ｂｅｃａｕｓｅ ｉｔ ｉｓ ｏｎｅ ｏｆ ｔｈｅ ｍｏｓｔ ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ ａｒ￣
ｓｅｎｉｃ ｈｙｐｅｒａｃｃｕｍｕｌａｔｏｒｓ ｆｏｒ ｕｓｅ ｉｎ ｐｈｙｔｏｒｅｍｅ￣
ｄｉａｔｉｏｎ ｏｆ ａｒｓｅｎｉｃ ｃｏｎｔａｍｉｎａｔｅｄ ｓｏｉｌｓ[２ꎬ３] . Ａｃｃｏｒ￣
ｄｉｎｇ ｔｏ Ｃｈｅｎ ｅｔ ａｌ.[３]ꎬ Ｃｈｉｎｅｓｅ ｂｒａｋｅ ｆｅｒｎ ｉｎ Ｈｕ￣
ｎａｎ ｐｒｏｖｉｎｃｅ ｅｆｆｉｃｉｅｎｔｌｙ ｅｘｔｒａｃｔｅｄ ａｒｓｅｎｉｃ ｆｒｏｍ
ｓｏｉｌｓ ａｎｄ ｔｒａｎｓｌｏｃａｔｅｄ ｉｔ ｔｏ ｉｔｓ ｆｒｏｎｄｓꎬ ｗｈｅｒｅ ａｒｓｅ￣
ｎｉｃ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ ｒｅａｃｈｅｄ ５０７０ ｍｇ / ｋｇ. Ｔｈｅｉｒ
ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ Ｐｔｅｒｉｓ ｖｉｔｔａｔａ Ｌ. ｒｅｄｕｃｅｄ
ｔｏｔａｌ ａｒｓｅｎｉｃ ｉｎ ｔｈｅ ｓｏｉｌ ｂｙ ５％ ｔｏ ２４％ ｉｎ ｏｎｅ ｙｅａｒꎬ
ｗｈｉｃｈ ｗａｓ ２００ ｔｉｍｅｓ ｇｒｅａｔｅｒ ｔｈａｎ ｔｈａｔ ｏｆ ａ ｔｙｐｉｃａｌ
ｐｌａｎｔ. Ａｓ ａｎ ａｒｓｅｎｉｃ ｈｙｐｅｒａｃｃｕｍｕｌａｔｏｒꎬ ｎｏｔ ｏｎｌｙ
ｄｏｅｓ Ｐ. ｖｉｔｔａｔａ Ｌ. ｅｘｈｉｂｉｔ ｓｔｒｏｎｇ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｔｏ ａｒ￣
ｓｅｎｉｃ ａｎｄ ｈｉｇｈ ａｒｓｅｎｉｃ ｅｎｒｉｃｈｍｅｎｔ ｃａｐａｂｉｌｉｔｙꎬ ｂｕｔ
ｉｔ ａｌｓｏ ｈａｓ ｔｈｅ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ ｏｆ ｆａｓｔ ｇｒｏｗｔｈꎬ
ｌａｒｇｅ ｂｉｏｍａｓｓꎬ ａｎｄ ｗｉｄｅ ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎꎬ ｉｎｄｉｃａｔｉｎｇ
ｔｈａｔ ｉｔ ｉｓ ａ ｖｅｒｙ ｐｒｏｍｉｓｉｎｇ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｐｌａｎｔ. Ｉｎ ｔｈｅ
ｐａｓｔ ｆｅｗ ｙｅａｒｓꎬ ｒｅｓｅａｒｃｈ ｏｎ ｒｅｍｅｄｉａｔｉｏｎ ｅｆｆｉｃｉｅｎ￣
ｃｙ[４] ａｎｄ ｔｈｅ ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ ｏｆ ａｒｓｅｎｉｃ ｄｅｔｏｘｉｆｉｃａ￣
ｔｉｏｎ[５]ꎬ ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ[６] ａｎｄ ｈｙｐｅｒａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎ[７]
ｈａｖｅ ｂｅｅｎ ｄｅｖｅｌｏｐｅｄ. Ｔｈｅ ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｃｈｉ￣
ｎｅｓｅ ｂｒａｋｅ ｆｅｒｎ ｖａｒｉｅｓ ｇｒｅａｔｌｙ. Ｆｕｒｔｈｅｒｍｏｒｅꎬ ｆｉｎ￣
ｄｉｎｇｓ ｆｒｏｍ ｏｔｈｅｒ ｓｔｕｄｉｅｓ ｈａｖｅ ｓｈｏｗｎ ｔｈａｔ ａｒｓｅｎｉｃ
ａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎ ｌｅｖｅｌ ｉｓ ｐｏｓｉｔｉｖｅｌｙ ｃｏｒｒｅｌａｔｅｄ ｗｉｔｈ
ｆｒｏｎｄ ａｎｄ ｓｐｏｒｅ ｎｕｍｂｅｒ ａｓ ｗｅｌｌ ａｓ ｐｌａｎｔ
ｈｅｉｇｈｔ[８]ꎬ ｉｎｄｉｃａｔｉｎｇ ｔｈａｔ ｅｃｏｔｙｐｅ (ｏｒ ｇｅｎｏｔｙｐｅ)
ｍａｙ ｂｅ ａ ｋｅｙ ｆａｃｔｏｒ ｉｎ ａｒｓｅｎｉｃ ａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎ.
Ｈｏｗｅｖｅｒꎬ ｌｉｔｔｌｅ ｉｓ ｋｎｏｗｎ ａｂｏｕｔ ｔｈｅ ｇｅｎｅｔｉｃ ｄｉｖｅｒｓｉ￣
ｔｙ ｏｆ ｔｈｉｓ ｓｐｅｃｉｅｓ.
Ｍｉｃｒｏｓａｔｅｌｌｉｔｅｓꎬ ｏｒ ｓｉｍｐｌｅ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｒｅｐｅａｔｓ
(ＳＳＲ)ꎬ ｈａｓ ｂｅｅｎ ｐｒｏｖｅｄ ｔｏ ｂｅ ａ ｕｓｅｆｕｌ ｍａｒｋｅｒ
ｆｏｒ ｓｔｕｄｉｅｓ ｏｎ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ ｇｅｎｅｔｉｃｓꎬ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ
ｐｈｙｌｏｇｅｏｇｒａｐｈｙ ａｎｄ ｇｅｎｅｔｉｃ ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ ａｓｓｅｓｓ￣
ｍｅｎｔꎬ ｃｏｎｓｅｒｖａｔｉｏｎ ａｎｄ ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ ｄｕｅ ｔｏ ｔｈｅｉｒ
ｃｏ￣ｄｏｍｉｎａｎｃｅꎬ ｈｉｇｈ ｍｕｔａｔｉｏｎ ｒａｔｅ ａｎｄ ｅａｓｅ ｏｆ
ｓｃｏｒｉｎｇ[９] . Ｉｎ ｔｈｉｓ ｓｅｎｓｅꎬ ＳＳＲ ｍａｒｋｅｒｓ ｐｒｏｖｉｄｅ ａ
４１４ 植 物 科 学 学 报 第 ３２卷
ｐｏｗｅｒｆｕｌ ｔｏｏｌ ｆｏｒ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｎｇ ｇｅｎｅｔｉｃ ｄｉｖｅｒｓｉｔｙꎬ
ｉｄｅｎｔｉｆｙｉｎｇ ｇｅｎｏｔｙｐｅｓ ｏｒ ｅｃｏｔｙｐｅｓꎬ ａｎｄ ｂｒｅｅｄｉｎｇ
ｎｅｗ ｖａｒｉｅｔｉｅｓ ｏｆ Ｃｈｉｎｅｓｅ ｂｒａｋｅ ｆｅｒｎ ｆｏｒ ｍｏｒｅ ｅｆ￣
ｆｅｃｔｉｖｅ ｒｅｍｅｄｉａｔｉｏｎ. Ｔｈｅｒｅｆｏｒｅꎬ ｉｔ ｉｓ ｎｅｃｅｓｓａｒｙ ｔｏ
ｄｅｖｅｌｏｐ ｓｕｆｆｉｃｉｅｎｔ ｍｉｃｒｏｓａｔｅｌｌｉｔｅ ｍａｒｋｅｒｓ ｗｉｔｈ ｈｉｇｈ
ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ ｆｏｒ ｔｈｉｓ ｖａｌｕａｂｌｅ ｓｐｅｃｉｅｓ. Ｉｎ ｔｈｉｓ
ｓｔｕｄｙꎬ ｗｅ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｄ ｔｈｅ ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｐｏｌｙｍｏｒ￣
ｐｈｉｃ ｍｉｃｒｏｓａｔｅｌｌｉｔｅ ｌｏｃｉ ａｎｄ ｔｈｅｉｒ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎｓ
ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ ｂｒａｋｅ ｆｅｒｎꎬ ａｎｄ ｅｘａｍｉｎｅｄ ｔｈｅ ｐｏｔｅｎ￣
ｔｉａｌ ａｐｐｌｉｃａｂｉｌｉｔｙ ｏｆ ｔｈｅｓｅ ＤＮＡ ｌｏｃｉ ｉｎ Ｐｔｅｒｉｓ ｍｕｌｔｉ￣
ｆｉｄａ Ｐｏｉｒ.ꎬ ａｎｏｔｈｅｒ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ｐｈｙｔｏｒｅｍｅｄｉａｔｉｏｎ
ｐｌａｎｔ[１０] ｆｒｏｍ Ｃｈｉｎａ.
１ Ｍａｔｅｒｉａｌｓ ａｎｄ Ｍｅｔｈｏｄｓ
１ １ Ｓａｍｐｌｉｎｇ ａｎｄ ＤＮＡ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ
Ｓｐｅｃｉｍｅｎｓ ｏｆ Ｃｈｉｎｅｓｅ ｂｒａｋｅ ｆｅｒｎ ｗｅｒｅ ｃｏｌ￣
ｌｅｃｔｅｄ ｆｒｏｍ Ｌｕｓｈａｎ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｐａｒｋ (２９°３４′２１″Ｎꎬ
１１５°５８′２４″Ｅ) ｏｆ Ｊｉａｎｇｘｉ ｐｒｏｖｉｎｃｅ ａｎｄ Ｅｎｓｈｉ ｃｉｔｙ
(３０°１６′１３″Ｎꎬ １０９°２８′３０″Ｅ) ｏｆ Ｈｕｂｅｉ ｐｒｏｖｉｎｃｅꎬ
Ｃｈｉｎａ ( ２０ ｉｎｄｉｖｉｄｕａｌｓ ｐｅｒ ｓａｍｐｌｉｎｇ ｓｉｔｅ) . Ｇｅ￣
ｎｏｍｉｃ ＤＮＡ ｗａｓ ｅｘｔｒａｃｔｅｄ ｕｓｉｎｇ Ｃｅｔｙｌｔｒｉｍｅｔｈｙ￣
ｌａｍｍｏｎｉｕｍ ｂｒｏｍｉｄｅ (ＣＴＡＢ) ｃｏｍｂｉｎｅｄ ｗｉｔｈ ｉｓｏ￣
ｐｒｏｐａｎｏｌ ｐｒｅｃｉｐｉｔａｔｉｏｎ[１１] .
１ ２ Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｍｉｃｒｏｓａｔｅｌｌｉｔｅ ｍａｒｋｅｒｓ
Ｏｎｅ Ｐｔｅｒｉｓ ｖｉｔｔａｔａ Ｌ. ｓａｍｐｌｅ ｃｏｌｌｅｃｔｅｄ ｆｒｏｍ
Ｅｎｓｈｉ ｃｉｔｙ (３０°１６′１３″Ｎꎬ １０９°２８′３０″Ｅ) ｗａｓ ｓｅ￣
ｌｅｃｔｅｄ ｔｏ ｉｓｏｌａｔｅ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃ ｍｉｃｒｏｓａｔｅｌｌｉｔｅ ｌｏｃｉ
ｂａｓｅｄ ｏｎ ｔｈｅ ｍｏｄｉｆｉｅｄ ＦＩＡＳＣＯ[９] . Ｔｈｅ ＤＮＡ ｗａｓ
ｄｉｇｅｓｔｅｄ ｗｉｔｈ ＣｖｉＱＩ (ＮＥＢ) ａｎｄ ｌｉｇａｔｅｄ ｔｏ ＣｖｉＱＩ￣
ａｄａｐｔｏｒｓ ( ５′￣ＴＡＧＴＣＡＧＧＡＣＴＣＡＴ￣３′ / ５′￣ＧＡＣＧＡＴ￣
ＧＡＧＴＣＣＴＧＡＣ￣３′) ｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓｌｙ ｉｎ ａ ｔｏｔａｌ ｖｏｌｕ￣
ｍｅ ｏｆ ２５ μＬ ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ ２５０ ｎｇ ｏｆ ｇｅｎｏｍｉｃ ＤＮＡꎬ
１ ×ＯｎｅＰｈｏｒＡｌｌ ｂｕｆｆｅｒꎬ ５ ０ ｍｍｏｌ / Ｌ ＤＴＴꎬ ５０ μｇ / ｍＬ
ＢＳＡꎬ １ ０ μｍｏｌ / Ｌ ａｄａｐｔｏｒꎬ ２００ μｍｏｌ / Ｌ ＡＴＰꎬ
２ ５ Ｕ ｏｆ ＣｖｉＱＩꎬ ａｎｄ １ ０ Ｕ ｏｆ Ｔ４ ＤＮＡ ｌｉｇａｓｅ
(Ｐｒｏｍｅｇａ) . Ｔｈｅ ｒｅａｃｔｉｏｎ ｗａｓ ｔｈｅｎ ｉｎｃｕｂａｔｅｄ ａｔ
２５℃ ｆｏｒ １６ ｈ. Ｔｈｅ ｄｉｇｅｓｔｉｏｎ￣ｌｉｇａｔｉｏｎ ｍｉｘｔｕｒｅ ｗａｓ
ｄｉｌｕｔｅｄ ( １ ∶ １０) ａｎｄ ｔｈｅ ｄｉｇｅｓｔｅｄ￣ｌｉｇａｔｅｄ ＤＮＡ
ｗａｓ ｆｕｒｔｈｅｒ ａｍｐｌｉｆｉｅｄ ｕｓｉｎｇ ａ ｐｉｇ￣ｔａｉｌ[１２] ＣｖｉＱＩ￣Ｎ
ｐｒｉｍｅｒ ( ５′￣ＧＴＴＴＡＴＧＡＧＴＣＣＴＧＡＣＴＡＣＮ￣３′) ｏｎ
ａ Ｖｅｒｉｔｉ® Ｔｈｅｒｍａｌ Ｃｙｃｌｅｒ (Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ) .
Ｔｈｉｓ ＰＣＲ ｒｅａｃｔｉｏｎ ｗａｓ ｐｅｒｆｏｒｍｅｄ ｉｎ ａ ｔｏｔａｌ ｖｏｌｕ￣
ｍｅ ｏｆ ２０ μＬ ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ １ × Ｔａｑ ｒｅａｃｔｉｏｎ ｂｕｆｆｅｒ
(Ｓａｎｇｏｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ Ｃｏｍｐａｎｙꎬ Ｓｈａｎｇｈａｉ)ꎬ １ ５ ｍｍｏｌ / Ｌ
ＭｇＣｌ２ꎬ ２ ５ μｍｏｌ / Ｌ ｐｒｉｍｅｒꎬ ２００ μｍｏｌ / Ｌ ｏｆ ｅａｃｈ
ｄＮＴＰｓꎬ ０ ５ Ｕ ｏｆ Ｔａｑ ＤＮＡ ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ (Ｓａｎｇｏｎ)ꎬ
ａｎｄ ５ μＬ ｏｆ ｄｉｇｅｓｔｅｄ￣ｌｉｇａｔｅｄ ＤＮＡ ｄｉｌｕｔｉｏｎ. Ｔｈｅ
ＰＣＲ ｃｙｃｌｉｎｇ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ ｗｅｒｅ: ａｎ ｉｎｉｔｉａｌ ｄｅｎａｔｕｒ￣
ａｔｉｏｎ ａｔ ９５℃ ｆｏｒ ３ ｍｉｎꎬ ｆｏｌｌｏｗｅｄ ｂｙ １４－２６ ｃｙｃｌｅｓ
ｏｆ ９４℃ ｆｏｒ ３０ ｓꎬ ５３℃ ｆｏｒ ３０ ｓꎬ ７２℃ ｆｏｒ ３０ ｓꎬ
ａｎｄ ａ ｆｉｎａｌ ｅｘｔｅｎｓｉｏｎ ａｔ ７２℃ ｆｏｒ １０ ｍｉｎ. Ｔｈｅ ＰＣＲ
ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ ａ ｃｌｅａｒｌｙ ｖｉｓｉｂｌｅ ｓｍｅａｒ ｗｅｒｅ
ｃｏｎｓｉｄｅｒｅｄ ｏｐｔｉｍａｌ ａｎｄ ｗｅｒｅ ｓｅｌｅｃｔｅｄ ｆｏｒ ｆｕｒｔｈｅｒ
ｕｓｅ. Ｔｈｅ ｐｕｒｉｆｉｅｄ ＰＣＲ ｐｒｏｄｕｃｔｓ (５００ ｎｇ) ｗｅｒｅ
ｈｙｂｒｉｄｉｚｅｄ ｔｏ Ｂｉｏｔｉｎ￣ｌａｂｅｌｅｄ ｐｒｏｂｅｓ ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ
ｒｅｐｅａｔ ｍｏｔｉｆｓ (ＡＣ)１２ ａｎｄ (ＡＧ)１２ (１００ μｍｏｌ ｅａｃｈ)
ｉｎ １００ μＬ ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ ｓｏｌｕｔｉｏｎ (６ × ＳＳＣ ＋ ０ １％
ＳＤＳ) ａｔ ４８℃ ｆｏｒ ９０ ｍｉｎ. Ｐｒｏｂｅ￣ｂｏｕｎｄ ＤＮＡ ｆｒａｇ￣
ｍｅｎｔｓ ｗｅｒｅ ｔｈｅｎ ｃａｐｔｕｒｅｄ ｂｙ ｓｔｒｅｐｔａｖｉｄｉｎ￣ｃｏａｔｅｄ
ｍａｇｎｅｔｉｃ ｂｅａｄｓ (Ｐｒｏｍｅｇａ) ａｔ ｒｏｏｍ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ
ｆｏｒ ３０ ｍｉｎ. Ｎｏｎｓｔｒｉｎｇｅｎｃｙ ｗａｓｈｅｓ ａｎｄ ｓｔｒｉｎｇｅｎｃｙ
ｗａｓｈｅｓ ｗｅｒｅ ｐｅｒｆｏｒｍｅｄ ａｓ ｄｅｓｃｒｉｂｅｄ ｉｎ ｔｈｅ
ＦＩＡＳＣＯ ｐｒｏｔｏｃｏｌꎬ ｅｘｃｅｐｔ ｔｈｅ ｓｔｒｉｎｇｅｎｃｙ ｅｌｕｅｎｔ
ｗａｓ ０ ５ × ＳＳＣ ＋ ０ １％ ＳＤＳ ａｎｄ ｔｈｅ ｌａｓｔ ｓｔｒｉｎ￣
ｇｅｎｃｙ ｗａｓｈ ｗａｓ ｉｎｃｕｂａｔｅｄ ｆｏｒ ５ ｍｉｎ ａｔ ４５℃ ｔｏ
ｒｅｍｏｖｅ ｎｏｎｓｐｅｃｉｆｉｃａｌｌｙ ｂｏｕｎｄ ａｎｄ ｕｎｂｏｕｎｄ ＤＮＡ.
Ｅｎｒｉｃｈｅｄ ＤＮＡ ｆｒａｇｍｅｎｔｓ ｗｅｒｅ ａｍｐｌｉｆｉｅｄ ｗｉｔｈ ａ
ｐｉｇ￣ｔａｉｌ ＣｖｉＱＩ￣Ｎ ｐｒｉｍｅｒ ｕｎｄｅｒ ｔｈｅ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ ｄｅ￣
ｓｃｒｉｂｅｄ ａｂｏｖｅ. Ｔｈｅ ｐｕｒｉｆｉｅｄ ＰＣＲ ｐｒｏｄｕｃｔｓ ｗｅｒｅ
ｌｉｇａｔｅｄ ｔｏ ｐＭＤ１８￣Ｔ ｖｅｃｔｏｒ (ＴａＫａＲａ) ａｃｃｏｒｄｉｎｇ
ｔｏ ｔｈｅ ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｅｒｓ ｉｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎｓꎬ ａｎｄ ｔｈｅｎ ｔｒａｎｓ￣
ｆｏｒｍｅｄ ｉｎｔｏ Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ ＤＨ５α ｃｏｍｐｅｔｅｎｔ
ｃｅｌｌｓ. Ｔｈｅ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｃｌｏｎｅｓ ｗｅｒｅ ｃｏｎｆｉｒｍｅｄ ｂｙ ｃｏ￣
ｌｏｎｙ ＰＣＲ ｕｓｉｎｇ (ＡＧ / ＡＣ)１２ ａｎｄ Ｍ１３
＋ / Ｍ１３－ ａｓ
ｐｒｉｍｅｒｓ[１３]ꎬ ａｎｄ ｓｅｑｕｅｎｃｅｄ ｂｙ ｔｈｅ Ｓａｎｇｏｎ Ｂｉｏ￣
ｔｅｃｈ Ｃｏｍｐａｎｙ (Ｓｈａｎｇｈａｉ) ｕｓｉｎｇ ａｎ ＡＢＩ ＰＲＩＳＭ
３７３０ ｓｅｑｕｅｎｃｅｒ (Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ) . Ｍｉｃｒｏｓａ￣
ｔｅｌｌｉｔｅ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｗｅｒｅ ｓｃｒｅｅｎｅｄ ｕｓｉｎｇ ｔｈｅ ｓｏｆｔ￣
ｗａｒｅ ＳＳＲＨｕｎｔｅｒ １ ３[１４] . Ｐｒｉｍｅｒ ｐａｉｒｓ ｆｏｒ ｅａｃｈ ｍｉ￣
ｃｒｏｓａｔｅｌｌｉｔｅ ｌｏｃｕｓ ｗｅｒｅ ｄｅｓｉｇｎｅｄ ｗｉｔｈ ＰｒｉｍｅｒＰｒｅ￣
５１４ 第 ４期 李 磊等: 改良 ＦＩＡＳＣＯ方法筛选砷超富集植物蜈蚣草 ＳＳＲ分子标记(英文)
ｍｉｅｒ ５ ０ ｓｏｆｔｗａｒｅ (ｈｔｔｐ: / / ｗｗｗ. ｐｒｅｍｉｅｒｂｉｏｓｏｆｔ.
ｃｏｍ / ｐｒｉｍｅｒｄｅｓｉｇｎ / ) ａｎｄ ｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｄ ｂｙ Ｓａｎｇｏｎ
Ｂｉｏｔｅｃｈ Ｃｏｍｐａｎｙ (Ｓｈａｎｇｈａｉ) .
１ ３ ＰＣＲ ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ ｇｅｎｏｔｙｐｉｎｇ
Ｔｈｅ ｍｉｃｒｏｓａｔｅｌｌｉｔｅ ｐｒｉｍｅｒｓ ｗｅｒｅ ｔｈｅｎ ｏｐｔｉ￣
ｍｉｚｅｄ ｆｏｒ ａｎｎｅａｌｉｎｇ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ａｎｄ ｓｃｒｅｅｎｅｄ
ｆｏｒ ｃｏｎｓｉｓｔｅｎｔ ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ １０ ｉｎｄｉｖｉｄｕａｌｓ.
ＰＣＲ ｒｅａｃｔｉｏｎｓ ｗｅｒｅ ｃａｒｒｉｅｄ ｏｕｔ ｉｎ １０ μＬ ｔｏｔａｌ ｖｏ￣
ｌｕｍｅꎬ ｗｈｉｃｈ ｉｎｃｌｕｄｅｄ １０ ｎｇ ｏｆ ｇｅｎｏｍｉｃ ＤＮＡꎬ
０ ２ ｍｍｏｌ / Ｌ ｏｆ ｅａｃｈ ｄＮＴＰｓꎬ ０ ２ μｍｏｌ / Ｌ ｏｆ ｅａｃｈ
ｐｒｉｍｅｒꎬ １ × ＰＣＲ ｂｕｆｆｅｒ ( Ｓａｎｇｏｎ)ꎬ ２ ｍｍｏｌ / Ｌ
Ｍｇ２＋ꎬ ａｎｄ ０ ２５ Ｕ ｏｆ ＤＮＡ Ｔａｑ ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ
(Ｓａｎｇｏｎ) . Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ ｗｅｒｅ: ４ ｍｉｎ
ｄｅｎａｔｕｒａｔｉｏｎ ａｔ ９４℃ꎬ ３５ ｃｙｃｌｅｓ ｏｆ ３０ ｓ ａｔ ９４℃ꎬ
３０ ｓ ａｔ Ｔａ (℃)ꎬ ３０ ｓ ａｔ ７２℃ꎬ ａｎｄ ａ ｆｉｎａｌ ｅｘｔｅｎ￣
ｓｉｏｎ ｏｆ ７２℃ ｆｏｒ １０ ｍｉｎ. Ｔｏｕｃｈ Ｄｏｗｎ ＰＣＲ ｗａｓ
ｐｅｒｆｏｒｍｅｄ ｆｏｒ ＷＧＣ￣１ꎬ ＷＧＣ￣７ ａｎｄ ＷＧＣ￣１４: ａｎ
ｉｎｉｔｉａｌ ｄｅｎａｔｕｒａｔｉｏｎ ａｔ ９４℃ ｆｏｒ ５ ｍｉｎꎻ １０ ｃｙｃｌｅｓ ｏｆ
３０ ｓ ａｔ ９４℃ꎬ ３０ ｓ ａｔ (Ｔａ ＋ ４)℃ꎬ ａｎｄ ２０ ｓ ａｔ
７２℃ꎻ ３０ ｃｙｃｌｅｓ ｏｆ ３０ ｓ ａｔ ９２℃ꎬ ３０ ｓ ａｔ Ｔａ (℃)
ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅꎬ ａｎｄ ２０ ｓ ａｔ ７２℃ꎬ ａｎｄ ａ ｆｉｎａｌ ｅｘｔｅｎ￣
ｓｉｏｎ ａｔ ７２℃ ｆｏｒ １０ ｍｉｎ. Ｔｈｅ ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｐｒｏ￣
ｄｕｃｔｓ ｗｅｒｅ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｏｎ ３％ ａｇａｒｏｓｅ ｇｅｌ.
Ｐｒｉｍｅｒｓ ｏｆ ｅｉｇｈｔ ｌｏｃｉ ｏｆ ｐｕｒｅ ｒｅｐｅａｔｓ ａｎｄ ｏｎｅ
ｌｏｃｕｓ ｏｆ ｎｅａｒ ｐｕｒｅ ｒｅｐｅａｔｓ (Ｔａｂｌｅ １) ｗｅｒｅ ｓｅｌｅｃｔｅｄ
ｔｏ ｅｘａｍｉｎｅ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ ｉｎ ｔｈｅ ４０ ｉｎｄｉｖｉｄｕａｌｓ ｃｏｌ￣
ｌｅｃｔｅｄ ｆｒｏｍ Ｌｕｓｈａｎ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｐａｒｋ ｏｆ Ｊｉａｎｇｘｉ ｐｒｏ￣
ｖｉｎｃｅ ａｎｄ Ｅｎｓｈｉ ｃｉｔｙ ｏｆ Ｈｕｂｅｉ ｐｒｏｖｉｎｃｅꎬ Ｃｈｉｎａ (２０
ｉｎｄｉｖｉｄｕａｌｓ ｆｒｏｍ ｅａｃｈ ｓｉｔｅ). Ａｍｐｌｉｆｉｅｄ ｐｒｏｄｕｃｔｓ ｗｅｒｅ
ｓｅｐａｒａｔｅｄ ｏｎ ａ １０％ ｎｏｎ￣ｄｅｎａｔｕｒｉｎｇ ｐｏｌｙａｃｒｙｌａｍｉｄｅ
ｇｅｌ ｕｓｉｎｇ ｓｉｌｖｅｒ ｓｔａｉｎｉｎｇ. Ａ ２０ ｂｐ ＤＮＡ ｌａｄｄｅｒ
(ＴａＫａＲａ) ｗａｓ ｕｓｅｄ ｔｏ ｉｄｅｎｔｉｆｙ ａｌｌｅｌｅｓ.
Ｔａｂｌｅ １ Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ ｏｆ ｎｉｎｅ ｍｉｃｒｏｓａｔｅｌｌｉｔｅ ｌｏｃｉ ｆｏｒ Ｐｔｅｒｉｓ ｖｉｔｔａｔａ ｔｅｓｔｅｄ ｏｎ ４０ ｉｎｄｉｖｉｄｕａｌｓ
(ｅａｃｈ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ ｈａｄ ２０ ｉｎｄｉｖｉｄｕａｌｓ)
Ｌｏｃｕｓ Ｒｅｐｅａｔｍｏｔｉｆ Ｐｒｉｍｅｒ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ (５′
－ ３′) Ｓｉｚｅ ｒａｎｇｅ(ｂｐ)
Ｔａ
(°Ｃ) Ｎａ Ｎｅ
Ｏｂｓ￣
Ｈｅｔ
Ｅｘｐ￣
Ｈｅｔ Ｆｉｓ Ｆｓｔ ＧＢ Ａｃｃ. Ｎｏ.
ＷＧＣ￣１ (ＴＣ)１７
Ｆ: ＴＴＴＴＧＴＡＴＴＧＧＡＣＡＣＴＧＡＣＡＣＧ
Ｒ: ＣＧＧＡＣＧＧＣＡＴＧＧＡＧＡＡＧ ２９６
－３４８ ５４∗ ６ ４ ４０２４ ０ ００００ ０ ７８３２ １ ００００ ０ ０１６４ ＫＣ６９８８７８
ＷＧＣ￣２ (ＡＧ)１３
Ｆ: ＡＧＣＣＧＣＴＴＧＡＡＣＡＡＡＧＴＡＡＡ
Ｒ: ＴＡＣＡＡＡＴＴＣＣＡＴＴＧＡＡＴＧＴＧＣＴ １３６
－１４４ ４５ ３ １ ６１３４ ０ ２４３２ ０ ３８５４ ０ ３６７０ ０ ００４０ ＫＣ６９８８７９
ＷＧＣ￣７ (ＴＣ)２６
Ｆ: ＴＣＴＣＧＴＡＧＡＣＣＧＡＴＴＴＣＣＴ
Ｒ: ＡＣＡＧＣＣＣＡＣＣＴＣＴＴＴＣＣ １０２
－１０８ ５２∗ ４ ２ ２６６８ ０ ００００ ０ ５６８７ １ ００００ ０ ４７２９ ＫＣ６９８８８４
ＷＧＣ￣１０ (ＧＡ)１８
Ｆ: ＣＴＣＣＣＣＴＡＴＡＡＧＣＧＴＴＣＡＡＧＣ
Ｒ: ＧＣＣＣＡＣＡＴＧＧＴＣＡＣＣＴＣＡＡ １００
－１４０ ５３ ７ ５ １４２９ ０ ２５００ ０ ８１６９ ０ ６７８９ ０ ０３３９ ＫＣ６９８８８７
ＷＧＣ￣１１ (ＣＡ)１３
Ｆ: ＴＣＡＣＣＣＴＴＧＡＡＣＴＣＣＣＴＣ
Ｒ: ＴＧＡＡＧＣＣＣＴＧＣＴＡＴＴＧＧ １２４
－１２６ ５５ ２ １ ０５１２ ０ ００００ ０ ０４９４ １ ００００ ０ ０２５６ ＫＣ６９８８８８
ＷＧＣ￣１３ (ＧＡ)１４
Ｆ: ＴＧＣＧＴＡＡＧＣＣＡＧＣＴＣＣＡＣＡＴＣ
Ｒ: ＧＣＣＴＣＴＡＴＣＴＴＣＡＧＣＧＧＧＴＴＣＡＴ １４７
－１６７ ５５ ６ ４ １５７０ ０ １３３３ ０ ７７２３ ０ ７８４９ ０ １１７２ ＫＣ６９８８９０
ＷＧＣ￣１４ (ＧＡ)２３
Ｆ: ＡＧＴＴＧＡＡＧＧＣＴＡＡＧＧＡＴＧＡＴ
Ｒ: ＧＣＡＣＴＡＴＴＣＴＡＡＡＴＧＧＧＴＧＡ １７９
－１８５ ４８∗ ４ ３ ５２６６ ０ ０３２３ ０ ７２８２ ０ ９５３２ ０ ００６４ ＫＣ６９８８９１
ＷＧＣ￣２２
(ＣＴ)８ＣＣ
(ＣＴ)１４
Ｆ: ＡＴＧＧＣＡＧＴＡＡＴＧＴＴＧＣＴＡＴＣＴＣＣＧ
Ｒ: ＡＴＧＧＴＧＣＡＴＧＴＡＡＧＧＣＴＡＴＴＧＧＴＴ ２２６
－２３８ ５４ ４ １ ７４５５ ０ ２２２２ ０ ４３３１ ０ ４７６４ ０ ００６３ ＫＣ６９８８９９
ＷＧＣ￣２５ (ＣＴ)１３
Ｆ: ＴＣＴＡＴＴＧＣＴＣＴＴＡＣＧＣＣＣＣＴＧＡＡ
Ｒ: ＴＴＴＧＴＧＣＣＣＡＴＣＣＡＡＣＣＴＧＡ １７６
－１９０ ５４ ５ ２ ８８５１ ０ ３１０３ ０ ６６４９ ０ ５０５５ ０ ０４０７ ＫＣ６９８９０２
Ｎｏｔｅｓ: Ｔａ ＝ Ｏｐｔｉｍａｌ ａｎｎｅａｌｉｎｇ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅｓ (℃)ꎻ Ｎａ ＝ Ｏｂｓｅｒｖｅｄ ｎｕｍｂｅｒ ｏｆ ａｌｌｅｌｅｓꎻ Ｎｅ ＝ Ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ ｎｕｍｂｅｒ ｏｆ ａｌｌｅｌｅｓꎻ Ｏｂｓｅｒｖｅｄ
ｈｅｔｅｒｏｚｙｇｏｓｉｔｙ (Ｏｂｓ￣Ｈｅｔ) ａｎｄ ｅｘｐｅｃｔｅｄ ｈｅｔｅｒｏｚｙｇｏｓｉｔｙ (Ｅｘｐ￣Ｈｅｔ) ｗｅｒｅ ｃｏｍｐｕｔｅｄ ｕｓｉｎｇ Ｌｅｖｅｎｅ (１９４９)ꎻ Ｆｉｓ ＝ Ｗｒｉｇｈｔ′ｓ
(１９７８) ｆｉｘａｔｉｏｎ ｉｎｄｅｘ (Ｆｉｓ) ａｓ ａ ｍｅａｓｕｒｅ ｏｆ ｈｅｔｅｒｏｚｙｇｏｔｅ ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ ｏｒ ｅｘｃｅｓｓꎻ Ｆｓｔ ＝ Ｆ￣ｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ (Ｆｓｔ) ａｓ ａ ｍｅａｓｕｒｅ ｏｆ ｇｅ￣
ｎｅｔｉｃ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔꎻ Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ ｎｕｍｂｅｒ ｏｆ ＧｅｎＢａｎｋ (ＧＢ Ａｃｃ. Ｎｏ.) . ∗: Ｔｏｕｃｈ Ｄｏｗｎ ＰＣＲ ｗｉｔｈ １０ ｃｙｃｌｅｓ ｏｆ (Ｔａ ＋
４)℃ꎬ ｆｏｌｌｏｗｅｄ ｂｙ ３０ ｃｙｃｌｅｓ ａｔ Ｔａ (℃) .
６１４ 植 物 科 学 学 报 第 ３２卷
１ ４ Ｃｒｏｓｓ￣ｓｐｅｃｉｅｓ ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ
Ｐｔｅｒｉｓ ｍｕｌｔｉｆｉｄａ ｉｓ ａｎｏｔｈｅｒ ｐｌａｎｔ ｔｈａｔ ｃｏｕｌｄ ｂｅ
ｐｏｔｅｎｔｉａｌｌｙ ｕｓｅｄ ｉｎ ｐｈｙｔｏｒｅｍｅｄｉａｔｉｏｎ ｏｆ ａｒｓｅｎｉｃ
ｃｏｎｔａｍｉｎａｔｅｄ ｓｏｉｌｓ[１０] . Ｓｐｅｃｉｍｅｎｓ ｏｆ Ｐ. ｍｕｌｔｉｆｉｄａ
Ｐｏｉｒ. ｗｅｒｅ ｃｏｌｌｅｃｔｅｄ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｃａｍｐｕｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｃｈｉ￣
ｎａ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｇｅｏｓｃｉｅｎｃｅｓ (Ｗｕｈａｎ) . Ｇｅｎｏｍｉｃ
ＤＮＡ ｗａｓ ｅｘｔｒａｃｔｅｄ ｕｓｉｎｇ ｔｈｅ ＣＴＡＢ ｍｅｔｈｏｄ ａｎｄ
ｃｒｏｓｓ￣ｓｐｅｃｉｅｓ ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｗａｓ ｄｏｎｅ ｕｎｄｅｒ ｔｈｅ
ｓａｍｅ ＰＣＲ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ ｕｓｅｄ ａｂｏｖｅ.
１ ５ Ｄａｔａ ａｎａｌｙｓｉｓ
Ｔｈｅ ｇｅｎｏｔｙｐｉｎｇ ｄａｔａ ｗｅｒｅ ａｓｓｅｓｓｅｄ ｆｏｒ ｓｃｏ￣
ｒｉｎｇ ｅｒｒｏｒｓ ｕｓｉｎｇ ＭＩＣＲＯ￣ＣＨＥＣＫＥＲ ２２３[１５] . Ａｌｌ
ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ ｗｅｒｅ ｃａｌｃｕｌａｔｅｄ ｕｓｉｎｇ
ＰＯＰＧＥＮＥ Ｖ１３１ ｓｏｆｔｗａｒｅ[１６] . Ｔｅｓｔｓ ｆｏｒ ｇｅｎｏｔｙｐｉｃ
ｌｉｎｋａｇｅ ｄｉｓｅｑｕｉｌｉｂｒｉｕｍ ａｎｄ Ｈａｒｄｙ￣Ｗｅｉｎｂｅｒｇ ｅｑｕｉ￣
ｌｉｂｒｉｕｍ (ＨＷＥ) ｗｅｒｅ ａｌｓｏ ｃｏｎｄｕｃｔｅｄ ｕｓｉｎｇ ｔｈｅ
ｓａｍｅ ｓｏｆｔｗａｒｅ ｐａｃｋａｇｅ.
２ Ｒｅｓｕｌｔｓ
２ １ Ｄｉｇｅｓｔｉｏｎꎬ ｌｉｇａｔｉｏｎ ａｎｄ ａｄａｐｔｏｒ￣ｍｅｄｉａｔｅｄ
ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｇｅｎｏｍｉｃ ＤＮＡ
Ｔｈｅ ｇｅｎｏｍｉｃ ＤＮＡ ｗａｓ ｅｆｆｉｃｉｅｎｔｌｙ ｄｉｇｅｓｔｅｄ
ｂｙ ＣｖｉＱＩ ｅｎｄｏｎｕｃｌｅａｓｅ ａｎｄ ｌｉｇａｔｅｄ ｔｏ ｔｈｅ ＣｖｉＱＩ￣
ａｄａｐｔｏｒ ｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓｌｙ. Ｔｈｅ ｄｉｇｅｓｔｅｄ￣ｌｉｇａｔｅｄ ＤＮＡ
ｗａｓ ｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌｌｙ ａｍｐｌｉｆｉｅｄ ｕｓｉｎｇ ａ ｐｉｇ￣ｔａｉｌ ＣｖｉＱＩ￣
Ｎ ｐｒｉｍｅｒꎬ ｆｏｒｍｉｎｇ ａ ｃｌｅａｒ ｓｍｅａｒ ｏｆ ｆｒａｇｍｅｎｔｓ
ｃｅｎｔｅｒｅｄ ａｔ ａｐｐｒｏｘｉｍａｔｅｌｙ ５００ ｂｐ ( Ｆｉｇ １: Ａ) .
Ｔｈｅ ｅｎｒｉｃｈｅｄ ＤＮＡ ｗａｓ ａｌｓｏ ｒｅｃｏｖｅｒｅｄ ｂｙ ｔｈｅ
ｐｒｉｍｅｒ (Ｆｉｇ １: Ｂ) ｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌｌｙ.
２ ２ Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ ａｎｄ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ ｏｆ ｔｈｅ ｍｉｃｒｏ￣
ｓａｔｅｌｌｉｔｅｓ
Ｗｅ ｒａｎｄｏｍｌｙ ｓｅｌｅｃｔｅｄ １００ ｃｌｏｎｅｓ. Ａｍｏｎｇ
ｔｈｅｍꎬ ６１ ｃｌｏｎｅｓ ｗｅｒｅ ｃｏｎｆｉｒｍｅｄ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｂｙ ｃｏｌｏ￣
ｎｙ ＰＣＲ (Ｆｉｇ １: Ｃ) ａｎｄ ｓｅｑｕｅｎｃｅｄ. Ａ ｔｏｔａｌ ｏｆ ５１
ｃｌｏｎｅｓ ｃｏｎｔａｉｎｅｄ ｔｈｅ ｔａｒｇｅｔ ｒｅｐｅａｔｉｎｇ ｓｅｑｕｅｎ￣
ｃｅｓꎬ ｉｎｄｉｃａｔｉｎｇ ｔｈａｔ ｅｎｒｉｃｈｍｅｎｔ ｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙ ｗａｓ ａｓ
ｈｉｇｈ ａｓ ５１％ (５１ / １００) . Ａｍｏｎｇ ｔｈｅ ｒｅｐｅａｔｉｎｇ ｓｅ￣
ｑｕｅｎｃｅｓꎬ ａｐｐｒｏｘｉｍａｔｅｌｙ ８０％ ｃｏｎｔａｉｎｅｄ ｔｈｅ ＡＧ /
ＣＴ ｍｏｔｉｆꎬ ｏｎｌｙ ４％ ｃｏｎｔａｉｎｅｄ ｔｈｅ ＡＣ / ＧＴ ｍｏｔｉｆꎬ
ａｎｄ ｔｈｅ ｏｔｈｅｒ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｃｏｎｔａｉｎｅｄ ＡＧ / ＣＴ ａｎｄ
A B C
D
Ａ: Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ ａｆｔｅｒ ｄｉｇｅｓｔｉｏｎ￣ｌｉｇａｔｉｏｎ (１ ５％ ａｇａｒｏｓｅ ｇｅｌꎬ
Ｍａｒｋｅｒ: ＴａＫａＲａ ＤＬ５０００ )ꎻ Ｂ: ＰＣＲ ｒｅｃｏｖｅｒｙ ｏｆ ｅｎｒｉｃｈｅｄ
ＤＮＡ ( １ ５％ ａｇａｒｏｓｅ ｇｅｌꎬ Ｍａｒｋｅｒ: ＴａＫａＲａ ＤＬ５０００)ꎻ Ｃ:
Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｃｌｏｎｅｓ ｉｎ ｔｈｅ ｅｎｒｉｃｈｅｄ ｌｉｂｒａｒｙ ｂｙ ｃｏｌｏ￣
ｎｙ ＰＣＲ ( ３％ ａｇａｒｏｓｅ ｇｅｌꎬ Ｍａｒｋｅｒ: ＴａＫａＲａ ＤＬ２０００)ꎻ Ｄ:
Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｐｒｉｍｅｒ ＷＧＣ￣２２ ｉｎ ４０ ｉｎｄｉｖｉｄｕａｌｓ (３％ ａｇａｒｏｓｅ
ｇｅｌꎬ Ｍａｒｋｅｒ: ＴａＫａＲａ ＤＬ２０００) .
Ｆｉｇ １ Ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ ｔｈｅ ｍｏｄｉｆｉｅｄ ＦＩＡＳＣＯ ｐｒｏｔｏｃｏｌ
ＡＣ / ＧＴ ｃｏｍｐｏｕｎｄ ｍｏｔｉｆｓꎬ ｉｎｄｉｃａｔｉｎｇ ｔｈａｔ ｔｈｅ ＡＧ
ｒｅｐｅａｔｉｎｇ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｗａｓ ｍｕｃｈ ｍｏｒｅ ａｂｕｎｄａｎｔ ｉｎ
ｔｈｅ ｇｅｎｏｍｅ ｏｆ Ｃｈｉｎｅｓｅ ｂｒａｋｅ ｆｅｒｎ ｔｈａｎ ｔｈａｔ ｏｆ
ＡＣ. Ｆｕｒｔｈｅｒｍｏｒｅꎬ ６０％ ｏｆ ｔｈｅ ＳＳＲ￣ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ ｓｅ￣
ｑｕｅｎｃｅｓ ｈａｄ ｐｅｒｆｅｃｔ ｒｅｐｅａｔｓ. Ｂｅｃａｕｓｅ ｐｅｒｆｅｃｔ
ｒｅｐｅａｔｓ[１７] ａｒｅ ｍｏｒｅ ｓｕｉｔａｂｌｅ ｆｏｒ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ ａｎａｌｙ￣
ｓｉｓꎬ ｔｈｅｓｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｒｅｖｅａｌｅｄ ｔｈａｔ ｏｕｒ ｍｏｄｉｆｉｅｄ ＦＩ￣
ＡＳＣＯ ｍｅｔｈｏｄ ｗｏｒｋｅｄ ｖｅｒｙ ｗｅｌｌ ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ ｂｒａｋｅ
ｆｅｒｎ ｇｅｎｏｍｅ ａｎｄ ｅｘｈｉｂｉｔｅｄ ｖｅｒｙ ｈｉｇｈ ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ.
２ ３ Ｐｒｉｍｅｒ ｄｅｓｉｇｎ ａｎｄ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ
Ａｍｏｎｇ ｔｈｅ ５１ ｍｉｃｒｏｓａｔｅｌｌｉｔｅ ｌｏｃｉꎬ ＰｒｉｍｅｒＰｒｅ￣
ｍｉｅｒ ｃｒｅａｔｅｄ ｐｕｔａｔｉｖｅ ｐｒｉｍｅｒ ｓｅｔｓ ｆｏｒ ２５ ｌｏｃｉ
(ＧＢ Ａｃｃ. Ｎｏ. ＫＣ６９８８７８￣ＫＣ６９８９０２) ｗｉｔｈ ｓｃｏｒｅｓ
ｈｉｇｈｅｒ ｔｈａｎ ９０ ｐｏｉｎｔｓ. Ｔｈｅｓｅ ｐｒｉｍｅｒ ｓｅｔｓ ｗｅｒｅ
ｃｏｎｓｉｄｅｒｅｄ ａｓ ｃａｎｄｉｄａｔｅ ｐａｉｒｓ ａｎｄ ｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｄ.
Ｐｒｉｍｅｒｓ ｏｆ ｅｉｇｈｔ ｌｏｃｉ ｏｆ ｐｕｒｅ ｒｅｐｅａｔｓ ａｎｄ ｏｎｅ ｌｏ￣
ｃｕｓ ｏｆ ｉｎｔｅｒｍｉｔｔｅｎｔ ｒｅｐｅａｔｓ (Ｔａｂｌｅ １) ｙｉｅｌｄｅｄ ｓｕｃ￣
ｃｅｓｓｆｕｌ ａｍｐｌｉｃｏｎｓ ｏｆ ｔｈｅ ｅｘｐｅｃｔｅｄ ｓｉｚｅ ｃｏｎｓｉｓｔ￣
ｅｎｔｌｙ (Ｆｉｇ １: Ｄ)ꎬ ａｎｄ ｗｅｒｅ ｆｕｒｔｈｅｒ ｅｘａｍｉｎｅｄ ｆｏｒ
ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ.
Ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｓ ｗｅｒｅ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｏｎ １０％ ｎｏｎ￣
ｄｅｎａｔｕｒｉｎｇ ｐｏｌｙａｃｒｙｌａｍｉｄｅ ｇｅｌ ( Ｆｉｇ ２ ) . Ｔｈｅ
ｎｕｍｂｅｒ ｏｆ ａｌｌｅｌｅｓ ｏｆ ｔｈｅ ｐｒｉｍｅｒｓ ｒａｎｇｅｄ ｆｒｏｍ ｔｗｏ
ｔｏ ｓｅｖｅｎ. Ｆｕｒｔｈｅｒｍｏｒｅꎬ ｓｅｖｅｎ ｌｏｃｉ ｐｏｓｓｅｓｓｅｄ ｍｏｒｅ
７１４ 第 ４期 李 磊等: 改良 ＦＩＡＳＣＯ方法筛选砷超富集植物蜈蚣草 ＳＳＲ分子标记(英文)
AB
Ａ: Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｐｒｉｍｅｒ ＷＧＣ￣１０ (１００－１２０ ｂｐ) ｉｎ
ＬｕＳｈａｎ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ ( ２０ ｉｎｄｉｖｉｄｕａｌｓ ) ( １０％ ＰＡＧＥ
ｇｅｌꎬ Ｍａｒｋｅｒ: ＴａＫａＲａ ２０ ｂｐ ＤＮＡ ｌａｄｄｅｒ. Ｆｒｏｍ ｔｏｐ ｔｏ
ｂｏｔｔｏｍ: ２００ꎬ １８０ꎬ １６０ꎬ １４０ꎬ １２０ꎬ １００ ｂｐ)ꎻ Ｂ:
Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｐｒｉｍｅｒ ＷＧＣ￣１０ ｉｎ ＥｎＳｈｉ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ
(２０ ｉｎｄｉｖｉｄｕａｌｓ) (１０％ ＰＡＧＥ ｇｅｌꎬ Ｍａｒｋｅｒ: ＴａＫａＲａ
２０ ｂｐ ＤＮＡ ｌａｄｄｅｒ. Ｆｒｏｍ ｔｏｐ ｔｏ ｂｏｔｔｏｍ: ２００ꎬ １８０ꎬ
１６０ꎬ １４０ꎬ １２０ꎬ １００ ｂｐ) .
Ｆｉｇ ２ Ａｍｐｌｉｆｉｅｄ ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ ｐｒｉｍｅｒ ＷＧＣ￣１０
ｔｈａｎ ｔｈｒｅｅ ａｌｌｅｌｅｓ ｐｅｒ ｌｏｃｕｓ. Ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ ｎｕｍ￣
ｂｅｒｓ ｏｆ ａｌｌｅｌｅｓ ｗｅｒｅ ｂｅｔｗｅｅｎ １０５１２ ａｎｄ ５１４２９.
Ｏｂｓ￣Ｈｅｔ ｗｅｒｅ ０ ｔｏ ０ ３１０３ꎬ ｗｈｉｌｅ Ｅｘｐ￣Ｈｅｔ ｗｅｒｅ
ｂｅｔｗｅｅｎ ００４９４ ａｎｄ ０ ８１６９. Ｗｅ ａｌｓｏ ｔｅｓｔｅｄ ｔｈｅ
ｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔｓ ｆｏｒ ｈｅｔｅｒｏｚｙｇｏｔｅ ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ (Ｆｉｓ) ａｎｄ
ｇｅｎｅｔｉｃ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔ ( Ｆｓｔ) . Ｔｈｅ Ｆｉｓ
ｗｅｒｅ ｂｅｔｗｅｅｎ ０ ３６７０ ａｎｄ １００００ꎬ ｗｈｉｌｅ ｔｈｅ Ｆｓｔ
ｗｅｒｅ ｂｅｔｗｅｅｎ ０ ００４０ ａｎｄ ０ ４７２９ (Ｔａｂｌｅ １) . Ｎｏ
ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｌｉｎｋａｇｅ ｄｉｓｅｑｕｉｌｉｂｒｉａ ｗｅｒｅ ｄｅｔｅｃｔｅｄ. Ａｌｌ
ｌｏｃｉ ｄｅｖｉａｔｅｄ ｆｒｏｍ ｔｈｅ Ｈａｒｄｙ￣Ｗｅｉｎｂｅｒｇ ｅｑｕｉｌｉｂ￣
ｒｉｕｍ (Ｐ < ０ ０５) .
２ ４ Ｃｒｏｓｓ￣ｓｐｅｃｉｅｓ ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ
Ｔｏ ｅｘａｍｉｎｅ ｔｈｅ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ｕｔｉｌｉｔｙ ｏｆ ｔｈｅｓｅ ｍｉｃ￣
ｒｏｓａｔｅｌｌｉｔｅ ｍａｒｋｅｒｓ ｄｅｖｅｌｏｐｅｄ ｆｏｒ Ｃｈｉｎｅｓｅ ｂｒａｋｅ
ｆｅｒｎ ｉｎ ｏｔｈｅｒ Ｐｔｅｒｉｓ ｓｐｅｃｉｅｓꎬ ｃｒｏｓｓ￣ｓｐｅｃｉｅｓ ａｍｐｌｉ￣
ｆｉｃａｔｉｏｎ ｗａｓ ａｌｓｏ ｃｏｎｄｕｃｔｅｄ ｕｓｉｎｇ ｇｅｎｏｍｉｃ ＤＮＡ
ｆｒｏｍ １０ ｉｎｄｉｖｉｄｕａｌｓ ｏｆ Ｐ. ｍｕｌｔｉｆｉｄａ ( Ｔａｂｌｅ ２) .
Ｐｒｉｍｅｒ ｓｅｔｓ ｏｆ ＷＧＣ￣１ ａｎｄ ＷＧＣ￣７ ａｍｐｌｉｆｉｅｄ ａｎ
ｕｎｓｔａｂｌｅ ｂａｎｄ ｗｉｔｈ ａ ｓｉｚｅ ｓｉｍｉｌａｒ ｔｏ Ｃｈｉｎｅｓｅ
ｂｒａｋｅ ｆｅｒｎꎬ ｗｈｉｌｅ ｐｒｉｍｅｒ ｓｅｔ ｏｆ ＷＧＣ￣２５ ａｍｐｌｉｆｉｅｄ
ａ ｖｅｒｙ ｃｌｅａｒ ｂａｎｄ (７５０ ｂｐ) ｔｈａｔ ｗａｓ ｍｕｃｈ ｌａｒｇｅｒ
ｔｈａｎ ｅｘｐｅｃｔｅｄ. Ｓｉｘ ｏｆ ｔｈｅ ｎｉｎｅ ｌｏｃｉ ａｍｐｌｉｆｉｅｄ ｉｎ
Ｃｈｉｎｅｓｅ ｂｒａｋｅ ｆｅｒｎ ａｌｓｏ ａｍｐｌｉｆｉｅｄ ａ ｂａｎｄ ｏｆ ｓｉｍｉ￣
ｌａｒ ｓｉｚｅ ｉｎ Ｐ. ｍｕｌｔｉｆｉｄａ ( Ｔａｂｌｅ ２ ) . Ｔｈｅｒｅｆｏｒｅꎬ
ｔｈｅｓｅ ｌｏｃｉ ｍｉｇｈｔ ｆａｃｉｌｉｔａｔｅ ｅｖｏｌｕｔｉｏｎａｒｙ ａｎｄ ｐｏｐｕ￣
ｌａｔｉｏｎ ｇｅｎｅｔｉｃ ｓｔｕｄｉｅｓ ａｓ ｗｅｌｌ ａｓ ｂｒｅｅｄｉｎｇ ａｎｄ
ｃｕｌｔｉｖａｒ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｉｎ Ｐ. ｍｕｌｔｉｆｉｄａ.
３ Ｄｉｓｃｕｓｓｉｏｎ
Ｔｈｅ ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｃｈｉｎｅｓｅ ｂｒａｋｅ ｆｅｒｎ ｖａ￣
ｒｉｅｓ ｇｒｅａｔｌｙ. Ｔｈｅ ｈｅｉｇｈｔ ｒａｎｇｅｓ ｆｒｏｍ ０ ２ ｔｏ ２ ｍ.
Ｉｔ ａｌｓｏ ｈａｓ ａ ｇｒｅａｔ ｃｈａｎｇｅ ｉｎ ｂｉｏｍａｓｓ ｒａｎｇｉｎｇ ｉｎ
５ －３６ ｔ / ｈｍ２( ｆｒｅｓｈ ｗｅｉｇｈｔ) [３] . Ｗｅｉ[１８] ｓｕｇｇｅｓｔｅｄ
ｔｈａｔ ｔｈｅ ｕｐｔａｋｅ ｏｆ ａｒｓｅｎｉｃ ｈａｄ ｎｏ ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ ｗｉｔｈ
ｔｈｅ ｅｃｏｔｙｐｅ ｏｆ Ｐｔｅｒｉｓ ｖｉｔｔａｔａ Ｌ.ꎬ ｗｈｉｌｅ ｏｔｈｅｒ ｓｔｕ￣
ｄｉｅｓ[８] ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ａｒｓｅｎｉｃ ａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎ ｗａｓ
ｐｏｓｉｔｉｖｅｌｙ ｃｏｒｒｅｌａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｆｒｏｎｄ ｎｕｍｂｅｒꎬ ｓｐｏｒｅ
ｎｕｍｂｅｒ ａｎｄ ｐｌａｎｔ ｈｅｉｇｈｔꎬ ｗｈｉｃｈ ｐｒｏｖｉｄｅｓ ａ ｒｅａ￣
ｌｉｓｔｉｃ ｂａｓｉｓ ａｓ ｗｅｌｌ ａｓ ｔｈｅｏｒｅｔｉｃａｌ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ ｆｏｒ
ｔｈｅ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ＳＳＲ ｍａｒｋｅｒｓ. Ａｔ ｐｒｅｓｅｎｔꎬ ｆｅｗ
ｓｔｕｄｉｅｓ ｈａｖｅ ｂｅｅｎ ｃｏｎｄｕｃｔｅｄ ｏｎ ｔｈｅ ｇｅｎｅｔｉｃ ｄｉ￣
ｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ ｆｅｒｎｓ[１９] . Ｆｕｒｔｈｅｒｍｏｒｅꎬ ｇｅｎｅｔｉｃ ｒｅｓｅａｒｃｈ
ｏｎ ｓｐｅｃｉｅｓ ｓｕｃｈ ａｓ Ｐｔｅｒｉｓ ｖｉｔｔａｔａ Ｌ. ｉｓ ｐａｒｔｉｃｕｌａｒｌｙ
ｌｉｍｉｔｅｄ. Ｚｈｏｕ[２０] ｆｏｕｎｄ ａ ｈｉｇｈ ｄｅｇｒｅｅ ｏｆ ｇｅｎｅｔｉｃ
ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ ｉｎ ｌｉｍｅｓｔｏｎｅ ａｒｅａｓ ｉｎ Ｇｕａｎｇｘｉ Ｐｔｅｒｉｓ
ｖｉｔｔａｔａ Ｌ. ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ ｕｓｉｎｇ ａｌｌｏｚｙｍｅ ａｎａｌｙｓｉｓꎬ ｂｕｔ
ｔｈｅ ｄｅｇｒｅｅ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ ｗａｓ ｎｏｔ ｐｒｏｐｏｒｔｉｏｎａｌ ｔｏ
ｄｉｓｔａｎｃｅ ａｎｄ ｓｐａｃｅ. Ｙａｎｇ[２１] ｃｏｌｌｅｃｔｅｄ Ｐｔｅｒｉｓ ｖｉｔｔａｔａ
Ｌ. ｓａｍｐｌｅｓ ｆｒｏｍ Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ ａｎｄ Ｈｕｎａｎ ｐｒｏｖｉｎｃｅ
ａｎｄ ｄｅｖｅｌｏｐｅｄ ｅｉｇｈｔ ｐａｉｒｓ ｏｆ ＳＳＲ ｐｒｉｍｅｒｓ. Ａ ｐｒｅ￣
ｌｉｍｉｎａｒｙ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｇｅｎｅｔｉｃ ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ ｔｈｅ ｔｗｏ
ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ ｗａｓ ｃｏｎｄｕｃｔｅｄꎻ ｈｏｗｅｖｅｒꎬ ｔｈｅ ｅｉｇｈｔ
Ｔａｂｌｅ ２ Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｎｉｎｅ ｍｉｃｒｏｓａｔｅｌｌｉｔｅ ｐｒｉｍｅｒｓ ｄｅｖｅｌｏｐｅｄ ｆｏｒ Ｐｔｅｒｉｓ ｖｉｔｔａｔａ ｉｎ Ｐ. ｍｕｌｔｉｆｉｄａ
Ｌｏｃｕｓ ＷＧＣ￣１ ＷＧＣ￣２ ＷＧＣ￣７ ＷＧＣ￣１０ ＷＧＣ￣１１ ＷＧＣ￣１３ ＷＧＣ￣１４ ＷＧＣ￣２２ ＷＧＣ￣２５
Ｒｅｓｕｌｔ ± ＋ ± ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ －
Ｎｏｔｅｓ: ‘＋’ ｄｅｎｏｔｅｓ ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ａ ｂａｎｄ ｉｎ ｔｈｅ ｓａｍｅ ｓｉｚｅ ｒａｎｇｅ ａｓ Ｐ. ｖｉｔｔａｔａꎬ ‘±’ ｄｅｎｏｔｅｓ ｕｎｓｔａｂｌｅ ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎꎬ ａｎｄ ‘－’ ｄｅ￣
ｎｏｔｅｓ ｎｏ ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｉｎ ｔｈｅ ｓａｍｅ ｓｉｚｅ ｒａｎｇｅ ａｓ Ｐ. ｖｉｔｔａｔａ.
８１４ 植 物 科 学 学 报 第 ３２卷
ｐａｉｒｓ ｏｆ ｐｒｉｍｅｒｓ ｗｅｒｅ ｎｏｔ ｐａｒｔｉｃｕｌａｒｌｙ ｐｅｒｆｅｃｔ.
Ｉｎ ｔｈｅ ｐｒｅｓｅｎｔ ｓｔｕｄｙꎬ ｔｈｅ ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ
ｌｉｂｒａｒｙ ｅｎｒｉｃｈｅｄ ｆｏｒ (ＡＧ)ｎ / (ＡＣ)ｎ ｍｉｃｒｏｓａｔｅｌｌｉｔｅ
ｒｅｐｅａｔ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ａｎｄ ｐｒｉｍｅｒ ｅｘｐｌｏｉｔａｔｉｏｎ ｏｆ Ｐｔｅ￣
ｒｉｓ ｖｉｔｔａｔａ ｗａｓ ｂａｓｅｄ ｏｎ ａ ｍｏｄｉｆｉｅｄ ＦＩＡＳＣＯ ｐｒｏ￣
ｔｏｃｏｌ. Ｏｕｒ ｄａｔａ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｓ
ｗｅｒｅ ｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌꎬ ａｎｄ ｂｏｔｈ ｅｎｒｉｃｈｍｅｎｔ ｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙ
ａｎｄ ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ ｗｅｒｅ ｉｍｐｒｏｖｅｄ.
Ｔｈｅ ＧＴＴＴ “ｐｉｇ￣ｔａｉｌ” ｗａｓ ｆｉｒｓｔ ｕｓｅｄ ｉｎ ｍｉｃｒｏ￣
ｓａｔｅｌｌｉｔｅ ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ｂｙ Ｇｌｅｎｎ ａｎｄ Ｓｃｈａｂｌｅ[１２] ｔｏ ｅｎ￣
ｓｕｒｅ ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ Ａ￣ｔａｉｌｉｎｇ ｏｆ ｅａｃｈ ＰＣＲ ｐｒｏｄｕｃｔꎬ
ｗｈｉｃｈ ｗｏｕｌｄ ｙｉｅｌｄ ｇｏｏｄ ｒｅｓｕｌｔｓ ｆｒｏｍ ＴＡ ｃｌｏｎｉｎｇ.
Ｗｅ ａｌｓｏ ｆｏｕｎｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｐｉｇ￣ｔａｉｌ ＣｖｉＱＩ￣Ｎ ｐｒｉｍｅｒ
ｃｏｕｌｄ ｉｍｐｒｏｖｅ ｔｈｅ ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙ ｃｏｍ￣
ｐａｒｅｄ ｔｏ ｔｈａｔ ｏｆ ｎｏｒｍａｌ ＣｖｉＱＩ￣Ｎ ｐｒｉｍｅｒ (５′￣ＧＡＴ￣
ＧＡＧＴＣＣＴＧＡＣＴＡＣＮ￣３′) (ｄａｔａ ｎｏｔ ｓｈｏｗｎ) . Ｗｅ
ａｌｓｏ ｆｏｕｎｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｓｔｒｉｎｇｅｎｔ ｅｌｕｅｎｔ ０ ５ × ＳＳＣ ＋
０１％ ＳＤＳ ｕｓｅｄ ｔｏ ｒｅｍｏｖｅ ｎｏｎｓｐｅｃｉｆｉｃａｌｌｙ ｂｏｕｎｄ
ａｎｄ ｕｎｂｏｕｎｄ ＤＮＡ ｐｅｒｆｏｒｍｅｄ ｂｅｔｔｅｒ ｔｈａｎ ｔｈａｔ ｏｆ
ｓｔｒｉｎｇｅｎｔ ｅｌｕｅｎｔ ０ ２ × ＳＳＣ ＋ ０１％ ＳＤＳꎬ ａｎｄ ｔｈｅ
ｌａｓｔ ｓｔｒｉｎｇｅｎｔ ｗａｓｈｉｎｇ ｉｎｃｕｂａｔｅｄ ａｔ ４５℃ꎬ ｗｈｉｃｈ
ｗａｓ ａｂｏｕｔ １０℃ ｌｏｗｅｒ ｔｈａｎ ｔｈｅ ｍｅｌｔｉｎｇ ｔｅｍｐｅｒａ￣
ｔｕｒｅ ｏｆ ｔｈｅ ｐｒｏｂｅｓꎬ ｗａｓ ａｎ ａｐｐｒｏｐｒｉａｔｅ ｓｔｒｉｎｇｅｎｔ
ｗａｓｈｉｎｇ ｓｔｒｅｎｇｔｈ ｔｏ ｇｅｔ ｔｈｅ ｂｅｓｔ ｅｌｕｔｉｏｎ ｅｆｆｉｃｉｅｎ￣
ｃｙ.
Ｔｈｅ ｈｉｇｈ ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅ (６０％) ｏｆ ｐｕｒｅ ｒｅｐｅａ￣
ｔｉｎｇ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｉｎｄｉｃａｔｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｌｏｃｉ ｗｅ ｅｎ￣
ｒｉｃｈｅｄ ｗｅｒｅ ｍｏｒｅ ｉｄｅａｌ ｔｈａｎ ｔｈｏｓｅ ｅｎｒｉｃｈｅｄ ｂｙ
Ｙａｎｇ[２１] ａｎｄ ａｌｓｏ ｄｅｍｏｎｓｔｒａｔｅｄ ｔｈａｔ ｏｕｒ ｍｏｄｉｆｉ￣
ｃａｔｉｏｎｓ ｗｏｒｋｅｄ ｗｅｌｌ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ＦＩＡＳＣＯ ｐｒｏｔｏｃｏｌ.
Ｔｈｅ ＡＧ ｒｅｐｅａｔｉｎｇ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｗａｓ ｍｕｃｈ ｍｏｒｅ ａ￣
ｂｕｎｄａｎｔ ｉｎ ｔｈｅ Ｃｈｉｎｅｓｅ ｂｒａｋｅ ｆｅｒｎ ｇｅｎｏｍｅ ｔｈａｎ
ｔｈａｔ ｏｆ ＡＣꎬ ｗｈｉｃｈ ｉｓ ｃｏｎｓｉｓｔｅｎｔ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｆｉｎｄｉｎｇｓ
ｏｆ Ｙａｎｇ[２１] .
Ｈｏｗｅｖｅｒꎬ ｄｕｒｉｎｇ ｔｈｅ ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅｓｅ ＳＳＲ
ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｓꎬ ｗｅ ｆｏｕｎｄ ｔｈａｔ ａｌｌ ｌｏｃｉ ｄｅｖｉａｔｅｄ
ｆｒｏｍ ｔｈｅ Ｈａｒｄｙ￣Ｗｅｉｎｂｅｒｇ ｅｑｕｉｌｉｂｒｉｕｍ (Ｐ < ０ ０５).
Ａｌｔｈｏｕｇｈ ｌｉｍｉｔｅｄ ｓａｍｐｌｅ ｓｉｚｅꎬ ｎｕｌｌ ａｌｌｅｌｅｓ ａｎｄ
ｇｅｏｇｒａｐｈｉｃａｌ ｓｉｔｅｓ ｏｆ ｔｈｅ ｓａｍｐｌｅｓ ｍｉｇｈｔ ｒｅｓｕｌｔ ｉｎ
ｔｈｅ ｄｅｖｉａｔｉｏｎꎬ ｔｈｅ ｍｏｒｅ ｒｅａｓｏｎａｂｌｅ ｅｘｐｌａｎａｔｉｏｎ
ｆｏｒ ｔｈｅ ｄｅｖｉａｔｉｏｎ ｉｓ ｔｈａｔ ｍｏｓｔ ｆｅｒｎｓꎬ ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ Ｃｈｉ￣
ｎｅｓｅ ｂｒａｋｅ ｆｅｒｎꎬ ｒｅｐｒｏｄｕｃｅ ｂｙ ｓｅｌｆｉｎｇ. Ｔｈｉｓ ｉｓ ａｌ￣
ｓｏ ｐｒｏｖｅｄ ｂｙ ｔｈｅ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔｓ ｆｏｒ ｈｅｔｅｒｏ￣
ｚｙｇｏｔｅ ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ (Ｆｉｓ)ꎬ ｗｈｉｃｈ ｉｌｌｕｓｔｒａｔｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ
ｌｏｃｉ ｗｅｒｅ ｄｏｍｉｎａｎｔｌｙ ｈｏｍｏｚｙｇｏｕｓ. Ｗｅ ａｌｓｏ ｔｅｓｔｅｄ
ｔｈｅ ｄｅｇｒｅｅ ｏｆ ｇｅｎｅｔｉｃ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｂｅｔｗｅｅｎ Ｅｎ￣
ｓｈｉ ａｎｄ Ｌｕｓｈａｎ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ ｂｙ Ｆｓｔꎬ ｗｈｉｃｈ ｒａｎｇｅｄ
ｆｒｏｍ ０００４０ ｔｏ ０４７２９. Ｔｈｉｓ ｉｎｄｉｃａｔｅｄ ｔｈａｔ ｎｏ
ｇｅｎｅ ｆｌｏｗ ｂａｒｒｉｅｒ ｅｘｉｓｔｅｄ ｂｅｔｗｅｅｎ ｔｈｅ ｔｗｏ ｐｏｐｕ￣
ｌａｔｉｏｎｓ.
Ｔｈｅ ｈｉｇｈｌｙ ｃｏｎｓｅｒｖｅｄ ｆｌａｎｋｉｎｇ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ
ｔｈｅ ＳＳＲ ｅｎｓｕｒｅｄ ｔｈｅ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ｕｔｉｌｉｔｙ ｏｆ ｔｈｅｓｅ ｍｉｃ￣
ｒｏｓａｔｅｌｌｉｔｅ ｍａｒｋｅｒｓ ｄｅｖｅｌｏｐｅｄ ｆｏｒ Ｃｈｉｎｅｓｅ ｂｒａｋｅ
ｆｅｒｎ ｉｎ Ｐ. ｍｕｌｔｉｆｉｄａ Ｐｏｉｒ.ꎬ ｅｘｃｅｐｔ ｔｈａｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ
ｓｐｅｃｉｅｓ ｈａｄ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ. Ｓｉｘ
ｏｆ ｔｈｅ ｎｉｎｅ ｌｏｃｉ ａｍｐｌｉｆｉｅｄ ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ ｂｒａｋｅ ｆｅｒｎ ａｌ￣
ｓｏ ａｍｐｌｉｆｉｅｄ ｓｉｍｉｌａｒ ｂａｎｄ(ｓ) ｉｎ Ｐ. ｍｕｌｔｉｆｉｄａꎬ ｒｅ￣
ｖｅａｌｉｎｇ ｔｈａｔ ｔｈｅｓｅ ｌｏｃｉ ｃａｎ ｆａｃｉｌｉｔａｔｅ ｅｖｏｌｕｔｉｏｎａｒｙ
ａｎｄ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ ｇｅｎｅｔｉｃ ｓｔｕｄｉｅｓ ａｓ ｗｅｌｌ ａｓ ｂｒｅｅ￣
ｄｉｎｇ ａｎｄ ｃｕｌｔｉｖａｒ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｉｎ Ｐ. ｍｕｌｔｉｆｉｄａ.
Ｔｈｅ ｎｅｗ ｍｉｃｒｏｓａｔｅｌｌｉｔｅ ｍａｒｋｅｒｓ ｄｅｖｅｌｏｐｅｄ ｉｎ
ｔｈｉｓ ｓｔｕｄｙ ｗｉｌｌ ｂｅ ｕｓｅｆｕｌ ｆｏｒ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｎｇ ｇｅｎｅｔｉｃ
ｄｉｖｅｒｓｉｔｙꎬ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅꎬ ａｎｄ ｍａｔｉｎｇ ｐａｔ￣
ｔｅｒｎｓꎬ ｆｏｒ ｉｄｅｎｔｉｆｙｉｎｇ ｖａｒｉｅｔｉｅｓ ａｎｄ ｅｃｏｔｙｐｅｓꎬ ａｎｄ
ｆｏｒ ｈｙｂｒｉｄ ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ ｉｎ ｂｒｅｅｄｉｎｇ ｐｒｏｇｒａｍ ｏｆ Ｃｈｉ￣
ｎｅｓｅ ｂｒａｋｅ ｆｅｒｎ.
Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅｓ:
[ １ ] Ｂｒｏｏｋｓ ＲＲ. Ｐｌａｎｔｓ ｔｈａｔ Ｈｙｐｅｒａｃｃｕｍｕｌａｔｅ Ｈｅａｖｙ
Ｍｅｔａｌｓ[Ｍ] . Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ: Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ Ｕｎｉｖ. Ｐｒｅｓｓꎬ
１９９８.
[ ２ ] Ｍａ ＬＱꎬ Ｋｏｍａｒ ＫＭꎬ Ｔｕ Ｃꎬ Ｚｈａｎｇ Ｗꎬ Ｃａｉ Ｙꎬ Ｋｅｎ￣
ｎｅｌｌｅｙ ＥＤ. Ａ ｆｅｒｎ ｔｈａｔ ｈｙｐｅｒａｃｃｕｍｕｌａｔｅｓ ａｒｓｅｎｉｃ
[Ｊ] . Ｎａｔｕｒｅꎬ ２００１ꎬ ４０９(６８２０): ５７９－５７９.
[ ３ ] Ｃｈｅｎ ＴＢꎬ Ｗｅｉ ＣＹꎬ Ｈｕａｎｇ ＺＣꎬ Ｈｕａｎｇ ＱＦꎬ ＬＵ
ＱＧꎬ Ｆａｎ Ｚ. Ａｒｓｅｎｉｃ ｈｙｐｅｒａｃｃｕｍｕｌａｔｏｒ Ｐｔｅｒｉｓ ｖｉｔｔａ￣
ｔａ Ｌ. ａｎｄ ｉｔｓ ａｒｓｅｎｉｃ ａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎ[Ｊ] . Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｓｃｉ
Ｂｕｌｌꎬ ２００２ꎬ ４７(１１): ９０２－９０５.
[ ４ ] Ｋｅｒｔｕｌｉｓ￣Ｔａｒｔａｒ ＧＭꎬ Ｍａ ＬＱꎬ Ｔｕ Ｃꎬ Ｃｈｉｒｅｎｊｅ Ｔ. Ｐｈｙ￣
ｔｏｒｅｍｅｄｉａｔｉｏｎ ｏｆ ａｎ ａｒｓｅｎｉｃ￣ｃｏｎｔａｍｉｎａｔｅｄ ｓｉｔｅ
ｕｓｉｎｇ Ｐｔｅｒｉｓ ｖｉｔｔａｔａ Ｌ.: Ａ ｔｗｏ￣ｙｅａｒ ｓｔｕｄｙ[Ｊ] . Ｉｎｔ Ｊ
Ｐｈｙｔｏｒｅｍｅｄｉａｔꎬ ２００６ꎬ ８(４): ３１１－ ３２２.
９１４ 第 ４期 李 磊等: 改良 ＦＩＡＳＣＯ方法筛选砷超富集植物蜈蚣草 ＳＳＲ分子标记(英文)
[ ５ ] Ｃａｏ ＸＤꎬ Ｍａ ＬＱꎬ Ｔｕ Ｃ. Ａｎｔｉｏｘｉｄａｔｉｖｅ ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ ｔｏ
ａｒｓｅｎｉｃ ｉｎ ｔｈｅ ａｒｓｅｎｉｃ￣ｈｙｐｅｒａｃｃｕｍｕｌａｔｏｒ Ｃｈｉｎｅｓｅ
ｂｒａｋｅ ｆｅｒｎ (Ｐｔｅｒｉｓ ｖｉｔｔａｔａ Ｌ.) [ Ｊ] . Ｅｎｖｉｒｏｎ Ｐｏｌｌｕｔꎬ
２００４ꎬ １２８(３): ３１７－３２５.
[ ６ ] Ｌｏｍｂｉ Ｅꎬ Ｚｈａｏ ＦＪꎬ Ｆｕｈｒｍａｎｎ Ｍꎬ Ｍａ ＬＱꎬ
ＭｃＧｒａｔｈ ＳＰ. Ａｒｓｅｎｉｃ ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ ａｎｄ ｓｐｅｃｉａｔｉｏｎ ｉｎ
ｔｈｅ ｆｒｏｎｄｓ ｏｆ ｔｈｅ ｈｙｐｅｒａｃｃｕｍｕｌａｔｏｒ Ｐｔｅｒｉｓ ｖｉｔｔａｔａ
[Ｊ] . Ｎｅｗ Ｐｈｙｔｏｌꎬ ２００２ꎬ １５６(２): １９５－２０３.
[ ７ ] Ｗａｎｇ ＪＲꎬ Ｚｈａｏ ＦＪꎬ Ｍｅｈａｒｇ ＡＡꎬ Ｒａａｂ Ａꎬ Ｆｅｌｄ￣
ｍａｎｎ Ｊꎬ ＭｃＧｒａｔｈ ＳＰ. Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ ｏｆ ａｒｓｅｎｉｃ ｈｙ￣
ｐｅｒａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎ ｉｎ Ｐｔｅｒｉｓ ｖｉｔｔａｔａ. Ｕｐｔａｋｅ ｋｉｎｅｔｉｃｓꎬ
ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ ｗｉｔｈ ｐｈｏｓｐｈａｔｅꎬ ａｎｄ ａｒｓｅｎｉｃ ｓｐｅｃｉａ￣
ｔｉｏｎ [ Ｊ] . Ｐｌａｎｔ Ｐｈｙｓｉｏｌꎬ ２００２ꎬ １３０ ( ３): １５５２ －
１５６１.
[ ８ ] Ｃａｉ ＢＳꎬ Ｚｈａｎｇ ＧＰꎬ Ｃｈｅｎ ＴＢ. Ｇｅｎｏｔｙｐｉｃ ｄｉｆｆｅ￣
ｒｅｎｃｅ ｉｎ ｇｒｏｗｔｈ ａｎｄ ａｓ ａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎ ｉｎ Ｐｔｅｒｉｓ ｖｉｔｔａ￣
ｔａ[Ｊ] . Ｊ Ｚｈｅｊｉａｎｇ Ｕｎｉｖ Ｓｃｉꎬ ２００７ꎬ ３３(５): ４７３－
４７８.
[ ９ ] Ｚａｎｅ Ｌꎬ Ｂａｒｇｅｌｌｏｎｉ Ｌꎬ Ｐａｔａｒｎｅｌｌｏ Ｔ. Ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ ｆｏｒ
ｍｉｃｒｏｓａｔｅｌｌｉｔｅ ｉｓｏｌａｔｉｏｎ: ａ ｒｅｖｉｅｗ [ Ｊ] . Ｍｏｌ Ｅｃｏｌꎬ
２００２ꎬ １１(１): １－１６.
[１０] Ｄｕ ＷＢꎬ Ｌｉ ＺＡꎬ Ｚｏｕ Ｂꎬ Ｐｅｎｇ Ｓ. Ｐｔｅｒｉｓ ｍｕｌｔｉｆｉｄａ
Ｐｏｉｒ.ꎬ ａ ｎｅｗ ａｒｓｅｎｉｃ ｈｙｐｅｒａｃｃｕｍｕｌａｔｏｒ: ｃｈａｒａｃｔｅ￣
ｒｉｓｔｉｃｓ ａｎｄ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ[Ｊ] . Ｉｎｔ Ｊ Ｅｎｖｉｒｏｎ Ｐｏｌｌｕｔꎬ ２００５ꎬ
２３(４): ３８８－３９６.
[１１] Ｓａｇｈａｉｍａｒｏｏｆ ＭＡꎬ Ｓｏｌｉｍａｎ ＫＭꎬ Ｊｏｒｇｅｎｓｅｎ ＲＡꎬ
Ａｌｌａｒｄ ＲＷ. Ｒｉｂｏｓｏｍａｌ ＤＮＡ ｓｐａｃｅｒ￣ｌｅｎｇｔｈ ｐｏｌｙｍｏｒ￣
ｐｈｉｓｍｓ ｉｎ ｂａｒｌｅｙ￣ｍｅｎｄｅｌｉａｎ ｉｎｈｅｒｉｔａｎｃｅꎬ ｃｈｒｏｍｏ￣
ｓｏｍａｌ ｌｏｃａｔｉｏｎꎬ ａｎｄ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ￣ｄｙｎａｍｉｃｓ [ Ｊ] . Ｐ
Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡꎬ １９８４ꎬ ８１(２４): ８０１４－８０１８.
[１２] Ｇｌｅｎｎ ＴＣꎬ Ｓｃｈａｂｌｅ ＮＡ. Ｉｓｏｌａｔｉｎｇ ｍｉｃｒｏｓａｔｅｌｌｉｔｅ
ＤＮＡ ｌｏｃｉ[Ｊ] . Ｍｅｔｈｏｄ Ｅｎｚｙｍｏｌꎬ ２００５ꎬ ３９５: ２０２－
２２２.
[１３] Ｗａｎｇ ＸＷꎬ Ｔｒｉｇｉａｎｏ ＲＮꎬ Ｗｉｎｄｈａｍ ＭＴꎬ ＤｅＶｒｉｅｓ
ＲＥꎬ Ｓｃｈｅｆｆｌｅｒ ＢＥꎬ Ｒｉｎｅｈａｒｔ ＴＡꎬ Ｓｐｉｅｒｓ ＪＭ. Ａ ｓｉｍ￣
ｐｌｅ ＰＣＲ ｐｒｏｃｅｄｕｒｅ ｆｏｒ ｄｉｓｃｏｖｅｒｉｎｇ ｍｉｃｒｏｓａｔｅｌｌｉｔｅｓ
ｆｒｏｍ ｓｍａｌｌ ｉｎｓｅｒｔ ｌｉｂｒａｒｉｅｓ [ Ｊ] . Ｍｏｌ Ｅｃｏｌ Ｎｏｔｅｓꎬ
２００７ꎬ ７(４): ５５８－５６１.
[１４] Ｌｉ Ｑꎬ Ｗａｎ Ｊ. ＳＳＲＨｕｎｔｅｒ: ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ａ ｌｏｃａｌ
ｓｅａｒｃｈｉｎｇ ｓｏｆｔｗａｒｅ ｆｏｒ ＳＳＲ ｓｉｔｅｓ [ Ｊ] . Ｈｅｒｅｄｉｔａｓ
(Ｂｅｉｊｉｎｇ)ꎬ ２００５ꎬ ２７(５): ８０８－８１０.
[１５] Ｏｏｓｔｅｒｈｏｕｔ ＣＶꎬ Ｈｕｔｃｈｉｎｓｏｎ ＷＦꎬ Ｗｉｌｌｓ ＤＰＭꎬ Ｓｈｉｐ￣
ｌｅｙ Ｐ. ＭＩＣＲＯ￣ＣＨＥＣＫＥＲ: ｓｏｆｔｗａｒｅ ｆｏｒ ｉｄｅｎｔｉｆｙｉｎｇ
ａｎｄ ｃｏｒｒｅｃｔｉｎｇ ｇｅｎｏｔｙｐｉｎｇ ｅｒｒｏｒｓ ｉｎ ｍｉｃｒｏｓａｔｅｌｌｉｔｅ
ｄａｔａ[Ｊ] . Ｍｏｌ Ｅｃｏｌ Ｎｏｔｅｓꎬ ２００４ꎬ ４(３): ５３５－５３８.
[１６] Ｙｅｈ ＦＣꎬ Ｙａｎｇ ＲＣꎬ Ｂｏｙｌｅ Ｔ. ＰＯＰＧＥＮＥꎬ ｖｅｒｓｉｏｎ
１ ３１. Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ Ｗｉｎｄｏｗ￣ｂａｓｅｄ ｆｒｅｅｗａｒｅ ｆｏｒ ｐｏｐｕ￣
ｌａｔｉｏｎ ｇｅｎｅｔｉｃ ａｎａｌｙｓｉｓ. Ｑｕｉｃｋ Ｕｓｅｒ Ｇｕｉｄｅ[ＣＰ] . Ａｌ￣
ｂｅｒｔａꎬ Ｃａｎａｄａꎬ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ａｌｂｅｒｔａꎬ １９９９.
[１７] Ｗｅｂｅｒ ＪＬ. Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｖｅｎｅｓｓ ｏｆ ｈｕｍａｎ (ｄＣ￣ｄＡ) ｎ.
(ｄＧ￣ｄＴ) ｎ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｓ[Ｊ] . Ｇｅｎｏｍｉｃｓꎬ １９９０ꎬ
７(４): ５２４－５３０.
[１８] Ｗｅｉ ＣＹꎬ Ｚｈｅｎｇ Ｈꎬ Ｓｕｎ Ｘꎬ Ｗａｎｇ Ｃ. Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓ￣
ｔｉｃｓ ｏｆ ａｒｓｅｎｉｃ ｅｎｒｉｃｈｍｅｎｔ ｂｙ ｐｌａｎｔｓ ｏｆ Ｐｔｅｒｉｓ ｖｉｔｔａｔａ
ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｉｎ ｓｏｕｒｃｅ ａｎｄ ｔｈｅｉｒ ｐｈｙｔｏｒｅｍｅｄｉａｔｉｏｎ ｅｆｆｉ￣
ｃｉｅｎｃｙ[Ｊ] . Ｓｏｉｌｓꎬ ２００８(３): ４７４－４７８.
[１９] Ｚｈａｎｇ ＪＣꎬ Ｓｏｎｇ ＹＨꎬ Ｚｈｕ Ｙꎬ Ｚｈａｎｇ ＨＹꎬ Ｚｈｏｎｇ Ｙ.
ＡＦＬＰ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｇｅｎｅｔｉｃ ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ ａｎｄ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ
ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｏｆ Ｈｕｐｅｒｚｉａ ｓｅｒｒａｔａ (Ｔｈｕｎｂ. ｅｘ Ｍｕｒｒａｙ)
Ｔｒｅｖ. ｖａｒ. ｌｏｎｇｉｐｅｔｉｏｌａｔａ ( Ｓｐｒｉｎｇ) Ｈ. Ｍ. Ｃｈａｎｇ
[Ｊ] . Ｃｈｉｎ Ｊ Ａｐｐｌ Ｅｎｖｉｒｏｎ Ｂｉｏｌꎬ ２０１１ꎬ １７(１): １８－
２３.
[２０] Ｚｈｏｕ ＨＧꎬ Ｘｉｅ ＹＬꎬ Ｌｉ Ｈ. Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｇｅｎｅｔｉｃ ｄｉｖｅｒ￣
ｓｉｔｙ ｏｎ Ｐｔｅｒｉｓ ｖｉｔｔａｔａ Ｌ. ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ ｆｒｏｍ Ｇｕａｎｇｘｉ
ｌｉｍｅｓｔｏｎｅ ａｒｅａ[Ｊ] . Ｇｕｉｈａｉꎬ ２００２ꎬ ２２ (１): ６７－７１.
[２１] Ｙａｎｇ Ｂꎬ Ｈｕ Ｍꎬ Ｚｈｏｕ Ｍꎬ Ｇｕａｎ ＪＰꎬ Ｚｈａｎｇ Ｊꎬ Ｌａｎ
ＣＹꎬ Ｌｉａｏ Ｂ. Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ｅｉｇｈｔ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃ ｍｉ￣
ｃｒｏｓａｔｅｌｌｉｔｅ ｍａｒｋｅｒｓ ｂｙ ＦＩＡＳＣＯ￣ｂａｓｅｄ ｓｔｒａｔｅｇｙ ｆｏｒ
ａ ａｒｓｅｎｉｃ￣ｈｙｐｅｒａｃｃｕｍｕｌａｔｏｒ Ｃｈｉｎｅｓｅ ｂｒａｋｅ ｆｅｒｎ
[Ｊ] . Ｃｏｎｓｅｒｖ Ｇｅｎｅｔ Ｒｅｓｏｕｒꎬ ２０１０ꎬ ２(１): ６５－６７.
(责任编辑: 张 平)
０２４ 植 物 科 学 学 报 第 ３２卷