全 文 ：南天竹微卫星标记开发及特性分析∗
呼慧丽ꎬ 李 波ꎬ 胡 菀ꎬ 孙志霞ꎬ 张志勇ꎬ 范邓妹∗∗
(江西农业大学亚热带生物多样性实验室ꎬ 南昌 ３３００４５)
摘要: 南天竹 (Ｎａｎｄｉｎａ ｄｏｍｅｓｔｉｃａ) 是一种具有较高观赏价值的常绿灌木ꎮ 本研究从南天竹基因组中开发
和筛选出 １０个微卫星位点ꎬ 能在该物种中进行稳定 ＰＣＲ扩增且具一定的多态性ꎮ 采用 ４个南天竹群体 ２４
个个体进行检测发现ꎬ 每个位点的等位基因数为 ２~ ６ꎬ 期望杂合度和表观杂合度分别为 ０ １５３~ ０ ７７８ 和
０~１ꎮ 本研究结果为后续对南天竹遗传多样性的研究打下了基础ꎮ 另外ꎬ 这 １０ 个位点在小檗科 ４ 个其他
物种中也有一定的通用性ꎮ
关键词: 南天竹ꎻ 微卫星ꎻ 遗传多样性
中图分类号: Ｑ ７８５ꎬ Ｑ １６ 文献标志码: Ａ 文章编号: ２０９５－０８４５(２０１５)０２－１４１－０４
Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ａｎｄ Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ Ｍｉｃｒｏｓａｔｅｌｌｉｔｅ Ｌｏｃｉ
ｆｏｒ Ｈｅａｖｅｎｌｙ Ｂａｍｂｏｏ (Ｎａｎｄｉｎａ ｄｏｍｅｓｔｉｃａ)∗
ＨＵ Ｈｕｉ￣ｌｉꎬ ＬＩ Ｂｏꎬ ＨＵ Ｗａｎꎬ ＳＵＮ Ｚｈｉ￣ｘｉａꎬ ＺＨＡＮＧ Ｚｈｉ￣ｙｏｎｇꎬ ＦＡＮ Ｄｅｎｇ￣ｍｅｉ∗∗
(Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ Ｓｕｂｔｒｏｐｉｃａｌ Ｂｉｏｄｉｖｅｒｓｉｔｙꎬ Ｊｉａｎｇｘｉ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙꎬ Ｎａｎｃｈａｎｇ ３３００４５ꎬ Ｃｈｉｎａ)
Ａｂｓｔｒａｃｔ: Ｗｅ ｄｅｖｅｌｏｐｅｄ ａｎｄ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚｅｄ ａ ｔｏｔａｌ ｏｆ １０ ｎｏｖｅｌ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃ ｍｉｃｒｏｓａｔｅｌｌｉｔｅ ｌｏｃｉ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｇｅｎｏｍｅ ｏｆ ａｎ
ｏｒｎａｍｅｎｔａｌ ｓｈｒｕｂꎬ Ｎａｎｄｉｎａ ｄｏｍｅｓｔｉｃａ. Ｔｈｅ ｎｕｍｂｅｒ ｏｆ ａｌｌｅｌｅｓ ｐｅｒ ｌｏｃｕｓ ｉｎ ２４ ｉｎｄｉｖｉｄｕａｌｓ ｆｒｏｍ ｆｏｕｒ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ ｖａｒｉｅｄ
ｆｒｏｍ ２ ｔｏ ６. Ｔｈｅ ｅｘｐｅｃｔｅｄ ａｎｄ ｏｂｓｅｒｖｅｄ ｈｅｔｅｒｏｚｙｇｏｓｉｔｙ ｒａｎｇｅｄ ｆｒｏｍ ０ １５３ ｔｏ ０ ７７８ ａｎｄ ｆｒｏｍ ０ ｔｏ １ꎬ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ.
Ｔｈｅｓｅ ｍａｒｋｅｒｓ ｗｉｌｌ ｐｒｏｖｉｄｅ ｔｏｏｌｓ ｆｏｒ ｆｕｔｕｒｅ ｓｔｕｄｉｅｓ ｏｎ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ ｇｅｎｅｔｉｃ ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｎ ｄｏｍｅｓｔｉｃａ. Ａｄｄｉｔｉｏｎａｌｌｙꎬ ｍｏｓｔ
ｏｆ ｏｕｒ ｎｅｗ ｍａｒｋｅｒｓ ｃｏｕｌｄ ｙｉｅｌｄ ｔｈｅ ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｐｒｏｄｕｃｔｓ ｉｎ ｆｏｕｒ ｏｔｈｅｒ Ｂｅｒｂｅｒｉｄａｃｅａｅ ｓｐｅｃｉｅｓ.
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ: Ｎａｎｄｉｎａ ｄｏｍｅｓｔｉｃａꎻ Ｍｉｃｒｏｓａｔｅｌｌｉｔｅ ｍａｒｋｅｒꎻ Ｇｅｎｅｔｉｃ ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ
Ｎａｎｄｉｎａ ｉｓ ａ ｍｏｎｏｔｙｐｉｃ ｇｅｎｕｓ ｉｎ ｔｈｅ Ｂａｒｂｅｒｒｙ
ｆａｍｉｌｙꎬ Ｂｅｒｂｅｒｉｄａｃｅａｅ. Ｔｈｅ ｏｎｌｙ ｓｐｅｃｉｅｓ Ｎａｎｄｉｎａ
ｄｏｍｅｓｔｉｃａ Ｔｈｕｎｂ. (Ｈｅａｖｅｎｌｙ ｂａｍｂｏｏ) ｉｓ ａ ｓｕｃｋｅ￣
ｒｉｎｇ ｓｈｒｕｂ ｏｃｃｕｒｒｉｎｇ ｉｎ ｆｏｒｅｓｔ ｕｎｄｅｒｓｔｏｒｉｅｓ ｏｆ ｅａｓｔｅｒｎ
Ａｓｉａ ａｎｄ Ｉｎｄｉａ (Ｋｎｏｘ ａｎｄ Ｗｉｌｓｏｎꎬ ２００６ꎻ Ｙｉｎｇ ｅｔ
ａｌ.ꎬ ２０１１). Ｉｔ ｉｓ ｗｉｄｅｌｙ ｇｒｏｗｎ ｉｎ ｇａｒｄｅｎｓ ａｓ ａ ｂｅａｕ￣
ｔｉｆｕｌ ｏｒｎａｍｅｎｔａｌ ｐｌａｎｔ ｂｅｃａｕｓｅ ｉｔｓ ｙｏｕｎｇ ｌｅａｖｅｓ ｉｎ
ｓｐｒｉｎｇ ａｒｅ ｂｒｉｇｈｔｌｙ ｃｏｌｏｒｅｄ ｐｉｎｋ ｔｏ ｒｅｄ ｂｅｆｏｒｅ ｔｕｒｎｉｎｇ
ｇｒｅｅｎꎬ ａｎｄ ｏｌｄ ｌｅａｖｅｓ ｔｕｒｎ ｒｅｄ ｏｒ ｐｕｒｐｌｅ ｂｅｆｏｒｅ ｆａｌｌ￣
ｉｎｇ. Ｈｏｗｅｖｅｒꎬ ｉｎ ｔｈｅ ｓｏｕｔｈｅａｓｔｅｒｎ Ｕ Ｓ Ａ.ꎬ ｔｈｉｓ ｓｐｅ￣
ｃｉｅｓ ｉｓ ｃｏｎｓｉｄｅｒｅｄ ａｓ ａ ｐｏｔｅｎｔｉａｌｌｙ ｉｎｖａｓｉｖｅ ｓｐｅｃｉｅｓ
ｓｉｎｃｅ ｉｔ ｈａｓ ｅｓｃａｐｅｄ ｃｕｌｔｉｖａｔｉｏｎ ｉｎ ｎｉｎｅ ｓｔａｔｅｓ (Ｋｎｏｘ
ａｎｄ Ｗｉｌｓｏｎꎬ ２００６). Ｈｉｓｔｏｒｉｃａｌ ａｎｄ ｏｂｓｅｒｖａｔｉｏｎａｌ ｄａ￣
ｔａ ｆｏｒ ｉｎｖａｓｉｖｅ ｓｐｅｃｉｅｓ ａｒｅ ｏｆｔｅｎ ｓｐａｒｓｅ ａｎｄ ｉｎｃｏｍ￣
ｐｌｅｔｅꎬ ｓｏ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｇｅｎｅｔｉｃ ｍａｒｋｅｒｓ ａｒｅ ｉｎｃｒｅａｓｉｎｇｌｙ
ｕｓｅｄ ａｎｄ ｈａｖｅ ｐｒｏｖｅｄ ｔｏ ｂｅ ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ ｔｏｏｌｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ｉｎ￣
ｆｅｒｅｎｃｅ ｏｆ ｉｎｖａｓｉｏｎ ｏｒｉｇｉｎｓ ａｎｄ ｒｏｕｔｅｓ ( Ｅｓｔｏｕｐ ａｎｄ
Ｇｕｉｌｌｅｍａｕｄꎬ ２０１０). Ｈｅｒｅ ｗｅ ｒｅｐｏｒｔ １０ ｎｏｖｅｌ ｍｉｃｒｏ￣
ｓａｔｅｌｌｉｔｅ ｌｏｃｉ ｉｓｏｌａｔｅｄ ａｎｄ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚｅｄ ｆｒｏｍ Ｎ ｄｏｍ￣
ｅｓｔｉｃａ ｔｈａｔ ｃａｎ ｂｅ ｕｓｅｆｕｌ ｉｎ ｆｕｔｕｒｅ ｓｔｕｄｉｅｓ ｏｎ ｔｈｅ ｇｅ￣
植 物 分 类 与 资 源 学 报 ２０１５ꎬ ３７ (２): １４１~１４４
Ｐｌａｎｔ Ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ ａｎｄ Ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ ＤＯＩ: １０.７６７７ / ｙｎｚｗｙｊ２０１５１４０６３
∗
∗∗
Ｆｕｎｄｉｎｇ: Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｎａｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ ｏｆ Ｃｈｉｎａ (ｇｒａｎｔ ｎｏｓ. ３１１６００４３ ａｎｄ ３１１６００８２) ａｎｄ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｓｕｐｐｏｒｔ
Ｐｒｏｇｒａｍ (２０１２ＢＡＣ１１Ｂ０２)
Ａｕｔｈｏｒ ｆｏｒ ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｅｎｃｅꎻ Ｅ￣ｍａｉｌ: ｄｍｆ６２５＠１６３ ｃｏｍ
Ｒｅｃｅｉｖｅｄ ｄａｔｅ: ２０１４－０４－１０ꎬ Ａｃｃｅｐｔｅｄ ｄａｔｅ: ２０１４－０７－２０
作者简介: 呼慧丽 (１９８８－) 女ꎬ 在读硕士研究生ꎬ 主要从事保护遗传学研究ꎮ
ｎｅｔｉｃ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓ ｂｅｔｗｅｅｎ ｎａｔｉｖｅ ａｎｄ ｉｎｖａｓｉｖｅ ｐｏｐｕｌａ￣
ｔｉｏｎｓꎬ ａｓ ｗｅｌｌ ａｓ ｐｈｙｌｏｇｅｏｇｒａｐｈｉｃ ａｎａｌｙｓｅｓ ａｎｄ ｃｕｌｔｉ￣
ｖａｒ ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ.
１ Ｍｅｔｈｏｄ ａｎｄ ｒｅｓｕｌｔ
Ｗｅ ｓａｍｐｌｅｄ ２４ Ｎ ｄｏｍｅｓｔｉｃａ ｔｒｅｅｓ ｉｎ ｆｏｕｒ ｎａｔｕ￣
ｒａｌ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ ｆｒｏｍ Ｊｉａｎｇｘｉ Ｐｒｏｖｉｎｃｅ ( Ｗｕｎｉｎｇ:
２９ １５９２° Ｎꎬ １１５ ２６０８° Ｅꎻ Ｘｉｎｙｕ: ２７ ５９３１° Ｎꎬ
１１４ ５３７４° Ｅꎻ Ｔａｉｈｅ: ２６ ５１１５° Ｎꎬ １１５ ００１２° Ｅꎻ
Ｙｕｄｕ: ２５ ６３０４°Ｎꎬ １１５ ３４７０°Ｅꎻ ６ ｉｎｄｉｖｉｄｕａｌｓ ｐｅｒ
ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ). Ｖｏｕｃｈｅｒ ｓｐｅｃｉｍｅｎｓ ｆｏｒ ｅａｃｈ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ
ｗｅｒｅ ｄｅｐｏｓｉｔｅｄ ｉｎ ｔｈｅ Ｊｉａｎｇｘｉ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ
ｈｅｒｂａｒｉｕｍ ( ａｃｃｅｓｓｉｏｎ ｎｏｓ. ＪＸＡＵ３５２２９￣ＪＸＡＵ３５２３２).
Ｇｅｎｏｍｉｃ ＤＮＡ ｗａｓ ｅｘｔｒａｃｔｅｄ ｕｓｉｎｇ ｔｈｅ ＤＮｅａｓｙ Ｔｉｓ￣
ｓｕｅ Ｋｉｔ (ＱＩＡＧＥＮ) ａｎｄ ｍｉｃｒｏｓａｔｅｌｌｉｔｅｓ ｗｅｒｅ ｉｓｏｌａｔｅｄ
ｕｓｉｎｇ ｔｈｅ ｆａｓｔ ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ｂｙ ＡＦＬＰ ｏｆ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｃｏｎｔａｉ￣
ｎｉｎｇ ｒｅｐｅａｔｓ (ＦＩＡＳＣＯ) ｐｒｏｔｏｃｏｌ (Ｚａｎｅ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２００２).
Ａ ｓｉｎｇｌｅ ｉｎｄｉｖｉｄｕａｌ ｏｆ Ｗｕｎｉｎｇ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ ｗａｓ ｕｓｅｄ
ｔｏ ｐｒｅｐａｒｅ ｔｈｅ ｍｉｃｒｏｓａｔｅｌｌｉｔｅ￣ｅｎｒｉｃｈｅｄ ｌｉｂｒａｒｙ. Ｔｏｔａｌ
ｇｅｎｏｍｉｃ ＤＮＡ ( ｃａ. ２５０－５００ ｎｇ) ｗａｓ ｄｉｇｅｓｔｅｄ ｗｉｔｈ
２ ５ Ｕ ｏｆ ＭｓｅＩ ｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎ ｅｎｚｙｍｅ ａｎｄ ｔｈｅｎ ｌｉｇａｔｅｄ ｔｏ
ａｎ ＭｓｅＩ ＡＦＬＰ ａｄａｐｔｏｒ (５′－ＴＡＣＴＣＡＧＧＡＣＴＣＡＴ－
３′ / ５′－ＧＡＣＧＡＴＧＡＧＴＣＣＴＧＡＧ－３′) ｕｓｉｎｇ Ｔ４ ＤＮＡ
ｌｉｇａｓｅ (ＭＢＩꎬ Ｆｅｒｍｅｎｔａｓꎬ Ｌｉｔｈｕａｎｉａ). Ａｆｔｅｒ ｌｉｇａｔｉｏｎ
ｔｈｅ ｐｒｏｄｕｃｔｓ ｗｅｒｅ ａｍｐｌｉｆｉｅｄ ｗｉｔｈ ａｄａｐｔｏｒ￣ｓｐｅｃｉｆｉｃ
ｐｒｉｍｅｒｓ ( ５′ － ＧＡＴＧＡＧＴＣＣＴＧＡＧＴＡＡＮ － ３′ / ５′ －
ＴＴＡＣＴＣＡＧＧＡＣＴＣＡＴＣＮ－３′). Ｔｈｅ ｄｉｇｅｓｔｅｄ￣ｌｉｇａｔｅｄ
ｆｒａｇｍｅｎｔｓ ｗｅｒｅ ｄｉｌｕｔｅｄ ｉｎ ａ ｒａｔｉｏ ｏｆ １ ∶ １０ꎬ ａｎｄ ５ μＬ
ｏｆ ｔｈｅｍ ｗｅｒｅ ｕｓｅｄ ｆｏｒ ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｒｅａｃｔｉｏｎｓ ｗｉｔｈ
ａｄａｐｔｏｒ￣ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｐｒｉｍｅｒｓ ( ５′ － ＧＡＴＧＡＧＴＣＣＴＧＡＧ￣
ＴＡＡＮ－３′ / ５′－ＴＴＡＣＴＣＡＧＧＡＣＴＣＡＴＣＮ－３′). Ｔｈｅ
ａｍｐｌｉｆｉｅｄ ＤＮＡ ｆｒａｇｍｅｎｔｓ (２００－８００ ｂｐ) ｗｅｒｅ ｅｎ￣
ｒｉｃｈｅｄ ｂｙ ｍａｇｎｅｔｉｃ ｂｅａｄ ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ａ ５￣ｂｉｏｔｉｎｙ￣
ｌａｔｅｄ ｐｒｏｂｅ [ (ＡＧ) １５ ｏｒ (ＡＣ) １５ꎬ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ].
Ｅｎｒｉｃｈｅｄ ＤＮＡ ｆｒａｇｍｅｎｔｓ ｗｅｒｅ ｒｅａｍｐｌｉｆｉｅｄ ｗｉｔｈ
ＭｓｅＩ￣Ｎ ｐｒｉｍｅｒｓ. Ｔｈｅ ＰＣＲ ｐｒｏｄｕｃｔｓ ｗｅｒｅ ｐｕｒｉｆｉｅｄ ｕ￣
ｓｉｎｇ ＳａｎＰｒｅｐ Ｃｏｌｕｍｎ ＤＮＡ Ｇｅｌ Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ Ｋｉｔ
( Ｓａｎｇｏｎ Ｂｉｏ￣Ｔｅｃｈꎬ Ｓｈａｎｇｈａｉꎬ Ｃｈｉｎａ ). Ｐｕｒｉｆｉｅｄ
ＤＮＡ ｆｒａｇｍｅｎｔｓ ｗｅｒｅ ｌｉｇａｔｅｄ ｉｎｔｏ ｐＧＥＭ￣Ｔ ｖｅｃｔｏｒ
(Ｐｒｏｍｅｇａꎬ Ｍａｄｉｓｏｎꎬ ＷＩꎬ ＵＳＡ)ꎬ ａｎｄ ｔｈｅｎ ｔｒａｎｓ￣
ｆｏｒｍｅｄ ｉｎｔｏ ＤＨ５α ｃｏｍｐｅｔｅｎｔ ｃｅｌｌｓ ( Ｔｉａｎｇｅｎ Ｂｉｏ￣
ｔｅｃｈꎬ Ｂｅｊｉｎｇꎬ Ｃｈｉｎａ). Ｔｈｅ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｃｌｏｎｅｓ ｗｅｒｅ ｔｅｓｔ￣
ｅｄ ｂｙ ＰＣＲ ｕｓｉｎｇ ｖｅｃｔｏｒ ｐｒｉｍｅｒｓ ５′ － ＣＧＡＣＴＣＡＣ￣
ＴＡＴＡＧＧＧＡＧＡＧＣＧＧＣ－３′ / ５′－ＡＡＧＡＡＣＡＴＣＧＡＴ￣
ＴＴＴＣＣＡＴＧＧＣＡＧ－３′ ａｎｄ ｐｒｉｍｅｒｓ (ＡＣ)１０ / (ＡＧ)１０ .
Ａ ｔｏｔａｌ ｏｆ ２４４ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｃｌｏｎｅｓ ｗｉｔｈ ｍｉｃｒｏｓａｔｅｌｌｉｔｅ ｒｅ￣
ｐｅａｔｓ (ＡＧ / ＡＣ) ｗｅｒｅ ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ ａｎｄ ｓｅｑｕｅｎｃｅｄꎬ ｏｆ
ｗｈｉｃｈ １２８ ｕｎｉｑｕｅ ｃｌｏｎｅｓ ｗｉｔｈ ｒｅｌａｔｉｖｅｌｙ ｌｏｎｇ ｆｌａｎｋｉｎｇ
ｒｅｇｉｏｎｓ ｗｅｒｅ ｃｈｏｓｅｎ ｔｏ ｄｅｓｉｇｎ ｐｒｉｍｅｒｓ ｕｓｉｎｇ Ｏｌｉｇｏ
７ ０ ｓｏｆｔｗａｒｅ (Ｒｙｃｈｌｉｋꎬ ２００７).
Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｐｒｏｄｕｃｔｓ ａｎｄ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ ｏｆ ｔｈｅ
１２８ ｎｅｗｌｙ ｄｅｓｉｇｎｅｄ ｐｒｉｍｅｒ ｐａｉｒｓ ｗｅｒｅ ａｓｓｅｓｓｅｄ ｗｉｔｈ
ａｌｌ ２４ ｉｎｄｉｖｉｄｕａｌｓ ｓａｍｐｌｅｄ. Ｔｈｅ ＰＣＲ ｒｅａｃｔｉｏｎ ｖｏｌ￣
ｕｍｅ (２０ μＬ) ｃｏｎｔａｉｎｅｄ ５０－１００ ｎｇ ｇｅｎｏｍｉｃ ＤＮＡꎬ
０ ５ μｍｏｌＬ－１ ｏｆ ｅａｃｈ ｐｒｉｍｅｒꎬ ａｎｄ １０ μＬ ２ × Ｔａｑ
ＰＣＲ ＭａｓｔｅｒＭｉｘ (０ １ Ｕ Ｔａｑ ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ / μＬꎬ ０ ５
ｍｍｏｌＬ－１ ｄＮＴＰ ｅａｃｈꎬ ２０ ｍｍｏｌＬ－１ Ｔｒｉｓ￣ＨＣｌ [ｐＨ
８ ３]ꎬ １００ ｍｍｏｌＬ－１ ＫＣｌꎬ ａｎｄ ３ ｍｍｏｌＬ－１ ＭｇＣｌ２ꎻ
Ｔｉａｎｇｅｎ). ＰＣＲ ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎｓ ｗｅｒｅ ｃｏｎｄｕｃｔｅｄ ｕｎｄｅｒ
ｔｈｅ ｆｏｌｌｏｗｉｎｇ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ: ９５ ℃ ｆｏｒ ３ ｍｉｎ ｆｏｌｌｏｗｅｄ ｂｙ
３２－ ３５ ｃｙｃｌｅｓ ａｔ ９４ ℃ ｆｏｒ ４５ ｓꎬ ａｔ ｔｈｅ ａｎｎｅａｌｉｎｇ
ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ (ｏｐｔｉｍｉｚｅｄ ｆｏｒ ｅａｃｈ ｌｏｃｕｓꎬ Ｔａｂｌｅ １) ｆｏｒ
４５ ｓꎬ ７２℃ ｆｏｒ ４５ ｓꎻ ａｎｄ ａ ｆｉｎａｌ ｅｘｔｅｎｓｉｏｎ ｓｔｅｐ ａｔ ７２℃
ｆｏｒ ５ ｍｉｎ. ＰＣＲ ｐｒｏｄｕｃｔｓ ｗｅｒｅ ｓｅｐａｒａｔｅｄ ｂｙ ８％ ｎｏｎ￣
ｄｅｎａｔｕｒｉｎｇ ＰＡＧＥ ｇｅｌ ａｎｄ ｓｔａｉｎｅｄ ｗｉｔｈ ａ ｓｉｌｖｅｒ￣ｓｔａｉ￣
ｎｉｎｇ ｍｅｔｈｏｄ. Ｔｈｅ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓ ｗｅｒｅ ｒｕｎ ｉｎ ｄｕｐｌｉｃａｔｅ.
Ｅｓｔｉｍａｔｅｓ ｏｆ ｔｈｅ ｎｕｍｂｅｒ ｏｆ ａｌｌｅｌｅｓꎬ ｅｘｐｅｃｔｅｄ ａｎｄ ｏｂ￣
ｓｅｒｖｅｄ ｈｅｔｅｒｏｚｙｇｏｓｉｔｙ ａｎｄ ｔｅｓｔｓ ｆｏｒ ｄｅｖｉａｔｉｏｎ ｆｒｏｍ ｂｏｔｈ
ｔｈｅ Ｈａｒｄｙ￣Ｗｅｉｎｂｅｒｇ ｅｑｕｉｌｉｂｒｉｕｍ ( ＨＷＥ) ａｎｄ ｔｈｅ
ｌｉｎｋａｇｅ ｅｑｕｉｌｉｂｒｉｕｍ (ＬＥ) ｗｅｒｅ ｐｅｒｆｏｒｍｅｄ ｗｉｔｈ Ｇｅｎｅ￣
Ｐｏｐ ｖｅｒｓｉｏｎ ４ ０ (Ｒａｙｍｏｎｄ ａｎｄ Ｒｏｕｓｓｅｔꎬ １９９５).
Ａｍｏｎｇ ｔｈｅ １２８ ｐｒｉｍｅｒ ｐａｉｒｓꎬ ４６ ｗｅｒｅ ｓｕｃｃｅｓｓ￣
ｆｕｌｌｙ ａｍｐｌｉｆｉｅｄ ｉｎ ａｌｌ ｓａｍｐｌｅｓꎬ ａｎｄ １０ ｐｒｉｍｅｒ ｐａｉｒｓ
ｄｉｓｐｌａｙｅｄ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ. Ａｍｐｌｉｆｉｅｄ ｐｒｏｆｉｌｅｓ ｏｆ ｔｗｏ
ｍｉｃｒｏｓａｔｅｌｌｉｔｅ ｌｏｃｉ (ＮＴＺ０１ ａｎｄ ＮＴＺ１０) ｏｎ ８％ ｎｏｎ￣
ｄｅｎａｔｕｒａｎｔ ｐｏｌｙａｃｒｙｌａｍｉｄｅ ｇｅｌ ａｒｅ ｓｈｏｗｎ ｉｎ Ｆｉｇ １.
Ｂａｓｅｄ ｏｎ １０ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃ ｌｏｃｉꎬ ｔｈｅ ｎｕｍｂｅｒ ｏｆ ａｌｌｅｌｅｓ
ｐｅｒ ｌｏｃｕｓ ｒａｎｇｅｄ ｆｒｏｍ ２ ｔｏ ６. Ｅｘｐｅｃｔｅｄ ａｎｄ ｏｂｓｅｒｖｅｄ
ｈｅｔｅｒｏｚｙｇｏｓｉｔｙ ｖａｒｉｅｄ ｆｒｏｍ ０ １５３ ｔｏ ０ ７７８ ａｎｄ ｆｒｏｍ
０ ｔｏ １ꎬ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ ( Ｔａｂｌｅ ２). Ａｌｌ ｌｏｃｉ ｗｅｒｅ ｉｎ
ＨＷＥ ｅｘｃｅｐｔ ＮＴＺ０９ ａｎｄ ｎｏ ｌｉｎｋａｇｅ ｄｉｓｅｑｕｉｌｉｂｒｉｕｍ
ｗａｓ ｄｅｔｅｃｔｅｄ.
Ｆｉｎａｌｌｙꎬ ｔｈｅ ｔｒａｎｓｆｅｒａｂｉｌｉｔｙ ｏｆ １０ ｐｒｉｍｅｒ ｐａｉｒｓ ｗａｓ
ｔｅｓｔｅｄ ｉｎ ｆｏｕｒ ｓｐｅｃｉｅｓ ｆｒｏｍ ｔｗｏ ｇｅｎｅｒａ ｏｆ Ｂｅｒｂｅｒｉｄａｃｅａｅ.
２４１ 植 物 分 类 与 资 源 学 报 第 ３７卷
Ｔａｂｌｅ １ Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ ｏｆ １０ ｍｉｃｒｏｓａｔｅｌｌｉｔｅ ｐｒｉｍｅｒｓ ｉｎ Ｎａｎｄｉｎａ ｄｏｍｅｓｔｉｃａ
Ｌｏｃｕｓ Ｐｒｉｍｅｒ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ (５′－３′)
Ｒｅｐｅａｔ
Ｍｏｔｉｆ
Ｔｍ
/ ℃
Ａｌｌｅｌｅ Ｓｉｚｅ
/ ｂｐ
Ｔｒａｎｓｆｅｒａｂｉｌｉｔｙａ
ＧｅｎＢａｎｋ
ａｃｃｅｓｓｉｏｎ ｎｏ.
ＮＴＺ０１
Ｆ: ＧＧＴＧＴＡＡＴＡＡＴＧＧＡＧＡＡＧＧ
Ｒ: ＡＣＣＣＴＡＡＡＧＴＧＣＣＡＡＴＧＡ
(ＡＧ) ８ ５７ １３３ １ꎬ １ꎬ １ꎬ １ ＫＦ７８５７７８
ＮＴＺ０２
Ｆ: ＴＡＴＡＣＧＴＧＣＴＴＧＡＧＣＡＡＴＧＡ
Ｒ: ＣＡＧＧＣＧＡＣＡＧＡＡＡＣＡＧＡＴＡＡ
(ＣＴ) １２ ５４ ５ ２０２ １ꎬ １ꎬ １ꎬ １ ＫＦ７８５７７９
ＮＴＺ０３
Ｆ: ＡＴＧＡＴＧＡＴＧＡＴＧＡＣＡＧＧＧＡ
Ｒ: ＴＡＣＣＡＣＣＡＣＣＴＴＣＣＡＣＡＧ
(ＧＡ) １５ ５８ ５ ２６７ １ꎬ １ꎬ １ꎬ １ ＫＦ７８５７８０
ＮＴＺ０４
Ｆ: ＡＡＧＴＧＧＡＧＴＧＡＧＧＣＡＴＣＴＡＡ
Ｒ: ＣＴＧＡＣＡＧＡＴＧＡＡＧＡＴＴＡＣＧ
(ＣＡ) ７ ５１ １３１ １ꎬ １ꎬ １ꎬ １ ＫＦ７８５７８１
ＮＴＺ０５
Ｆ: ＣＡＣＴＧＧＡＴＴＡＧＧＧＣＧＡＧＡ
Ｒ: ＣＡＣＣＴＣＣＣＡＧＡＡＣＴＧＡＡＡ
(ＴＡ) １２(ＡＧ) ７ ５２ ５ １２１ １ꎬ １ꎬ １ꎬ １ ＫＦ７８５７８２
ＮＴＺ０６
Ｆ: ＣＴＣＴＴＧＣＣＴＡＴＴＣＣＣＴＴＣ
Ｒ: ＧＴＡＴＧＣＴＡＴＡＡＧＴＣＧＴＣ
(ＣＴ) １０ ４５ １８６ １ꎬ １ꎬ ０ꎬ １ ＫＦ７８５７８３
ＮＴＺ０７
Ｆ: ＡＣＡＡＡＴＡＡＣＧＡＧＡＣＴＡＡＴＣＡ
Ｒ: ＡＣＣＴＣＧＴＡＡＡＴＣＴＴＧＴＣＴＴＣ
(ＡＧ) ７ ４８ １３３ １ꎬ １ꎬ １ꎬ ０ ＫＦ７８５７８４
ＮＴＺ０８
Ｆ: ＡＣＣＣＡＣＡＧＣＣＡＡＡＣＴＣＣＡ
Ｒ: ＧＧＴＴＡＴＣＴＴＡＴＣＣＣＴＣＴＧＡ
(ＡＣ) ８ ５６ １６８ １ꎬ １ꎬ ０ꎬ １ ＫＦ７８５７８５
ＮＴＺ０９
Ｆ: ＣＴＴＡＧＧＴＴＧＡＴＴＡＴＣＴＣＧＧ
Ｒ: ＧＴＣＡＧＧＣＡＡＧＧＴＴＣＡＴＧＴ
(ＣＡ) ７ ５５ １３１ １ꎬ １ꎬ １ꎬ １ ＫＦ７８５７８６
ＮＴＺ１０
Ｆ: ＧＧＣＡＧＴＴＣＧＴＡＴＡＡＡＧＴＧＧ
Ｒ: ＧＴＣＡＴＧＣＡＡＡＴＣＣＧＴＴＡＧ
(ＴＣ) ９ ５７ １７１ ０ꎬ １ꎬ ０ꎬ ０ ＫＦ７８５７８７
Ｎｏｔｅ: Ｔｍ ＝ ａｎｎｅａｌｉｎｇ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ｗｈｅｎ ｒｕｎ ｉｎｄｉｖｉｄｕａｌｌｙ. ａ Ｔｈｅ ｎｕｍｂｅｒ ０ ｏｒ １ ｓｈｏｗｓ ｔｈｅ ｌｏｃｉ ｃｏｕｌｄ ｎｏｔ ｂｅ ｏｒ ｃｏｕｌｄ ｂｅ ａｍｐｌｉｆｉｅｄ ｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌｌｙ ｉｎ Ｍａ￣
ｈｏｎｉａ ｂｅａｌｅｉꎬ Ｍ ｊａｐｏｎｉｃａꎬ Ｂｅｒｂｅｒｉｓ ｊｕｌｉａｎａｅꎬ ａｎｄ Ｂ ｔｈｕｎｂｅｒｇｉｉ
Ｔａｂｌｅ ２ Ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ ｉｎｉｔｉａｌ ｐｒｉｍｅｒ ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ ｉｎ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｎａｎｄｉｎａ ｄｏｍｅｓｔｉｃａ
Ｌｏｃｕｓ
Ｗｕｎｉｎｇ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ (ｎ＝ ６)
Ｎａ Ｈｏ Ｈｅ
Ｘｉｎｙｕ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ (ｎ＝ ６)
Ｎａ Ｈｏ Ｈｅ
Ｔａｉｈｅ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ (ｎ＝ ６)
Ｎａ Ｈｏ Ｈｅ
Ｙｕｄｕ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ (ｎ＝ ６)
Ｎａ Ｈｏ Ｈｅ
ＮＴＺ０１ ２ ０ ３３３ ０ ４４４ ２ ０ ３３３ ０ ４４４ ２ ０ ０００ ０ ４４４ ２ ０ １６７ ０ １５３
ＮＴＺ０２ ２ ０ ０００ ０ ２７８ ２ ０ １６７ ０ １５３ ２ ０ ３３３ ０ ２７８ ３ ０ ５００ ０ ５６９
ＮＴＺ０３ ２ ０ ３３３ ０ ２７８ ２ ０ ５００ ０ ３７５ ２ ０ ６６７ ０ ４４４ ３ ０ ３３３ ０ ２９２
ＮＴＺ０４ ３ ０ ５００ ０ ５６９ ３ ０ １６７ ０ ４８６ ２ ０ ８３３ ０ ４８６ ３ ０ ６６７ ０ ５４２
ＮＴＺ０５ ４ １ ０００ ０ ６８１ ５ １ ０００ ０ ６９４ ３ １ ０００ ０ ６２５ ４ １ ０００ ０ ７３６
ＮＴＺ０６ ４ ０ ６６７ ０ ６６７ ４ ０ ５００ ０ ７２２ ３ ０ ８３３ ０ ６１１ ３ ０ ５００ ０ ６２５
ＮＴＺ０７ ２ ０ １６７ ０ １５３ ２ ０ ５００ ０ ４８６ ２ ０ ０００ ０ ５００ ２ ０ ３３３ ０ ５００
ＮＴＺ０８ ２ １ ０００ ０ ５００ ２ １ ０００ ０ ５００ ３ １ ０００ ０ ６１１ ３ ０ ６６７ ０ ５００
ＮＴＺ０９ ６ ０ ６６７ ０ ７７８ ６ ０ ８３３ ０ ７７８ ４ ０ ５００ ０ ６５３ ５ ０ ６６７ ０ ７２２
ＮＴＺ１０ ３ ０ ６６７ ０ ６２５ ４ ０ ８３３ ０ ６８１ ３ ０ ５００ ０ ４０３ ３ ０ ８３３ ０ ６２５
Ｎｏｔｅ: Ｎａ ＝ｎｕｍｂｅｒ ｏｆ ａｌｌｅｌｅｓ ｐｅｒ ｌｏｃｕｓꎻ Ｈｏ ＝ｏｂｓｅｒｖｅｄ ｈｅｔｅｒｏｚｙｇｏｓｉｔｙꎻ Ｈｅ ｅｘｐｅｃｔｅｄ ｈｅｔｅｒｏｚｙｇｏｓｉｔｙꎻ ｎ＝ｓａｍｐｌｅ ｓｉｚｅ ｆｏｒ ｅａｃｈ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ
３４１２期 ＨＵ Ｈｕｉ￣Ｌｉ ｅｔ ａｌ.: Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ａｎｄ Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ Ｍｉｃｒｏｓａｔｅｌｌｉｔｅ Ｌｏｃｉ ｆｏｒ Ｈｅａｖｅｎｌｙ Ｂａｍｂｏｏ
Ｎｉｎｅꎬ １０ꎬ ７ꎬ ａｎｄ ８ ｍａｒｋｅｒｓ ｗｅｒｅ ｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌｌｙ ａｍ￣
ｐｌｉｆｉｅｄ ｉｎ Ｍａｈｏｎｉａ ｂｅａｌｅｉꎬ Ｍａｈｏｎｉａ ｊａｐｏｎｉｃａꎬ Ｂｅｒ￣
ｂｅｒｉｓ ｊｕｌｉａｎａｅꎬ ａｎｄ Ｂｅｒｂｅｒｉｓ ｔｈｕｎｂｅｒｇｉｉꎬ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ
(Ｔａｂｌｅ １).
２ Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ
Ｔｈｅ １０ ｍｉｃｒｏｓａｔｅｌｌｉｔｅ ｍａｒｋｅｒｓ ｄｅｖｅｌｏｐｅｄ ｈｅｒｅ
ｗｉｌｌ ｂｅ ｕｓｅｄ ｉｎ ｏｕｒ ｏｎｇｏｉｎｇ ｒｅｓｅａｒｃｈ ｏｎ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ
ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ａｎｄ ｇｅｎｅｔｉｃ ｒｅｌａｔｅｄｎｅｓｓ ｉｎ ｎａｔｉｖｅ ａｎｄ ｉｎｖａ￣
ｓｉｖｅ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｎ ｄｏｍｅｓｔｉｃａ. Ｓｕｃｈ ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ
ｍａｙ ｈｅｌｐ ｒｅｓｅａｒｃｈｅｒｓ ｒｅｖｅａｌ ｔｈｅ ｉｎｖａｓｉｏｎ ｈｉｓｔｏｒｙ ｏｆ
ｔｈｅ ｓｐｅｃｉｅｓ ａｎｄ ｒａｐｉｄ ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ ｗｉｔｈｉｎ ｔｈｅ ｉｎｖａｓｉｖｅ
ｒａｎｇｅ. Ｉｎ ａｄｄｉｔｉｏｎꎬ ｔｈｅｓｅ ｍａｒｋｅｒｓ ａｒｅ ａｌｓｏ ｕｓｅｆｕｌ ｆｏｒ
ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ ｇｅｎｅｔｉｃ ｓｔｕｄｉｅｓ ｉｎ ｏｔｈｅｒ ｇｅｎｅｒａ ｏｆ Ｂｅｒｂｅｒｉ￣
ｄａｃｅａｅ.
Ａｃｋｎｏｗｌｅｄｇｍｅｎｔｓ: Ｗｅ ｔｈａｎｋ Ｍｒ. Ｗｅｉ Ｚｅｎｇꎬ Ｔａｏ Ｌｉꎬ Ｊｉａｐ￣
ｅｎｇ Ｚｈｅｎｇ ａｎｄ Ｂｏｃｈａｏ Ｌｉ ｆｏｒ ｈｅｌｐ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｆｉｅｌｄ ｓｕｒｖｅｙ ａｎｄ
ｌｅａｆ ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ.
Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅｓ:
Ｅｓｔｏｕｐ Ａꎬ Ｇｕｉｌｌｅｍａｕｄ Ｔꎬ ２０１０. Ｒｅｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｎｇ ｒｏｕｔｅｓ ｏｆ ｉｎｖａｓｉｏｎ ｕ￣
ｓｉｎｇ ｇｅｎｅｔｉｃ ｄａｔａ: ｗｈｙꎬ ｈｏｗ ａｎｄ ｓｏ ｗｈａｔ? [Ｊ] . Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｅｃｏｌｏ￣
ｇｙꎬ １９: ４１１３—４１３０
Ｋｎｏｘ ＧＷꎬ Ｗｉｌｓｏｎ ＳＢꎬ ２００６. Ｅｖａｌｕａｔｉｎｇ ｎｏｒｔｈ ａｎｄ ｓｏｕｔｈ Ｆｌｏｒｉｄａ
ｌａｎｄｓｃａｐｅ ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ ａｎｄ ｆｒｕｉｔｉｎｇ ｏｆ ｔｅｎ ｃｕｌｔｉｖａｒｓ ａｎｄ ａ ｗｉｌｄ￣
ｔｙｐｅ ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｎａｎｄｉｎａ ｄｏｍｅｓｔｉｃａꎬ ａ ｐｏｔｅｎｔｉａｌｌｙ ｉｎｖａｓｉｖｅ
ｓｈｒｕｂ [ Ｊ] . Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ Ｈｏｒｔｉｃｕｌｔｕｒｅꎬ ２４ ( ３):
１３７—１４２
Ｒａｙｍｏｎｄ Ｍꎬ Ｒｏｕｓｓｅｔ Ｆꎬ １９９５. ＧＥＮＥＰＯＰ: ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ ｇｅｎｅｔｉｃｓ ｓｏｆｔ￣
ｗａｒｅ ｆｏｒ ｅｘａｃｔ ｔｅｓｔｓ ａｎｄ ｅｃｕｍｅｎｉｃｉｓｍꎬ ｖｅｒｓｉｏｎ １ ２ [Ｊ] . Ｊｏｕｒｎａｌ
ｏｆ Ｈｅｒｅｄｉｔｙꎬ ８６: ２４８—２４９
Ｒｙｃｈｌｉｋ Ｗꎬ ２００７. ＯＬＩＧＯ ７ ｐｒｉｍｅｒ ａｎａｌｙｓｉｓ ｓｏｆｔｗａｒｅ [Ｊ] . Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ
Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙꎬ ４０２: ３５—５９
Ｙｉｎｇ ＪＳꎬ Ｂｏｕｆｆｏｒｄ ＤＥꎬ Ｂｒａｃｈ ＡＲꎬ ２０１１. Ｎａｎｄｉｎａ [Ａ]. / / Ｗｕ ＺＹꎬ
Ｒａｖｅｎ ＰＨ ｅｄｓ.ꎬ Ｆｌｏｒａ ｏｆ Ｃｈｉｎａ [Ｍ]. Ｂｅｉｊｉｎｇ: Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｐｒｅｓｓꎻ
Ｓｔ. Ｌｏｕｉｓ: Ｍｉｓｓｏｕｒｉ Ｂｏｔａｎｉｃａｌ Ｇａｒｄｅｎ Ｐｒｅｓｓꎬ ７１５
Ｚａｎｅ Ｌꎬ Ｂａｒｇｅｌｌｏｎｉ Ｌꎬ Ｐａｔａｒｎｅｌｌｏ Ｔꎬ ２００２. Ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ ｆｏｒ ｍｉｃｒｏｓａｔｅｌｌｉｔｅ
ｉｓｏｌａｔｉｏｎ: ａ ｒｅｖｉｅｗ [Ｊ] . Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｅｃｏｌｏｇｙꎬ １１: １—１６
４４１ 植 物 分 类 与 资 源 学 报 第 ３７卷