全 文 :2016
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ChuanxiongRhizomaduringintestinalabsorptionwithS9incubation
YANGWenning,LIBo,WANGHao,CHENXinjing,YANGLiyuan,LIUYang
(BeijingUniversityofChineseMedicine,Beijing100102,China)
[Abstract] Theinformationofdrugdepositionintheintestineisrequiredinthestudyforthedrugabsorptioninbiopharmaceutics
classificationsystem(BCS)Toilustratetheimpactsofgutwalmetabolismontheabsorption,metabolismofmultiplecomponentsin
ChuanxiongRhizomaingutwalwastestedbyratS9incubationinvitroThechemicalfingerprinttechnologywasusedinthisstudyto
simultaneouslydetectmultiplecomponentsinChuanxiong,andpeakareasbeforeandafterS9incubationwerecomparedTheresults
showedthatsenkyunolideIandseveralconstituentsweremetabolizedbygutwal,andonenewmetabolitewasfoundedHowever,feru
licacidandothercompoundsremainedunchangedafterincubationTherefore,thesubsequentintestinalpermeabilityofmultiplecom
ponentsinChuanxiongthatwerenotmetabolizedintheintestinewassuggestedtobedetecteddirectlybyinsitusinglepassintestinal
perfusion(SPIP)Nonetheless,theintestinalpermeabilityoftheconstituentsthatweremetabolizedintheintestineshalbeexploredby
appropriateapproaches
[Keywords] biopharmaceuticsclassificationsystem;S9;multiplecomponents
doi:10.4268/cjcmm20160705
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(biopharmaceuticsclassifi
cationsystem,BCS)
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4 232441±2359 266809±61281) -1479
5 185811±979 191635±27521) -313
6 252845±1670 287768±23091) -1381
7 312313±508 309285±2074 097
8 3888458±58837 3990302±13626 -262
9 905117±4470 890081±69091) 166
10 186525±1228 213180±18491) -1429
11 361944±2767 337881±16611) 665
12 47186±649 56470±13331) -1967
13 3632156±17234 3650653±17567 -051
14 193802±3026 178116±27981) 809
15 190200±37169 223717±10302 -1762
16 8444574±40348 8262017±241241) 216
17 1361777±15178 1309516±169651) 384
18 56828±24449 79653±8175 -4017
19 463319±9616 468855±5716 -119
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²³´µâµ¬âßà#GD1i?W¬]
。
[
q=
]
[1] AmidonGL,LennernsH,ShahVP,etal.Atheoreticalbasis
forabiopharmaceuticdrugclassification:thecorelationofinvitro
drugproductdissolutionandinvivobioavailability[J].Pharm
Res,1995,12(3):413.
[2] LiH,DongL,LiuY,etal.Comparisonoftwoapproachesofin
testinalabsorptionbypuerarin[J].JPharmacolToxicolMeth
ods,2014,70(1):6.
[3] LiH,DongL,LiuY,etal.Biopharmaceuticsclassificationof
puerarinandcomparisonofperfusionapproachesinrats[J].IntJ
Pharm,2014,466(1):133.
[4] NakamuraM,KawakitaY,YasuharaA,etal.Invitroandin
vivoevaluationofthemetabolismandbioavailabilityofesterpro
drugsofMGS0039(3(3,4dichlorobenzyloxy)2amino6flu
orobicyclo[3.1.0]hexane2,6dicarboxylicAcid),apotent
metabotropicglutamatereceptorantagonist[J].DrugMetabDis
pos,2006,34(3):369.
[5] MasakiK,HashimotoM,ImaiT.Intestinalfirstpassmetabolism
viacarboxylesteraseinratjejunumandileum[J].DrugMetab
Dispos,2007,35(7):1089.
[6] LiW,GuoJ,TangY,etal.Pharmacokineticcomparisonoffer
ulicacidinnormalandblooddeficiencyratsafteroraladministra
tionofAngelicasinensis,Ligusticumchuanxiongandtheircombi
nation[J].IntJMolSci,2012,13(3):3583.
[7] YanR,KoNL,LiSL,etal.Pharmacokineticsandmetabolism
ofligustilide,amajorbioactivecomponentinRhizomaChuanx
iong,intherat[J].DrugMetabDispos,2008,36(2):400.
[8] YanR,LinG,KoNL,etal.Loworalbioavailabilityandphar
macokineticsofsenkyunolideA,amajorbioactivecomponentin
RhizomaChuanxiong,intherat[J].TherDrugMonit,2007,29
(1):49.
[9]
M
,
^
,
MÛ
,
è
.
á ¡-£¤
R°¤_
_«¬
[J].
23$A,
k
,2008,31(5):334.
[10]
«\<
,
_
.
<Ø ¡,ì$<ØÛ¬K¼±
R¿°
²©ªfË
[J].
A,]k
,2015,34(2):173.
[11] WuCY,BenetLZ.Predictingdrugdispositionviaapplication
ofBCS:transport/absorption/eliminationinterplayanddevelop
mentofabiopharmaceuticsdrugdispositionclassificationsystem
[J].PharmRes,2005,22(1):11.
[12]
M
,
åK
,
æg
,
è
.
°Å@$,Â,ÃÄ
ÅƱ÷à
[J].
$%$,-.
,2014,39(23):4479.
[13] KajbafM,RicciR,ZambonS,etal.Contributionofratintesti
nalmetabolismtothexenobioticsclearance[J].EurJDrug
MetabPharmacokinet,2013,38(1):33.
[
-0
¤¥¥
]
·1911·