全 文 ：HPLC法测定不同海拔长柄秦艽中龙胆苦苷、马钱酸、
獐牙菜苦苷和獐牙菜苷
杨慧玲1 ,司庆文1, 2 ,侯勤正1, 2 ,刘建全1 ,周党卫1 *
( 1 中国科学院西北高原生物研究所 高原生物进化与适应院重点实验室, 青海 西宁 810001;
2 中国科学院研究生院, 北京 100039)
摘 要:目的 测定西藏产长柄秦艽 Gentiana w altonii 中指征性成分龙胆苦苷、马钱酸、獐牙菜苦苷和獐牙菜苷,
分析其与海拔的关系, 为开发秦艽替代性资源, 发展中藏药产业提供依据。方法 Alltech C18 ( 250 mm 4 6
mm, 5 m) ;流动相为甲醇0 5%乙酸水溶液( 25! 75) ;体积流量为 1 0 mL / min; 柱温: 25 ∀ ;检测波长 238 nm(马
钱子酸和獐牙菜苦苷)、246 nm(龙胆苦苷和獐牙菜苦苷) ; 进样量: 10 L, 按外标法计算。结果 西藏不同产地长
柄秦艽中均能检测到秦艽中的指征性成分,其中龙胆苦苷的量在 4 种组分中最高,马钱酸次之,獐牙菜苦苷最低。
不同地区长柄秦艽中龙胆苦苷的量均高于或接近#中国药典∃ 2005 年版标准。4 种指征性成分的量与海拔无明显
相关性,随海拔升高活性成分呈钟状变化。其中海拔4 000 m 左右地区的长柄秦艽品质最优。结论 西藏产长柄
秦艽含有秦艽所具有的 4 种指征性成分,可以作为中藏药秦艽的替代性开发资源,其中海拔4 000 m 左右区域的品
质最优。
关键词:长柄秦艽; 马钱酸;獐牙菜苦苷; 龙胆苦苷;獐牙菜苷
中图分类号: R286 02 文献标识码: A 文章编号: 02532670( 2010) 10172003
秦艽是我国中藏药中的传统药物, 对于治疗风
湿性关节炎、肺病发烧、黄疸、皮疹、水肿及二便不通
等病症具有显著疗效 [ 15]。现代化学分析研究表明,
其主要化学成分有马钱酸、龙胆苦苷等[ 67] 。其中,
龙胆苦苷对化学性及免疫性肝损伤有明显保护作
用[ 1, 3] , 而马钱酸具有一定的抗炎活性, 对角叉菜胶
引起的小鼠脚肿胀和十四烷佛波醇乙酯引起的小鼠
耳肿胀具有抑制作用 [ 8]。目前国内外已从秦艽的根
中提取了龙胆苦苷糖和挥发油等多种成分, 并发现
其具有抗炎、镇痛、降压、升血糖等作用[ 1] 。因此, 秦
艽的药用价值也逐渐被现代医学界所公认。
随着秦艽药用价值研究的不断深入及新药的开
发,其药用资源近年来逐渐减少 [ 9] ,而过度挖掘和生
境的破坏, 也对物种的生存构成潜在的威胁 [ 10]。
#中国药典∃规定秦艽的药材来源有秦艽 Gentiana
macr ophy l la Pall、麻花秦艽 G str am inea Max
im [ 11]、粗茎秦艽又称粗茎龙胆 G cr assicaul is
Duthie ex Bur k 和小秦艽 G d ahur ica Fiseh [ 12]。
目前在青海、甘肃、陕西等地有少量栽培的秦艽, 但
产量少、效益低[ 10] 。因此, 从龙胆属植物中寻找新
的替代性资源植物对发展中藏药产业和保护高山生
态环境具有重要意义。
长柄秦艽G waltonii Bur k 为多年生草本,植
株高 10~ 30 cm, 根粗大, 为秦艽组中的重要物种。
主要分布在我国西藏东南部及南部的山坡、山坡砾
石地和林下,海拔3 400~ 4 800 m 的地带[ 12] 。有研
究发现,该种与大叶秦艽具有很近的亲缘关系[ 13] ,
但多年来,对该物种的潜在药用成分缺乏研究。本
实验采用 HPLC 法对青藏高原不同海拔地区长柄
秦艽根中的指征性成分马钱酸、龙胆苦苷、獐牙菜苦
苷和獐牙菜苷进行了定量分析, 并对其与海拔的关
系进行了探讨。以期为选择合适的地道栽培物种代
替麻花秦艽入药和深度开发该物种提供科学依据。
1 材料
1 1 仪器与试剂: Water s 515E 高效液相色谱仪,
Water s 2996紫外检测器, Empow er ( Waters)数据
处理系统, Waters Empow er pro 液相色谱工作站,
M illipor e溶剂过滤系统; 2200B 超声波仪; M : I: Q
超纯水装置。
1 2 对照品,龙胆苦苷、獐牙菜苦苷(色谱纯)购自
中国药品生物制品检定所 ( 批号 200308、0785
200303)、马钱酸和獐牙菜苷(中国科学院西北高原
%1720% 中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 41 卷第 10 期 2010 年 10月
收稿日期: 20100320 基金项目:国家自然科学基金资助项目( 30572329, 31070208) ;中科院知识创新项目 ( KSCX2SW106) ;中科院西北高原生物研究所知识创新前沿项目( 0954051211, 0954061211)作者简介:杨慧玲( 1975 & ) ,女,吉林松原人,博士,主要从事高山植物资源与生态学研究。
T el : ( 0971)6143282 Email: yanghuil ing@ nw ipb ac cn
* 通讯作者 周党卫 T el: ( 0971) 3526807 Email: dan gw eizh ou@ sina com
生物研究所藏药中心李玉林副研究员提供) , 经归一
化法测定,质量分数达到 98%。
13 药材:长柄秦艽于 2006年 8底至 2006年 9月
初,采自青藏高原不同海拔地区(表 1)。标本存于中
国科学院西北高原生物研究所标本馆,所有标本均由
兰州大学生命科学学院刘建全教授鉴定。为避免生
长年限(以根大小为标准)对活性成分的影响,野外采
集时,挖取大小一致的根,风干、切片后进行分析。
2 方法与结果
2 1 色谱条件 : A lltech C18色谱柱 ( 250 mm
表 1 长柄秦艽样品来源
Table 1 Sample source of G waltonii
编 号 来 源 经 度 纬 度 海拔/ m
Liu2006199 羊卓雍湖,西藏 0∋35(938) 29∋11(446) 4 550
Liu2006229 南木林,西藏 89∋14(362) 29∋45(236) 4 080
Liu2006301 左贡,西藏 97∋23(762) 30∋08(326) 4 070
Liu2006293 然乌,西藏 96∋45(802) 29∋30(292) 3 950
Liu2006275 拉萨,西藏 91∋08(537) 29∋36(790) 3 730
Liu2006284 宫布达,西藏 93∋16(598) 29∋53(363) 3 410
4 6 mm, 5 m) ; 流动相: 甲醇0 5 乙酸水 ( 25 !
75)。进样量: 10 L; 体积流量为 1 0 mL/ min; 柱
温:室温。在 238 nm 下检测马钱酸和獐牙菜苦苷,
在 246 nm下检测龙胆苦苷和獐牙菜苷。
2 2 对照品溶液的制备: 精确称取 31 8 mg 龙胆
苦苷、19 5 mg 马钱酸、5 125 mg 獐牙菜苦苷、
12 05 mg 獐牙菜苷对照品, 置 5 mL 量瓶中, 加甲
醇溶解并稀释至刻度, 摇匀, 过 0 45 m 微孔滤膜,
得对照品溶液, 备用。
2 3 供试品溶液的制备: 将长柄秦艽根部粉碎, 取
待测样品粉末(过40目筛) ,精密称定0 2 g, 置量瓶
中,精密加入甲醇 20 mL, 60 ∀ 超声 30 m in, 滤过,
滤液用甲醇定容至25 mL,摇匀,溶液过 0 45 m 滤
膜,得供试品溶液。
24 线性关系考察:精密吸取储备液 0 5、5、7 5、10、
15 mL 于 25 mL 量瓶中,加甲醇至刻度, 摇匀, 制成 5
个不同系列质量浓度的对照品溶液,分别吸取 10 L
进样。按上述色谱条件测定峰面积,以进样量为横坐
标,峰面积值为纵坐标, 得到马钱酸的回归方程为
Y= 13 204 316 X- 407 775, r= 0 999 0; 獐牙菜苦苷
为Y= 5 131 437 X- 1 077, r= 0 999 2; 龙胆苦苷为
Y= 8 686 153 X- 338 681, r= 0 999 1; 獐牙菜苷为
Y= 2 589 599 X- 3 118, r= 0 998 9。结果表明马钱酸
在2~ 47 g/ mL, 獐牙菜苦苷在 0 4~ 12 g/ mL, 龙
胆苦苷在 2 5~ 76 g/ mL,獐牙菜苷在 09~ 29 g/
mL线性关系良好。
2 5 精密度试验:取同一样品溶液按上述色谱条件
重复进样 5 次,每次 10 L, 样品峰面积 RSD 分别
为龙胆苦苷 2 66%、马钱酸 1 76%、獐牙菜苦苷
2 43%、獐牙菜苷 2 54%。
2 6 重现性试验: 取同一批样品 5份, 制备供试品
溶液, 进样, 每次 10 L, 计算得 4 组分质量分数的
RSD分别为龙胆苦苷 0 24%、马钱酸 1 12%、獐牙
菜苦苷 1 15%、獐牙菜苷 2 34%。
2 7 回收率试验:取药材适量, 加入一定量的混合
对照品溶液, 按照上述样品处理方法制备, 进样量
10 L,计算加样回收率, 得到龙胆苦苷、马钱酸、獐
牙菜苦苷、獐牙菜苷分别为 99 54%、98 87%、
97 97%、99 51%, RSD 分别为 1 28%、2 39%、
2 74%、3 46%( n= 5)。
2 8 稳定性试验: 精密称取样品 0 2 g , 分别于 0、
4、8、12、18、24 h 进样分析, 测定马钱酸、獐牙菜苦
苷、龙胆苦苷和獐牙菜苷的峰面积, RSD 分别为
4 28%、1 51%、1 17%和 2 42% ,表明供试品溶液
24 h内稳定性良好。
2 9 样品测定:取上述制备好的样品溶液, 吸取 10
L 进样测定, 每个样品至少重复进样 3 次,得到龙
胆苦苷、马钱酸、獐牙菜苦苷、獐牙菜苷的峰面积值,
色谱图见图 1, 计算质量分数结果见表 2。
3 讨论
长柄秦艽为龙胆属秦艽组中的重要成员,其植
t/ min
1马钱酸 2獐牙菜苦苷 3龙胆苦苷 4獐牙菜苷
1 loganic acid 2sw et iamarin 3 geatiopicroside 4sw eroside
图 1 对照品(A)和长柄秦艽样品(B)的 HPCL图谱
Fig 1 HPLC Chromatograms of reference substances
(A) and G waltonii samples ( B)
%1721%中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 41 卷第 10 期 2010 年 10月
表 2 长柄秦艽不同样品 4 种活性成分的测定结果( x∗ s, n= 3)
Table 2 Determination of four chemical constituents in G waltonii from diff erent habitats ( x ∗ s, n= 3)
编 号 马钱酸/ ( m g % g- 1) 獐牙菜苷/ ( mg % g- 1) 龙胆苦苷/ ( mg % g- 1) 獐牙菜苦苷/ ( mg % g- 1) 总量/ %
Liu2006199 0 630 ∗ 0 030 0 172 ∗ 0 006 1 598 ∗ 0 094 0 109 3 ∗ 0 010 2 509 3
Liu2006299 0 544 ∗ 0 097 0 100 0 ∗ 0 046 1 601 ∗ 0 045 0 067 3 ∗ 0 011 2 311 3
Liu2006301 0 990 ∗ 0 015 0 982 ∗ 0 032 9 091 ∗ 0 072 0 124 5 ∗ 0 036 11 063
Liu2006293 1 388 ∗ 0 038 0 916 ∗ 0 032 7 164 ∗ 0 174 0 203 7 ∗ 0 041 9 671 7
Liu2006275 0 439 ∗ 0 011 0 083 ∗ 0 024 1 282 ∗ 0 035 0 031 7 ∗ 0 005 1 835 7
Liu2006284 0 345 ∗ 0 018 1 108 ∗ 0 190 0 984 ∗ 0 056 0 044 9 ∗ 0 014 3 934 9
株与麻花秦艽接近,约 30 cm, 根茎粗大, 系统关系
与大叶秦艽相近 [ 13] ,但其指征性组分的量与变化尚
不清楚。采用 HPLC 法,对分布于西藏地区的长柄
秦艽中的龙胆苦苷、马钱酸、獐牙菜苷和獐牙菜苦苷
的量进行了测定。从表 2 中可见,尽管长柄秦艽中
4种化学成分量的变化存在差异,但均含有麻花秦
艽和大叶秦艽中的指征性成分[ 6, 1415]。在所有化学
组分中,除宫布达居群外,不同居群长柄秦艽中龙胆
苦苷的量最高, 马钱酸次之,而獐牙菜苦苷最低, 这
与孙菁等[ 14] 的结果相似。且不同地区长柄秦艽中
龙胆苦苷的量高于或接近#中国药典∃中的要求 [ 12] ,
因此,长柄秦艽可以作为一种重要的秦艽类植物资
源加以利用。
青藏高原环境复杂, 气候多变,这种条件往往对
植物的生长发育产生重要影响, 也严重影响到植物
体内次生代谢产物的变化。对不同海拔长柄秦艽中
4 种化学成分量比较发现, 高海拔地区的左贡
( 3 950 m )马钱酸、龙胆苦苷、獐牙菜苷和獐牙菜苦
苷的量均高于宫布达( 3 400 m ) (表 2)。但不同海
拔居群间, 活性成分的变化较大。不同海拔长柄秦
艽的不同活性成分与海拔高度的相关分析显示, 其
皮尔森相关系数分别为: 0 291、- 0 464、0 165、
0 470( P> 0 05) , 表明 4种活性成分的量与海拔之
间并不相关。这与 Mossi等[ 16] 对鞣酸和三萜类化
合物的分析结果相似。在采收季节, 长柄秦艽中 4
种组分的变化随海拔均呈现出钟状变化的趋势, 在
4 000 m 左右达到最大, 而后随海拔升高呈降低趋
势。有研究表明,由于高海拔处生长季短,光合作用
平均速率降低而导致初级生产量随海拔升高而呈现
曲线变化的趋势,即随着海拔升高生产量先升高, 达
到一定的海拔后再降低[ 17] 。因此,长柄秦艽主要指
征性化合物的这种变化趋势, 可能与其初级代谢的
影响有关,其影响因素值得进一步研究。
尽管在青藏高原不同海拔地区, 都有长柄秦艽
分布,生长于海拔4 000 m 左右区域的长柄秦艽根
中有效成分的量明显高于其他区域。这为在高原地
区利用优良的野生秦艽资源,在合适的区域建立人
工种植基地提供了重要依据。
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