全 文 ：中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 43 卷 第 10 期 2012 年 10 月

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镇痛灵方分煎与合煎液中有效成分的比较研究
郑 琴，郝伟伟，杨 明*，王木生，乐志艳，陆浩伟，胡鹏翼
江西中医学院 现代中药制剂教育部重点实验室，江西 南昌 330004
摘 要：目的 考察合煎、分煎镇痛灵方提取液中乌头总生物碱、芍药苷及胡椒碱的变化。方法 采用紫外-可见分光光度
（UV-Vis）法测定乌头总生物碱；采用 Hypersil ODS2 C18柱，流动相分别以乙腈-0.1%磷酸水溶液（15∶85），在 230 nm 波
长处测定芍药苷；甲醇-水（75∶25），在 328 nm 波长处测定胡椒碱。结果 线性范围分别为乌头总生物碱 3.28～29.80 μg/mL、
芍药苷 0.408～40.800 μg/mL、胡椒碱 1.5～9.0 μg/mL，合煎液中乌头总生物碱和芍药苷的量明显高于分煎液，合煎液和分煎
液中胡椒碱的量无明显差别。结论 镇痛灵方合煎与分煎对有效成分的溶出有影响。
关键词：镇痛灵方；合煎；分煎；乌头总生物碱；芍药苷；胡椒碱
中图分类号：R284.2；R286.02 文献标志码：A 文章编号：0253 - 2670(2012)10 - 1957 - 04
Comparison on active ingredients in Zhentongling Prescription
of different decoctions
ZHENG Qin, HAO Wei-wei, YANG Ming, WANG Mu-sheng, LE Zhi-yan, LU Hao-wei, HU Peng-yi
Key Laboratory of Modern Preparation of Chinese Materia Medica, Ministry of Education, Jiangxi University of Traditional
Chinese Medicine, Nanchang 330004, China
Key words: Zhentongling Prescription (ZTLP); combined decoctions; separated decoctions; Aconitum total alkaloids; paeoniflorin;
pipperine

临床经验方镇痛灵方是根据民间验方仲氏止痛
散结合临床实践，予以加减化裁而成的经验方，具
有温通散寒、活血行气、化瘀止痛作用，主要用于
乳痛、痛经、腹部及肢体疼痛、术后疼痛等的治疗。
药理研究表明，该方对大鼠实验性糖尿病具有降血
糖作用，作用机制可能与其促进四氧嘧啶引起的大
鼠胰岛 β 细胞损伤的修复和胰岛素的分泌，增加肝
糖元合成，改善耐糖功能有关[1]。该方由制川乌、
胡椒、白芍、延胡索 4 味药组成，方中以制川乌祛
风除湿、温经止痛为君药；胡椒辛、大温，温中祛
痰、宣散下气；白芍苦酸、微寒，养血柔肝、缓中
止痛、敛阴收汗，并能抑制其他两味之温热性；二
者同为方中臣药。诸药合用，既有温经散寒、活血
行气止痛之效，又无过于辛温而伤正之弊。
制川乌为川乌的炮制品，含有的乌头类生物碱
既是药效成分也是毒性成分[2]，其有效剂量与中毒
剂量接近，用量不慎，易引起中毒现象[3]，因此控
制该类成分的定量限度尤为重要。研究表明白芍具
有良好的抗炎、镇痛功效，其有效部位主要为糖苷
类物质包括芍药苷、羟基芍药苷、芍药花苷、芍药
内酯苷等，统称为总苷。其中芍药苷占总苷量的 90%
以上，是白芍的主要有效成分[4]。胡椒碱是胡椒的
主要活性成分，其化学结构属于桂皮酰胺类，已有
研究证明这类化合物具有镇静、催眠、抗惊厥、骨
骼肌松弛和抗抑郁等多方面的作用[5]。
中药成分复杂，不同成分在共煎过程中可能产
生多种相互作用，使得共煎时的成分量和效应并不
是分煎时各成分的简单加和。本实验以镇痛灵方中
的有效成分乌头总生物碱、芍药苷及胡椒碱为考察
指标，比较分煎与合煎提取液中有效成分溶出的差

收稿日期：2012-01-20
基金项目：国家自然科学基金资助项目（81060347）；江西省教育厅科学技术研究项目（GJJ08333）
作者简介：郑 琴（1973—），女，江西九江人，副教授，博士，主要从事中药新型给药系统研究。
Tel: (0791)87119010 18979102599 E-mail: zhengqin912006@163.com
*通讯作者 杨 明 Tel: (0791)87118658 13870608983 E-mail: yangming16@126.com
网络出版时间：2012-09-07 网络出版地址：http://www.cnki.net/kcms/detail/12.1108.R.20120907.1018.002.html
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异，以期阐明该方合煎、分煎对活性成分的影响，
从而为合理选择提取方法提供依据。
1 仪器与材料
Agilent 1200 液相色谱仪（美国 Agilent 公司），
包括四元梯度泵、在线脱气机、柱温箱、G1314B
VWD 紫外检测器，UV—2102 紫外分光光度计（美
国 Unico 公司），PHS—3 C 精密 pH 计（上海精密
仪器科技有限公司雷磁仪器厂），BS124S 电子分析
天平（赛多利斯科学仪器有限公司）。
乌头碱对照品（批号 110720-200410）、芍药苷
对照品（批号 110736-200629）、胡椒碱对照品（批
号 0775-200203）均购自中国药品生物制品检定所。
制川乌药材购自江油恒源药业集团有限公司，产自
四川，批号 20080930，白芍、胡椒等药材购自黄庆
仁大药房，产地分别为浙江和海南，批号分别为
20080925、20070730，经江西中医学院现代中药制
剂教育部重点实验室刘荣华教授鉴定分别为毛茛科
植物乌头 Aconitum carmichaeli Debx. 的干燥母根
炮制品、毛茛科植物芍药 Paeonia lactiflora Pall. 的
干燥根，以及胡椒科植物胡椒 Piper nigrum L. 的干
燥近成熟或成熟果实。乙腈、甲醇为色谱纯（江苏
汉邦），双蒸水，其余试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 样品的制备
2.1.1 合煎液的制备 按镇痛灵方处方及比例称取
1/10 处方量的各味药中粉共 137 g，加 6 倍量 65%
乙醇，回流提取 2 h，共 3 次，合并 3 次提取液，滤
过，浓缩至一定体积。
2.1.2 分煎液的制备 按镇痛灵方处方及比例称取
1/10 处方量的各味药中粉共 137 g，由于川乌、白
芍两药配伍具有增效减毒的作用，分煎液中将制川
乌与白芍药材作为一个单元提取，胡椒和另一味药
材则分别单独提取，依上法分别加 6 倍量 65%乙醇
回流提取 2 h，共 3 次，制备各单味药材的煎液，合
并各煎液，浓缩至一定体积。
2.1.3 阴性样品的制备 分别按上述方法制备缺制
川乌、缺白芍、缺胡椒的阴性对照液。
2.2 有效成分的定量测定
2.2.1 乌头总生物碱最大吸收波长的选择[6] 分别
取乌头碱对照品溶液、合煎液和制川乌阴性提取
液，按照“2.2.3”和“2.2.4”项方法分别制备对照
品溶液、供试品溶液和阴性样品溶液，照 UV-Vis
法在 190～760 nm 进行全波长扫描，确定最大吸收
波长为 416 nm。
2.2.2 色谱条件
（1）芍药苷[7]：十八烷基键合硅胶柱 Hypersil
ODS2 C18 柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），流动相为
乙腈-0.1%磷酸水（15∶85），柱温 30 ℃，检测波
长 230 nm，体积流量 1.0 mL/min。
（2）胡椒碱：十八烷基键合硅胶柱 Hypersil
ODS2 C18 柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），流动相为
甲醇-水（75∶25），柱温 25 ℃，检测波长 328 nm，
体积流量 1.0 mL/min。
2.2.3 对照品溶液的制备 精密称取 60 ℃减压干
燥的乌头碱、芍药苷、胡椒碱对照品适量，分别加
0.01 mol/L 盐酸溶液、50%甲醇、无水乙醇适量使
溶解，摇匀，分别配制成质量浓度为乌头碱 149
μg/mL、芍药苷 40.80 μg/mL、胡椒碱 15 μg/mL 的 3
种对照品溶液。
2.2.4 供试品溶液的制备 分别精密吸取合煎液与
分煎液及缺制川乌阴性溶液各 10 mL，低温蒸干，
残渣用 10 mL 蒸馏水溶解，加氨试液调节 pH 值至
10～11，用氯仿萃取 4 次，每次 10 mL，合并氯仿
液，低温蒸干，残渣加 0.01 mol/L 盐酸溶液，分次
溶解，并转入 25 mL 量瓶中，稀释至刻度，摇匀，
得供试品 1、2 及缺制川乌阴性溶液。精密量取供试
品 1、2 溶液与缺制川乌阴性溶液各 2 mL，分别置
分液漏斗中，各精密加醋酸-醋酸钠缓冲液 10 mL，
溴甲酚绿液 2 mL，氯仿 10 mL，振摇 3 min，静置，
分取氯仿液，依法制备供试品 3、4，供乌头总生物
碱的测定。
精密吸取合煎液与分煎液各 1 mL 置 25 mL 量
瓶，加 65%乙醇定容至刻度，4 000 r/min 离心 5
min，上清液经 0.45 μm 滤膜滤过，得供试品 5、6，
供芍药苷和胡椒碱测定用。
2.2.5 专属性考察 分别吸取上述对照品溶液、供
试品溶液、阴性对照品溶液，按上述色谱条件测定，
芍药苷、胡椒碱出峰位置处，阴性对照液均无干扰，
样品色谱图见图 1、2。
2.2.6 线性关系考察 精密量取 0.00、0.25、0.50、
0.75、1.00、1.50、2.00 mL 乌头碱对照品溶液，分
别置分液漏斗中，依次加入 0.01 mol/L 盐酸溶液
2.00、1.75、1.50、1.25、1.00、0.50、0.00 mL，各
精密加醋酸-醋酸钠缓冲液 10 mL，溴甲酚绿液 2
mL，氯仿 10 mL，振摇 3 min，静置，分取氯仿液，
按 UV-Vis 法（《中国药典》2010 年版附录 V）在
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*芍药苷
*paeoniflorin

图 1 芍药苷对照品 (A)、镇痛灵方合煎样品 (B)、阴性样品 (C) 的 HPLC 图
Fig. 1 HPLC chromatograms of paeoniflorin reference substance (A), combined decoction
of ZTLP sample (B), and negative sample (C)




*胡椒碱
*piperine
图 2 胡椒碱对照品 (A)、镇痛灵方合煎样品 (B)、阴性样品 (C) 的 HPLC 图
Fig. 2 HPLC chromatograms of piperine reference substance (A), combined decoction
of ZTLP sample (B), and negative sample (C)

416 nm 波长处测定吸光度（A）值。以质量浓度为
横坐标（X），A 值为纵坐标（Y），进行线性回归，
得回归方程 Y＝0.667 8 X＋0.115，r＝0.999 8，表明
乌头总生物碱在 3.28～29.8 μg/mL 线性关系良好。
精密吸取芍药苷对照品溶液 0.1、0.2、0.4、0.6、
0.8、1.0 mL 置 1 mL 棕色量瓶中，用 50%甲醇溶液
定容至刻度，摇匀，制得 6 个不同质量浓度的对照
品溶液。取上述质量浓度对照品溶液，按“2.2.2”
项下色谱条件分别进样 10 μL 分析。以芍药苷的质
量浓度为横坐标（X），平均峰面积值为纵坐标（Y）
进行线性回归，得回归方程 Y＝25.924 X－3.241 4，
r＝0.999 5；表明芍药苷在 0.408～40.800 μg/mL 线
性关系良好。
精密吸取胡椒碱对照品溶液 1、2、3、4、5、6
mL 置 10 mL 量瓶中，用无水乙醇定容至刻度摇匀，
制备 1.5、3.0、4.5、6.0、7.5、9.0 μg/mL 对照品溶
液。分别精密吸取各对照品溶液，按“2.2.2”项下
色谱条件分别进样 10 μL 进行分析。以胡椒碱的质
量浓度为横坐标（X），平均峰面积值为纵坐标（Y），
进行线性回归，得回归方程 Y＝9 027.9 X－36.747，
r＝0.999 6，表明胡椒碱在 1.5～9.0 μg/mL 线性关系
良好。
2.2.7 精密度试验 精密量取 0.149 mg/mL 乌头碱
对照品 1 mL，加 0.01 mol/L 盐酸溶液 1 mL，按
“2.2.6”项下方法制备乌头碱对照品溶液，在 416 nm
处连续测定 6 次 A 值，结果乌头碱 A 值的 RSD 为
0.208%。
分别精密吸取质量浓度为芍药苷 16.32 μg/mL、
胡椒碱 7.5 μg/mL 的对照品溶液 10 μL，重复进样 6
次，按色谱条件测定峰面积值，结果芍药苷峰面积
值的 RSD 为 1.55%，胡椒碱峰面积值的 RSD 为
0.944%。
2.2.8 稳定性试验 精密吸取供试品 3 溶液，在显
色、萃取后每隔 30 min 测定 1 次 A 值，连续测定 7
次，RSD 为 0.69%，表明样品显色后 3 h 内稳定性
良好。
精密吸取供试品 5 溶液，分别于 0、2、4、6、
8、10、12 h 进样 1 次，测定峰面积，结果芍药苷峰
面积值的 RSD 为 1.82%，胡椒碱峰面积值的 RSD
为 0.952%，表明供试品溶液在 12 h 内稳定。
2.2.9 重复性试验 取同一批分煎液 6 份，按
“2.2.4”项下方法处理，制得供试品溶液，分别测定
A 值和峰面积，计算得乌头总生物碱、芍药苷、胡
椒碱质量分数的 RSD 分别为 1.61%、3.11%、0.99%。
*
*
0 10 20 0 10 20 0 10 20
t / min
A B C
* *
A B C
0 4 8 12 0 4 8 12 0 4 8 12
t / min
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2.2.10 加样回收率试验 精密吸取分煎液（含乌头
总生物碱 0.174%、芍药苷 0.045%、胡椒碱 0.162%）
3 组每组 6 份，其中一组取 5 mL，剩余两组取 0.5
mL，分别精确加入 1.29 mg/mL 乌头碱对照品溶液
1 mL、31.03 μg/mL 芍药苷对照品溶液 1 mL、101.12
μg/mL 胡椒碱对照品溶液 1 mL，按“2.2.4”项下方
法处理，制得供试品溶液，分别测定 A 值和峰面积，
计算回收率和 RSD。结果乌头总生物碱平均回收率
为 100.29%，RSD 为 1.76%；芍药苷平均回收率为
97.13%，RSD 为 1.43%；胡椒碱平均回收率为
96.65%，RSD 为 1.22%。
2.2.11 样品测定 按“2.2.4”项下方法制备分煎、
合煎液供试品溶液，按照上述测定方法，平行测定
3 份镇痛灵方处方中有效成分的量，计算煎出率，结
果见表 1。结果表明，合煎提取的乌头总生物碱与芍
药苷的量明显高于分煎，而 2 种提取方法胡椒碱的
量差别不大。
煎出率＝提取液中某种有效成分的总质量/处方中总生
药材量

表 1 镇痛灵方不同煎液中有效成分的测定 (n＝3)
Table 1 Determination of active components
in ZTLP of different decoctions (n＝3)
煎出率/% 提取方法
乌头总生物碱 芍药苷 胡椒碱
合煎 0.353 0.060 0.164
分煎 0.186 0.045 0.163

3 讨论
镇痛灵方中制川乌为君药，在处方中占较大比
例，其主要成分是乌头总生物碱，既是有效成分也
是毒性成分，需要严格控制[3]。本实验采用酸性染
料显色后，再用离子对萃取，UV-Vis 法测定乌头总
生物碱，其原理是生物碱与酸性染料形成离子缔合
物，经萃取后进行比色测定。在操作过程中，试剂、
溶剂的用量、溶液的 pH 值、反应时间、温度等对
反应条件有较大影响，应严格控制。
中药成分复杂，不同成分在共煎过程中可能产
生多种相互作用，使得共煎时的成分量和效应并不
是分煎时各成分的简单加和。实验结果表明，镇痛
灵方采用合煎提取方式，有效成分的溶出总体高于
单煎提取，故此方的最佳提取方式确定为合煎，为
镇痛灵方的进一步开发提供依据。
参考文献
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