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披针叶黄华种子中金雀花碱的定性和定量分析
周军辉1 ,李 静2 ,李 静1 ,王答祺1 ,李思锋1*
( 1 陕西省西安植物园 陕西省植物研究所,陕西 西安 710061; 2 陕西省生物医药重点实验室, 陕西 西安 710069)
摘 要:目的 应用 H PLC 和 T LC 建立披针叶黄华种子中金雀花碱的定量和定性分析方法。方法 采用超声提
取的方法获得样品,分别采用 TLC 和 H PLC 对披针叶黄华种子中的金雀花碱进行定性鉴别和定量测定。结果
TLC 采用碱性硅胶为固定相,以苯丙酮醋酸乙酯甲醇( 4 2 1 1)为展开剂, 可清晰检出金雀花碱斑点; H PLC
分析中,金雀花碱在 0 04~ 1 2 mg/ mL 与峰面积呈良好的线性关系。结论 本方法样品处理快速简便, 定性与定
量分析分离效果好,准确、快速、干扰少, 可用于披针叶黄华种子原料和金雀花碱产品的质量控制。
关键词:披针叶黄华种子; 金雀花碱; T LC; H PLC;超声提取
中图分类号: R284 2 文献标识码: A 文章编号: 02532670( 2010) 07118403
披针叶黄华 T hermop si s lanceolata RBr 又
名牧马豆、野决明,系豆科( Legumino seae)野决明属
( T hermop si s RBr )多年生草本植物, 分布于中国
东北、华北及西北等广大地区,资源丰富。据资料记
载,本种为有毒植物,其主要有效成分金雀花碱( cy
t isine)对呼吸系统的作用类似烟碱, 能反射性地兴
奋呼吸,是一种临床上用于抗心律失常的生物碱类
药物。近年来, 金雀花碱作为疗效确切的戒烟制剂
原料引起国际医药界的关注, 研究表明, 以金雀花碱
的酒石酸盐为主要成分的戒烟制剂的一年期戒烟有
效率可达 22%,具有可观的发展前景[ 1] 。我国学者
从 20 世纪 70 年代已开始对其化学成分进行研
究[ 2, 3] ,其定量测定有紫外吸收法[ 4] 、原子吸收法 [ 5]
及酸碱滴定法 [ 6] , 本实验采用 TLC 法和 HPLC 法
进行金雀花碱的定性和定量分析,为相关的生产及
检验工作提供实验依据。
1 仪器、药材与试剂
1 1 仪器: Waters 515高效液相色谱仪(包括 Wa
ter s 515泵, Waters 2487检测器等) , N2000 色谱工
作站; Beckman高效液相色谱系统( 125泵, 168PDA
二极管阵列检测器, 32Kar at 工作站, 美国) , Beck
man 508自动进样器。天津东康 DS6150 超声波清
洗机(频率为 40 kHz, 功率为 150 W)。
1 2 药材与试剂: 药材共 10 批次, 于 2007 年和
2008年分别在宁夏盐池, 内蒙古自治区阿拉善左
旗、右旗、前旗,新疆哈密、塔城、阿勒泰,陕西榆林,
青海门源、互助彩集成熟的披针叶黄华的种子, 由陕
西省植物研究所王答祺副研究员鉴定, 样本保存于
陕西省植物研究所; 所用金雀花碱对照品购自 Sig
ma公司, 质量分数在 99% 以上, 药材粉碎后过 40
目筛, 60 ! 干燥 3 h, 密封保存, 待用。HPLC 用甲
醇为色谱纯, 其余试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2 1 T LC定性鉴别:取披针叶黄华种子药材粉末 2
∀1184∀ 中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 41 卷第 7 期 2010 年 7 月
* 收稿日期: 20091213 基金项目:陕西省科学院项目( 2008K13)作者简介:周军辉( 1978 ) ,男,助理研究员,主要从事天然药物化学分离与分析研究。
T el: ( 029) 85251515 Email: zh ou junhui@ sohu com
* 通讯作者 李思锋 T el: ( 029) 85212196 Emai l: lisf60@ sina com
g,加入甲醇 20 mL,超声处理 30 min,滤过,滤液作
为供试品溶液。另取金雀花碱对照品适量, 加甲醇
制成含金雀花碱 1 mg/ mL 的对照品溶液。照#中国
药典∃薄层色谱法试验, 吸取上述各种溶液 5 L 分
别点于碱性硅胶 G薄层板(普通薄层色谱用硅胶 G
以 2%N aOH 水溶液混合均匀后铺板)上, 以苯丙
酮醋酸乙酯甲醇( 4 2 1 1)为展开剂, 展距 10
cm, 取出晾干, 以改良的碘化铋钾试剂显色。供试
品色谱中, 在与对照品色谱相同位置显橘红色斑点,
Rf值在 0 5左右,结果见图 1。
图 1 披针叶黄华种子的鉴别 TLC图谱
Fig 1 TLC Chromatograms of T lanceolata seeds
2 2 HPLC定量测定
2 2 1 色谱条件: 色谱柱为江苏汉邦 Lichro spher
C18柱( 250 mm % 4 6 mm, 5 m) , 流动相为 0 05
mol/ L 磷酸二氢钠溶液甲醇高氯酸氨( 15 mL 85
mL 0 5 g ) ;体积流量 1 0 mL/ min;检测波长 305
nm ;柱温 25 ! ;进样量10 L;理论塔板数按金雀花
碱峰计算应不低于 5 000, 色谱图见图 2。
图 2 金雀花碱对照品(A)和披针叶黄华(B)的 HPLC图谱
Fig 2 HPLCChromatograms of cytisine reference
substance (A) and T lanceolata ( B)
2 2 2 对照品溶液的制备:精密称取金雀花碱对照
品 10 0 mg,置 100 mL 量瓶中, 加甲醇至刻度, 摇
匀,即得。
2 2 3 供试品溶液的制备: 精密称定样品粉末
0 500 g 左右,置具塞锥形瓶中,加入 20 mL 的 80%
甲醇溶液,超声 15 min取出, 放冷至室温, 滤过, 滤
液置 100 mL 量瓶中;重复上述操作 2次, 每次加入
20 mL 的 80% 甲醇, 最后用适量 80% 甲醇洗涤残
渣,分别滤过;合并滤液置上述 100 mL 量瓶中, 加
入去除甲醇的流动相溶液至刻度,摇匀, 0 45 m 微
孔滤膜滤过, 即得。
2 2 4 线性关系考察:将上述金雀花碱对照品溶液
稀释成不同质量浓度的对照品溶液, 在上述色谱条
件下分别进样测定,以进样量为横坐标,以峰面积为
纵坐标绘制标准曲线, 经回归处理得回归方程 y=
491 008 x+ 488 405, r= 0 999 7。金雀花碱在0 04~
1 2 mg/ mL 呈良好的线性关系。
2 2 5 精密度试验:取同一批供试品溶液, 精密吸
取 10 L,按 2 1项下色谱条件重复进样 5次,测定
金雀花碱峰面积, 峰面积 RSD为 0 42%。
2 2 6 重现性试验: 取同一批供试药材, 按 2 2 3
项下供试品溶液制备方法制备 5 份供试品溶液, 进
样测定,结果该批药材中金雀花碱质量分数平均为
1 73% , RSD为 0 62%。
2 2 7 稳定性试验:取同一批供试品溶液, 精密吸
取 10 L,每隔 2 h 测定 1次金雀花碱峰面积,共测
定 5次,其峰面积的 RSD为 1 12%, 表明供试品溶
液在 8 h 内稳定。
2 2 8 回收率试验:采用加样回收法。分别精密称
取 3个批次已测定的披针叶黄华种子药材约 0 300
g , 6份,分别加入含金雀花碱 0 1 mg / mL 的对照品
溶液 4、6、8 mL, 按 2 2 3项下供试品溶液制备方法
制备供试品, 各进样 10 L, 结果加样回收率为
98 2% , RSD为 1 22%( n= 6)。
2 2 9 样品测定:取供试药材粉末 10批, 各 3份,
每份约 0 500 g , 按供试品溶液制备方法制备供试
品,在上述色谱条件下测定样品中金雀花碱的量,结
果见表 1。
表 1 不同批次的披针叶黄华中金雀花碱的测定结果( n= 3)
Table 1 Determination of cytisine in different
batches of T lanceolata ( n= 3)
批次 金雀花碱/ % 批次 金雀花碱/ %
070812 0 81 080911 1 32
070815 1 32 080916 1 36
070817 1 86 080825 0 89
070822 0 69 080901 1 29
080801 0 87 081015 1 59
3 讨论
3 1 金雀花碱的定量测定方法有紫外吸收法、滴定
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法和原子吸收光谱法 3种。紫外吸收法和滴定法测
定结果的准确性与样品的质量分数有直接关系, 对
于高纯度的金雀花碱产品,本方法是适用的, 但对于
含杂质较多的供试品,由于杂质的干扰, 测定结果并
不理想;原子吸收光谱法的供试品处理方法比较繁
琐,且操作方法的通用性较差,不能满足生产和日常
检验的需要,因此有必要探索其他的分析方法。
3 2 实验过程中发现, 2 2 3项下供试品溶液制备
过程中如果用 80%甲醇定容,进样后色谱图的分离
效果变差, 色谱柱易污染。推测是由于种子类药材
含脂溶性成分较多, 在本实验色谱条件下不易洗脱,
改用本实验所述供试品处理方法后,可明显改善分
析效果、保护色谱系统。
3 3 采用本实验的色谱条件, 随机测定了 10 批披
针叶黄华药材中金雀花碱的量,结果令人满意,本方
法可对披针叶黄华药材以及金雀花碱产品的定量测
定提供依据。
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72
HPLC法测定不同采收期栽培藏木香中内酯类成分
董 琦,马世震, 胡凤祖*
(中国科学院西北高原生物研究所, 青海 西宁 810001)
摘 要: 目的 测定不同采收期栽培藏木香中土木香内酯和异土木香内酯的量,确定最佳采收期,为提高药材质量
提供依据。方法 采用 H PLC 法,色谱柱为 XDBC18( 150 mm % 4 5 mm, 5 0 m) ,流动相为乙腈0 01%醋酸水溶
液( 55 45) , 检测波长 202 nm,体积流量1 0 mL/ min,柱温 30 ! 。结果 栽培藏木香在不同采收期土木香内酯和
异土木香内酯的总量不同, 9 月份的量最高。结论 藏木香的最佳采收期为 9 月份。
关键词:藏木香; 不同采收期;土木香内酯; 异土木香内酯
中图分类号: R284 2 文献标识码: A 文章编号: 02532670( 2010) 07118602
藏木香为菊科植物总状土木香 I nula racemosa
Hook f 的干燥根, 藏语中称为∋玛奴(, 主要分布在
四川、青海、甘肃、西藏等省, 以根入药, 具有行气镇
痛、健脾消食、温中和胃、胸腔胀痛、食积不消、止痛
安胎作用[ 1~ 3] 。土木香内酯和异土木香内酯是藏木
香的主要活性成分 [ 4, 5] , 其量高低直接影响药材的
质量与疗效。本实验以不同采收期的栽培藏木香为
对象,采用 H PLC 法对土木香内酯、异土木香内酯
进行定量分析, 为确定最佳采收期从而提高药材质
量提供依据。
1 材料、试剂与仪器
试验材料: 栽培藏木香由本所与青海大通宝库
林场合作试验基地提供, 采于 2008年 5月至 10月,
由本所陈世龙研究员鉴定。样品经阴干,粉碎后, 过
80目筛,备用。
Ag ilent 1200 高效液相色谱仪 (带 G1315D
DAD检测器) , Chemstat ion 工作站, M OLEMENT
元素型超纯水机(上海摩勒生物科技有限公司)。
土木香内酯对照品( 110761200204)、异土木香
内酯对照品( 110760200507) , 中国药品生物制品检
定所。乙腈(色谱纯) , 甲醇 (分析纯) , 醋酸 (分析
纯) ,水为超纯水。
2 方法与结果
2 1 色谱条件: 色谱柱为 ZORBAX Eclipse XDB
C18 ( 150 mm % 4 5 mm , 5 0 m) , 流动相为乙腈
0 01%醋酸水溶液( 55 45) , 检测波长 202 nm, 体
积流量 1 0 mL/ min,柱温 30 ! ,进样量 10 L。色
谱图见图 1。
∀1186∀ 中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 41 卷第 7 期 2010 年 7 月
* 收稿日期: 20090903 作者简介:董 琦( 1980 ) ,女,吉林省通化市人,工程师,硕士,从事分析化学工作。
T el: ( 0971) 6132750 Fax: ( 0971) 6143282 Email: qdong@ nw ipb ac cn