全 文 ：纳米雄黄混悬液诱导 Ｓｉｈａ细胞凋亡及对
ＨＰＶ１６Ｅ６／Ｅ７表达的影响
刘　嵘１，２，濮德敏１，赵立波３，程艳香１，尹　伶１，李　天１
（１．华中科技大学 同济医学院 附属同济医院 妇产科，湖北 武汉 ４３００３０；
２．解放军４５７医院 妇产科，湖北 武汉 ４３００１２；
３．华中科技大学 同济医学院 基础医学院 药理学系，湖北 武汉 ４３００３０）
［摘要］　目的：探讨纳米雄黄混悬液对人宫颈癌Ｓｉｈａ细胞的抑制增殖、诱导凋亡作用及其对 ＨＰＶ１６Ｅ６和 Ｅ７
致瘤基因的影响。方法：采用微射流法制备纳米雄黄混悬液，应用不同质量浓度（６２５，１２５，２５，５０ｍｇ·Ｌ－１）的纳
米雄黄混悬液作用于Ｓｉｈａ细胞不同时间（１２，２４，４８，７２ｈ），光镜和透射电镜观察实验组（不同质量浓度的纳米雄
黄混悬液处理组）和对照组（不加药物的细胞）细胞的形态学变化；琼脂糖凝胶电泳观察凋亡细胞 ＤＮＡＬａｄｄｅｒ形
成；ＭＴＴ比色法测定细胞生长抑制情况；流式细胞仪检测细胞凋亡率及细胞周期改变；ＲＴＰＣＲ方法检测 ＨＰＶ１６Ｅ６
和Ｅ７的表达。结果：纳米雄黄混悬液２５～５０ｍｇ·Ｌ－１处理Ｓｉｈａ细胞４８，７２ｈ后，细胞存活率降低，凋亡增加，作用
呈时间剂量依赖关系。电镜显示细胞呈典型的凋亡形态学改变，琼脂糖凝胶电泳显示凋亡细胞ＤＮＡＬａｄｄｅｒ形成；
流式细胞术检测证实细胞凋亡率与纳米雄黄混悬液作用浓度呈明显相关，与对照组相比，差异有极显著意义（Ｐ＜
００１），且细胞呈Ｇ０Ｇ１期阻滞。ＲＴＰＣＲ检测显示随着纳米雄黄混悬液作用浓度的增加，ＨＰＶ１６Ｅ６和Ｅ７的表达不
同程度地受到抑制。结论：纳米雄黄混悬液对于 Ｓｉｈａ细胞具有诱导凋亡、抑制增殖的作用，其机制可能与其抑制
ＨＰＶ１６Ｅ６和Ｅ７致瘤基因的表达有关。
［关键词］　纳米雄黄混悬液；Ｓｉｈａ细胞；细胞凋亡；ＨＰＶ１６Ｅ６；ＨＰＶ１６Ｅ７
［中图分类号］Ｒ２８５．５　［文献标识码］Ａ　［文章编号］１００１５３０２（２００８）０１００５４０５
［收稿日期］　２００７０４１０
［基金项目］　湖北省科技攻关项目（２００７ＡＡ３０１Ｂ３８３）
［通讯作者］　濮德敏，Ｔｅｌ：（０２７）６７１６０５７８，Ｆａｘ：（０２７）８３３６２９
６５，Ｅｍａｉｌ：ｌｉｕｒｏｎｇｄｏｃｔｏｒ＠１６３．ｃｏｍ
　　雄黄是中医内治外用常用药之一。近年来，雄
黄在临床上用于治疗急性早幼粒细胞白血病
（ＡＰＬ）、慢性粒细胞白血病（ＣＭＬ）等恶性血液系统
疾病的疗效已得到国内外肯定。有研究表明，雄黄
对实体肿瘤亦有治疗作用。宫颈癌是一种严重危害
全世界妇女健康和生命的恶性肿瘤，它的发病与高
危性人乳头瘤病毒（ｈｕｍａｎｐａｐｉｌｏｍａｖｉｒｕｓ，ＨＰＶ）感
染有关，其中 ＨＰＶ１６，ＨＰＶ１８感染是宫颈癌发生发
展的首要因素，病毒的早期基因 Ｅ６，Ｅ７的表达产物
在宫颈上皮细胞的恶性转化和维持恶性表型中起着
重要作用。作者采用微射流法制备纳米雄黄混悬
液，通过其对宫颈癌 Ｓｉｈａ细胞生长、形态学以及细
胞周期等影响，研究了纳米雄黄的凋亡诱导效应及
对ＨＰＶ１６Ｅ６和Ｅ７表达的影响，为纳米雄黄治疗实
体肿瘤的临床应用提供实验依据。
１　材料与方法
１．１　药物与试剂　雄黄购于湖北省药材公司，产地
湖南石门，经本校中药鉴定教研室鉴定，为硫化物类
矿物药雄黄族雄黄（ｒｅａｌｇａｒ），四硫化四砷（Ａｓ４Ｓ４）纯
度为９２３％。宫颈癌细胞株 Ｓｉｈａ购于美国典型物
种保藏中（ＡＴＣＣ），胎牛血清（杭州四季青），ＤＭＥＭ
培养基（美国Ｇｉｂｃｏ公司），四甲基偶氮唑蓝（ＭＴＴ）、
二甲基亚砜（ＤＭＳＯ），碘化丙啶（ＰＩ），ＲＮＡ酶（Ｓｉｇｍａ
公司），Ｔｒｉｚｏｌ试剂（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ公司），ＲＴＰＣＲ试剂
盒（Ｐｒｏｍｅｇａ公司）、引物（上海生工），ＰＣＲｍａｒｋｅｒ
（武汉生命技术有限公司），其他试剂均为国产分析
纯。
１．２　仪器　Ｍ－１１０ＥＨ型微射流制粒机为上海鲤
跃精密机械贸易有限公司产品，Ｎｉｃｏｍｐ３８０ＺＬＳ型
粒度测定仪为美国 ＰａｒｔｉｃｌｅＳｉｚｉｎｇＳｙｓｔｅｍｓ粒度分析
仪公司生产，ＧＥ２０００－５型相差显微镜为日本 Ｎｉ
·４５·
第３３卷第１期
２００８年１月
　　　　　　　　　
　　　 中 国 中 药 杂 志
ＣｈｉｎａＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭａｔｅｒｉａＭｅｄｉｃａ
　　　　　　　
Ｖｏｌ．３３，Ｉｓｓｕｅ　１
Ｊａｎｕａｒｙ，２００８
ｋｏｎ公司生产，Ｈ－６００型透射电镜为日本Ｈｉｔａｃｈｉ公
司产品。
１．３　药物制备　将经过５００目筛的雄黄样品３ｇ，
加蒸馏水至３００ｍＬ，磁力搅拌器搅拌３０ｍｉｎ，加入
Ｍ－１１０ＥＨ型微射流制粒机，３００００ｒ·ｍｉｎ－１，１０个
循环，最后１次５０００ｒ·ｍｉｎ－１。超声３０ｍｉｎ，再过
０２２μｍ微孔滤器除菌，密封避光４℃保存。用分
光光度法测定其浓度［１］，在 Ｎｉｃｏｍｐ３８０ＺＬＳ型粒度
测定仪上测定粒度。使用时用含１５％胎牛血清的
ＤＭＥＭ培养基稀释至工作浓度。
１．４　细胞培养　Ｓｉｈａ细胞培养于含１０％胎牛血清
的ＤＭＥＭ培养基中，在含５％ＣＯ２，３７℃饱和湿度的
培养箱中培养。根据预试验结果设定用药剂量，实
验选用对数生长期细胞。
１．５　细胞形态学观察　每瓶（２５ｃｍ２）接种１５×
１０５个／ｍＬ细胞，２４ｈ后分别加入不同质量浓度
（６２５，１２５，２５，５０ｍｇ·Ｌ－１）的纳米雄黄混悬液作
为实验组，不加药物的细胞为对照组。每天用相差
显微镜观察并照相记录实验组和对照组的细胞形态
变化。电镜观察凋亡细胞超微结构：收集 １×１０７
个／ｍＬ实验组和对照组的 Ｓｉｈａ细胞，ＰＢＳ洗 ２次，
４％戊二醛４℃固定２４ｈ，ＰＢＳ洗２次，丙酮梯度脱
水，环氧树脂包埋，ＬＫＢ超薄切片机切片，铅铀双染
色后在Ｈ－６００型透射电镜下观察。
１．６　ＤＮＡ电泳　收集实验组作用４８ｈ的 Ｓｉｈａ细
胞和对照组细胞，按照ＤＮＡ提取试剂盒说明书提取
基因组ＤＮＡ，行琼脂糖凝胶电泳，用凝胶成像分析
系统进行拍照分析。
１．７　ＭＴＴ法测定纳米雄黄混悬液对Ｓｉｈａ细胞的生
长抑制效应　取９６孔板，每孔接种５×１０４个／ｍＬ细
胞，培养 ２４ｈ后分别加入不同质量浓度（６２５，
１２５，２５，５０ｍｇ·Ｌ－１）的纳米雄黄混悬液，继续培养
１２，２４，４８，７２ｈ后，每孔加入 ２０μＬＭＴＴ（５ｍｇ·
ｍＬ－１，用００１ｍｏｌ·Ｌ－１ＰＢＳ配制），再在同样条件
下培养４ｈ，弃去 ＭＴＴ，加入１５０μＬＤＭＳＯ，振荡均
匀１０ｍｉｎ，在酶标仪上读取波长为４５０ｎｍ的吸光度
（Ａ）值，根据如下公式计算细胞生长抑制率。
细胞生长抑制率（％）＝（对照组Ａ－实验组Ａ）／对照组
Ａ×１００％
１．８　流式细胞仪检测细胞凋亡　取对数生长期的
Ｓｉｈａ细胞，传代接种２４ｈ后，分别加入不同质量浓
度（６２５，１２５，２５，５０ｍｇ·Ｌ－１）的纳米雄黄混悬
液，继续培养４８ｈ后，消化收集细胞；ＰＢＳ洗２次，
１０００ｒ·ｍｉｎ－１离心５ｍｉｎ，将７０％冷乙醇缓慢滴入
试管，并不停摇动试管，使细胞分散固定，－２０℃过
夜；ＰＢＳ洗涤，离心１０ｍｉｎ（１５００ｒ·ｍｉｎ－１），弃上
清；预冷的（－２０℃）７０％乙醇于－２０℃固定过夜。
取固定后的细胞用 ＰＢＳ洗涤 ２次并悬浮，加入终质
量浓度为１００ｍｇ·Ｌ－１ＲＮａｓｅＡ和 ５０ｍｇ·Ｌ－１ＰＩ
染液，摇匀，避光静置１ｈ后上流式细胞仪进行细胞
周期分析，采用ＣＥＬＬＱｕｅｓｔ软件进行数据处理。
１．９　ＨＰＶ１６Ｅ６／Ｅ７基因的表达　分别收集对照组
和不同质量浓度（６２５，１２５，２５，５０ｍｇ·Ｌ－１）纳米
雄黄混悬液作用４８ｈ的Ｓｉｈａ细胞，用 Ｔｒｉｚｏｌ试剂提
取细胞中的总ＲＮＡ，紫外分光光度仪测其纯度及浓
度，所有样品的 Ａ２６０／Ａ２８０比值均 ＞１８０。引物序列
如下：ＨＰＶ１６Ｅ６（２９８ｂｐ）上游引物：５′ＴＴＡＣＣＡ
ＣＡＧＴＴＡＴＧＣＡＣＡＧＡ３′，下 游 引 物：５′ＡＣＡＧＴＧ
ＧＣＴＴＴＴＧＡＣＡＧＴＴＡ３′；ＨＰＶ１６Ｅ７（３１５ｂｐ）上游引
物：５′ＡＧＡＡＡＣＣＣＡＧＣＴＧＴＡＡＴＣＡＴ３′，下游引物：
５′ＴＴＡＴＧＧＴＴＴＣＴＧＡＧＡＡＣＡＧＡ３′，内参照 ＧＡＰＤＨ
（５４０ｂｐ）上游引物：５′ＧＴＧＧＧＧＣＧＣＣＣＣＡＧＧＣＡＣ
ＣＡ３′，下 游 ５′ＣＴＣＣＴＴＡＡＴＧＴＣＡＣＧＣＡＣＧＡＴＴＴ
Ｃ３′。引物用碳酸二乙酯（ＤＥＰＣ）水稀释成 １５
ｐｍｏｌ·Ｌ－１，４℃保存。ＲＴＰＣＲ反应条件：１３μＬ
ＤＥＰＣ水，５×ｂｕｆｅｒ６μＬ，ＨＰＶ１６Ｅ６／Ｅ７和 ＧＡＰＤＨ
上、下游引物各 ３μＬ，ＭＭＬＶ逆转录酶（１μＬ）及
ＴａｑＤＮＡ聚合酶共１５μＬ，逆转录反应条件如下：逆
转录４６℃ ４０ｍｉｎ，灭活９４℃ ２ｍｉｎ。ＰＣＲ扩增条
件如下：变性９４℃３０ｓ，退火５５℃６０ｓ，延伸７２℃
６０ｓ，３０个循环，最后１个循环在７２℃延伸１０ｍｉｎ，
ＰＣＲ产物在 １８％的琼脂糖凝胶上进行分析并拍
照。
１．１０　统计学处理　全部数据以 珋ｘ±ｓ表示，采用 ｔ
检验及方差分析做组间数据比较。数据统计分析由
ＳＰＳＳ１２０软件完成。
２　结果
２．１　Ｓｉｈａ细胞凋亡的形态学变化　光镜下观察细
胞形态学，正常情况下，Ｓｉｈａ细胞形状不规则，可为
多角形、梭形等，核仁 ２～３个，贴壁生长。２５ｍｇ·
Ｌ－１纳米雄黄混悬液作用 Ｓｉｈａ细胞２４ｈ，即可见少
量细胞变圆；４８ｈ后细胞之间距离增大，变圆的细
胞数量增多，可见细胞皱缩，染色质凝集，并有凋亡
小体形成；７２ｈ后凋亡细胞数进一步增加，见细胞
·５５·
第３３卷第１期
２００８年１月
　　　　　　　　　
　　　 中 国 中 药 杂 志
ＣｈｉｎａＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭａｔｅｒｉａＭｅｄｉｃａ
　　　　　　　
Ｖｏｌ．３３，Ｉｓｓｕｅ　１
Ｊａｎｕａｒｙ，２００８
脱落悬浮于培养基中，部分细胞体积增大，膜破裂呈
细胞坏死状。５０ｍｇ·Ｌ－１的纳米雄黄混悬液处理
Ｓｉｈａ细胞，上述变化出现的更早、更显著。透射电镜
下Ｓｉｈａ细胞形态学改变，呈现细胞凋亡特征性的形
态学变化：实验组细胞表现为细胞体积变小，细胞微
绒毛消失，胞内大量空泡形成；常染色质增加，核质
比例减小；部分细胞呈典型的凋亡改变：核膜内陷，
不规则，细胞染色质边集，固缩，紧靠核膜，聚居于细
胞核核膜下，呈境界分明的团块状、花瓣状，细胞核
碎裂细胞核固缩，胞质呈片状脱落。随着药物浓度
的增加及时间的延长愈加明显。对照组凋亡现象不
明显，染色质分布均匀。见图１。
图１　不同质量浓度纳米雄黄混悬液作用Ｓｉｈａ细胞４８ｈ后的形态学变化（×４００）
１～４．分别为５０，２５，１２５，６２５ｍｇ·Ｌ－１的纳米雄黄混悬液处理组；５．对照组
２．２　ＤＮＡ片断化分析　提取细胞基因组 ＤＮＡ经
琼脂糖凝胶电泳。５０ｍｇ·Ｌ－１组可见比较明显的梯
状ＤＮＡ条带形，ＤＮＡ形成１８０～２００ｂｐ碎片，而正
常对照组和６２５～１２５ｍｇ·Ｌ－１为一条完整的条
带。见图２。
图２　宫颈癌Ｓｉｈａ细胞ＤＮＡ片断化分析结果
Ｍ．ＤＮＡ分子质量标准；１～４．分别为５０，２５，１２５，６２５ｍｇ·Ｌ－１
的纳米雄黄混悬液组；５．对照组
２．３　对Ｓｉｈａ细胞的增殖抑制效应　纳米雄黄混悬
液对Ｓｉｈａ细胞具有明显的抑制增殖作用，纳米雄黄
混悬液对Ｓｉｈａ细胞的这种作用呈时间和剂量依赖
关系。１２５ｍｇ·Ｌ－１纳米雄黄混悬液对 Ｓｉｈａ细胞
的增殖抑制作用不明显，２５～５０ｍｇ·Ｌ－１纳米雄黄
混悬液处理Ｓｉｈａ细胞２４，４８，７２ｈ后细胞增殖抑制
率均随浓度的增加而升高。见图３。
图３　不同质量浓度纳米雄黄混悬液处理Ｓｉｈａ细胞
不同时间后的细胞增殖抑制率
２．４　流式细胞仪分析结果　６２５ｍｇ·Ｌ－１纳米雄
黄混悬液处理 Ｓｉｈａ细胞４８ｈ后，未出现亚 Ｇ１期凋
亡峰；２５ｍｇ·Ｌ－１纳米雄黄混悬液处理Ｓｉｈａ细胞４８
ｈ后，即可出现明显凋亡峰，凋亡率为２６８３％。随
着用药浓度增加，凋亡峰逐渐加大，凋亡率相应增
·６５·
第３３卷第１期
２００８年１月
　　　　　　　　　
　　　 中 国 中 药 杂 志
ＣｈｉｎａＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭａｔｅｒｉａＭｅｄｉｃａ
　　　　　　　
Ｖｏｌ．３３，Ｉｓｓｕｅ　１
Ｊａｎｕａｒｙ，２００８
加，５０ｍｇ·Ｌ－１纳米雄黄混悬液处理Ｓｉｈａ细胞４８ｈ
后，凋亡率为３３０２％。不同质量浓度纳米雄黄混
悬液处理Ｓｉｈａ细胞４８ｈ后，其细胞周期和凋亡率变
化见表１。
表１　不同质量浓度纳米雄黄混悬液作用４８ｈＳｉｈａ细胞周期和凋亡率比较（珋ｘ±ｓ，ｎ＝５）
组别 剂量／ｍｇ·Ｌ－１ Ｇ０Ｇ１ Ｓ Ｇ２Ｍ 凋亡率／％
对照　　 － ５８７８±３８１ ２８０９±３４５ １３３２±３１１ １６１±０２４
纳米雄黄 ６２５ ５９２３±４３５ ２９１８±３７２ １１５６±３２５ ２３８±０３２
　 １２５ ６３４９±３７４ ２５５０±４６１ １１０４±２４８ ５７４±０８１
　 ２５ ６７５３±２５１ １９０９±３５６ １０２９±３４３ ２６８３±０６７
　 ５０ ７５１８±２４６１） １１２７±４８３１） ８５６±２３１１） ３３０２±１５９２）
　　注：与对照组比１）Ｐ＜００５，２）Ｐ＜００１
２．５　抑制 Ｓｉｈａ细胞 ＨＰＶ１６Ｅ６／Ｅ７ｍＲＮＡ的表达　
与对照组比较，６２５ｍｇ·Ｌ－１纳米雄黄混悬液处理
Ｓｉｈａ细胞４８ｈ后，ＨＰＶ１６Ｅ６／Ｅ７ｍＲＮＡ的表达无明
显改变，１２５ｍｇ·Ｌ－１纳米雄黄混悬液处理 Ｓｉｈａ细
胞４８ｈ后，ＨＰＶ１６Ｅ６／Ｅ７ｍＲＮＡ表达明显受到抑制，
２５～５０ｍｇ·Ｌ－１纳米雄黄混悬液处理组，ＨＰＶ１６Ｅ６／
Ｅ７ｍＲＮＡ的表达完全受到抑制。ＲＴＰＣＲ检测结果
以各泳道目的条带与 ＧＡＰＤＨ条带比值作为
ＨＰＶ１６Ｅ６／Ｅ７ｍＲＮＡ表达的相对值。实验结果显
示：对照组、６２５ｍｇ·Ｌ－１纳米雄黄混悬液组相比，
无明显差异；６２５，１２５ｍｇ·Ｌ－１组与２５，５０ｍｇ·
Ｌ－１组比较，差异有统计学意义（Ｐ＜００１），见图４。
图４　ＲＴＰＣＲ检测纳米雄黄混悬液抑制Ｓｉｈａ细胞
ＨＰＶ１６Ｅ６／Ｅ７ｍＲＮＡ表达
Ｍ．５４０ｂｐ的标准ＤＮＡｌａｄｄｅｒ；１～４．分别为５０，２５，１２５，
６２５ｍｇ·Ｌ－１的纳米雄黄混悬液处理组；５．对照组
３　讨论
雄黄是一种含砷的化合物，很早以前雄黄就以
复方形式用于治疗宫颈糜烂、宫颈癌及尖锐湿
疣［２］。现代研究表明，雄黄无论在临床应用上，还
是在基础研究方面都已经取得一定进展。但是，随
着治疗病例的增加，应用范围的扩大，雄黄的毒副作
用及用药剂量较大是目前需要解决的问题。传统的
制作工艺一定程度上可以降低雄黄的毒副作用，但
由于雄黄的主要成分为 Ａｓ４Ｓ４／Ａｓ２Ｓ２，其水溶性极
低，胃肠道吸收差，致使雄黄生物利用度低、临床用
药剂量大阻碍了临床应用的推广。王晓波等［３］采
用球磨法制备纳米级雄黄粉体，发现纳米雄黄与传
统雄黄比较，生物利用度等方面具有明显优势。宁
凝等［４］采用溶剂接力法制备雄黄纳米混悬液有诱
导ＨＬ６０和Ｋ５６２细胞凋亡和坏死的双重作用。詹
秀琴等［５］应用微射流法制备超细微雄黄颗粒与水
飞法、气流粉碎制备的雄黄颗粒从粉体表征、药代动
力学参数、体内外抑瘤作用等方面进行了比较，得出
微射流法制备的超细微雄黄颗粒优于其他２种方
法。根据前人的经验，作者对雄黄进行纳米处理，研
究其体外抗宫颈癌作用。研究显示［６］，４５％以上的
宫颈癌组织可以检测到ＨＰＶＤＮＡ，高危型ＨＰＶ持续
感染是导致宫颈癌的主要病因。在宫颈癌中，
ＨＰＶ１６ＤＮＡ检出率最高，在６０％以上。ＨＰＶ的致癌
机制与病毒ＤＮＡ整合于宿主基因组有关，Ｅ６，Ｅ７蛋
白能够改变机体角蛋白细胞的终末分化，破坏细胞
周期的负调控，诱导细胞进入Ｓ期，从而使上皮细胞
绕过正常细胞周期检测点，最终发生细胞永生化。
有研究表明［７］，Ｅ６，Ｅ７蛋白不仅在上皮细胞的恶性
转化中起着重要的作用，对肿瘤的恶性表型的维持
也起着重要的作用。体外实验显示［８］，Ｅ６和Ｅ７可
以转化人上皮细胞，也证实了表达高危型ＨＰＶ的宫
颈癌细胞株在阻断 Ｅ６，Ｅ７的情况下可以发生恶性
表型的逆转。这些研究结果表明，阻断 ＨＰＶ的 Ｅ６，
Ｅ７基因表达有可能成为治疗ＨＰＶ相关性肿瘤的有
效途径。Ｓｉｈａ细胞是 ＨＰＶ１６ＤＮＡ阳性的宫颈癌细
胞株，它活性表达ＨＰＶ１６Ｅ６和Ｅ７蛋白。
本研究结果显示，低浓度纳米雄黄混悬液可抑
制Ｓｉｈａ细胞增长，诱导其凋亡，随着纳米雄黄混悬
液浓度的增高，Ｓｉｈａ细胞出现明显的 Ｇ０Ｇ１期阻滞，
这种凋亡诱导作用与其抑制Ｓｉｈａ细胞ＨＰＶ１６Ｅ６，Ｅ７
·７５·
第３３卷第１期
２００８年１月
　　　　　　　　　
　　　 中 国 中 药 杂 志
ＣｈｉｎａＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭａｔｅｒｉａＭｅｄｉｃａ
　　　　　　　
Ｖｏｌ．３３，Ｉｓｓｕｅ　１
Ｊａｎｕａｒｙ，２００８
基因表达有一定关系。吕秀宁等［９］研究结果显示，
２μｍｏｌ· Ｌ－１ Ａｓ２Ｏ３处理 Ｈｅｌａ细胞 ４８ｈ后，
ＨＰＶ１８Ｅ６ｍＲＮＡ表达明显受到抑制，５μｍｏｌ·Ｌ－１及
以上浓度处理组的Ｅ６ｍＲＮＡ表达完全被抑制，低浓
度Ａｓ２Ｏ３通过抑制 ＨＰＶ致瘤基因表达来诱导肿瘤
细胞凋亡［１０，１１］。本研究结果表明，纳米雄黄混悬液
处理Ｓｉｈａ细胞４８ｈ后，１２５ｍｇ·Ｌ－１处理组的Ｅ６／
Ｅ７ｍＲＮＡ表达受到明显抑制；２５～５０ｍｇ·Ｌ－１处理
组的 Ｅ６／Ｅ７ｍＲＮＡ表达受到完全抑制，纳米雄黄混
悬液抑制ＨＰＶ致瘤基因表达可能是其诱导宫颈癌
细胞凋亡的机制之一。
［参考文献］
［１］　 黄诺嘉，谢琼玉，罗丽娟．分光光度法测定救急行军胶囊中
的微量砷［Ｊ］．中成药，２００５，２７（７）：７７２．
［２］　 徐　红，陈宜鸿，陈爱香，等．复方雄黄乳膏的制备和临床疗
效观察［Ｊ］．中国医院药学杂志，２００２，２２（３）：１８３．
［３］　 王晓波，袭荣刚，张治然，等．纳米级雄黄粉体药代动力学研
究［Ｊ］．解放军药学学报，２００２，１８（６）：３２４．
［４］　 宁　凝，彭作富，袁　兰，等．雄黄纳米微粒对白血病细胞的
诱导凋亡及坏死作用［Ｊ］．中国中药杂志，２００５，３０（２）：１３６．
［５］　 詹秀琴，赵凤鸣，郭立玮．超细微粒径雄黄的药代动力学研究
及抑瘤作用比较［Ｊ］．实用中医药杂志，２００６，２２（７）：３９７．
［６］　 ＺｕｒＨａｕｓｅｎＨ．Ｐａｐｉｌｏｍａｖｉｒｕｓｅｓａｎｄｃａｎｃｅｒ：ｆｒｏｍｂａｓｉｃｓｔｕｄｉｅｓ
ｔｏｃｌｉｎｉｃａｌａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ［Ｊ］．ＮａｔＲｅｖＣａｎｃｅｒ，２００２，２（５）：３４２．
［７］　 ＮｏｍｉｎｅＹ，ＭａｓｓｏｎＭ，ＣｈａｒｂｏｎｎｉｅｒＳ，ｅｔａｌ．Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌａｎｄ
ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌａｎａｌｙｓｉｓｏｆＥ６ｏｎｃｏｐｒｏｔｅｉｎ：ｉｎｓｉｇｈｔｓｉｎｔｈｅｍｏｌｅｃｕｌａｒ
ｐａｔｈｗａｙｓｏｆｈｕｍａｎｐａｐｉｌｏｍａｖｉｒｕｓｍｅｄｉａｔｅｄｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ［Ｊ］．
ＭｏｌＣｅｌ，２００６，２１（５）：６６５．
［８］　 ＬｅｄｗａｄａＴ，ＤｌａｍｉｎｉＺ，ＮａｉｃｋｅｒＳ，ｅｔａｌ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒｇｅｎｅｔｉｃｓｏｆ
ｈｕｍａｎｃｅｒｖｉｃａｌｃａｎｃｅｒ：ｒｏｌｅｏｆｐａｐｉｌｏｍａｖｉｒｕｓａｎｄｔｈｅａｐｏｐｔｏｔｉｃ
ｃａｓｃａｄｅ［Ｊ］．ＢｉｏｌＣｈｅｍ，２００４，３８５（８）：６７１．
［９］　 吕秀宁，郑　杰．三氧化二砷诱导 ＨｅＬａ细胞凋亡与其抑制
ＨＰＶ１８Ｅ６表达和端粒酶活性有关［Ｊ］．中华肿瘤杂志，２００５，
２７（５）：２６５．
［１０］　ＺｈｅｎｇＪ，ＤｅｎｇＹＰ，ＬｉｎＣ，ｅｔａｌ．Ａｒｓｅｎｉｃｔｒｉｏｘｉｄｅｉｎｄｕｃｅｓａｐｏｐ
ｔｏｓｉｓｏｆＨＰＶ１６ＤＮＡｉｍｍｏｒｔａｌｉｚｅｄｈｕｍａｎｃｅｒｖｉｃａｌｅｐｉｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｓ
ａｎｄｓｅｌｅｃｔｉｖｅｌｙｉｎｈｉｂｉｔｖｉｒａｌｇｅｎｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ［Ｊ］．ＩｎｔＪＣａｎｃｅｒ，
１９９９，８２（３）：２８６．
［１１］　ＵｍＳＪ，ＬｅｅＳＹ，ＫｉｍＥＪ，ｅｔａｌ．Ｄｏｗｎｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆｈｕｍａｎ
ｐａｐｉｌｏｍａｖｉｒｕｓＥ６／Ｅ７ｏｎｃｏｇｅｎｅｂｙａｒｓｅｎｉｃｔｒｉｏｘｉｄｅｉｎｃｅｒｖｉｃａｌ
ｃａｒｃｉｎｏｍａｃｅｌｓ［Ｊ］．ＣａｎｃｅｒＬｅｔ，２００２，１８１（１）：１１．
ＲｅａｌｇａｒｎａｎｏｍｅｔｅｒｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎｉｎｄｕｃｉｎｇａｐｏｐｔｏｓｉｓｏｆＳｉｈａｃｅｌａｎｄ
ｉｔｓｅｆｅｃｔｏｎｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＨＰＶＥ６／Ｅ７ｏｎｃｏｇｅｎｅ
ＬＩＵＲｏｎｇ１，２，ＰＵＤｅｍｉｎ１，ＺＨＡＯＬｉｂｏ３，ＣＨＥＮＧＹａｎｘｉａｎｇ１，ＹＩＮＬｉｎｇ１，ＬＩＴｉａｎ１
（１．ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＯｂｓｔｅｔｒｉｃｓａｎｄＧｙｎｅｃｏｌｏｇｙ，ＴｏｎｇｊｉＨｏｓｐｉｔａｌ，ＴｏｎｇｊｉＭｅｄｉｃａｌＣｏｌｅｇｅｏｆＨｕａｚｈｏｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆ
ＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｗｕｈａｎ４３００３０，Ｃｈｉｎａ；
２．ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＯｂｓｔｅｔｒｉｃｓａｎｄＧｙｎｅｃｏｌｏｇｙ，ＬｉｂｅｒａｔｉｏｎＡｒｍｙ４５７Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｗｕｈａｎ４３００１０，Ｃｈｉｎａ；
３．ＥｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＰｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，ＴｏｎｇｊｉＭｅｄｉｃａｌＣｏｌｅｇｅｏｆＨｕａｚｈｏｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｗｕｈａｎ４３００３０，Ｃｈｉｎａ）
　　［Ａｂｓｔｒａｃｔ］　Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏｓｔｕｄｙｔｈｅｇｒｏｗｔｈｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙａｎｄａｐｏｐｔｏｓｉｓｉｎｄｕｃｉｎｇｅｆｅｃｔｓｏｆｒｅａｌｇａｒｎａｎｏｍｅｔｅｒｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎｉｎｈｕｍａｎ
ｃａｒｃｉｎｏｍａｃｅｒｖｉｃａｌｃｅｌＳｉｈａｌｉｎｅ，ａｎｄｔｈｅｅｆｅｃｔｏｎＨＰＶ１６Ｅ６／Ｅ７ｏｎｃｏｇｅｎｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ．Ｍｅｔｈｏｄ：Ａ＂ｍｉｃｒｏｊｅｔｅｆｌｕｘ＂ｓｔｒａｔｅｇｙｗａｓ
ｕｓｅｄｆｏｒｔｈｅｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎｏｆｒｅａｌｇａｒｎａｎｏｍｅｔｅｒｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎ．Ｓｉｈａｃｅｌｓｗｅｒｅｔｒｅａｔｅｄｗｉｔｈｖａｒｉｏｕｓｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ（６２５，１２５，２５，５０ｍｇ
·Ｌ－１）ｏｆｒｅａｌｇａｒｎａｎｏｍｅｔｅｒｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎｆｏｒｄｉｆｅｒｅｎｔｈｏｕｒｓ（１２，２４，４８，７２ｈ）．ＴｈｅｅｆｅｃｔｏｆｒｅａｌｇａｒｎａｎｏｍｅｔｅｒｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎｏｎＳｉｈａ
ｃｅｌｇｒｏｗｔｈｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎｗａｓｄｅｔｅｃｔｅｄｂｙＭＴＴｍｅｔｈｏｄ．Ｓｐｅｃｉａｌｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌｃｈａｎｇｅｓｏｆａｐｏｐｔｏｓｉｓｗｅｒｅｏｂｓｅｒｖｅｄｂｙｌｉｇｈｔａｎｄｔｒａｎｓｍｉｓ
ｓｉｏｎｅｌｅｃｔｒｏｎｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙ（ＴＥＭ）ａｎｄＤＮＡｆｒａｇｍｅｎｔｓｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ．Ｔｈｅａｐｏｐｔｏｔｉｃｒａｔｅｓｗｅｒｅｑｕａｎｔｉｆｉｅｄｂｙｆｌｏｗｃｙｔｏｍｅｔｒｙ（ＦＣＭ）．
ＴｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＨＰＶ１６Ｅ６／Ｅ７ｍＲＮＡｗａｓａｓｓａｙｅｄｂｙＲＴＰＣＲ．Ｒｅｓｕｌｔ：Ａｆｔｅｒｂｅｉｎｇｔｒｅａｔｅｄｗｉｔｈ２５５０ｍｇ·Ｌ－１ｒｅａｌｇａｒｎａｎｏｍｅｔｅｒ
ｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎｆｏｒ４８，７２ｈ，ｔｈｅｓｕｒｖｉｖａｌｏｆＳｉｈａｃｅｌｓｄｅｃｒｅａｓｅｄ，ａｎｄｔｈｅｒａｔｅｏｆａｐｏｐｔｏｓｉｓｍａｒｋｅｄｌｙｉｎｃｒｅａｓｅｄＷｉｔｈＴＥＭａｎｄＤＮＡｅｌｅｃ
ｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ，ｔｈｅｓｐｅｃｉａｌｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌｃｈａｎｇｅｓｗｅｒｅｆｏｕｎｄ．ＴｈｅａｐｏｐｔｏｔｉｃｒａｔｅｓｏｆＳｉｈａｃｅｌｓｔｒｅａｔｅｄｗｉｔｈｒｅａｌｇａｒｎａｎｏｍｅｔｅｒｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎ
ｗｅｒｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｈｉｇｈｅｒｔｈａｎｔｈｏｓｅｉｎｔｈｅｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ（Ｐ＜００１）Ｇ０Ｇ１ｐｈａｓｅａｒｅｓｔａｐｐｅａｒｅｄｆｏｌｏｗｉｎｇｔｈｅｔｒｅａｔｍｅｎｔｗｉｔｈｒｅａｌｇａｒ
ｎａｎｏｍｅｔｅｒｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎｉｎ２５ａｎｄ５０ｍｇ·Ｌ－１４８ｈＲＴＰＣＲａｓｓａｙｒｅｖｅａｌｅｄｔｈａｔｒｅａｌｇａｒｎａｎｏｍｅｔｅｒｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎｒｅｄｕｃｅｄＨＰＶ１６Ｅ６／Ｅ７
ｇｅｎｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：ＲｅａｌｇａｒｎａｎｏｍｅｔｅｒｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎｃａｎｉｎｈｉｂｉｔｔｈｅｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｏｆｈｕｍａｎｃａｒｃｉｎｏｍａｃｅｒｖｉｃａｌｃｅｌＳｉｈａｌｉｎｅ
ａｎｄｉｎｄｕｃｅｔｈｅｃｅｌａｐｏｐｔｏｓｉｓ．ＴｈｅｍｅｃｈａｎｉｓｍｍａｙｂｅｒｅｌａｔｅｄｔｏｔｈｅｄｏｗｎｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆＨＰＶ１６Ｅ６／Ｅ７ｏｎｃｏｇｅｎｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ．
［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］　ｒｅａｌｇａｒｎａｎｏｍｅｔｅｒｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎ；Ｓｉｈａｃｅｌ；ａｐｏｐｔｏｓｉｓ；ＨＰＶ１６Ｅ６ｏｎｃｏｇｅｎｅ；ＨＰＶ１６Ｅ７ｏｎｃｏｇｅｎｅ
［责任编辑　古云侠］
·８５·
第３３卷第１期
２００８年１月
　　　　　　　　　
　　　 中 国 中 药 杂 志
ＣｈｉｎａＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭａｔｅｒｉａＭｅｄｉｃａ
　　　　　　　
Ｖｏｌ．３３，Ｉｓｓｕｅ　１
Ｊａｎｕａｒｙ，２００８