全 文 ：HAT鄄RAPD技术在姜科象牙参属植物自然
杂交个体鉴定中的应用*
杜光辉1,2, 李庆军1**
(1 中国科学院西双版纳热带植物园, 云南 昆明摇 650223; 2 中国科学院研究生院, 北京摇 100049)
摘要: 自然杂交在植物中广泛存在, 对植物进化起着重要的作用。 研究自然杂交现象, 除了传粉、 形态等
传统手段, 还需要分子水平的证据。 本研究利用 HAT鄄RAPD 技术, 对姜科象牙参属植物的自然杂交现象
进行分析, 运用主坐标分析和杂交指数分析对疑似杂交个体进行鉴定, 探讨 HAT鄄RAPD 技术在分析和鉴
定杂交个体方面的可行性。 结果显示, HAT鄄RAPD 方法比传统 RAPD 扩增的条带更稳定、 清楚、 容易统
计, 同时主坐标分析和杂交指数分析的结果表明, 形态介于大花象牙参 (Roscoea humeana) 和早花象牙参
(R. cautleoides) 的个体是两者的杂交后代, 且与大花象牙参的亲缘关系更近。 以上的结果表明 HAT鄄RAPD
技术可以用于自然杂交的分析, 并且由于其简单、 易操作等特点, 将成为一种非常适合分析和鉴定杂交个
体的分子手段。
关键词: 大花象牙参; 早花象牙参; 疑似杂交个体; HAT鄄RAPD; 主坐标分析; 杂交指数
中图分类号: Q 78摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 文献标识码: A摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 文章编号: 2095-0845(2011)06-683-07
Application of HAT鄄RAPD Technique in Identifying Natural
Hybrids of Roscoea (Zingiberaceae)
DU Guang鄄Hui1,2, LI Qing鄄Jun1**
(1 Xishuangbanna Tropical Botanical Garden, Chinese Academy of Sciences, Kunming 650223, China;
2 Graduate University of Chinese Academy of Sciences, Beijing 100049, China)
Abstract: Natural hybridization is very common in plants, and plays an important role in plant evolution. Besides
the traditional methods including morphological analysis and hand crossing, molecular evidence is needed for study鄄
ing natural hybridization. In order to analyze natural hybridization in Roscoea, HAT鄄RAPD technique was used to
identify putative hybrids from parental species by principal co鄄ordinate analysis and hybrid index. The results indica鄄
ted that the bands amplified by HAT鄄RAPD technique were more stable and reliable than that of RAPD. The result
of principal co鄄ordinate analysis and hybrid index showed that intermediate individuals were the hybrids of R. hu鄄
meana and R. cautleoides, and showed closer relationships to R. humeana. These results suggested that HAT鄄RAPD
could be used to study natural hybridization. As it is simple and easy to manipulate, HAT鄄RAPD may prove to be a
very effective technique in hybrid identification in the studies of plant evolution.
Key words: Roscoea humeana; R. cautleoides; Putative hybrids; HAT鄄RAPD; PCOA; Hybrid index
摇 自然杂交现象在植物中非常普遍, 随着群体
生物学工作的日益深入, 人们发现至少有 25%的
植物在其进化历程中经历了与其它近缘种杂交的
过程 (Mallet, 2007)。 杂交可以增加种内遗传多
植 物 分 类 与 资 源 学 报摇 2011, 33 (6): 683 ~ 689
Plant Diversity and Resources摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 DOI: 10. 3724 / SP. J. 1143. 2011. 11051
*
**
基金项目: 中国科学院知识创新工程重要方向项目 (KSCX2鄄YW鄄Z鄄0903); 云南省自然科学基金 (2007C111M)
通讯作者: Author for correspondence; E鄄mail: qjli@ xtbg. ac. cn
收稿日期: 2011-03-23, 2011-04-19 接受发表
作者简介: 杜光辉 (1982-) 男, 博士研究生, 研究方向为植物进化生态。 E鄄mail: du0425@ 163. com
样性, 提高居群的适合度, 加强或打破近缘种间
的生殖隔离, 更是新种形成的一种重要途径 (Rie鄄
seberg, 1997)。 由于杂交在植物进化过程中的重
要作用, 近年来已经成为植物系统与进化研究的
热点 (Ellstrand等, 1996; Rieseberg等, 2003)。
要准确地鉴定某一物种是否属于杂种或杂种起
源并不容易 (Rauscher等, 2002)。 近年来, 大量传
统研究方法如形态学 (Albert 等, 1997; Mckenzie
等, 2004;杜玉娟等, 2008)、 人工杂交 (Motley 和
Carr, 1998;张敬丽等, 2007) 等方法被用于研究自
然杂交, 但通常不能准确判断杂种, 即使已经从形
态学或细胞遗传学上确定一个物种是杂种或杂种起
源, 仍然需要用其他一些证据加以验证 (Soltis
等, 1992)。 随着分子生物学的迅速发展, 一些分
子生物学方法, 如 AFLP、 SSR、 DNA测序技术被
用来研究和验证杂交种 (Szczepaniak等, 2007;袁
长春等, 2007; 李小娟等, 2007; Ortego 和 Bonal,
2009)。 但是在实际应用中, 这些技术方法都存在
着一定的不足。 AFLP技术步骤多、 流程长, 所需
模版 DNA的质量要求高, 同时还需要限制性内切
酶进行酶切, 所以操作难度大, 很难掌握 (付瑜
华等, 2007)。 SSR标记是共显性标记, 可以鉴定
杂合体, 但是 SSR引物的设计必须知道微卫星两
端序列, 引物的开发受到很大的限制 (高志红等,
2002)。 DNA测序的方法由于其准确性, 可以检
测到碱基的变异, 是目前应用于杂交种分析和鉴
定的比较有效的方法。 核 DNA测序鉴定杂交种的
方法其原理是: 如果两个亲本在相同位点上的碱
基不同, 那么, 在其杂交后代的对应位点上将检
测出两种不同的碱基, 其中一个来自父本, 一个
来自母本, 因而在原始测序图上, 将呈现出这两
种碱基的峰的叠加 (袁长春等, 2004)。 叶绿体基
因, 属于细胞质遗传, 通常为母系遗传方式 (胡
适宜, 1997; 奇文清等, 1999), 可以结合核基因
片段结果用来区分父母本和确定杂交的方向。 但
是由于亲本的遗传关系比较近, 或者存在基因渗
入等原因, 造成了某些基因或者片段在亲本之间
没有差异 (Feliner等, 2002); 或者当一个杂交种
已进行许多代的繁衍, 亲本之一的基因可能完全
从杂种的基因组中消失, 将限制 DNA测序在杂交
研究中的应用, 达不到检测的目的 (Rauscher等,
2002)。 同时 DNA测序所需费用比较高。 以上所
述各种分子技术都有一定缺点, 所以寻找到一种
简单有效的分子手段是非常有价值的。
HAT鄄RAPD (high annealing temperature ran鄄
dom amplified polymorphic DNA) 技术是 2000 年
由 Anuntalabhochai 等 (2000) 在传统的 RAPD
(random amplified polymorphic DNA) 技术的基础
上发展起来的一项 DNA 水平上的多态性检测技
术。 该方法主要把传统的 RAPD 的退火温度从
35 ~ 37益提高到 46 ~ 48益, 从而提高了实验结
果的可靠性和稳定性。 同时该方法又具有 RAPD
技术的以下优点: 模板 DNA 用量少, 纯度低;
引物不受物种的限制, 具有通用性; 在 DNA 分
子水平上进行检测, 不受环境、 季节、 组织器官
以及发育时期的限制, 取样方便; 简单容易掌
握, 操作过程不需要同位素标记、 Southern 杂交等
复杂的过程, 成本花费低等 (Williams 等, 1990)。
HAT鄄RAPD方法已经被成功运用到许多热带植物
的研究中 (Cutler等, 2006, 2007; Ruangsuttapha
等, 2007; Anuntalabhochai等, 2007), 但是在自
然杂交种的分析和鉴定方面还未见报道。
象牙参属 (Roscoea) 是姜科中的一个小属,
主要沿着喜马拉雅山脉分布于从克什米尔至我国
西南的横断山脉这一地区 (海拔 1 200 ~4 880 m),
是姜科植物中唯一真正的高山分布类群 (Cowley,
1982)。 其中横断山区尤其是滇西北是其现在的分
布中心之一, 多种象牙参同域分布现象十分普遍
(Cowley, 1982)。 大花象牙参 (Roscoea humeana)
和早花象牙参 (R. cautleoides) 是象牙参属中关系
非常近的两个种 (Ngamriabsakul等, 2000)。 在云
南省丽江市西北的玉龙雪山干海子地区, 这两个
种同域分布, 并且在这两个居群分布的交叉地
带, 张志强 (2008) 发现存在形态上居于两者
之间的疑似杂交个体, 但是没有一个明显的形态
性状可以清楚地把疑似杂交个体和亲本区分开,
急需一种简单有效的分子手段进行鉴定和分析。
本文试图通过传统的 RAPD 方法和 HAT鄄
RAPD方法的对比, 检验 HAT鄄RAPD技术是否比
传统的 RAPD方法更稳定可靠; 同时检验能否利
用该技术准确地对疑似杂交个体进行分子鉴定,
即是否能很好地把杂交个体和亲本区分开, 从而
可以作为一种简单有效的进行杂交种鉴定和分析
的分子技术。
486摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 植 物 分 类 与 资 源 学 报摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 第 33 卷
1摇 材料与方法
1. 1摇 材料
研究材料采自云南省丽江市玉龙雪山的干海子地区
(27毅05忆 N, 100毅16忆 E; 海拔3120 m)。 分别随机选取大花象
牙参、 早花象牙参各 20株和疑似杂交个体 38株, 共 78份
材料, 取其幼嫩的叶片 (大约 1 g), 硅胶干燥保存备用。
1. 2摇 实验方法
总 DNA 提取采用改良的 CTAB 法 (Doyle 和 Doyle,
1987)。 DNA纯度和浓度分别采用 1. 0% (m / v) 琼脂
糖凝胶电泳和紫外分光光度计 ( Thermo 公司, Nano鄄
Drop1000 spectrophotometer) 进行检测。
PCR扩增反应在 PCR 仪 (ABI 公司 2720型) 上进行,
引物由上海生工合成, 参照 Anuntalabhochai 等 (2007)
的 HAT鄄RAPD扩增程序, 即: 95益预变性 2 min, 95益
变性 30 s, 46益退火 30 s, 72益延伸 45 s, 35 个循环后,
72益延伸 5 min, 最后 4益保存。 传统的 RAPD 方法只是
退火温度为 37益, 其它参数不变。 扩增反应均采用 25
滋L的反应体系: 10 ~ 40 ng 模板 DNA, 2. 5 滋L 10伊PCR
buffer, 1. 5 mmol·L-1 Mg2+, 0. 2 mmol·L-1 dNTPs, 4
mmol·L-1引物和1. 5 U Taq酶 (Takara)。 扩增反应完成后,
1. 5% (m / v) 琼脂糖凝胶电泳检测, 核酸染料 (Gold鄄
view) 染色后, 在凝胶成像系统下拍照, 保存统计。
同一引物、 同一位点, 按照其扩增产物的有 (1)
无 (0) 得到二元数据, 形成 0, 1 矩阵。 只筛选物种特
异性的条带作为下一步的分析, 因为相同的条带对于区
分杂交种没有作用。 同时由于物种之间的关系比较近,
还有基因渗入的问题, 所以很难找到只在一个物种出
现, 而在另一个物种不出现的标准的特异带。 根据前人
的报道 (Allan等, 1997; Neuffer等, 1999), 本实验采用
只在某一物种普遍存在, 同时条带出现的比例大于另一
物种 50%以上的条带作为物种的特异带。
根据统计的条带, 主要进行以下两种方法的分析:
1. 主坐标分析 ( principal co鄄ordinate analysis, PCOA):
运用 GenAlEx6. 4 软件 (Peakall和 Smouse, 2006), 先计
算 Nei遗传距离, 再根据 Nei 遗传距离形成主坐标图。
2. 杂交指数分析: 根据 Fritz (1994) 的算术杂交指数的
方法, 设标准的早花象牙参 (指物种特异带都出现, 非
物种特异带都不出现的理想状态) 的指数为 0, 标准的
大花象牙参的指数为 1, 当与标准的早花象牙参有一条
带的差异, 其杂交指数按比例增加, 最大范围到 1, 所
以杂交个体的指数应该在 0 ~ 1 之间。
2摇 结果
2. 1摇 HAT鄄RAPD与传统 RAPD的结果比较
图 1 是引物 B1046 分别用传统 RAPD (上)
和 HAT鄄RAPD (下) 方法进行扩增, 在相同的电
泳条件下的结果。 从图 1 可以看出, 通过 HAT鄄
RAPD的方法扩增的条带比传统 RAPD 更清楚稳
定。 用传统 RAPD方法扩增不出来, 或者不清楚
的条带, 在 HAT鄄RAPD 中都很清楚、 容易统计,
这为下一步条带统计和分析带来了方便。
2. 2摇 引物的筛选及特异扩增带
从 216 条 RAPD引物中, 挑选出扩增产物条
带清楚、 差异明显的引物 27 条 (表 1), 共计 42
个特异性片段 (表 2)。 为了提高扩增的稳定性
和增加引物的退火温度, 筛选出的引物的 GC 含
量都在 60% (含) 以上 (表 1)。 在 42 条特异性
条带中, 大花象牙参有 27 条, 早花象牙参 15 条,
其中有些条带是严格的物种特异性条带, 如引物
OPD鄄03 在大约 600 bp 处扩增的条带。 在疑似杂
交个体中, 既有父本的特异性条带又有母本的特
异性条带, 很好地证明了这些个体是杂交后代。
2. 3摇 PCOA与 Nei遗传距离分析
通过 PCOA 分析 (图 2) 可以看出, 78 份
材料共聚成三类, 大花象牙参一类, 早花象牙参
一类, 而疑似杂交个体处于两者之间, 且与大花
象牙参的亲缘关系较近。 第一、 第二两个主坐标
图1摇 引物 B1046分别用传统 RAPD(上)和HAT鄄RAPD(下)的扩增结果。 箭头表示特异扩增条带; 1~8为大花象牙参, 9 ~16为早花象牙参
Fig. 1摇 Amplification of primer B1046 by RAPD (upper) and HAT鄄RAPD (lower) techniques. Arrows show the specific
amplified fragment; 1-8 are R. humeana; 9-16 are R. cautleoides
5866 期摇 摇 摇 摇 摇 杜光辉和李庆军: HAT鄄RAPD技术在姜科象牙参属植物自然杂交个体鉴定中的应用摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇
表 1摇 RAPD引物名称、 序列及 GC含量
Table 1摇 Primers爷 name, sequences and GC%
引物名称 Primers 序列 (5忆 ~ 3忆) Sequences GC含量 GC / % 引物名称 Primers 序列 (5忆 ~ 3忆) Sequences GC含量 GC / %
B1046 GTCGGAGCGG 80 OPA 07 GAAACGGGTG 60
OPW 08 GACTGCCTCT 60 OPA 08 GTGACGTAGG 60
OPW 16 CAGCCTACCA 60 OPA 15 TTCCGAACCC 60
OPR 16 CTCTGCGCGT 70 OPA 17 GACCGCTTGT 60
OPT 16 GGTGAACGCT 60 OPB 12 CCTTGACGCA 60
OPB鄄01 GTTTCGCTCC 60 OPJ 10 AAGCCCGAGG 70
OPG 13 CTCTCCGCCA 70 OPX 03 TGGCGCAGTG 70
OPD鄄03 GTCGCCGTCA 70 OPX 11 GGAGCCTCAG 70
S2077 GTTCGCTCCC 70 OPE 02 GGTGCGGGAA 70
S2100 CAAAGGCGTG 60 OPC 01 TTCGAGCCAG 60
S2159 GTCGTGCGGA 70 OPI 16 TCTCCGCCCT 70
OPA 04 AATCGGGCTG 60 OPO 11 GACAGGAGGT 60
OPD 18 GAGAGCCAAC 60 OPO 13 GTCAGAGTCC 60
OPN 06 GAGACGCACA 60
表 2摇 HAT鄄RAPD特异片段的大小及在大花象牙参、 早花象牙参和疑似杂交个体中的扩增比例
Table 2摇 The size of HAT鄄RAPD specific fragments and its amplification ratio in R. humeana, R. cautleoides and putative hybrids
引物名称
Primer
names
片段大小
Fragments爷
size
大花象
牙参
R. humeana
疑似杂交个体
Putative
hybrids
早花象
牙参
R. cautleoides
引物名称
Primer
names
片段大小
Fragments爷
size
大花象
牙参
R. humeana
疑似杂交个体
Putative
hybrids
早花象
牙参
R. cautleoides
B1046 500 1. 00 1. 00 0. 05 OPA 15 550 0. 05 0. 24 0. 75
OPW 08 400 0. 05 0. 63 0. 90 600 1. 00 0. 95 0. 05
800 0. 95 0. 76 0. 00 650 0. 05 0. 29 0. 70
OPW 16 800 1. 00 1. 00 0. 20 OPA 17 550 0. 90 0. 89 0. 00
OPR 16 1000 0. 90 0. 53 0. 00 750 0. 15 0. 84 1. 00
1200 0. 60 0. 53 0. 00 OPB 12 400 1. 00 1. 00 0. 00
OPT 16 250 1. 00 0. 84 0. 05 1100 1. 00 0. 74 0. 00
OPB鄄01 500 0. 65 0. 63 0. 10 OPJ 10 1200 0. 85 0. 42 0. 00
1600 0. 20 0. 92 0. 90 OPX 03 400 0. 40 0. 79 1. 00
OPG 13 400 1. 00 0. 95 0. 05 500 0. 00 0. 47 0. 80
OPD鄄03 450 0. 15 0. 53 0. 85 550 0. 95 0. 53 0. 10
600 1. 00 1. 00 0. 00 600 0. 95 0. 84 0. 00
1100 0. 80 0. 39 0. 30 OPX 11 450 0. 00 0. 61 0. 85
S2077 650 1. 00 1. 00 0. 05 1400 0. 00 0. 84 0. 80
S2100 1100 0. 05 0. 76 0. 70 1600 0. 60 0. 63 0. 00
S2159 400 0. 05 0. 58 0. 90 OPE 02 850 0. 95 0. 79 0. 05
OPA 04 900 1. 00 0. 82 0. 05 OPC 01 260 1. 00 1. 00 0. 10
OPD 18 650 1. 00 0. 97 0. 20 400 0. 00 0. 45 0. 95
OPN 06 550 1. 00 1. 00 0. 05 OPI 16 800 1. 00 0. 92 0. 10
OPA 07 1700 1. 00 0. 63 0. 20 OPO 11 900 0. 05 0. 71 0. 90
OPA 08 400 1. 00 0. 95 0. 05 OPO 13 600 0. 20 0. 82 0. 95
共解释了 80. 05% 的变异, 其中在第一主坐标
(66. 64%的变异) 方向上大花象牙参、 早花象牙
参和疑似杂交个体能够很好地分开。 而 Nei 遗传
距离 (表 3) 显示, 大花象牙参和早花象牙参的
遗传距离为1. 266, 疑似杂交个体与两种象牙参之
间的遗传距离分别是0. 141和0. 580, 介于两种象
牙参之间, 且与大花象牙参的遗传距离更近。
2. 4摇 杂交指数分析
通过杂交指数的分析 (图 3) 可以看出, 疑似
杂交个体的杂交指数都在 0 ~1 之间, 介于大花象
牙参和早花象牙参之间, 证明是两者的杂交后代。
同时疑似杂交个体的杂交指数都大于 0. 5, 且更偏
686摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 植 物 分 类 与 资 源 学 报摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 第 33 卷
图 2摇 大花象牙参、 早花象牙参和疑似杂交个体 PCOA分析的散点图
Fig. 2摇 Plot of Roscoea samples by PCO analysis based on HAT鄄RAPD bands
表 3摇 大花象牙参、 早花象牙参和疑似杂交
个体之间的 Nei遗传距离
Table 3摇 Pairwise population matrix of Nei genetic distance in
R. humeana, R. cautleoides, and putative hybrids
物种
Species
大花象牙参
R. humeana
早花象牙参
R. cautleoides
疑似杂交个体
Putative hybrids
大花象牙参
R. humeana 0. 000
早花象牙参
R. cautleoides 1. 266 0. 000
疑似杂交个体
Putative hybrids 0. 141 0. 580 0. 000
向于大花象牙参, 说明疑似杂交个体与大花象牙参
亲缘关系更近。 其中有些杂交个体的杂交指数在
0. 65 以上, 可能是与大花象牙参的回交后代。
3摇 讨论
理想的分子标记技术应该同时具有以下几个
特点 (Agarwal等, 2008): (1) 具有多态性, 并
且多态性在整个基因组中均匀分布; (2) 能够准
确地揭示遗传差异; (3) 能够产生稳定可靠的条
带; (4) 简单, 快捷, 成本低; (5) 需要很少的
组织和 DNA样品; (6) 与不同表型相联系; (7)
不需要预先知道物种的基因和序列。 目前, 还没
有任何一种分子技术可以同时具有上述全部特点。
RAPD方法有很多的优点, 已经成功地应用
于分子生态学研究中 (Hadrys等, 1994), 但是由
图 3摇 大花象牙参、 早花象牙参和疑似杂交个体
参杂交指数频率分布图
Fig. 3摇 Frequency distribution of hybrid index in R. humeana,
R. cautleoides and putative hybrids
于其退火温度偏低, 导致条带的重复性和稳定性
很差, 其结果受到很多质疑 (Bardakci, 2001)。
近几年, 随着其它分子标记的出现和测序的应
用, RAPD 方法已经渐渐被人们抛弃。 但是,
RAPD方法简单、 易操作、 成本低等特点是人们
希望利用的。 HAT鄄RAPD技术就是在 RAPD 方法
7866 期摇 摇 摇 摇 摇 杜光辉和李庆军: HAT鄄RAPD技术在姜科象牙参属植物自然杂交个体鉴定中的应用摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇
基础上提出的, 主要通过提高退火温度, 从而使
扩增条带稳定、 重复性高的一种分子标记。 本研
究通过 HAT鄄RAPD和传统 RAPD的对比, 确实发
现 HAT鄄RAPD方法扩增的条带更清楚稳定, 为下
一步的统计分析提供了方便。
传统 RAPD方法除了退火温度偏低, 还有其
它两个主要问题: (1) 引物长度很短 (一般只有
10 个碱基) (傅俊江等, 2000)。 针对这个问题,
可以选择 GC含量高的引物, 作为 HAT鄄RAPD 方
法的扩增引物。 根据已有的报道 ( Eimert 等,
2003; Ruangsuttapha 等, 2007), GC 含量高, 引
物结合更稳定, 同时 GC 含量高的引物其退火温
度也相应偏高。 本实验筛选出的 27 条引物 GC含
量都在 60% (含) 以上, 保证了引物结合的稳定
性, 从而使扩增的条带更稳定可靠。 (2) RAPD
标记是显性标记, 不能区分杂合体 ( Bardakci,
2001)。 为了能够很好的把疑似杂交个体和亲本
区分开, 在实验中只筛选物种特异带, 只要父母
本的特有带在疑似杂交个体中都能找到, 就可以
说明其杂交个体的地位。
通过 HAT鄄RAPD方法筛选出的特异带, 有的
是物种的真正的特有带 (就是在某一物种的全部
个体中出现, 而在另一物种个体中都不出现的条
带), 这些可以进一步转化为共显性的 SCAR标记
而作为区分物种的特有标记。 通过 HAT鄄RAPD 方
法发现物种性状相关的特异带而成功转化为 SCAR
标记的例子也有很多 (Culter等, 2006, 2007)。
根据 HAT鄄RAPD方法统计的条带, 本实验主
要通过主坐标和杂交指数两种方法进行了分析比
较, 两种方法的结果虽然有一定的不一致, 但是
主要结果是相同的, 都能清楚地区分出杂交个
体。 除了 PCOA和杂交指数分析, 利用 HAT鄄RAPD
条带, 我们还可以进行很多处理分析, 得到不同
方面的信息。 如利用 NewHybrids 软件 (Anderson
和 Thompson, 2002) 把杂交个体划分为 F1、 F2或
者回交后代; 利用 Structure 软件 ( Pritchard 等,
2000) 可以进行居群结构的分析; 还可以利用
NTSYSpc软件进行聚类分析。
通过本实验的分子结果, 我们可以确定形态
上介于大花象牙参和早花象牙参的个体是两者的杂
交后代, 并且这些杂交个体与大花象牙参的关系更
近。 通过一系列方法的改进, 使 HAT鄄RAPD扩增更
稳定, 结果更可信; 同时证明 HAT鄄RAPD方法能够
简单有效地从分子水平区分杂交个体和父母本的关
系, 成为一种鉴定杂交个体的有效分子手段。
也参摇 考摇 文摇 献页
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