全 文 ：中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 43 卷 第 5 期 2012 年 5 月

·891·
蟾酥缓释注射液的制备及其局部麻醉作用研究
吴帅成，宋 舟，张 翠，秦倩倩，付本懂，申海清，韦旭斌*
吉林大学畜牧兽医学院，吉林 长春 130062
摘 要：目的 以泊洛沙姆 407 作为载体材料制备蟾酥缓释注射液，并评价其在体内局部麻醉作用效果。方法 采用冷溶法
制备蟾酥缓释注射液，以胶凝温度为指标筛选蟾酥缓释注射液最佳处方，采用豚鼠皮丘模型比较蟾酥缓释注射液和蟾酥溶液
局部麻醉作用时间。结果 蟾酥缓释注射液的最佳处方是泊洛沙姆 407 15.5%、乙醇 10%、蟾酥提取物 0.5%，胶凝温度在
33 ℃，体内局部麻醉作用时间可达 6～7 h，而蟾酥溶液麻醉作用时间仅为 2～3 h。结论 蟾酥缓释注射液是一种长效制剂。
关键词：蟾酥缓释注射液；泊洛沙姆 407；局部麻醉；冷溶法；豚鼠皮丘模型；缓释
中图分类号：R284.2 文献标志码：A 文章编号：0253 - 2670(2012)05 - 0891 - 04
Preparation of sustained-release injection of Venenum Bufonis and its local
anesthetic activity
WU Shuai-cheng, SONG Zhou, ZHANG Cui, QIN Qian-qian, FU Ben-dong, SHEN Hai-qing, WEI Xu-bin
College of Animal Science and Veterinary Medicine, Jilin University, Changchun 130062, China
Abstract: Objective To prepare the sustained-release injection of Venenum Bufonis using Poloxamer 407 as the carrier material and
evaluate its local anesthetic activity in vivo. Methods The sustained-release injection of Venenum Bufonis was prepared through
cold-dissolving and the optimal prescription was screened by determining gelation temperature. With the guinea-pig cutaneous wheal
model, the local anesthetic time of the sustained-release injection was compared with the solution of Venenum Bufonis. Results The
optimal prescription was composed of 15.5% Poloxamer 407, 10% alcohol, and 0.5% Venenum Bufonis extracts at the gelation
temperature of 33 ℃. In vivo study, the local anesthetic effect of the sustained-release injection of Venenum Dufonis lasted for 6—7 h
whereas the solution of Venenum Bufonis only lasted for 2—3 h. Conclusion The sustained-release injection of Venenum Bufonis is
proved to be a prolonged action preparation.
Key words: sustained-release injection of Venenum Bufonis; Poloxamer 407; local anaesthesia; cold-dissolving method; guinea-pig
cutaneous wheal model; sustained-release

蟾酥是蟾蜍科动物中华大蟾蜍 Bufo bufo
gargarizans Cantor 或黑眶蟾蜍 B. melanostictus
Schneider 的耳后腺及皮肤所分泌的白色浆液，经收
集加工而成的干燥品，具有解毒消肿、止痛开窍之
功效。药理学实验研究证明，蟾酥具有局部麻醉、
抗炎、抗肿瘤等多种药理作用[1-2]，临床证实其对关
节炎、癌症疼痛等疗效显著，但因关节炎和癌症疼
痛为慢性疼痛，需要多次注射给药，病人依从性差。
为了提高治疗效果和病人顺从性，有必要研究蟾酥
提取物的长效缓释制剂。温度敏感原位凝胶是一种
新型的药物传递系统，在给药前为液态，注射后可
填充于组织间隙，并迅速变成半固体凝胶，具有制
备简单、使用方便和控制释药性能好等优点，是目
前药剂学领域的热点。其中泊洛沙姆 407 是一种非
离子表面活性剂，具有表面活性而无免疫原性，低
毒，易代谢，是抗生素、麻醉药、抗炎药、抗肿瘤
和蛋白质大分子多肽类药物的理想控缓释载体，也
是目前研究最深入的制备温度敏感原位凝胶的高分
子辅料[3]。本研究采用泊洛沙姆 407 为载体制备蟾
酥缓释注射液，并采用豚鼠皮丘模型研究蟾酥缓释
注射液作用效果，为进一步开发蟾酥穴位缓释注射
剂提供理论依据。

收稿日期：2011-10-06
作者简介：吴帅成（1986—），男，山东聊城人，硕士生，从事中兽药新型制剂的研究。E-mail: wushuaicheng10@163.com
*通讯作者 韦旭斌 E-mail: weixub@163.com
网络出版时间：2012-04-09 网络出版地址：http://www.cnki.net/kcms/detail/12.1108.R.20120409.0859.004.html
中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 43 卷 第 5 期 2012 年 5 月

·892·
1 仪器与材料
85—2 型恒温磁力搅拌器（上海司乐仪器厂），
DL2120A 型超声波清洗器（上海之信仪器有限公
司），BSA124S 型电子分析天平（德国 Sartorius 公
司），LSC—218C 型陈列柜（中国星星集团有限
公司）。
豚鼠，雄雌各半，250～300 g，购于吉林大学
实验动物中心，许可证号 SCAK-（吉）2003-0001。
蟾酥提取物（自制，经 95%乙醇连续 3 次冷浸
提取 48 h 后干燥制得，其主要成分为蟾毒灵 7.1%、
华蟾酥毒基 9.13%、酯蟾毒配基 11.7%）；泊洛沙姆
407（批号 20100201）购于 BASF 公司；乙醇（批
号 20100311）为 95%医用酒精，购于天津市八一制
药厂；水为注射用水，购于吉林大学五星药厂；其
他试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 蟾酥缓释注射液的制备
2.1.1 基质的筛选 泊洛沙姆 407 具有受热反向胶
凝的性质，在较低温度时为澄清溶液，黏度小，具
有良好的流动性，可方便注射；但升高到一定温度
后，黏度可迅速增加，流动性迅速降低，很快转变
成半固体透明凝胶，从而发挥缓释作用。因此确定
以泊洛沙姆 407 为基质。
2.1.2 胶凝温度的测定 参照文献方法[4]，在西林
瓶中放入待测溶液和磁力搅拌子，插入温度计。将
西林瓶放入冰水浴中，开启电磁搅拌器，使水浴温
度持续缓慢升高。磁力搅拌子完全停止转动的温度
即为胶凝温度，平行测定 3 次，取平均值。
2.1.3 处方设计
（1）助溶剂的选择：乙醇有助于蟾酥提取物的
溶解，提高注射液澄明度，而乙醇体积分数超过 10%
时，肌肉注射有疼痛感。因此确定乙醇的体积分数
为 10%，作为助溶剂。
（2）药物质量分数的确定：采用冷溶法[5]，以
注射用水为介质，加入泊洛沙姆 407 15%和乙醇
10%，加入不同量的蟾酥提取物，搅拌使其分散均
匀，置于 4 ℃冰箱中保存直至完全溶解，经 0.22 μm
滤膜滤过除菌，从而得到药物质量分数分别为
0.1%、0.5%、1.0%的含药凝胶，放置于 4 ℃冰箱保
存 7 d，观察凝胶性状，结果见表 1。1.0%含药凝胶
在 4 ℃保存 7 d 后，凝胶中有药物析出，而 0.1%、
0.5%含药凝胶未见药物析出，凝胶性状良好。此外，
注射剂高载药量，有助于减少给药剂量，提高患者
表 1 药物质量分数对凝胶形状的影响
Table 1 Effect of drug contents on gel properties
药物质量分数 色泽 澄明度 不溶性颗粒
0.1% 浅黄 澄清 未见
0.5% 淡黄 澄清 未见
1.0% 深黄 浑浊 可见

顺应性。因此确定药物质量分数为 0.5%。
（3）处方各成分对温度敏感凝胶温度的影响：
采用冷溶法[5]，以注射用水为介质，加入不同量的
泊洛沙姆搅拌使其分散均匀，置于 4 ℃冰箱中保存
直至完全溶解，经 0.22 μm 滤膜滤过除菌，从而得
到不同质量浓度泊洛沙姆 407 的空白凝胶。在凝胶
处方中，加入 10%乙醇，或再加入 0.5%药物后，即
可得到含有 10%乙醇的空白凝胶或含药凝胶。按
“2.1.2”项的方法，测定空白凝胶以及含有 10%乙
醇的空白凝胶和含药凝胶的胶凝温度，结果见表
2。空白凝胶的胶凝温度随着泊洛沙姆 407 质量分
数的升高，胶凝温度逐渐降低。处方中加入 10%
乙醇后，胶凝温度明显升高，而再加入 0.5%药物
后，胶凝温度有所降低，但对温度敏感凝胶的整体
变化趋势不变。

表 2 处方各成分对温度敏感凝胶胶凝温度的影响 (n＝3)
Table 2 Effects of each composition in prescription
on gelation temperature of thermosensitive
gel (n＝3)
凝胶种类 胶凝温度 / ℃
泊洛沙姆 407 15% 35.7±0.4
16% 28.4±0.2
17% 21.5±0.3
乙醇 10%＋泊洛沙姆 407 15% 37.2.±0.2
16% 29.4±0.3
17% 22.7±0.2
药物 0.5%＋乙醇 10%＋泊洛沙姆 407 15% 36.6±0.3
16% 29.2±0.4
17% 22.8±0.3

（4）泊洛沙姆 407 质量分数的确定：采用冷溶
法[5]，以注射用水为介质，加入 10%乙醇和 0.5%蟾
酥提取物，分别加入不同质量分数的泊洛沙姆 407，
搅拌使其分散均匀，置于 4 ℃冰箱中保存直至完全
溶解，经 0.22 μm 滤膜滤过除菌，从而得到不同质
量浓度泊洛沙姆 407 的含药凝胶，测定其胶凝温度。
结果表明，蟾酥缓释注射液的胶凝温度具有泊洛沙
中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 43 卷 第 5 期 2012 年 5 月

·893·
姆 407 质量浓度依赖性，随着泊洛沙姆 407 质量浓
度增加，胶凝温度下降。泊洛沙姆 407 质量分数为
15%、16%、17%、18%，在 37 ℃条件下能形成凝
胶。适宜的胶凝温度对于温度敏感制剂的应用具有
很重要的意义。调节胶凝温度要从使用方便和载体
胶凝能力综合考虑。一方面温敏凝胶制剂在体外必
须具有良好的流动性，可以方便注射；另一方面温
度敏感凝胶要在体温作用下可以迅速形成凝胶，胶
凝温度一定要低于体温，但是若胶凝温度过低，则
注射不便，另外低温对组织会产生刺激，造成顺应
性不佳。鉴于人体正常温度在 36～37 ℃，理想的
胶凝温度在 33 ℃左右，因此蟾酥缓释注射液的泊
洛沙姆 407 质量分数在 15%～16%，见表 3。

表 3 泊洛沙姆 407 质量分数对胶凝温度的影响
Table 3 Effect of Poloxamer 407 contents
on gelation temperature
泊洛沙姆 407 胶凝温度 / ℃ 泊洛沙姆 407 胶凝温度 / ℃
15% 36.8±0.3 17% 27.0±0.3
16% 29.1±0.4 18% 22.6±0.2

（5）蟾酥缓释注射液处方的优化：以注射用水
为介质，加入乙醇和蟾酥提取物，分别加入不同质
量分数泊洛沙姆 407，搅拌使其分散均匀，置于 4 ℃
冰箱中保存直至完全溶解，从而得到泊洛沙姆 407
质量浓度分别为 15.00%、15.25%、15.50%、15.75%、
16.00%，10%乙醇，0.5%药物的含药凝胶液，测定
其胶凝温度，结果见表 4。泊洛沙姆 407 质量分数
在 15.5%时，胶凝温度为 33 ℃。因此蟾酥缓释注
射液的最终处方确定为 15.5%泊洛沙姆 407、10%乙
醇、0.5%蟾酥提取物。

表 4 蟾酥缓释注射液处方的优化
Table 4 Prescription optimization of sustained-release
injection of Venenum Bufonis
泊洛沙姆 407 胶凝温度 / ℃ 泊洛沙姆 407 胶凝温度 / ℃
15.00% 36.7±0.3 15.75% 30.6±0.3
15.25% 34.5±0.4 16.00% 29.1±0.2
15.50% 33.1±0.3

2.2 体内局部麻醉作用研究
取体质量 250～300 g 的健康豚鼠 10 只，雄雌
各半。在每只豚鼠背部选择两个皮丘点，分别注射
蟾酥缓释注射液和蟾酥溶液（为 0.5%蟾酥提取物、
10%乙醇、10%泊洛沙姆 407 的溶液）0.1 mL，标
记皮丘大小。用自制的测试针按左、中、右、上、
中、下顺序刺激 6 次皮丘范围内皮肤，两下针刺时
间间隔 3～5 s，皮肤出现收缩反应为阳性，记录注
药后 10、20、30、60、120、180、240、300、360、
420、480 min 的阳性反应次数，当 6 下针刺中有 3
次产生反应，可得出麻醉时间[6-7]。记录每种药物
10 个皮丘在各时间点的阳性反应次数，将其作为纵
坐标，以时间为横坐标，绘制效应-时间曲线，结果
见图 1。蟾酥缓释注射液组和蟾酥注射液组均在 10
min 内起效，蟾酥溶液对照组局部麻醉持续时间 2～
3 h，而蟾酥缓释注射液组局部麻醉持续时间可达
6～7 h，作用时间明显高于蟾酥溶液对照组。




图 1 蟾酥缓释注射液和蟾酥溶液局部麻醉作用
效应-时间曲线 (n＝10)
Fig. 1 Effect-time curves of local anesthetic effects by
sustained-release injection of Venenum Bufonis
and solution of Venenum Bufonis (n＝10)

3 讨论
本实验研究筛选了蟾酥缓释注射液最佳处方，
其中制剂组成成分泊洛沙姆 407 是一种非离子表面
活性剂，具有载药量大、毒性低、易代谢、生物相
容性好的特点，已广泛应用于药学的各个领域。泊
洛沙姆407是由聚氧乙烯与聚丙乙烯以7∶3的比例
构成的 ABA 嵌合聚合物，其水溶液具有特殊的反
向热胶凝作用，即低温时为液体，在体温下可以成
为半固体凝胶，是目前研究最深入的制备温度敏感
原位凝胶的高分子辅料。温度敏感型原位凝胶是一
种新型制剂，目前尚无一套规范的检测指标和方法。
根据其自身的特点、物理化学性质和文献报道的情
况，目前常用制剂评价指标有胶凝温度、凝胶强度、
生物黏附力、流变学性质、体外释放度等[8-9]，本实
验采用胶凝温度为主要评价指标来筛选蟾酥缓释注
射液的最佳处方。本研究中发现，蟾酥缓释注射液
的胶凝温度与泊洛沙姆 407 的质量分数存在依赖
性，随着泊洛沙姆 407 质量分数越高，蟾酥缓释注
射液胶凝温度越低，这与 Kojarunchitt、Ricci 等[10-11]
6
3
0
阳
性
反
应
次
数
蟾酥缓释注射液
蟾酥溶液
10 20 30 60 120 180 240 300 360 420 480
t / min
中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 43 卷 第 5 期 2012 年 5 月

·894·
的研究报道相一致。本实验最终确定了蟾酥缓释注
射液的最佳处方为 15.5%泊洛沙姆 407、10%乙醇、
0.5%蟾酥提取物，胶凝温度在 33 ℃左右，在室温
下具有良好的流动性，黏度小，可以方便注射；在
37 ℃以上可迅速形成半固体凝胶，发挥缓释作用。
蟾酥缓释注射液是注射式温度敏感凝胶制剂，
观察蟾酥的局部麻醉起效时间及作用时间，需要选
择合适的研究模型。蟾酥缓释注射液的主要有效成
分为蟾毒灵、华蟾酥毒基、酯蟾毒配基等，现代药
理学证明蟾毒灵、华蟾酥毒基、酯蟾毒配基都具有
局部麻醉的作用[1, 12]。蟾酥缓释注射液作为局部麻
醉药，能在用药局部可逆性的阻断感觉神经冲动发
生与传递，引起局部组织痛觉消失，其作用局限给
药部位并随药物从给药部位扩散而迅速消失。热板
法、甩尾、压尾、足趾刺激等躯体镇痛模型[7, 13]常
用于筛选镇痛药，或要求药物口服、腹腔注射或在
刺激部位外用给药，不符合注射式温度敏感凝胶制
剂给药特点，或不适用于研究局部麻醉药在给药部
位的镇痛作用效果的研究，或不能用于进行时效分
析，因此本实验不能采用热板法、甩尾法等躯体镇
痛模型来研究蟾酥缓释注射液的局部麻醉起效时间
和作用时间。豚鼠皮丘法，在豚鼠背部皮内注射给
药形成皮丘，用针头按左、中、右、上、中、下顺
序刺激 6 次皮丘范围内皮肤，以皮肤点出现收缩为
痛感指标，考察药物作用效果，可进行时效分析，
是研究局部麻醉药的经典方法[7, 13]，同时也符合注
射式温度敏感凝胶制剂给药特点。
本研究采用豚鼠皮丘法，在每只豚鼠背部相近
位置选择两个皮丘点，分别注射蟾酥缓释注射液和
蟾酥溶液 0.1 mL，以皮丘点针刺反应为指标，对比
其局部麻醉作用效果，一方面可以在同一只动物研
究两种制剂局麻作用时间，另一方面可以考察药物
在注射位置的滞留时间。结果可知，蟾酥缓释注射
液组与蟾酥溶液组对比，局部麻醉维持时间明显延
长，表明蟾酥缓释注射液释药缓慢，药物可在注射
部位长期滞留，这与 Barichello 等[14]、Liu 等[15]的
研究报道相符。体内实验研究证明蟾酥缓释注射液
是一种长效缓释制剂，药物可以在注射部位长期滞
留，可用于局部-穴位给药，然而其注入穴位的疗效
和机制以及药物代谢规律需要进一步研究。
参考文献
[1] 赵 强, 孟凡静, 刘安西. 蟾酥的研究进展 [J]. 中草
药, 2004, 35(10): 4-7.
[2] 于垂亮, 侯惠民. 蟾酥抗肿瘤有效成分的活性追踪分
离及急性毒性研究 [J]. 中草药, 2011, 42(2): 307-311.
[3] Ricci E J, Lunardi L O, Nanclares D M A, et al. Sustained
release of lidocaine from Poloxamer 407 gels [J]. Int J
Pharm, 2005, 288(2): 235-244.
[4] Choi H G, Jung J H, Ryu J M, et al. Development of in
situ-gelling and mucoadhesive acetaminophen liquid
suppository [J]. Int J Pharm, 1998, 165(1): 33-44.
[5] Matthew J E, Nazario Y L, Roberts S C, et al. Effect of
mammalian cell culture medium on the gelation
properties of Pluronic® F127 [J]. Biomaterials, 2002,
23(23): 4615-4619.
[6] Mowat J J, Mok M J, Macleod B A, et al. Liposomal
bupivacaine. Extended duration nerve blockade using
large unilamellar vesicles that exhibit a proton gradient
[J]. Anesthesiology, 1996, 85(3): 635-643.
[7] Vogel H G, Vogel W H 主编. 杜冠华译. 药理学实验指
南 [M]. 北京: 科学技术出版社, 2001.
[8] 王丽娟, 朱照静. 泊洛沙姆 407温度敏感型原位凝胶的
研究进展 [J]. 中国药学杂志, 2009, 44(4): 245-248.
[9] Bruschi M L, Jones D S, Panzeri H, et al. Semisolid
systems containing propolis for the treatment of
periodontal disease: in vitro release kinetics,
syringeability, rheological, textural, and mucoadhesive
properties [J]. J Pharm Sci, 2007, 96(8): 2074-2089.
[10] Kojarunchitt T, Hook S, Rizwan S, et al. Development
and characterisation of modified Poloxamer 407 thermo-
responsive depot systems containing cubosomes [J]. Int J
Pharm, 2011, 408(1/2): 20-26.
[11] Ricci E J, Bentley M V L B, Farah M, et al. Rheological
characterization of Poloxamer 407 lidocaine hydrochloride
gels [J]. Eur J Pharm Sci, 2002, 17(3): 161-167.
[12] 程国华. 蟾酥质量研究及其药理临床应用进展 [J]. 中
草药, 2001, 32(2): 184-186.
[13] 徐淑云, 卞如濂, 陈 修. 药理实验方法学 [M]. 北京:
人民卫生出版社, 2001.
[14] Barichello J M, Morishita M, Takayama K, et al.
Absorption of insulin from Pluronic F-127 gels following
subcutaneous administration in rats [J]. Int J Pharm,
1999, 184(2): 189-198.
[15] Liu Y, Lu W L, Wang J C, et al. Controlled delivery of
recombinant hirudin based on thermosensitive Pluronic®
F127 hydrogel for subcutaneous administration: In vitro
and in vivo characterization [J]. J Controlled Release,
2007, 117(3): 387-395.