全 文 ：中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 42 卷 第 7 期 2011 年 7 月 ·1341·
HPLC 法测定山楂叶总黄酮磷脂复合物中牡荆素鼠李糖苷
王鑫波 1，高 敏 2, 3，童丽姣 1，叶姣云 2，石森林 2*
1. 临安市中医院，浙江 临安 311300
2. 浙江中医药大学药学院，浙江 杭州 310053
3. 上海睿智化学研究有限公司，上海 201203
摘 要：目的 建立山楂叶总黄酮磷脂复合物中牡荆素鼠李糖苷的 HPLC 测定方法。方法 色谱柱为 Zorbax SB C18柱（250
mm×4.6 mm，5 μm），流动相为乙腈（A）-水（B），梯度洗脱：0～5 min，5%～10% A；5～10 min，10%～18% A；10～
30 min，18% A；体积流量 1.0 mL/min，检测波长 334 nm，柱温 30 ℃。结果 牡荆素鼠李糖苷在 4.296～64.440 μg/mL 与
峰面积值线性关系良好（r＝1.000 0），平均回收率为 100.83%，RSD 为 2.12%。结论 建立的测定方法简便、准确、灵敏，
可用于山楂叶总黄酮磷脂复合物中牡荆素鼠李糖苷的测定。
关键词：山楂叶总黄酮；磷脂复合物；牡荆素鼠李糖苷；大豆磷脂；高效液相色谱法
中图分类号：R286.02 文献标志码：B 文章编号：0253 - 2670(2011)07 - 1341 - 03
Determination of rhamnosylvitexin in hawthorn leaves flavonoids phospholipid
complex by HPLC
WANG Xin-bo1, GAO Min2, 3, TONG Li-jiao1, YE Jiao-yun2, SHI Sen-lin2
1. Lin’an Chinese Medical Hospital, Lin’an 311300, China
2. College of Pharmacy, Zhejiang Chinese Medical University, Hangzhou 310053, China
3. Shanghai Chempartner Co., Ltd., Shanghai 201203, China
Key Words: hawthorn leaves flavonoids; phospholipid complex; rhamnosylvitexin; soybean phospholipids; HPLC

山楂叶总黄酮（商品名为益心酮）主要含有槲
皮素、金丝桃苷、牡荆素、牡荆素鼠李糖苷、山柰
酚、芦丁等，主要用于治疗心血管疾病，有降压、
增加冠脉血流量、调血脂、耐缺氧、强心、改善血
液流变、抗心肌缺血、抗心律失常等作用[1-6]。其中
牡荆素鼠李糖苷是重要有效成分之一，具有扩张冠
状血管、保护实验性心肌缺血、改善心肌供血量、
调血脂等作用[7-8]。
国内已上市的益心酮制剂主要有片剂、滴丸、
胶囊剂等口服固体剂型，目前存在的主要问题是其
口服生物利用度较低，药效不理想。其原因可能是
山楂叶总黄酮中黄酮类化合物大多以黄酮苷形式存
在，由于糖基的连接，具有较大的亲水性和相对分
子质量，经小肠的吸收较差。为解决该问题，本课
题组采用磷脂复合物固体分散技术，制备了山楂叶
总黄酮磷脂复合物，磷脂的加入可有效提高药物的
亲脂性，提高生物利用度。本实验采用反相 HPLC
法，以乙腈-水为流动相梯度洗脱，对山楂叶总黄酮
磷脂复合物中牡荆素鼠李糖苷进行定量测定，为其
质量控制提供科学而适用的分析和评价手段。
1 仪器与材料
UV—2450 紫外分光光度计（日本岛津）；
Agilent 1200 高效液相色谱仪（美国安捷伦色谱工作
站）；KH—250DB 型数控超声波清洗器（昆山禾创
市超声仪器有限公司）；JA2003N 电子天平（上海
精密科学仪器有限公司）；XS105 分析天平（梅特
勒-托利多仪器上海有限公司）。
牡荆素鼠李糖苷对照品（批号 111668-200401，
中国药品生物制品检定所）；山楂叶总黄酮磷脂复合
物（自制，山楂叶总黄酮与磷脂按质量比 1∶2 制备，

收稿日期：2010-11-01
基金项目：浙江省中医药科技项目（2008CA090）
作者简介：王鑫波（1965—），男，副主任中药师，主要从事中药制剂新技术和新剂型的研究。Tel: 13506815300 E-mail: hzlawxb@163.com
*通讯作者 石森林 Tel: 13157106148 E-mail: pjstone@163.com
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批号 090702、090703、090704、090705）；乙腈、甲
醇为色谱纯；水为去离子水；其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 检测波长的选择
取牡荆素鼠李糖苷对照品、山楂叶总黄酮磷脂
复合物（批号 090705）适量，用甲醇溶解并适当稀
释，于 200～800 nm 波长进行扫描，由扫描结果确
定检测波长为 334 nm。
2.2 色谱条件
Zorbax SB C18 柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；
流动相为乙腈（A）-水（B），梯度洗脱程序：0～5
min，5%～10% A；5～10 min，10%～18% A；10～
30 min，18% A；体积流量 1.0 mL/min；检测波长
334 nm；柱温 30 ℃；进样量 5 µL。
2.3 对照品溶液的制备
取牡荆素鼠李糖苷对照品约 10 mg，精密称定，
置 100 mL 量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇
匀，得对照品储备液。精密量取对照品储备液 10 mL
置 50 mL 量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得
对照品溶液。
2.4 供试品溶液的制备
取山楂叶总黄酮磷脂复合物 75 mg，精密称定，
置 50 mL 量瓶中，加入甲醇适量，超声处理 30 min，
取出放凉，用甲醇定容至刻度，密塞，摇匀，滤过，
取续滤液备用；精密量取各续滤液 5 mL，置 10 mL
量瓶中，分别加入甲醇稀释并定容至刻度，摇匀，
即得。
2.5 系统适用性试验
精密量取对照品储备液适量，以甲醇稀释至适
当质量浓度；同时配制相应的山楂叶总黄酮磷脂复
合物（批号为 090705）和大豆磷脂的甲醇溶液，在
上述色谱条件下进行系统适用性试验，结果表明牡
荆素鼠李糖苷保留时间约为 18 min，理论塔板数大
于 6 000、分离度大于 1.5，拖尾因子在 0.95～1.05，
符合分析要求，大豆磷脂对测定无干扰。色谱图见
图 1。




* 牡荆素鼠李糖苷
* rhamnosylvitexin
图 1 牡荆素鼠李糖苷对照品（A）、山楂叶总黄酮磷脂复合物（B）和大豆磷脂（C）的 HPLC 色谱图
Fig. 1 HPLC chromatograms of rhamnosylvitexin reference substance (A), hawthorn leaves flavonids
phospholipid complex (B), and soybean phospholipids (C)

2.6 线性关系考察
精密称取牡荆素鼠李糖苷对照品适量，用色谱
纯甲醇配成 107.4 µg/mL 对照品储备液。分别精密
量取上述对照品储备液 0.4、0.8、1.2、1.6、2.0、2.4、
4.0、6.0 mL，置 10 mL 量瓶中以甲醇稀释至刻度，
配成不同质量浓度的系列牡荆素鼠李糖苷对照品溶
液，按上述色谱条件分别进样 5 µL，记录色谱图，
以峰面积为纵坐标，质量浓度为横坐标进行线性回
归，得回归方程 Y＝8.720 1 X－0.366 4，r＝1.000 0，
表明牡荆素鼠李糖苷在 4.296～64.440 µg/mL 与峰
面积的线性关系良好。
2.7 精密度试验
精密量取山楂叶总黄酮磷脂复合物（批号
090705）供试品溶液 5 µL，按上述色谱条件进行测
定，连续进样 6 次，记录色谱图，计算得牡荆素鼠
李糖苷峰面积的 RSD 为 0.32%。
2.8 稳定性试验
精密量取山楂叶总黄酮磷脂复合物（批号
090705）供试品溶液 5 µL，按上述色谱条件，分别
于 0、2、4、6、8、10、12、24 h 以及连续 7 d 测定，
记录峰面积，计算得牡荆素鼠李糖苷日内峰面积的
RSD 为 1.07%，日间峰面积的 RSD 为 1.34%，表明
供试品溶液的稳定性良好。
2.9 重现性试验
取山楂叶总黄酮磷脂复合物（批号 090705）6
份，每份 75 mg，精密称定，制备供试品溶液。分
*
*
A B C
0 5 10 15 20 25 30 35 0 5 10 15 20 25 30 35 0 5 10 15 20 25 30 35
t / min
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别按上述色谱条件测定，记录峰面积，计算得山楂
叶总黄酮磷脂复合物中牡荆素鼠李糖苷质量分数的
RSD 为 1.58%。
2.10 加样回收率试验
取山楂叶总黄酮磷脂复合物（批号 090705）6
份，每份 75 mg，精密称定，分别置 25 mL 量瓶中，
各加入牡荆素鼠李糖苷对照品约 2.8 mg，精密称定，
制备供试品溶液。按上述色谱条件测定，记录峰面
积，计算得牡荆素鼠李糖苷的平均回收率为
100.83%，RSD 为 2.12%。
2.11 样品测定
取批号 090702、090703、090704、090705 的山
楂叶总黄酮磷脂复合物各 3 份，每份 75 mg，精密
称定，制备供试品溶液。按上述色谱条件进样测定，
记录峰面积，按外标法计算山楂叶总黄酮磷脂复合
物中牡荆素鼠李糖苷的质量分数，结果见表 1。

表 1 样品测定（n＝3）
Table 1 Determination of sample (n = 3)
批 号 牡荆素鼠李糖苷/%
090702 2.92
090703 2.91
090704 2.95
090705 2.93

3 讨论
3.1 供试品溶液的制备
样品处理中采用超声提取牡荆素鼠李糖苷，可
减少加热对黄酮苷的破坏，同时该方法简单，效果
好；采用单因素试验考察了提取溶剂（甲醇、乙醇、
无水乙醇）和提取时间（30、60、90 min）对提取
效果的影响，结果表明甲醇作为提取溶剂时提取效
果最好，而超声时间对测定结果几乎无影响，因此
供试品溶液的制备采用超声方法，以甲醇为溶剂提
取 30 min。
3.2 流动相的选择
在实验过程中，发现流动相体系的选择比较困
难，参考文献方法[9-11]选用甲醇-0.1%磷酸水体系、
乙腈-0.1%磷酸水体系、甲醇-0.5%冰醋酸水体系、
乙腈-0.5%冰醋酸水体系，以及在体系中加入四氢呋
喃、异丙醇等分离效果均不理想，在反复摸索中选
用乙腈-水体系进行梯度洗脱，分离效果较好，色谱
峰对称性好，分析时间 30 min，符合实验要求，同
时未引入毒性大的四氢呋喃，所选用的流动相安全、
经济。
3.3 方法专属性
《中国药典》2010 年版一部收载了山楂叶总黄
酮及其制剂山楂叶总黄酮片，其质控指标成分均为
金丝桃苷，金丝桃苷虽为主要活性成分之一，但量
非常低（金丝桃苷不少于 0.40%），且为非专属性
成分。而牡荆素鼠李糖苷为山楂叶、山楂叶总黄酮
和益心酮片中重要的药理活性成分，且量较高（山
楂叶总黄酮原料中为 9.00%），且为专属性成分[12]，
更适宜作为山楂叶总黄酮、山楂叶总黄酮磷脂复合
物及其制剂的质量控制指标。
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