全 文 ：注射用肿节风提取物温度敏感原位凝胶制备
及体外释药评析
陈燕军１，李露２，刘华凤２，彭勃２，金日显１
（１．中国中医科学院 中药研究所，北京 １００７００；
２．广西中医学院 药学院，广西 南宁 ５３０００１）
［摘要］ 目的：制备注射用肿节风提取物温敏型原位凝胶制剂，并对其体外释药进行考察。方法：以泊洛沙姆４０７为载
体材料制备注射用肿节风提取物温敏型原位凝胶制剂，采用ＨＰＬＣ测定制剂在磷酸盐缓冲溶液（ｐＨ７６）的体外释放度，并对
体外释放数据进行拟合。结果：最佳处方为１６％Ｐ４０７＋６％Ｐ１８８＋０２％ＨＰＭＣ＋０５％苯甲醇 ＋４％（ｇ·ｍＬ－１）肿节风提取
物，胶凝温度在３３℃，体外释放行为符合Ｈｉｇｕｃｈｉ方程。结论：注射用肿节风提取物温敏原位凝胶的制备工艺简便，药物释放
达到预期要求。
［关键词］ 肿节风提取物；泊洛沙姆４０７；注射用原位凝胶；体外释放
［收稿日期］ ２００９０６１２
［基金项目］ 国家中医药管理局中医药科技研究专项（０６０７ＺＰ５２）；科
技部“重大新药创新”科技重大专项（２００９ＺＸ０９３０１００５０５）
［通信作者］ 陈燕军，Ｔｅｌ：（０１０）６４０１４４１１２９５２，Ｅｍａｉｌ：ｉｖｙｃｙｊ＠
１６３．ｃｏｍ
肿节风为金粟科植物草珊瑚 Ｓａｒｃａｎｄｒａｇｌａｂｒａ
（Ｔｈｕｎｂ．）Ｎａｋａｉ的干燥全株，具有清热凉血，活血
消斑，祛风通络等功效，临床上有用肿节风注射液直
接关节腔注射来治疗关节炎［１］，但因关节炎为慢性
疾病，长期关节腔多次注射，病人依从性差。为了提
高治疗效果和病人用药的顺应性，有必要研究注射
用肿节风提取物的缓释制剂。本研究将肿节风提
取物制备成注射用温度敏感原位凝胶制剂，以减
少注射次数，提高患者的顺应性，并对其体外释放
进行考察。
１ 材料
肿节风提取物（自制，反丁烯二酸质量分数为
１４４３９％），反丁烯二酸对照品（中国药品生物制品
检定所，批号１５４１２００００１），泊洛沙姆４０７（Ｐ４０７，
德国ＢＡＳＦ），泊洛沙姆１８８（Ｐ１８８，南京威尔化工），
羟丙基甲基纤维素（ＨＰＭＣ，湖州展望天明药业），乙
腈（色谱醇，天津四友精细化学品有限公司），甲醇
（色谱醇，天津四友精细化学品有限公司），水为去
离子重蒸水，其余试剂均为分析纯。
ＨＰ１１００高效液相色谱仪；Ｇ１３１４Ａ紫外检测
器；ＤＬ１２０Ａ超声波清洗器（上海之信仪器有限公
司），ＺＤ７９Ｂ真空干燥箱（北京兴争仪器设备厂），
ＡＥＬ２００电子天平（日本岛津公司），８５２Ａ型恒温
磁力搅拌器（江苏省金坛市荣华仪器制造有限公
司），ＨＺＱＣ空气浴振荡器（哈尔滨市东联电子技术
开发有限公司）。
２ 方法与结果
２．１ 温敏凝胶溶液的制备
采用冷溶法（ｃｏｌｄｍｅｈｔｏｄ）配制含 Ｐ４０７的凝胶
溶液。称取一定量 Ｐ４０７，加入一定量的注射用水，
于磁力搅拌下使其分散均匀，于４℃条件放置２４ｈ，
使凝胶充分溶胀分散均匀得到澄明的溶液，过０２２
μｍ滤膜即得。
２．２ 胶凝温度的考察
测定方法在锥形瓶中装入温敏凝胶溶液２０ｍＬ
和搅拌子，插入精度为０１℃的精密温度计，温度计
的水银球完全浸没在凝胶溶液中。将其放入低温
（１０℃）水浴中，转速３００ｒ·ｍｉｎ－１，保持水浴持续
缓慢升温，使凝胶的温度上升速率约为１～２℃·
ｍｉｎ－１将磁力搅拌子完全停止转动的温度定义为胶
凝温度。每一样品平行测定３次，结果取平均值。
２．３ 温敏凝胶载体的选择
２．３．１ Ｐ４０７不同质量分数的胶凝特性
以水为介质，加入不同量的 Ｐ４０７，搅拌使其分
散均匀，置于４℃冰箱中保存至完全溶解从而得到
不同质量分数的 Ｐ４０７胶体溶液，测定其在２０℃，
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３７℃下的胶凝特性，结果见表１。
表１ Ｐ４０７与水的混合体系在不同温度下的胶凝特性
Ｐ４０７浓度／％ ２０℃ ３７℃ Ｐ４０７浓度／％ ２０℃ ３７℃
１０ 溶液 溶液 １８ 溶液 胶体
１３ 溶液 溶液 ２０ 溶液 胶体
１５ 溶液 溶液 ２２ 胶体 胶体
１６ 溶液 胶体
结果表明，Ｐ４０７的胶凝特性具有浓度依赖性，
在１６％～２０％的范围内，在２０℃条件下成溶液状
态，在３７℃条件下胶凝成半固体状态，此体系可作
为温度敏感型原位凝胶。而且，实验还发现，当
Ｐ４０７溶液质量分数低于１５％时，即使不断加温也只
形成稠厚溶胶而不能完全胶凝。
２．３．２ 处方中各成分对温敏凝胶胶凝温度的影响
２．３．２．１ 药物与苯甲醇对温敏凝胶胶凝温度的影
响 凝胶处方中加入４％（ｇ·ｍＬ－１）药物，并且以
０５％的苯甲醇为抑菌剂后，测定不同浓度Ｐ４０７空
白及分别加入４％（ｇ·ｍＬ－１）的药物和０５％的苯
甲醇的载药凝胶和０５％的苯甲醇的空白凝胶的胶
凝温度，结果见表２，图１。
表２ 药物与苯甲醇对不同浓度胶凝温度的影响
Ｐ４０７浓度／％
１６ １８ ２０
空白凝胶（℃） ２８５±０２ ２４２±０３ ２１５±０２
药＋苯甲醇＋凝胶（℃） ２４６±０１ ２００±０２ １８２±０４
苯甲醇＋凝胶（℃） ２５３±０２ ２１８±０２ ２００±０２
结果表明，空白凝胶的相转变温度与 Ｐ４０７的
浓度有线性关系。随 Ｐ４０７浓度的增大 Ｔ的下降
是很显著的（Ｐ＜００５）。加有 ４％（ｇ·ｍＬ－１）的
药物和０５％的苯甲醇后 Ｔ稍降低，但其变化趋势
不变。
２．３．２．２ Ｐ１８８对温敏凝胶胶凝温度的影响 在
Ｐ４０７温敏凝胶中加入一定浓度的 Ｐ１８８可起到调
节胶凝温度的作用，本研究考察了 Ｐ１８８浓度对
１８％Ｐ４０７的影响，结果 Ｐ１８８浓度为２％，４％，６％
时，胶凝温度分别为（２５３±０２）℃，（２８７±０１）
℃，（３０５±０３）℃。结果表明，Ｐ１８８可以使胶凝
温度升高，随着 Ｐ１８８浓度的增加同一浓度 Ｐ４０７
下胶凝温度升高。
２．３．２．３ ＨＰＭＣ对温敏凝胶胶凝温度的影响 由
于药物水溶性大，在Ｐ４０７温敏凝胶中释放快，因此
加入一定浓度的羟丙甲纤维素（ＨＰＭＣ）可起到阻滞
水溶性药物的释放的作用，结果 ＨＰＭＣ的浓度为
０１％，０５％，１０％时，胶凝温度分别为（２１４±
０２）℃，（２０５±０１）℃，（２００±０１）℃。结果
表明，ＨＰＭＣ的加入使胶凝温度降低，随着ＨＰＭＣ浓
度的增加同一浓度Ｐ４０７下的胶凝温度降低。
２．４ 温敏凝胶处方的确定
综合以上不同材料对胶凝温度的影响，符合３７
℃条件下形成半固体状态，药液能在（３０～３３）℃温
度下发生黏度的突变形成半固体凝胶，确定组成处
方为：１６％Ｐ４０７＋６％Ｐ１８８＋０２％ＨＰＭＣ＋４％（ｇ
·ｍＬ－１）药物＋０５％苯甲醇。
２．５ 反丁烯二酸的含量测定［２］
２．５．１ 色谱条件
ＫｒｏｍａｓｉｌＣ１８柱（４６ｍｍ×２５０ｍｍ，５μｍ）；流
动相乙腈００５％磷酸（１∶４０）；检测波长２１０ｎｍ；流
速１ｍＬ·ｍｉｎ－１；柱温３５℃；进样量２０μＬ。
２．５．２ 对照品溶液和供试品溶液的制备
精密称取０００５０ｇ反丁烯二酸对照品，置１０
ｍＬ量瓶中，用流动相乙腈００５％磷酸（１∶４０）溶解
稀释至刻度，摇匀；精密吸取０４０ｍＬ置１０ｍＬ量瓶
中，用流动相稀释至刻度，摇匀，即得２ｍｇ·Ｌ－１的
浓度作为对照品溶液。见图１。
精密吸取肿节风提取物温敏原位凝胶２ｇ加水
稀释，定容至 １０ｍＬ量瓶中，精密吸取 １ｍＬ至 １０
ｍＬ量瓶，加甲醇至刻度，定容，微孔滤膜（０４５μｍ）
滤过，取滤液备用。
图１ 对照品溶液色谱图
２．５．３ 空白试验
精密吸取未加原料的空白肿节风原位凝胶
０８０ｍＬ，加水稀释至１０ｍＬ，精密吸取５ｍＬ，加甲醇
稀释至１０ｍＬ，微孔滤膜（０４５μｍ）滤过，取滤液即
为空白溶液。吸取一定量进样测定，见图２。
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图２ 空白凝胶溶液色谱图
２．５．４ 线性范围确定
取０５ｇ·Ｌ－１反丁烯二酸对照品溶液 ００４
ｍＬ，加流动相至 １０ｍＬ，摇匀，分别精密吸取 １，４，
６５，８ｍＬ于１０ｍＬ量瓶中，加流动相稀释至刻度，
摇匀，进样量为２０μＬ，在２１０ｎｍ波长下测定，以峰
面积对进样浓度进行回归，结果反丁烯二酸进样量
在４～４０ｎｇ内线性关系良好，回归方程Ｙ＝３５７４５９＋
８８３２７Ｘ，ｒ＝０９９９５（ｎ＝５）。
２．５．５ 加样回收率试验
精密吸取肿节风提取物温敏原位凝胶１ｇ，加入
对照品溶液（０５ｇ·Ｌ－１）１ｍＬ，加水稀释，定容至１０
ｍＬ量瓶中，精密吸取１ｍＬ至１０ｍＬ量瓶，加甲醇至
刻度，定容，微孔滤膜（０４５μｍ）滤过，取滤液进样测
定。结果平均回收率为９９８７％，ＲＳＤ０７５％（ｎ＝５）。
２．５．６ 样品测定
精密吸取肿节风提取物温敏原位凝胶２ｇ加水
稀释，定容至 １０ｍＬ量瓶中，精密吸取 １ｍＬ至 １０
ｍＬ量瓶，加甲醇至刻度，定容，微孔滤膜（０４５
μｍ））滤过，取滤液进样测定。见图３。
图３ 凝胶供试品溶液色谱图
２．６ 体外释放的考察［３］
精密称取肿节风提取物凝胶溶液１２ｍＬ，置经
处理过的透析袋内，紧密封口后，放一小烧杯中。带
塞锥形瓶中装有释放介质为磷酸盐缓冲液（ｐＨ
７６）３０ｍＬ，一同放入３７℃空气浴振荡器中１５ｍｉｎ，
使其变成凝胶后，将透析袋放入锥形瓶内，保证被释
放介质浸没。以５０ｒ·ｍｉｎ－１，３７℃为条件进行振
荡。于２，４，６，１２，２４，２６，２８，３０，３４，４８，５０，５４，５８，７２
ｈ紧密吸取接受液２ｍＬ，同时补充相同体积的新鲜
缓冲液于溶出锥形瓶中。吸取的接受液经０４５μｍ
的微孔滤膜过滤，取续滤液备用。ＨＰＬＣ测定，同时
间接受液中药物含量，结果见图５。以 Ｈｉｇｕｃｈｉ分布
模型拟合，结果拟合方程为 Ｑ＝９５３９＋８８１６ｔ１／２，
ｒ＝０９９５５。
图５ 注射用肿节风提取物温度敏感原位
凝胶体外释放曲线
结果表明，肿节风提取物中反丁烯二酸在２ｈ
内就释放了１８１２％，７２ｈ释放了８２１０％，释放符
合Ｈｉｇｕｃｈｉ分布，药物释放达到预期要求。
３ 讨论
３．１ 关于温度敏感原位凝胶的设计
适宜的胶凝温度对于温敏凝胶的应用具有重要
意义。调节温度敏感原位凝胶的胶凝温度需从使用
方便和在体胶凝能力综合考虑。一方面，温敏凝胶
在体外需为具有较好流动性的液体，胶凝温度必须
低于体温。但若胶凝温度过低，需冷藏后才能使用，
而且低温对组织也会产生刺激，由此造成顺应性不
佳；另外从生产工艺角度考虑，过低的胶凝温度也会
给凝胶的制备带来困难。另一方面，还要求温敏凝
胶在体温作用下能立即胶凝，并在该温度下保持半
固态。本研究筛选不同基质，应用各种辅料改善凝
胶性质，按筛选的处方制得具有适宜胶凝温度的肿
节风提取物温敏凝胶，在低于室温（２６℃）条件下为
流体，体温时形成凝胶，可满足局部注射给药和在体
胶凝的要求，值得进一步研究。
３．２ 关于胶凝温度的测定
采用观察磁力搅拌子转动方法测定胶凝温度
时，缓慢的升温速率、均匀的热传导和相对恒定的搅
拌条件是保证测定结果准确、精密的重要因素，升温
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过快则测得的胶凝温度偏高，热传导不均匀和搅拌
条件的改变会导致实验结果重复性较差。因此，所
有样品胶凝温度的测定需在接近恒定的升温速率、
相同的玻璃器壁厚度和保持搅拌子转速、形状及大
小一致的条件下进行。
３．３ 关于Ｐ４０７和附加剂的选用
泊洛沙姆具有良好的耐受性，一般认为无毒，能
被肾和胆汁排泄。其水溶液具有受热反向胶凝的性
质，其中Ｐ４０７的胶凝温度比泊洛沙姆系列的其他
都低，因此选用Ｐ４０７为凝胶基质。Ｐ１８８作为胶凝
温度调节剂可以升高胶凝温度。由于制剂处方参照
注射剂设计，因而限制了抑菌剂种类的选择，苯甲醇
能溶于水，符合本研究中的剂型。温敏凝胶中常需
加入阻滞剂以增强制剂的粘附能力使其在体内的滞
留时间延长，提高药物的局部生物利用度。本实验
所选用的ＨＰＭＣ具有高黏度性，可用于调节水溶性
药物的释放。
［参考文献］
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ＰｒｅｐａｒａｔｉｏｎａｎｄｒｅｌｅａｓｅｉｎｖｉｔｒｏｏｆＳａｒｃａｎｄｒａｅｅｘｔｒａｃｔｆｒｏｍ
ｉｎｊｅｃｔａｂｌｅｔｈｅｒｍｏｓｅｎｓｉｔｉｖｅｉｎｓｉｔｕｇｅｌ
ＣＨＥＮＹａｎｊｕｎ１，ＬＩＬｕ２，ＬＩＵＨｕａｆｅｎｇ２，ＰＥＮＧＢｏ２，ＪＩＮＲｉｘｉａｎ１
（１．ＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭａｔｅｒｉａＭｅｄｉｃａ，ＣｈｉｎａＡｃａｄｅｍｙｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅ，Ｂｅｉｊｉｎｇ１００７００，Ｃｈｉｎａ；
２．ＧｕａｎｇｘｉＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＴｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅ，Ｎａｎｎｉｎｇ５３０００１，Ｃｈｉｎａ）
［Ａｂｓｔｒａｃｔ］ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏｐｒｅｐａｒｅａｎｄｅｖａｌｕａｔｅｔｈｅｉｎｊｅｃｔａｂｌｅｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅｉｎｓｉｔｕｇｅｌｆｏｒｓｕｓｔａｉｎｅｄｒｅｌｅａｓｅｏｆｓａｒｃａｎ
ｄｒａｅｅｘｔｒａｃｔｉｎｖｉｔｒｏ．Ｍｅｔｈｏｄ：Ｔｈｅｎｏｖｅｌｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅｐｏｌｏｘａｍｅｒ４０７ｗａｓｕｓｅｄａｓｔｈｅｃａｒｉｅｒｏｆｓａｒｃａｎｄｒａｅｅｘｔｒａｃｔｓｕｓｔａｉｎｅｄ
ｒｅｌｅａｓｅｉｎｊｅｃｔｉｏｎ．Ｔｈｅｒｅｌｅａｓｅｏｆｓａｒｃａｎｄｒａｅｅｘｔｒａｃｔｆｒｏｍｐｏｌｏｘａｍｅｒ４０７ｂａｓｅｄｉｎｓｉｔｕｇｅｌｉｎｔｈｅｐｈｏｓｐｈａｔｅｂｕｆｅｒ（ｐＨ７６）ｗａｓｓｔｕｄｉｅｄ
ａｔ３７℃ ｕｎｄｅｒａｇｉｔａｔｉｏｎ．ＨＰＬＣｍｅｔｈｏｄｗａｓｕｓｅｄｆｏｒｔｈｅｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｓａｒｃａｎｄｒａｅｅｘｔｒａｃｔ．Ｒｅｓｕｌｔ：Ｔｈｅｂｅｓｔｐｒｅｓｃｒｉｐｔｉｏｎｉｓ１６％Ｐ
４０７＋６％Ｐ１８８＋０２％ＨＰＭＣ＋０５％ ｂｅｎｚｉｌａｌｃｏｈｏｌ＋４％ （ｇ·ｍＬ－１）Ｓａｒｃａｎｄｒａｅｅｘｔｒａｃｔ，ａｎｄｔｈｅｇｅｌａｔｉｏｎｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅｉｓａｒｏｕｎｄ
３３℃．ＴｈｅｄａｔａｏｆｒｅｌｅａｓｅｉｎｖｉｔｒｏｗｅｒｅａｎａｌｙｚｅｄａｃｃｏｒｄｉｎｇｔｏｔｈｅｔｈｅｏｒｅｔｉｃａｌｍｏｄｅｌｏｆＫｏｒｓｍｅｙｅｒＰｅｐｐａｓ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｔｈｅｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ
ｍｅｔｈｏｄｏｆｔｈｅｉｎｊｅｃｔａｂｌｅｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅｉｎｓｉｔｕｇｅｌｏｆＳａｒｃａｎｄｒａｅｅｘｔｒａｃｔｗａｓａｐｐｒｏｐｒｉａｔｅ．Ｔｈｅｒｅｌｅａｓｅｉｎｖｉｔｒｏｃａｎｒｅａｃｈｔｈｅｅｘ
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［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］ Ｓａｒｃａｎｄｒａｅ；ｐｏｌｏｘａｍｅｒ４０７；ｔｈｅｉｎｊｅｃｔａｂｌｅｉｎｓｉｔｕｇｅｌ；ｒｅｌｅａｓｅｉｎｖｉｔｒｏ
［责任编辑 周 驰］
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