全 文 :2016
y
4
z ³
41
ų
7
}
Vol41,No.7 April,2016
[
)(
] 20151218
[
R
]
ì(81473362);
}~!#$%öjk
(2015JYBXS061)
[
x?
]
CD
,
,
ö
,
®
ö$%W$
,Tel:(010)64286245,Email:dongling@bucmeducn
[
?¢£
]
E+F
,
ö
,Email:luhou2006@163com
®¯°±²³´µ«¬
E+F
,
CGH
,
IJK
,
89
,
LMN
,
OPQ
,
CD
(
}~!#$%
,
}~
100102)
[
]
$,Â,ÃÄÅÆ
(biopharmaceuticsclassificationsystemofChinesemateriamedica,CMMBCS)
«¬$
,
¦OáâO:/¦Ùþ©ª¸¹$±ß0
。
|«¬a®«¬|°
,
p°ïo²èç
,
ì®$±
¿²Ú±©ªÖn«¬
,
¬ìîÖnâßà
。
ç*ú®#Ö$B
19
M´¸²º©ª
,
x
©ªeðÔÕñò
,3
ž@±*³´Å=¿
1×10-5~1×10-6cm·s-1
=ß^
,
Óâî±*
³´Å==ß^`ñ>
1×10-6~1×10-7cm·s-1,
ÎÑûê
1×10-6cm·s-1,
ÕòAê
1×10-6~1×10-7cm·s-1,
ÜHê
1×10-6~1×10-7cm·s-1,
¿©ªòó@
,
uDz³´µÔ±
。
@[Í쥦Ä`
`Önk뫬óâ1i
。
[
]
$,Â,ÃÄÅÆ
;
®
;
³´µ
;
°ïo²è
;HPLC
Overalintestinalpermeabilityofmultiplecomponentsinlotusleaves
HOUChengbo,DONGYueliu,YINXiuwen,LIUYang,SUNHuijuan,CHENYingying,DONGLing
(BeijingUniversityofChineseMedicine,Beijing100102,China)
[Abstract] InthestudyofbiopharmaceuticsclassificationsystemofChinesemateriamedica(CMMBCS),theinteractionsofmulti
plecomponentsintheabsorptionshouldbetakenintoconsiderationinsimultaneousmulticomponentdeterminationToinvestigatethe
absorptionofmultiplecomponents,theinvitroevertedgutsacmodelwasusedinthisstudy,wtihlotusleavesastheresearchobject
AquantitativeanalysiswasalsocariedoutfortheknowncomponentsinthisstudyTotaly19componentsinlotusextractswereab
sorbedbytheintestinaltract,thePapplevelsoftheknowncomponentswerenuciferine(1×10
-51×10-6cm·s-1),rutin(1×10-6
1×10-7cm·s-1),hyperoside(1×10-6cm·s-1),isoquercitrin(1×10-61×10-7cm·s-1)andastragalin(1×10-61×10-7
cm·s-1),respectivelyThesecomponentsshowedalowpermeabilityunderamulticomponentenvironmentThisstudywascaried
outtolayafoundationforfurtherrelevanttargetstudiesfordiferentcategoriesofcomponents
[Keywords] biopharmaceuticsclassificationsystemofChinesemateriamedica;lotusleaf;permeability;invitroevertedgutsac;
HPLC
doi:10.4268/cjcmm20160704
Â,ÃÄÅÆØ>,±¢7µ¬²
³´µD[÷&ñE
[1],
¬¿¥m×Ç_
$
,2015
y%
FDA
D¥P±()]r{
ò
[2],
“rB]r{0DAB
,
쫬,
2
ǵë0Ön.¥â
,
19Ñ
EMA[3],WHO[4]
±]r{d+[cµ
,
çI<«¬Å
。
ì$,Ïé
,
$,Â,ÃÄÅÆ
(biopharmaceuticsclassificationsystemofChinesema
teriamedica,CMMBCS)[5]
¿¥Ë<_,¤T
Ö½_¦O
,
Á/å.$,±ë
,
êÓÉâ
·3811·
2016
y
4
z ³
41
ų
7
}
Vol41,No.7 April,2016
ßÇO«¬|±²©ªµýí
,
m+
¦Oáâ±r{
,
¿¥
©ªµß0±òó
ÉÊ@
,
@¸âµç
,
¦¤MG©ª
,
a©ªY
,
WÖn-°±Â,Ã
ÄÅÆ$²³´µ«¬
。
²³´µ÷±
,
G¢¤ÍÎä°8këm
,É
,
§²³´µÔ±M¿²Ê8/ôÒ
,
Bf+ѲÊ8±%4q
、α·¸£êqèkë/
0§mÉ
。
àï9«¬;q8ëBMѲ
Ê8%4qkë0§m&õ0±
,
Zë
BÓ⩪O¢±®
[69]
0g-,
,
@¸
¯°¦Oáâ²³´µ±ïo²è
,
¶
¯°t©ª¬¥t©ª1
,
Y.Ö[
Ͷ1`쩪Yk묩ªíkëI×
«¬öÈ)
。
1
Ì
11
w
LC20AT
Ýɤ(ç
(SPD20A
QÜð
áw
,SIL20A
¶Ö#w
,
{9ֈDE
);
Uï
àË%
(BT25S,
23nwBCDE
);
Õ
Vªw
(KQ500DE,
ÒÕwBCDE
);
U«¶¢
(DZKW4,
23$O)wBC
DE
);
Ýö»øSf
(GL21M,
÷HùúS
fBCDE
)。
12
,ÑÃ
®,ß$%23¦£¤
(
ÈÇ
)
BC
X
DE
,
ìH¤®¾
(
Þ<
J04M6Y1,
÷H>
®Â&(BCDE
)、
ñ>
(
Þ<
Y05M6S1,
÷
H>®Â&(BCDE
)、
ÎÑûê
(
Þ<
08916418,
%
ChromaDex)、
ÕòAê
(
Þ<
HJ0604XA13,
÷H>®Â&(BCDE
)、
ò
AÛ
(
Þ<
Y26D5Y1,
÷H>®Â&(BCD
E
)、
ÜHê
(
Þ<
KS0910CB14,
÷H>®Â
&(BCDE
)。
m«ßà%
Fisher
DE
(
(ç^
);
5¼
、
û_ü
、
û_Ì
、
5¼ýÌ
、
û_þ
、
û_ÿ
、
!¼
ýÌ
、
·¸£ßà23_gj
(
à^
);
®¯¯
°¢ßய¯ÈÇDE
(
$%±o
)。
13
¶
SD
R
,
²µ
,
°.
200~250g,
¢S
(
23
)
ç¶&(BCDE#G
,
íM<
SCXK(
3
)
20110004。
2
21
¤ÙË
211
ìH¤¤Ë)
`~c¼â®ìH¤
5mg
10mL
ß
Á
,
a¨Õ7¬âê
,
<ä
05g·L-1
±
ìH¤Ì)¤
。
`~cßÖ
10mL
xÌ)¤
50mL
ßÁ
,
a¨âê
,
¹<
10mg·L-1
±
¯V¤
。
212 KrebsRinger′s
¼½¤
(KR
¤
)
±Ë)
¼Ö
NaCl780g,KCl035g,CaCl2037g,
NaHCO3137g,NaH2PO4032g,MgCl2002g,·¸
£
140g;
Źº¢âê
1000mL,
Ï
pH
739~741,
;L)
。
213
®#Ö¤±Ë)
®,ãæ
,
<ã
,
¼Ö
5g,
a
60%
m¨
>Ìñ
1∶30
G#Ö
1h,
#֤ë#Ä
,
;ȉ
ê
250mL,
$%
,¸ 045μmÓ&Ä#,Ö,Ĥ
G
HPLC
à
。
214
²³´,¤±Ë)
®,ãæ
,
<ã
,
a
60%
m¨>Ìñ
1∶30
G#Ö
1h,
#Ö
2
º
,
#ÖYë#Ä
,
V¬
2
º#Ö¤
,
aÓo¹m&=ªÃ
zÎÅfw²ß
,60℃
¢6zj©r¨þO
,
Å
KR
¼½¤Ë[âž,¤
,¸ 045μmÓ
&Ä#
,
Ö,ĤG
HPLC
à
。
22
®
HPLC
à±
221
(çÒJ
p
PhenomenexGeminiC18(ç(46mm×
250mm,5μm),áVË 270nm,Gö 08
mL·min-1,
¶
30℃,
Ö#ß
20μL,G¶
0025%
5¼
m«ÖnÖ¾ü
(0~2min,98∶2~
98∶2;2~5min,98∶2~92∶8;5~8min,92∶8~92∶8;
8~11min,92∶8~88∶12;11~17min,88∶12~88∶
12;17~25min,88∶12~85∶15;25~43min,85∶15~
85∶15;43~61min,85∶15~74∶26;61~70min,74∶
26~74∶26;70~89min,74∶26~25∶75;89~90min,
25∶75~25∶75;90~98min,25∶75~98∶2;98~120
min,98∶2~98∶2)。
222
âßত
DD7MÂâ²³´
,
;<²©ª
*³´Å=
,
ì®$MÂâÖn
¦¤
。
·4811·
Vè
:
®¯°±²³´µ«¬
2221
µÅ¦¤
`ßÖ[â°2
05
g·L-1
±ìH¤Ì)¤ßÁ$¬âê
,
Ù
005,05,10,40,100,200mg·L-1
±ìH¤¯
V¤
,
`Ö#à
,¨
p2
。
2222
Cǵ¦¤
`Ö#
KR
}¤
、¯
¤aÊ#¤¤
,
ìH¤xdBj]
,
]q
1。
A
®m¨#Ö¤
;B
®ìH¤ìH¤
;C
}¤
;1
®¾
;2
ñ>
;3
ÎÑûê
;4
ÕòAê
;5
ÜHê
;6
òAÛ
。
q
1
®
HPLC
q
Fig1 Themulticomponentchromatogramspeaksinlotusleaf
2223
~c¾¦¤
¯Â¤Á,Ö#
5
5
,
¨px2
,
l{.æq0
。
¦¤{8
、
{
þ~c¾
,
æhi{8
、
{þ2
RSD
:
20%。
23
®°ïo²è²³´âµ«¬
»*
SD
RÉò¥É¢
12h,
¢Vû(Íä
,
:S¶²3¦²Å#)
,
`Öx¨:²È
10
cm,
;O
37℃
±ÂS»¢$
,
¬Õr8êG
d
。
:S)²¨*±²Å#¬%4
,
¶²3[
¹ÒË*Ì÷3
,
:S¶²3ïo
,
l²è8
åO
1mL
}
KR
¤
,
Ò[[¹
,
;O
37℃
¶±,¤$
,
@OtW
。
¶·
1h
Y¶²èÖd
,
+
°*¤°
,
,d¤°
。
#¤
13000r·min-1
S
15min
Y
,
:SÖ÷ª¤t¶d
,
¦OG
HPLC
à
,¨
p2
,
·>Dóx-²³´µ*©ª
Å=
Papp
[1011]。
Papp=
ΔQ
Δt
2πrLC0
Ó$
,ΔQ/Δt60min8²è8,Þß
± _
,μg·s-1;Lë,²è˾,cm;C0¶
·O,¤ÌìÞßž
,mg·L-1。
3
æ
31
®
HPLC
q±
311
®
HPLC
q
D¦¤®©ª _
,
9«¬
D®_
HPLC
q
,
xìH¤Bj]
,
æ]q
1。
312
ÂÈ./Ë
a,Þßž
X(mg·L-1)
0Â
,
2
Y
i0Â
,
Önµ
,
]*
1。
æ*úx
ìH¤¿Å¾C8µÅÕ÷
。
*
1
xìH¤¹ÊµC
Table1 Linearandstandardregressionequationofreference
substanceinlotusleaf
®¼ µ¹ R2
µC
/mg·L-1
®¾
Y=78670X-36517 1000 0050~20123
ñ>
Y=43284X+20108 09997 0051~20253
ÎÑûê
Y=56774X+4031 09995 0050~19992
ÕòAê
Y=59173X+32537 09996 0051~20384
òAÛ
Y=62544X+5024 09995 0051~20515
ÜHê
Y=72847X-78618 09999 0051~20449
32
®²³´µ«¬
321
®u°²³´µâµ«¬
®aÀÈÄ
、
¾ļ
,
(çüL/È$¿$þÊY11
,
¦§
ID²¤±j]
,
®²©ªâµà
æ]q
2,
¦qç$Ma½dr,Má±
24
$
,
D
4,9,11,13,23
í(çÒJ@b
]dð
,
Óâ¿x²¨uB©ª
,
}©ª±¹
¾BÔ`
。
322
®Mâß²³´µâß«¬
p®Mâß²©ªÅ=]*
2,
q
3,
ÊïM½d
,5
MÂâ²³´µòÔ
,
¿¥¦
±²¨³´{ñBÔÕ
,
®¾¿²Ú©ªò
e
,Papp¿ 3¥¦Â,ž@¿ 1×10
-5~1×
10-6cm·s-1
=ß^
,
ñ>
、
ÎÑûê
、
ÕòAêèÀ
ÈêÄ©ª³´Å=Ût
,
c¿
1×10-6~1×
10-7cm·s-1
=ß^
,
ÜH꿲¨©ªìò
÷
,
Ó³´Å=¿
1×10-6cm·s-1
=ß^
。
®$
M²@
,
®¾¿x²Ú©ªQ÷
。
·5811·
2016
y
4
z ³
41
ų
7
}
Vol41,No.7 April,2016
A
}
KR
¤
;B
®,¤
;C
®¿ö²©ªqç
;D
®¿²©ªqç
;E
®¿²©ªqç
;F
®¿²©ª
qç
。
q
2
®²©ª
HPLC
q
Fig2 TheHPLCchromatogramsofintestinalabsorptioncom
ponentsinlotusleaf
4
Ús
41
®²³´µPQ±;q
ïo²èÉ8ÁUZBɱ²³´«¬
,
¦
1954
y#dY&Iì,²©ª{
ñ±~g0
[1213]。
°q0Á&
,
VÝÉ
¤2qç
,
Ma6
、
DöBÉFà¬5
â$,$M´#©ªaÊ¥{©ª±_
。
¦
Oïo²èPQ&M{±d+D²ºrB±F¬
3#µ
,
I<|PQÁMÏ«¬ò󩪱²
ºð
|}aÊPèàÛ
[1416],
àï9ç;q
ïo²è0«¬Ön²³´µ«¬
。
42
M²@®î²©ª
M²@
,
¿²Ú¸¹$ß0ò
óÓⱩª
。
9çæhi
,
®¾²³
´µeÓâî
,
Ñ^kÚ1[
c
[1719],
}É
,
Ê¿¥¦²Ú±©ª
BbÔÕ
,
¦ÙM²@òó]
c
[5]。
D®$©ªð
,
ÁádëßòÝ
±
X1,ï¿r,± KR¤$áëß
t
,
§ïÑìH¤ÜHêdOþ[c
,
àï
ÌÍôïM{ÉòAÛ
,
¦O®¿²
¤$Kâµçm±
,
18
çd±ä7
,
¦Ù
M{ɲºqP±æ
。
5
×y
®$D¿©ªO¢m,É
,
Á
¿a©ªífËm0±
,
M²@
þ±ß0ç+ìU[±²©ªãÂò
*
2
®ïo²è²©ª
Papp
Table2 Pappofcomponentsinlotusviainvitroevertedgutsac ×10
-6cm·s-1
Â,Þßž
/g·L-1 ²¨ ®¾ ñ> ÎFûê ÕòAê ÜHê
401
ö²
11898±1666 3130±1223 3278±1312 0897±0437 -
²
9599±1999 3398±2767 1942±0754 0469±0037 -
²
11505±2421 2208±0692 1408±0041 0326±0082 -
²
13845±1927 0677±0409 1303±0416 0927±0052 7239±0157
802
ö²
12265±2607 2726±1783 2661±0171 1506±0633 1980±1098
²
14196±4341 3289±1453 3301±2397 0435±0273 -
²
10056±2226 1530±0247 2746±0643 0971±0864 0748±0
²
14494±6358 2144±1513 5548±3464 4326±3130 8077±3869
1193
ö²
8669±4093 4071±0134 7382±0918 0732±0472 -
²
3274±1609 0561±0264 1821±0130 0055±0019 -
²
3385±1289 0430±0070 2413±0743 0929±0100 -
²
5668±1629 0814±0597 4173±0900 3163±0837 6873±1411
·6811·
Vè
:
®¯°±²³´µ«¬
A4g·L-1;B8g·L-1;C12g·L-1。
q
3
¥¦Â,Þßž®ïo²è²©ª
Papp
Fig3 Pappofcomponentsinlotusviainvitroevertedgutsacin
diferentcrudedrugconcentration
ó
。
9«¬a®$¯°«¬ì-
,
¿
M²@ìÓ$±Ön²³´µ«¬
,
Ê
ìH¤±4
,
;âDÓ$±
6
Önâß
à
,
áâÓ³´Å=¬~_Ó³´µ
,
Y,U,
Ékëóâ1i
。
¿$,Â,ÃÄÅÆ
±Ö[Í«¬$
,
©ªÔMaË©ªíkë
4Ú®Ñ,Ékë±Å
,
쩪O¢±
4ÚÓÑ©ªYkë±Å
。
[
q=
]
[1] AmidonGL,LennernsH,ShahVP,etal.Atheoreticalbasis
forabiopharmaceuticsdrugclassification:thecorelationofin
vitrodrugproductdissolutionandinvivobioavailability[J].
PharmRes,1995,12(3):413.
[2] FDA.Guidanceforindustry:“Waiverofininvobioequivalence
studiesforimmediatereleasesolidoraldosageformscontaining
certainactivemoieties/activeingredientsbasedonaBiopharma
ceuticsClassificationSystem”[EB/OL].[201505].htp://
www.fda.gov/Drugs/GuidanceComplianceRegulatoryInfor
mation/Guidances/default.htm.
[3] EMA.Noteforguidanceontheinvestigationofbioavailability
andbioequivalenceCPMP/EWP/QWP/1401/98Rev1,Appen
dixII[S].2010.
[4] WHOExpertCommiteeonSpecificationsforPharmaceuticalPrepa
rations:WHOTechnicalReportSeries937[EB/OL].[200605].
htp://whqlibdoc.who.int/trs/WHOTRS937eng.pdf.
[5]
M
,
åK
,
æg
,
è
.
°Å@$,Â,ÃÄ
ÅƱ÷à
[J].
$%$,-.
,2014,39(23):4479.
[6] YouJS,YunJL,KimKS,etal.Ethanolextractoflotus(Ne
lumbonucifera)rootexhibitsanantiadipogenicefectinhuman
preadipocytesandantiobesityandantioxidantefectsinratsfed
ahighfatdiet[J].NutrRes,2014,34(3):258.
[7]
y5%
,
P6
,
!.
®$¾±_Ê%4q
ðµ9Ë0«¬
[J].
Ð)±P_«¬
,2009,30(6):
748.
[8]
{7
,
Ie
.
®ôt_ðµ1í±«¬
[J].
$,
,
2006,29(8):827.
[9]
B8ö
,
bl
,
9H
,
è
.
®Â¾,S0±«¬Ö
×
[J].
@9Ð)&
,2006(2):80.
[10]
=:
,
;?Ø
,
l¥K
,
è
.
©ªÖÃì<ØÛ²©ª±«
¬
[J].
ìK$A,
k
,2009,21(4):30.
[11]
æg
,
¿=
,
I>
,
è
.
,²©ªP=-
±»xÑà
[J].
$%$,-.
,2014,39(23):4484.
[12] WilsonTH,WisemanG.Theuseofsacsofevertedsmalintes
tineforthestudyofthetransferenceofsubstancesfromthemuco
saltotheserosalsurface[J].JPhysiol,1954,123(1):116.
[13]
!
,
?Õw
,
!@
,
è
.
a²è¦¤,ʼ½©
ª«¬Ö×
[J].
ðêWÆA,
,2015,11(2):47.
[14]
!j
,
Dv
,
Pa
,
è
.
p°ðï²èPQÖnãS
ä8±²©ªµ«¬
[J].
$%çÃ-.
,2010
(9):107.
[15]
øvä
.
vï*ðµÃì
P
£|}¥{±òó¦
¤
[D].
:
A
,2005.
[16]
Iðý
,
BCD
,
EF
.
ð
oÍ°¬PqÑÀȱß
0ÊÓìÀȲ©ªò󱫬Ö×
[J].
$,
,2009
(10):1659.
[17]
Df
,
,L¦
,
GH
,
è
.
®¾
R²Ú©ªµ«¬
[J].
$%,-.
,2011(18):1417.
[18]
P4:
,
?Ó3
,
D±
.
®ÎÑûÀÈÄ
R¿°²
©ª«¬
[J].
$Æ$A,l
,2015(3):519.
[19]
I
,
RJ
,
Kª
,
è
.
ÎÑûê÷¢ÙÅ=Ê
R¿
°²©ª¶ñ«¬
[J].
$,
,2012,43(5):934.
[
-0
¤¥¥
]
·7811·