全 文 ：基于“方证相关”理论的治“痹”经方调控
ＴＬＲ／ＴＲＡＦ信号通路的比较研究
徐世军１，２，３，４，李磊３，４，张文生３，４，王永炎５
（１成都中医药大学 药学院，四川 成都 ６１００７５；２教育部中药材标准化重点实验室，四川 成都 ６１１１３７；
３中药资源保护与利用北京市重点实验室，北京 １００８７５；４北京师范大学 资源学院 中药资源与
资源药物研究所，北京 １００８７５；５中国中医科学院，北京 １００７００）
［摘要］ 目的：在方证相关理论指导下，比较乌头汤、桂枝芍药知母汤和白虎加桂枝汤调控佐剂性关节炎大鼠脾脏
ＴＬＲ２，ＴＲＡＦ６，Ｆａｓｌｇ基因表达的差异。方法：建立佐剂性关节炎大鼠模型，采用实时荧光定量ＰＣＲ技术，以１８ｓＲＮＡ为内参基
因，用ＳＹＢＲＧｒｅｅｎＩ染料法检测脾脏ＴＬＲ２，ＴＲＡＦ６，Ｆａｓｌｇ基因相对表达，２－ΔΔＣＴ法进行进行计算和数据分析。结果：佐剂性关
节炎大鼠脾脏ＴＬＲ２，ＴＲＡＦ６，Ｆａｓｌｇ基因均较空白组显著高表达，乌头汤、桂枝芍药知母汤和白虎加桂枝汤各剂量均能显著抑
制或降低模型ＴＬＲ２，ＴＲＡＦ６，Ｆａｓｌｇ基因的异常高表达，临床等效剂量时降低的ＴＬＲ２和Ｆａｓｌｇ基因表达作用由强到弱依次是乌
头汤＞桂枝芍药知母汤＞白虎加桂枝汤，但降低ＴＲＡＦ６作用强度趋势刚好与ＴＬＲ２和Ｆａｓｌｇ基因相反。结论：乌头汤、桂枝芍
药知母汤和白虎加桂枝汤均对佐剂性关节炎大鼠脾脏异常高表达 ＴＬＲ２，ＴＲＡＦ６，Ｆａｓｌｇ基因有下调作用，但强度存在差异，与
药效学和调节Ｔ细胞亚群趋势较为一致，提示对ＴＬＲ２／ＴＲＡＦ６信号通路和凋亡受体Ｆａｓｌｇ基因下调可能是３个经方药效学及
对外周Ｔ细胞亚群的不同调节强度的原因之一。
［关键词］ 乌头汤；桂枝芍药知母汤；白虎加桂枝汤；ＴＬＲ／ＴＲＡＦ信号通路；Ｆａｓｌｇ
［收稿日期］ ２００９０９２７
［基金项目］ 国家中医药管理局中医科技进步工程专项（０６
０７ＺＱ１２）
［通信作者］ 徐世军，博士，主要从事中药效应的信号转导机制、
神经退行性疾病的中医防治及方证相关研究，Ｔｅｌ：（０２８）６１８００２３１，
Ｅｍａｉｌ：ｄｏｃｘｕ＠１２６ｃｏｍ
“方证相关”是中医辨证论治的核心，其基本属
性就是以方药的固有属性（性味、归经等）来调整机
体阴阳寒热之偏（证）的一个动态平衡过程。方剂
通过对病证相关生物网络的调控，在干预病证有关
生物分子组合及通路上发挥“多因微效”的“整体综
合调节”作用；证候疗效表征是在多靶点调节的微
小变动的基础上，系统“涌现”的结果［１２］。现有中
医药的研究多采用疾病模型，但是疾病模型无法表
征“证候”的实质，从方证相关的角度看很难揭示不
同治则、不同治法、不同偏性方剂的科学内涵。是病
与方对应，还是证与方对应，缺少具有说服力的实验
数据。乌头汤、桂枝芍药知母汤和白虎加桂枝汤是
临床治疗类风湿性关节炎（ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄａｒｔｈｒｉｔｉｓ，ＲＡ）
的３个寒热属性不同的经典代表方，３方均源于《金
匮要略》，乌头汤主“病历节不可屈伸，疼痛”，桂枝
芍药知母汤主“诸肢节疼痛，身体魁羸，脚肿如脱，
头眩短气，温温欲吐”，白虎加桂枝汤主痹症“身无
寒但热，骨节疼烦”，后世分别用于治疗寒痹、风寒
湿痹伴关节局部灼热者和热痹。已知ＲＡ是一种免
疫损伤引起的以Ｔ细胞紊乱为特征的全身性疾病，
可导致多系统的损伤，致残率很高［３］。为了比较３
个经方在同一疾病动物模型上“表征”的异同，课题
组前期采用佐剂性关节炎模型为载体进行了研究，
研究结果表明３个经方在抗炎、镇痛和对外周血 Ｔ
细胞亚群调节上存在差异，整体来说，乌头汤、桂枝
芍药知母汤抗炎作用明显，且乌头汤对弗氏完全佐
剂所致的免疫性炎症的拮抗作用优于桂枝芍药知母
汤，而白虎加桂枝汤仅对早期炎症有一定的拮抗效
应，乌头汤、桂枝芍药知母汤具有较好的镇痛作用，
而白虎加桂枝汤镇痛作用不明显。虽然３个经方都
有调节外周血 Ｔ细胞亚群紊乱的作用，但在提高
ＣＤ８＋Ｔ细胞和降低ＣＤ４＋／ＣＤ８＋方面强度不同，作
用由强到弱依次为桂枝芍药知母汤＞乌头汤＞白虎
加桂枝汤［４］。为了进一步揭示这种差异性内涵，从
Ｔ淋巴细胞活化和Ｔ，Ｂ淋巴细胞数量平衡密切相关
的ＴＬＲ／ＴＲＡＦ信号通路进行了研究。
·５２０１·
第３５卷第８期
２０１０年４月
Ｖｏｌ３５，Ｉｓｓｕｅ ８
Ａｐｒｉｌ，２０１０
１ 材料
１１ 动物
雄性ＳＤ大鼠，体重１８０～２２０ｇ，ＳＰＦ级，由四川
省医学科学院实验动物研究所提供，合格证号
ＳＣＸＫ（川）２００４１６。
１２ 药物
乌头汤、桂枝芍药知母汤、白虎加桂枝汤组成及
用量均采用上海中医学院１９８２年版的《中医方剂与
临床手册》，乌头汤由麻黄、芍药、黄芪 、甘草、川乌
组成；桂枝芍药知母汤由桂枝、芍药、甘草、麻黄、生
姜、白术、知母、防风、附子组成；白虎加桂枝汤由知
母、甘草、石膏、粳米、桂枝组成。上述３方均加８倍
量水，乌头汤和桂枝芍药知母汤中的川乌与附子先
煎２ｈ，口尝舌无发麻感时加入其他药材，文火煎３０
ｍｉｎ，取汁浓缩至１００％标准煎液，４℃冰箱保存备
用；白虎加桂枝汤中石膏先煎１ｈ，加入其他药材后
煎３０ｍｉｎ至米熟，取汁浓缩至１００％标准煎液，４℃
冰箱保存备用，动物按照人日用量的等效剂量相应
倍数换算，灌胃给药；醋酸地塞米松注射液（西南药
业股份有限公司，批号６６０４００９９）。
１３ 试剂与仪器
弗氏完全佐剂（Ｓｉｇｍａ公司）。ＴａＫａＲａｒｅａｌｔｉｍｅ
ＰＣＲｃｏｒｅｋｉｔ，ＳＹＢＲ ＰｒｅｍｉｘＥｘＴａｑＴＭ（ＴａＫａＲａ，日
本）；３ＳＳｐｉｎＡｇａｒｏｓｅＧｅｌＤＮＡＰｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎｋｉｔ（申能
博彩科技有限公司）；ＲＮＡｉｓｏＲｅａｇｅｎｔ，ＲＴＲｅａｇｅｎｔｓ
（ＴａＫａＲａ，日本）。ＡＢＩ７３００荧光定量 ＰＣＲ仪；Ｖｅｒ
ＳａＤｏｃ凝胶成像系统（美国 ＢｉｏＲａｄ公司）；Ｔｈｅｒｍｏ
Ｆｏｒｍａ超低温冰箱；ＣＡＲＹ５０Ｐｒｏｂｅ紫外分光光度
计。
２ 方法
２１ ＲＡ动物的建模与动物分组
１３０只 ＳＤ大鼠按体重随机分为１３组，即对照
组、模型组、醋酸地塞米松对照组（２５ｍｇ·ｋｇ－１）、
帕夫林对照组（５０ｍｇ·ｋｇ－１）、乌头汤高、中、低剂
量组（１５９６，７９８，３９９ｇ·ｋｇ－１）、桂枝芍药知母汤
高、中、低剂量组（１９３１，９６６，４８３ｇ·ｋｇ－１）、白虎
加桂枝汤高、中、低剂量组（３３６０，１６８０，８４０ｇ·
ｋｇ－１），每组１０只。除正常组外，各组大鼠均按造模
方法造模。鼠右后足跖皮内注射弗氏完全佐剂０１
ｍＬ／只诱导关节炎［５］。
２２ 给药方法、足肿胀测定及标本制备
各给药组动物 ｉｇ相应的药液１０ｍＬ·ｋｇ－１，正
常组和模型组ｉｇ５ｍｇ·ｋｇ－１的生理盐水，地塞米松
组ｉｐ１０ｍＬ·ｋｇ－１醋酸地塞米松注射液，造模当日
开始给药，每天１次，连续给药２１ｄ。末次给药后大
鼠禁食２４ｈ，股动脉放血处死，无菌条件下取大鼠脾
脏，锡箔纸编号包裹后液氮冻存备用。
２３ 目标基因ＲＴｒｅａｌｔｉｍｅＰＣＲ方法的建立
２３１ 引物设计 根据ＧｅｎＢａｎｋ中大鼠１８ＳｒＲＮＡ
以及Ｆａｓｌｇ，ＴＬＲ２，ＴＲＡＦ６ｍＲＮＡ序列，使用ＤＮＡＳｔａｒ
软件的 ＭｅｇＡｌｉｇｎ功能，分别找出各基因的保守区
域，并采用 ＰｒｉｍｅｒＰｒｅｍｉｅｒ５０软件在保守区域设计
用于ｒｅａｌｔｉｍｅＰＣＲ的引物。上下游引物序列如表
１，引物均由大连宝生物工程有限公司合成。
表１ １８ＳｒＲＮＡ，Ｆａｓｌｇ，ＴＬＲ２，ＴＲＡＦ６基因引物信息
引物名称 序列（５′３′）
产物长度
／ｂｐ
１８ＳｒＲＮＡ（Ｖ０１２７０） Ｆ：ＧＡＣＴＣＡＡＣＡＣＧＧＧＡＡＡＣＣＴＣＡ １２１
Ｒ：ＣＡＧＡＣＡＡＡＴＣＧＣＴＣＣＡＣＣＡＡ
ＴＬＲ２（ＮＭ＿０１３１３４） Ｆ：ＣＴＴＡＣＡＧＧＡＣＡＣＴＧＧＧＧＧＡＡＡＣ １３４
Ｒ：ＡＡＧＴＴＣＧＴＴＧＡＧＡＧＡＧＧＴＣＡＧＣ
Ｆａｓｌｇ（ＮＭ＿０１２９０８） Ｆ：ＣＡＧＡＧＣＣＡＣＣＡＧＣＡＣＣＡＴ １２５
Ｒ：ＣＡＣＣＴＣＣＡＴＣＡＣＣＡＣＴＡＣＣＡ
ＴＲＡＦ６（ＮＭ＿００１１０７７５４）Ｆ：ＣＡＧＧＧＡＴＡＴＧＡＴＧＴＧＧＡＧＴ １５０
Ｒ：ＴＡＣＣＧＴＣＡＧＧＧＡＡＡＧＡＡＴ
２３２ 总 ＲＮＡ提取及 ｃＤＮＡ合成 总 ＲＮＡ的提
取采用ＴａＫａＲａＲＮＡｉｓｏＲｅａｇｅｎｔ试剂盒，按产品说明
书进行，提取总ＲＮＡ于－８０℃保存备用。ｃＤＮＡ合
成：ＲＮＡ样本经 ＤＮａｓｅＩ处理后，采用 ＴａＫａＲａＲＴ
Ｒｅａｇｅｎｔｓ试剂盒，按产品说明书进行。
２３３ ＲＴｒｅａｌｔｉｍｅＰＣＲ方法的建立 Ｒｅａｌｔｉｍｅ
ＰＣＲ条件优化：利用ＳＹＢＲＧｒｅｅｎＩ染料法，ｒｅａｌｔｉｍｅ
ＰＣＲ均在 ＡＢＩ７３００ｒｅａｌｔｉｍｅＰＣＲ仪上进行。采用
２５μＬ的总反应体系，以得到最小的ＣＴ值、最大的荧
光值（ΔＲｎ）和熔解曲线不产生非特异性峰为指标，
对 １８ＳｒＲＮＡ，Ｆａｓｌｇ，ＴＬＲ２，ＴＲＡＦ６基因的 ＳＹＢＲ
ＧｒｅｅｎＩｒｅａｌｔｉｍｅＰＣＲ的退火温度、退火时间、引物
浓度以及荧光数据收集温度等条件进行优化，确定
各目标基因扩增的最佳条件，本研究所有 ｒｅａｌｔｉｍｅ
ＰＣＲ反应均以此优化条件进行。标准品的制备及
标准曲线的建立：采用上述引物，对各基因分别进行
常规ＰＣＲ扩增，ＰＣＲ产物与 ｐＭＤ１８Ｔ载体连接并
转化至ＴＯＰ１０感受态细胞，筛选阳性克隆，提取质
粒作为标准品。对标准品进行１０倍系列稀释，并采
·６２０１·
第３５卷第８期
２０１０年４月
Ｖｏｌ３５，Ｉｓｓｕｅ ８
Ａｐｒｉｌ，２０１０
用上述优化的条件进行 ｒｅａｌｔｉｍｅＰＣＲ反应，得到各
基因ｒｅａｌｔｉｍｅＰＣＲ标准曲线。根据各基因ｒｅａｌｔｉｍｅ
ＰＣＲ的扩增效率，确定计算方法。
２３４ 样本中目标基因的 ｒｅａｌｔｉｍｅＰＣＲ检测 各
试验组样本均提取总 ＲＮＡ并转录为 ｃＤＮＡ，并采用
优化结果，对样本中进行 １８ＳｒＲＮＡ，Ｆａｓｌｇ，ＴＬＲ２，
ＴＲＡＦ６基因的 ｍＲＮＡ表达水平进行 ｒｅａｌｔｉｍｅＰＣＲ
检测。以１８ＳｒＲＮＡ为内参基因对结果进行标化，
比较模型组其他各组与之间 Ｆａｓｌｇ，ＴＬＲ２，ＴＲＡＦ６基
因ｍＲＮＡ表达量变化情况。
３ 结果
３１ １８ＳｒＲＮＡ，Ｆａｓｌｇ，ＴＬＲ２，ＴＲＡＦ６基因 ＲＴｒｅａｌ
ｔｉｍｅＰＣＲ方法的建立
３１１ ＲＴｒｅａｌｔｉｍｅＰＣＲ条件的优化结果 各基因
的反应体系均为 ２５μＬ，即 ＳＹＢＲ ＰｒｅｍｉｘＥｘ
ＴａｑＴＭ１２５μＬ，Ｐｒｉｍｅｒｓ０２μＬ·Ｌ－１，模板 ２μＬ，
ｄｄＨ２Ｏ９５μＬ。优化的ＲＴｒｅａｌｔｉｍｅＰＣＲ反应条件
分别为：１８ＳｒＲＮＡ扩增条件为９５℃变性５ｍｉｎ（９５
℃ １５ｓ，５８℃ ３０ｓ），４０个循环，７２℃延伸５ｍｉｎ，熔
点温度为５８℃；ＴＬＲ２扩增条件为９５℃变性５ｍｉｎ
（９５℃ １５ｓ，５２℃ ３０ｓ），４０个循环，７２℃延伸 ５
ｍｉｎ，熔点温度为５２℃；ＴＲＡＦ６扩增条件为９５℃变
性５ｍｉｎ（９５℃ １５ｓ，５５℃ ３０ｓ），４０个循环，７２℃
延伸５ｍｉｎ，熔点温度为５５℃；Ｆａｓｌｇ扩增条件为９５
℃变性５ｍｉｎ（９５℃１５ｓ，５８℃３０ｓ），４０个循环，７２
℃延伸５ｍｉｎ，熔点温度为５８℃。
３１２ 对照品的制备及标准曲线的建立 总ＲＮＡ
经反转录合成 ｃＤＮＡ后，分别用各对引物进行 ＰＣＲ
扩增和克隆，对所得阳性质粒进行 ＰＣＲ鉴定，分别
得到 １２１ｂｐ（１８ＳｒＲＮＡ），１２５ｂｐ（Ｆａｓｌｇ），１３４ｂｐ
（ＴＬＲ２），１５０ｂｐ（ＴＲＡＦ６）大小的片段，与预期结果
一致，见图１。
１１８ＳｒＲＮＡ；２Ｆａｓｌｇ；３ＴＲＡＦ６；
４ＴＬＲ２；Ｍ相对分子质量标准。
图１ 目标基因标准品的ＰＣＲ鉴定
对阳性标准品进行１０倍系列稀释，采用优化的
条件进行ｒｅａｌｔｉｍｅＰＣＲ，以相对拷贝数的对数为横坐
标，以Ｃｔ值为纵坐标，分别得到各基因的标准曲线。
结果表明，各基因在较广的范围内均有很好的线性关
系，１８ＳｒＲＮＡ，Ｆａｓｌｇ，ＴＬＲ２，ＴＲＡＦ６的标准曲线回归方
程分别为：Ｙ＝－３２９Ｘ＋３４４２，Ｙ＝－３３３Ｘ＋
４０８６，Ｙ＝－３２８Ｘ＋３６５８，Ｙ＝－３３３Ｘ＋３７０６；ｒ均
为０９９９；线性范围依次为 １１９６～２８３１，１６８７～
３４２１，１６０３～３３４５，１５０９～３３０８。
３１３ 熔解曲线分析 在 ＳＹＢＲＧｒｅｅｎＩｒｅａｌｔｉｍｅ
ＰＣＲ后进行熔解曲线分析，结果表明 １８ＳｒＲＮＡ，
Ｆａｓｌｇ，ＴＬＲ２，ＴＲＡＦ６基因的熔解温度分别为 ８２３，
８３９，８０３，８４９℃，其中，４个基因均只有１个特异
性峰。说明设计引物有很好的特异性，ＰＣＲ反应条
件得到了较好的优化。
３１４ 相对定量计算方法的确定 通过比较基因
标准曲线的斜率看出，内参基因１８ＳｒＲＮＡ和目的
基因 Ｆａｓｌｇ，ＴＬＲ２，ＴＲＡＦ６的扩增效率分别为
１０１２２％，９９７％，１０１８％，９９７％，均接近１００％，
故可以采用２－ΔΔＣＴ法进行进行计算和数据分析。
３２ 样本ｒｅａｌｔｉｍｅＰＣＲ定量分析结果
与模型组相比（其表达量作为１），其他各组３
种基因 ｍＲＮＡ表达水平的倍数变化见图２。由图２
可以看出，模型组 ＴＬＲ２，ＴＲＡＦ６，Ｆａｓｌｇ基因表达均
较空白组显著增高（分别为７５，１６３４，１２８８倍），
提示佐剂性关节炎模型 ＴＬＲ２／ＴＲＡＦ６／Ｆａｓｌｇ信号通
路处于高度活化状态；乌头汤、桂枝芍药知母汤和白
虎加桂枝汤各组 ＴＬＲ２，ＴＲＡＦ６，Ｆａｓｌｇ基因表达均较
模型组显著降低，临床千克体重剂量等倍数条件下，
３个经方对 ＴＬＲ２，ＴＲＡＦ６，Ｆａｓｌｇ基因异常高表达下
调强度存在差异。
图２ 各组Ｆａｓｌｇ，ＴＬＲ２，ＴＲＡＦ６基因ｍＲＮＡ相对表达结果
·７２０１·
第３５卷第８期
２０１０年４月
Ｖｏｌ３５，Ｉｓｓｕｅ ８
Ａｐｒｉｌ，２０１０
４ 讨论
Ｔ淋巴细胞及其亚群间的动态平衡在保证自身
免疫稳定中起着重要作用。研究表明，ＲＡ患者体
内长期存在着自身反应性炎性 Ｔ细胞，其不断产生
炎症因子和对组织细胞的直接杀伤，导致了免疫系
统对机体、主要是关节滑膜和软骨的病理免疫，引起
关节滑膜炎症、增生、纤维化和关节软骨的血管翳，
最终导致关节的功能丧失［６］。因此目前普遍认为
ＲＡ的病因是抗原提呈细胞和 ＣＤ４＋Ｔ细胞相互作
用的结果［７］。已有研究资料表明 ＲＡ患者 ＣＤ４＋
Ｔｈ２细胞功能亢进，Ｔｈｌ细胞功能受抑，Ｔ细胞亚群
平衡紊乱与参与调节的细胞因子失控和 Ｔ细胞活
化过程中的信号传导异常密切相关［８］。此外，外周
血中高滴度的类风湿因子（ＲＦ）和多克隆性免疫球
蛋白表达为 ＲＡ的特征，提示 Ｂ细胞免疫功能处于
亢进状态，但Ｂ细胞的活化主要以 Ｔ细胞信号依赖
性，Ｔ细胞在胸腺依赖性 Ｂ细胞的活化中发挥着重
要的调节功能。研究表明，Ｔ细胞活化与 ＴＬＲ２／
ＴＲＡＦ信号通路有关，该通路被激活能诱导 Ｔ细胞
共刺激分子 Ｂ７１的表达［９］，Ｔ细胞共刺激分子
Ｂ７１的表达又是调控Ｔ细胞激活必不可少的信号，
ＴＬＲ的活化不仅可以启动炎症性细胞因子、趋化因
子、组织破坏性酶和Ｉ型干扰素的产生，也可以通过
上调抗原提呈细胞的共刺激分子在适应性免疫系统
的活化和发展中扮演重要作用［１０］。活化的 ＴＬＲ能
诱导Ｔ细胞共刺激分子Ｂ７１的表达，Ｔ细胞上共刺
激分子Ｂ７１与其受体相互作用，可通过与下游细
胞内信号分子———肿瘤坏死因子受体相关因子
（ＴＲＡＦ）家族成员结合发挥细胞活化或凋亡等多种
效应功能，一方面通过活化转录因子ＮＦκＢ或ＡＰ１
以促进细胞因子、趋化因子等基因转录；另一方面也
通过下游的ＴＲＡＦ分子经不同途径介导抗凋亡或凋
亡作用［１１１２］。ＣＤ９５（Ｆａｓｌ）分子在参与诱导 Ｔ细胞
凋亡过程中起关键作用，决定着 Ｔ，Ｂ细胞在数量上
的平衡［１３１４］，上述研究说明，ＴＬＲ２／ＴＲＡＦ６／Ｆａｓｌｇ信
号通路与佐剂性关节炎炎性损伤及 Ｔ细胞亚群密
切关联。
本次研究结果表明佐剂性关节炎模型脾脏
ＴＬＲ２，ＴＲＡＦ６，Ｆａｓｌｇ基因显著高表达，而乌头汤、桂
枝芍药知母汤和白虎加桂枝汤各剂量均可以显著抑
制／降低 ＴＬＲ２，ＴＲＡＦ６，Ｆａｓｌｇ３个基因的异常高表
达，提示 ＴＬＲ２／ＴＲＡＦ６／Ｆａｓｌｇ信号通路是 ３个经方
抗炎及调节外周血 Ｔ细胞亚群作用途径之一。从
实验结果看，３个经方在人临床千克体重用量等倍
数条件下对３个异常高表达基因下调强度存在差
异，下调ＴＬＲ２和 Ｆａｓｌｇ基因异常高表达趋势一致，
依次为乌头汤＞桂枝芍药知母汤 ＞白虎加桂枝汤；
下调ＴＲＡＦ６基因高表达则相反，依次为白虎加桂枝
汤＞桂枝芍药知母汤＞乌头汤；３个经方抑制 ＴＬＲ２
和Ｆａｓｌｇ基因异常高表达的结果与抗炎药效及外周
血Ｔ细胞亚群调节趋势基本一致，但ＴＲＡＦ６基因研
究结果则刚好相反。从３个经方组方来看，乌头汤
和桂枝芍药知母汤２方均含有川乌（附子）、麻黄、
芍药等，均具有温经祛寒，除湿止痛的功效，但桂枝
芍药知母汤中含有知母等滋阴清热之品，相对减弱
了温经散寒的强度；白虎加桂枝汤主要含知母、桂
枝、石膏等药，清热通络强，散寒通经作用更弱，从处
方寒热属性来看，温经散寒作用由强到弱依次为乌
头汤、桂枝芍药知母汤和白虎加桂枝汤。提示ＴＬＲ２
和Ｆａｓｌｇ的实验研究结果与３个经方的寒热药性基
本一致。对ＴＲＡＦ６基因调节的作用与三方的寒热
药性强弱，考虑一是ＴＲＡＦ６基因是多条信号通路细
胞内转导的一环，其表达受其他信号通路的调节，二
是信号通路与神经内分泌免疫调控网络存在着多
重交互作用，这种差异可能与神经内分泌免疫调
控网络有关。
［参考文献］
［１］ 王永炎 完善中医辨证方法体系的建议［Ｊ］中医杂志，
２００４，４５（１０）：７２９
［２］ 王阶，王永炎，杨戈 中药方剂配伍理论研究方法和模式
［Ｊ］．中国中药杂志，２００５，３０（１）：６
［３］ ＣｏｐｅＡＰ，ＳｅｈｕｌｚｅＫｏｏｐｓＨ，ＡｒｉｎｇｅｒＭＴｈｅｃｅｎｔｒａｌｒｏｌｅｏｆＴｃｅｉｌｓ
ｉｎｒｈｅｕｍａｔｏｉｄａｒｔｈｒｉｔｉｓ［Ｊ］ＣｌｉｎＥｘｐＲｈｅｕｍａｔｏｌ，２００７，２５：４
［４］ 徐世军，李磊，张文生，等基于“方证相关”理论的治“痹”
经方药效学比较研究［Ｊ］中国中药杂志，２００９，３４（２３）：
３１３１
［５］ 徐世军，彭玉华，欧晓燃，等蚁附蠲痹颗粒对佐剂性关节炎
大鼠Ｔ细胞亚群的影响［Ｊ］华西药效杂志，２００６，２１（２）：
１５４
［６］ 肖涟波，欧阳桂林，何东仪，等类风湿性关节炎滑液刺激 Ｔ
细胞表达ＧＡＤＤ４５１３机制的研究［Ｊ］重庆医学，２００８，３７
（１６）：１７７９
［７］ 苏青，韩星海，孟济明类风湿关节炎的病理生理及生物学
治疗进展［Ｊ］中华风湿病学杂志，２０００，４（３）：１８３
［８］ 王兰兰，李立新，刘瑾，等．类风湿性关节炎患者 Ｔ细胞亚群
失衡与炎性黏附分子的关系［Ｊ］．免疫学杂志，２００２，１８（５）：
３７８
·８２０１·
第３５卷第８期
２０１０年４月
Ｖｏｌ３５，Ｉｓｓｕｅ ８
Ａｐｒｉｌ，２０１０
［９］ ＭｅｄｚｈｉｔｉｖＲ，ＰｒｅｓｔｏｎＨＰ，ＪａｎｅｗａｙＣＡＡｈｕｍａｎｈｏｍｏｌｏｇｕｅｏｆ
ｔｈｅｄｒｏｓｏｐｈｉｌａＴｏｌｐｒｏｔｅｉｎｓｉｇｎａｌｓａｃｔｉｖａｔｉｏｎｏｆａｄａｐｔｉｖｅｉｍｍｕｎｉｔｙ
［Ｊ］Ｎａｔｕｒｅ，１９９７，３８８（６６４０）：３９４
［１０］ 奚正德Ｔｏｌ样受体信号传导在关节炎发病中的作用［Ｊ］国
际内科学杂志，２００９，３６（６）：３６１
［１１］ ＨｏｒｉｅＲ，ＡｉｚａｗａＳ，ＮａｇａｉＭ，ｅｔａｌＡｎｏｖｅｌｄｏｍａｉｎｉｎｔｈｅＣＤ３０
ｃｙｔｏｐｌａｓｍｉｃｔａｉｌｍｅｄｉａｔｅｓＮＦｋａｐｐａＢａｃｔｉｖａｔｉｏｎ［Ｊ］ＩｎｔｅｒｎＩｍ
ｍｕｎ，１９９８，１０（２）：２０３
［１２］ ＡｒｃｈＲＨ，ＧｅｄｒｉｃｈＲＷ，ＴｈｏｍｐｏｓｏｎＣＢＴｒａｎｓｌｏｃａｔｉｏｎｏｆ
ＴＲＡＦｐｒｏｔｅｉｎｓｒｅｇｕｌａｔｅｓａｐｏｐｔｏｔｉｃｔｈｒｅｓｈｏｌｄｏｆｃｅｌｓ［Ｊ］Ｂｉｏｃｈｅｍ
ＢｉｏｐｈｙｓＲｅｓＣｏｍｍｕｎ，２０００，２７２（３）：９３６
［１３］ 蔡蓓，王兰兰，陈捷，等共刺激分子与类风湿性关节炎患者
Ｔ细胞的平衡失控［Ｊ］免疫学杂志，２００５，２１（２）：１６０
［１４］ 王兰兰，蔡蓓，陈捷，等淋巴细胞共刺激信号和凋亡信号异
常与ＲＡ免疫效应亢进的研究［Ｊ］中国免疫学杂志，２００５，
２ｌ（１２）：９４０
ＣｏｍｐａｒａｔｉｖｅｓｔｕｄｙｏｆｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆＴＬＲ／ＴＲＡＦｓｉｇｎａｌｉｎｇｐａｔｈｗａｙｏｆｃｌａｓｓｉｃ
ｐｒｉｓｃｒｉｐｔｉｏｎｓｔｈａｔｄｅａｌｓｗｉｔｈａｒｔｈｒａｌｇｉａｓｙｎｄｒｏｍｅｂａｓｅｄｏｎｒｅｌｅｖｅｎｔ
ｔｈｅｏｒｙｏｆｐｒｉｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｎｄｓｙｎｄｒｏｍｅ
ＸＵＳｈｉｊｕｎ１，２，３，４，ＬＩＬｅｉ３，４，ＺＨＡＮＧＷｅｎｓｈｅｎｇ３，４，ＷＡＮＧＹｏｎｇｙａｎ５
（１ＰｈａｒｍａｃｙＳｃｈｏｏｌｏｆＣｈｅｎｇｄｕＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＴｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅ，Ｃｈｅｎｇｄｕ６１００７５，Ｃｈｉｎａ；
２ＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＳｔａｎｄａｒｄｉｚａｔｉｏｎｉｎＴｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎａｌＭａｔｅｒｉａｌｓ，ＭｉｎｉｓｔｒｙｏｆＥｄｕｃａｔｉｏｎ，Ｃｈｅｎｇｄｕ６１１１３７，Ｃｈｉｎａ；
３ＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＲｅｓｏｕｒｃｅｓＰｒｏｔｅｃｔｉｏｎａｎｄＵｔｉｌｉｚａｔｉｏｎｏｆＴｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅ，Ｂｅｉｊｉｎｇ１００８７５，Ｃｈｉｎａ；
４ＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＮａｔｕｒａｌＭｅｄｃｉｎｅＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅＲｅｓｏｕｒｃｅｓ，ＣｏｌｅｇｅｏｆＭｅｄｉｃｉｎｅＲｅｓｏｕｒｃｅｓ，ＢｅｉｊｉｎｇＮｏｒｍａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，
Ｂｅｉｊｉｎｇ１００８７５，Ｃｈｉｎａ；５ＣｈｉｎａＡｃａｄｅｍｙｏｆＴｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅ，Ｂｅｉｊｉｎｇ１００７００，Ｃｈｉｎａ）
［Ａｂｓｔｒａｃｔ］ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｂａｓｅｄｏｎｒｅｌｅｖｅｎｔｔｈｅｏｒｙｏｆｐｒｉｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｎｄｓｙｎｄｒｏｍｅ，ｔｏｃｏｍｐａｒｅｔｈｅｇｅｎｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｄｉｆｅｒｅｎｃｅｓｏｆ
ＴＬＲ２，ＴＲＡＦ６，ａｎｄＦａｓｌｇｗｉｔｈａｄｊｕｖａｎｔａｒｔｈｒｉｔｉｓｉｎｒａｔｓｐｌｅｅｎａｍｏｎｇＷｕｔｏｕｄｅｃｏｃｔｉｏｎ，ＧｕｉｚｈｉＳｈａｏｙａｏＺｈｉｍｕｄｅｃｏｃｔｉｏｎａｎｄＢａｉｈｕ
ＧｕｉｚｈｉｄｅｃｏｃｔｉｏｎＭｅｔｈｏｄ：ＴｈｅｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｎｉｍａｌｍｏｄｅｌｏｆａｄｊｕｖａｎｔａｒｔｈｒｉｔｉｓｉｎｒａｔｓｗａｓｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄＲｅｌａｔｉｖｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎａｍｏｕｎｔｏｆ
ＴＬＲ２，ＴＲＡＦ６，ａｎｄＦａｓｌｇｉｎｒａｔｓｓｐｌｅｅｎｗａｓｄｅｔｅｃｔｅｄｂｙＳＹＢＲＧｒｅｅｎＩｄｙｅｍｅｔｈｏｄｓａｎｄｉｍｐｌｅｍｅｎｔａｔｉｏｎｏｆｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅＰＣＲ
ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙｗｉｔｈ１８ｓＲＮＡａｓａｎｉｎｔｅｒｎａｌｇｅｎｅ２－ΔΔＣＴｍｅｔｈｏｄｗａｓｕｓｅｄｆｏｒｃｏｍｐｕｔｉｎｇａｎｄｄａｔａａｎａｌｙｓｉｓＲｅｓｕｌｔ：ＴＬＲ２，ＴＲＡＦ６，ａｎｄ
ＦａｓｌｇｇｅｎｅｉｎａｄｊｕｖａｎｔａｒｔｈｒｉｔｉｓｒａｔｓｐｌｅｅｎｗａｓｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｈｉｇｈｅｒｔｈａｎｔｈｏｓｅｉｎｔｈｅｂｌａｎｋｇｒｏｕｐＴｈｅｖａｒｉｏｕｓｄｏｓｅｓｏｆＷｕｔｏｕｄｅｃｏｃｔｉｏｎ，
ＧｕｉｚｈｉＳｈａｏｙａｏＺｈｉｍｕｄｅｃｏｃｔｉｏｎａｎｄＢａｉｈｕＧｕｉｚｈｉｄｅｃｏｃｔｉｏｎｃａｎｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｉｎｈｉｂｉｔｏｒｒｅｄｕｃｅｔｈｅａｂｎｏｒｍａｌｙｈｉｇｈｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＴＬＲ２，
ＴＲＡＦ６，ａｎｄＦａｓｌｇｇｅｎｅｓＴｈｅｇｅｎｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｌｅｖｅｌｃａｕｓｅｄｂｙｔｈｒｅｅｄｅｃｏｃｔｉｏｎｓｍｅｎｔｉｏｎｅｄａｂｏｖｅｗａｓｆｏｌｏｗｅｄｂｙｓｔｒｏｎｇｔｏｗｅａｋａｓＷｕｔｏｕ
ｄｅｃｏｃｔｉｏｎ，ＧｕｉｚｈｉＳｈａｏｙａｏＺｈｉｍｕｄｅｃｏｃｔｉｏｎａｎｄＢａｉｈｕＧｕｉｚｈｉｄｅｃｏｃｔｉｏｎｗｉｔｈｔｈｅｃｌｉｎｉｃａｌｅｑｕｉｖａｌｅｎｔｄｏｓｅ，ｂｕｔｔｈｅｓｔｒｅｎｇｔｈｏｆｔｈｅｔｒｅｎｄｔｏ
ｒｅｄｕｃｅｔｈｅｒｏｌｅｏｆＴＲＡＦ６ｉｓｊｕｓｔｔｈｅｏｐｐｏｓｉｔｅｗｉｔｈｔｈｅＴＬＲ２ａｎｄＦａｓｌｇｇｅｎｅｓＣｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｗｕｔｏｕｄｅｃｏｃｔｉｏｎ，ＧｕｉｚｈｉＳｈａｏｙａｏＺｈｉｍｕｄｅ
ｃｏｃｔｉｏｎａｎｄＢａｉｈｕＧｕｉｚｈｉｄｅｃｏｃｔｉｏｎｃａｎｒｅｄｕｃｅｔｈｅａｂｎｏｒｍａｌｙｈｉｇｈｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＴＬＲ２，ＴＲＡＦ６ａｎｄＦａｓｌｇｉｎｒａｔｓｐｌｅｅｎｗｉｔｈａｄｊｕｖａｎｔａｒ
ｔｈｒｉｔｉｓ，ｂｕｔｔｈｅｄｉｆｅｒｅｎｃｅｓｏｆｉｎｔｅｎｓｉｔｙｅｘｉｓｔａｎｄｒｅｍａｉｎｒｅｌａｔｉｖｅｌｙｃｏｎｓｉｓｔｅｎｔｗｉｔｈｔｈａｔｏｆｐｈａｒｍａｃｏｄｙｎａｍｉｃｓａｎｄｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｔｒｅｎｄｓｏｆＴｃｅｌ
ｓｕｂｓｅｔｓＲｅｓｕｌｔｓｓｕｇｇｅｓｔｔｈａｔｔｈｅｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＴＬＲ２／ＴＲＡＦ６ｓｉｇｎａｌｐａｔｈｗａｙａｎｄａｐｏｐｔｏｓｉｓＦａｓｌｇｒｅｃｅｐｔｏｒｇｅｎｅｍａｙｂｅｔｈｅｒｅａｓｏｎｓｔｈａｔ
ｔｈｅｐｈａｒｍａｃｏｄｙｎａｍｉｃｓｏｆｔｈｒｅｅｄｅｃｏｃｔｉｏｎｓｏｎｐｅｒｉｐｈｅｒａｌＴｃｅｌｓｕｂｓｅｔｓｉｎｒｅｇｕｌａｔｉｎｇｉｎｔｅｎｓｉｔｙｗａｓｄｉｆｅｒｅｎｔ
［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］ Ｗｕｔｏｕｄｅｃｏｃｔｉｏｎ；ＧｕｉｚｈｉＳｈａｏｙａｏＺｈｉｍｕｄｅｃｏｃｔｉｏｎ；ＢａｉｈｕＧｕｉｚｈｉｄｅｃｏｃｔｉｏｎ；ＴＬＲ／ＴＲＡＦｓｉｇｎａｌｐａｔｈｗａｙ；Ｆａｓｌｇ
ｄｏｉ：１０．４２６８／ｃｊｃｍｍ２０１００８１９
［责任编辑 张宁宁］
·９２０１·
第３５卷第８期
２０１０年４月
Ｖｏｌ３５，Ｉｓｓｕｅ ８
Ａｐｒｉｌ，２０１０