全 文 ：中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 46 卷 第 8 期 2015 年 4 月

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HPLC 法测定西藏秦艽花与川西秦艽花中 7 种成分的量
李荣娇，杨凤仙，袁绿益，王晓玲*
西南民族大学少数民族药物研究所，四川 成都 610041
摘 要：目的 建立测定西藏秦艽花和川西秦艽花中落干酸、6′-O-β-D-葡萄糖基龙胆苦苷、獐芽菜苦苷、龙胆苦苷、
獐芽菜苷、异荭草苷、异牡荆黄素 7 种成分的 HPLC 方法。方法 采用 Agilent Zorbax ODS（250 mm×4.6 mm，5 μm）
色谱柱，流动相为乙腈-0.4%醋酸水溶液梯度洗脱，体积流量 0.4 mL/min，检测波长 254 nm，柱温 30 ℃。结果 落干
酸、6′-O-β-D-葡萄糖基龙胆苦苷、獐芽菜苦苷、龙胆苦苷、獐芽菜苷、异荭草苷和异牡荆黄素分别在 0.228～2.280、
0.680～6.800、0.220～2.200、1.476～14.760、0.200～2.000、0.436～4.360、0.276～2.760 μg 进样量与峰面积积分值线
性关系良好（R2≥0.999 2），落干酸、6′-O-β-D-葡萄糖基龙胆苦苷、獐芽菜苦苷、龙胆苦苷、獐芽菜苷、异荭草苷及异
牡荆黄素的平均回收率（n＝9）分别为 100.9%、99.4%、101.0%、105.7%、103.1%、98.4%、104.2%。结论 该法简
便、准确、专属性强，可用于西藏秦艽花和川西秦艽花中 7 种成分的测定。
关键词：西藏秦艽；川西秦艽；HPLC；落干酸；6′-O-β-D-葡萄糖基龙胆苦苷；獐芽菜苦苷；龙胆苦苷；獐芽菜苷；异荭草
苷；异牡荆黄素
中图分类号：R286.6 文献标志码：A 文章编号：0253 - 2670(2015)08 - 1227 - 04
DOI: 10.7501/j.issn.0253-2670.2015.08.024
Determination of seven components in flowers of Gentiana tibetica and Gentiana
dendrologi by HPLC
LI Rong-jiao, YANG Feng-xian, YUAN Lv-yi, WANG Xiao-ling
Ethnic Pharmaceutical Institute, Southwest University for Nationalities, Chengdu 610041, China
Abstract: Objective To establish an HPLC method for simultaneously determining seven components, such as loganic acid,
6′-O-β-D-glucopyranosyl gentiopicroside, swertiamarine, gentiopicroside, swertiamarin, isoorientin, and isovitexin, from the flowers
of Gentiana tibetica and G. dendrology. Methods Chromatographic analysis was achieved on an Agilent Zorbax ODS column (150
mm × 4.6 mm, 5 μm) by gradient elution of acetonitrile-0.4% acetic acid in water at 30 ℃. The flow rate was 0.4 mL/min and the
detection wavelength was 254 nm. Results The calibration curves of all the seven constituents showed good linearity in a relatively
wide concentration range. The linear ranges of loganic acid, 6′-O-β-D-glucopyranosyl gentiopicroside, swertiamarine, gentiopicroside,
gentiopicroside, isoorientin, and isovitexin were 0.228—2.280, 0.680—6.800, 0.220—2.20, 1.476—14.760, 0.200—2.000,
0.436—4.360, and 0.276—2.760 μg (R2 ≥ 0.999 2), respectively. The recoveries (n = 9) of loganic acid, 6′-O-β-D-glucopyranosyl
gentiopicroside, swertiamarine, gentiopicroside, gentiopicroside, isoorientin, and isovitexin were 100.9%, 99.4%, 101.0%, 105.7%,
103.1%, 98.4%, 104.2%. Conclusion This method is simple, accurate, and specific, and can be used for the determination of seven
constituents in the flowers of G. tibetica and G. dendrologi.
Key words: Gentiana tibetica King ex Hook; Gentiana dendrologi Marq.; HPLC; loganic acid; 6′-O-β-D-glucopyranosyl
gentiopicroside; swertiamarine; gentiopicroside; swertiamarin;, isoorientin; isovitexin

秦艽 Gentiana macrophylla Pall. 为龙胆科
（Gentianaceae）龙胆属 Gentiana L. 植物，其根秦艽
是我国重要的传统中药材，是治疗风湿关节炎、结
核病潮热、黄疸、皮疹、水肿及二便不通等证的主
要中药[1-5]。随着秦艽药用资源的开发，《中国药典》
2010年版收录的4种秦艽野生资源均处于濒危状态[6]。

收稿日期：2014-11-26
基金项目：西南民族大学 2014 级研究生“创新型科技项目”（CX2014SZ47）
作者简介：李荣娇（1988—），女，彝族，云南文山人，在读硕士，研究方向为天然药物化学。E-mail: cocojiao88@163.com
*通信作者 王晓玲（1969—），女，教授，博士，研究方向为天然药物化学。E-mail: wxl3232@sina.com
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《中国植物志》中记载了龙胆科龙胆属 Gentiana L.
秦艽组多种近缘非药典收载植物在地方临床用药中
被用作秦艽药材[7]。西藏秦艽 Gentiana tibetica King
ex Hook 和川西秦艽 Gentiana dendrologi Marq. 为
龙胆科龙胆属秦艽组药材，主要分布在高海拔的青
藏高原区。西藏秦艽的藏药名“解吉嘎保”，是西
藏特有品种[8]。西藏秦艽的花在传统藏药中被当
作清热、止痛的良药，用于治疗关节炎、肺结核
和肝炎[9]。经文献报道[10]和本课题组研究发现西
藏秦艽花和川西秦艽花主要含有大量黄酮、环烯
醚萜、裂环环烯醚萜、甾醇及挥发油，目前关于
西藏秦艽花和川西秦艽花的主要化学成分量研究
在国内外均未见文献报道。本实验采用 HPLC 法
对以上 2 种植物的主要化学成分进行测定，为这
些药用植物的质量标准建立提供理论依据。
1 材料与试剂
1.1 仪器
美国 Waters 高效液相色谱仪，Waters 2996 型
PDA 检测器，Empower2 色谱工作站；0.45 μm 微孔
滤膜（天津市色谱科学技术公司）；电子分析天平
[XP6，梅特勒-托利多（上海）有限公司]；电子天
平（AE 240，瑞士 Metter Toledo 公司）；电热恒温
鼓风干燥箱（GHG-9240A 型，上海精密实验设备有
限公司）；超声波清洗器（KQ-250B，昆山市超声仪
器有限公司）；旋转蒸发仪（SENCO，上海申生科
技公司）。
1.2 试剂
乙腈（色谱纯，美国 Sigma 试剂公司）；甲醇
（色谱纯，Sigma 试剂公司）；无水乙醇，冰醋酸为
国产分析级。
1.3 药品
对照品落干酸、獐芽菜苷、獐芽菜苦苷由成都
普思生物科技有限公司赠予，经面积归一化法测定，
质量分数均大于 99.0%；龙胆苦苷、6′-O-β-D-葡萄
糖基龙胆苦苷、异荭草苷及异牡荆黄素均为自行分
离精制，并经 UV、IR、1H-NMR、13C-NMR 鉴定
结构，HPLC 检测，面积归一化法计算质量分数均
大于 98%。乙腈、冰醋酸均为色谱纯，水为乐百氏
纯净水并经 0.45 μm 微孔滤膜滤过，西藏秦艽花分
别采自西藏墨竹工卡和林芝县，川西秦艽花采自四
川阿坝藏族自治州，经西藏自治区药检所达瓦卓玛
副主任药师鉴定为龙胆科龙胆属西藏秦艽 Gentiana
tibetica King ex Hook 和 川 西 秦 艽 Gentiana
dendrologi Marq.，在 50 ℃的电热恒温鼓风干燥箱
中烘干至质量恒定，粉末过 50 目筛。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
采用 Agilent Zorbax ODS（150 mm×4.6 mm，5
μm）色谱柱，流动相为乙腈（A）-0.4%醋酸水溶液
（B），梯度洗脱：0～13 min，5%～10% A；13～48
min，10%～12.5% A；48～70 min，12.5%～20% A；
70～75 min，20% A；75～80 min，20%～15% A；
80～85 min，15% A。体积流量为 2 mL/min；柱温
30 ℃；检测波长 254 nm。在此条件下，对照品及
样品的色谱图见图 1。理论塔板数按落干酸峰计算
不低于 3 500，按龙胆苦苷峰计算不低于 3 000。

1-落干酸 2-6′-O-β-D-葡萄糖基龙胆苦苷 3-獐芽菜苦苷 4-龙
胆苦苷 5-獐芽菜苷 6-异荭草苷 7-异牡荆黄素
1-loganic acid 2-6′-O-β-D-glucopyranosyl gentiopicroside 3-swertiamarine
4-gentiopicroside 5-swertiamarin 6-isoorientin 7-isovitexin
图 1 混合对照品 (A)、西藏秦艽花 (B) 和川西秦艽花 (C)
的 HPLC 图谱
Fig. 1 HPLC of mixed reference substances (A), G. tibetica
(B), and G. dendrologi (C)
2.2 混合对照品溶液制备
精密称取落干酸 1.133 mg、6′-O-β-D-葡萄糖基
龙胆苦苷 3.396 mg、獐芽菜苦苷 1.103 mg、龙胆苦
苷 7.378 mg、獐芽菜苷 1.001 mg、异荭草苷 2.177 mg
及异牡荆黄素 1.384 mg，置于 10 mL 量瓶中，70%
甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，即得质量浓度分别为
113.3、339.6、110.3、737.8、100.1、217.7、138.4 μg/mL
的混合对照品溶液。
2.3 供试品溶液制备
称取西藏秦艽花和川西秦艽花样品粉末约 0.5
g，精密称定，置具塞三角瓶中，精密加入甲醇 20
1 2
3
4
5 6 7
A
0 10 20 30 40 50 60 70 80
t/min
1
2
3
4
5 6 7
B
1
32
4
5 6 7
C
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mL，超声处理（500 W，40 kHz）0.5 h，放置至室
温，滤过，滤液用甲醇定容至 25 mL，摇匀，用 0.45
μm 滤膜滤过，即得。
2.4 线性关系考察
精密吸取混合对照品溶液 2、4、8、12、16、
20 μL 分别注入高效液相色谱仪，测定色谱峰的峰
面积以进样量（X）对峰面积积分值（Y）进行线
性回归，绘制标准曲线。得到回归方程落干酸为
Y＝728 215.693 X－39 430.753，R2＝0.999 9；
6′-O-β-D-葡萄糖基龙胆苦苷 Y＝258 956.789 X－
44 700.685，R2＝0.999 7；獐芽菜苦苷 Y＝1 992 439.801
X－122 350.907，R2＝0.999 8；龙胆苦苷 Y＝2 295 849.790
X－643 067.167，R2＝0.999 9；獐芽菜苷 Y＝4 092 283.493
X－289 857.110，R2＝0.999 6；异荭草苷 Y＝
984 149.202 X－206 543.436，R2＝0.999 2；异牡
荆黄素 Y＝2 565 237.344 X－278 714.452，R2＝
0.999 3。结果表明落干酸在 0.228～2.280 μg，
6′-O-β-D-葡萄糖基龙胆苦苷在 0.680～6.800 μg，
獐芽菜苦苷在 0.220～ 2.20 μg，龙胆苦苷在
1.476～14.760 μg，獐芽菜苷在 0.200～2.000 μg，
异荭草苷在 0.436～4.360 μg，异牡荆黄素在
0.276～2.760 μg 内呈良好的线性关系。
2.5 精密度试验
取上述同一混合对照品溶液按上述色谱条件重
复 5 次，每次 10 μL，样品峰面积 RSD 分别为落干
酸 1.08%、6′-O-β-D-葡萄糖基龙胆苦苷 1.73%、獐
芽菜苦苷 1.25%、龙胆苦苷 0.42%、獐芽菜苷 0.57%、
异荭草苷 1.29%及异牡荆黄素 1.57%。
2.6 重复性试验
取同一批样品西藏秦艽花（墨竹工卡）5 份，
制备供试品溶液，进样，每次 10 μL，样品质量
分数 RSD 分别为落干酸 1.23%、6′-O-β-D-葡萄糖
基龙胆苦苷 1.24%、獐芽菜苦苷 0.72%、龙胆苦
苷 0.52%、獐芽菜苷 0.78%、异荭草苷 1.58%及
异牡荆黄素 1.04%，结果表明，本方法的重复性
良好。
2.7 稳定性试验
取一份样品西藏秦艽花（墨竹工卡）制备供试
品溶液，分别在 0、6、16、24、48、72 h 进样分析，
每次进样 10 μL，记录峰面积，结果落干酸、
6′-O-β-D-葡萄糖基龙胆苦苷、獐芽菜苦苷、龙胆苦
苷、獐芽菜苷、异荭草苷及异牡荆黄素峰面积的
RSD 分别为 1.03%、1.53%、0.43%、0.75%、1.03%、
1.29%、1.13%。
2.8 加样回收率试验
精密称取已测定的样品西藏秦艽花（墨竹工
卡）约 0.5 g，共 9 份，每 3 份分别精密加入高、
中、低 3 个质量浓度的混合对照品溶液适量，按
“2.3”项下方法制备供试品溶液，每次进样 10 μL，
计算加样回收率，得结果落干酸、6′-O-β-D-葡萄
糖基龙胆苦苷、獐芽菜苦苷、龙胆苦苷、獐芽菜苷、
异荭草苷及异牡荆黄素的平均回收率分别为
100.9%、99.4%、101.0%、105.7%、103.1%、98.4%、
104.2%，RSD 分别为 0.51%、0.94%、0.50%、0.40%、
0.93%、0.64%、0.87%。
2.9 样品测定
分别精密称取西藏秦艽花（墨竹工卡、林芝）
与川西秦艽花（阿坝）约 0.5 g，按供试品制备方法
进行制备。每个样品平行 3 份。进样，每次 10 μL，
得到落干酸、6′-O-β-D-葡萄糖基龙胆苦苷、獐芽菜
苦苷、龙胆苦苷、獐芽菜苷、异荭草苷及异牡荆黄
素的峰面积值，计算质量分数结果见表 1。
表 1 西藏秦艽花和川西秦艽花中 7 种化学成分的测定结果 (n = 3)
Table 1 Determination of seven chemical components in flowers of G. tibetica and G. dendrologi (n = 3)
质量分数/% 样品
落干酸 6′-O-β-D-葡萄糖基龙胆苦苷 獐芽菜苦苷 龙胆苦苷 獐芽菜苷 异荭草苷 异牡荆黄素
西藏秦艽花（墨竹工卡） 1.95 1.27 1.22 6.79 0.41 4.10 0.29
西藏秦艽花（林芝） 1.92 0.81 0.66 2.98 0.52 1.39 0.24
川西秦艽花（阿坝） 1.97 0.87 0.39 4.16 0.36 1.52 0.16

3 讨论
本研究建立了 2 种秦艽花中 7 种化合物的
HPLC 定量测定方法，该方法分离度好，结果准确，
具有良好的重复性和稳定性。采用该方法对 3 批秦
艽花药材进行了定量测定。
3.1 检测波长的确定
对 7 种化合物甲醇溶液进行全波长扫描，落干
酸、6′-O-β-D-葡萄糖基龙胆苦苷、獐芽菜苦苷、龙
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胆苦苷、獐芽菜苷、异荭草苷及异牡荆黄素的最大
吸收波长分别是 240 nm；250、275 nm；250 nm；
240 nm；250、275 nm；270、348 nm；270、332 nm。
结果在 254 nm 处测定可兼顾 7 个成分最大吸收，
且色谱图基线平稳，色谱峰峰形较好。故确定 254
nm 作为本实验的检测波长。
3.2 提取方法和色谱条件的优化
Lin 等[11]已经证实甲醇超声提取率高且出峰较
好；贾娜等[12]通过实验表明落干酸、龙胆苦苷采用
100%甲醇 20 mL 较其他溶剂效率更高，且提取 30
min 后落干酸、龙胆苦苷提取率趋于稳定，这均与
《中国药典》2010 年版相符，所以采用甲醇超声提
取法。选择色谱条件时，实验过程中选择了甲醇-
水、甲醇-0.1%乙酸水溶液、乙腈-水、乙腈-0.1%乙
酸水溶液、乙腈-0.4%乙酸水溶液等流动相，从分离
情况和出峰稳定性等综合分析选择乙腈-0.4%乙酸
水溶液为流动相较为合适。
3.3 2 种秦艽花结果比较
西藏秦艽花（墨竹工卡、林芝）与川西秦艽花
（阿坝）中龙胆苦苷均为 7 种成分中量最高的化合
物，质量分数为 2.98%～6.79%，龙胆苦苷占 7 种主
要化合物质量分数总和的 35.0%～44.1%，落干酸占
7 种化合物质量分数总和的 12.2%～22.5%，2 种黄
酮占 7 种化合物质量分数总和的 17.8%～27.4%。
《中国药典》2010 年版规定按秦艽干燥品计算，含
龙胆苦苷和落干酸的总量不得少于 2.5%[13]。可见，
西藏秦艽花与川西秦艽花中龙胆苦苷和落干酸的总
量均远远高于《中国药典》要求，并且墨竹工卡的
西藏秦艽花中 7 种化合物量均大于林芝的西藏秦艽
花和川西秦艽花。
西藏秦艽花和川西秦艽花为非《中国药典》收
载品种药材，主要分布在西南地区，在西藏、四川
等地资源丰富，西藏秦艽花和川西秦艽花为新的药
用部位，若能用它们代替《中国药典》收载品种秦
艽的根，这将是解决《中国药典》收载秦艽野生资
源均处于濒危状态最直接、最有效的办法。然而迫
在眉睫的是对西藏秦艽花和川西秦艽花的药理作用
进行深入研究，最终确定其能否作为秦艽替代品。
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