全 文 ：檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶
甘油外，还加入了 PEG600 以防止囊皮脱水
老化［10］。
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［责任编辑 仝燕］
［收稿日期］ 20130218(004)
［基金项目］ 广东省科技计划项目(2011B050500008)
［第一作者］ 张言，硕士，从事中药新药研究与开发，Tel:13760790029，E-mail:zhangyan0779@ 163． com
［通讯作者］ * 桂蜀华，副研究员，从事中药新药研究与开发，E-mail:guiguihuahua@ 163． com
乌头汤不同配伍对单酯型乌头生物碱含量的影响
张言，桂蜀华* ，谢友良，谭庆龙，卢瑞琦，李国卫，邱继远
( 广州中医药大学，广州 510006)
［摘要］ 目的:考察乌头汤不同配伍对制川乌中 3 种单酯型乌头生物碱(苯甲酰乌头原碱、苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰次
乌头原碱)含量的影响。方法:采用 HPLC考察乌头汤不同配伍中 3 种单酯型乌头生物碱含量的变化。结果:与制川乌单煎相
比，配伍黑豆、防风的乌头汤与原乌头汤中单酯型乌头生物碱含量由 1 338. 86 μg分别降至 349. 26，402. 18 μg，制川乌配伍防
风则降低至 680. 01 μg，制川乌配伍黑豆则降至 667. 59 μg。结论:乌头汤配伍防风、黑豆能很大程度地降低制川乌中 3 种单酯
型乌头碱含量，为揭示制川乌减毒配伍机制提供指导。
［关键词］ 乌头汤;配伍;高效液相色谱;单酯型乌头生物碱
［中图分类号］ Ｒ283. 6;Ｒ289. 1;Ｒ284. 1 ［文献标识码］ A ［文章编号］ 1005-9903(2013)17-0011-04
［doi］ 10． 11653 /syfj2013170011
Effects of Different Compatibility on Contents of Monoester-Alkaloids
from Aconiti Ｒadix Cocta in Aconitum Decoction
ZHANG Yan，GUI Shu-hua* ，XIE You-liang，TAN Qing-long，LU Ｒui-qi，LI Guo-wei，QIU Ji-yuan
(Guangzhou University of Chinese Medicine，Guangzhou 510006，China)
［Abstract］ Objective:To investigate influence of different compatibility to the contents of three kinds of
monoester-alkaloids (benzoylmesaconine， benzoylaconine， benzoylhypaconine) from Aconiti Ｒadix Cocta in
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aconitum decoction． Method:HPLC was applied to determine the contents of three kinds of monoester-alkaloids
from Aconiti Ｒadix Cocta in aconitum decoction with different compatibility． Ｒesult:Compared with single fried of
Aconiti Ｒadix Cocta，the contents of monoester-alkaloids in aconitum decoction felt from 1 338. 86 μg to 349. 26，
402. 18 μg by compatibility with black beans and Saposhnikoviae Ｒadix，compatibility of Aconiti Ｒadix Cocta and
Saposhnikoviae Ｒadix reduced to 680. 01 μg，and felt to 667. 59 μg in compatible decoction of Aconiti Ｒadix
Cocta and black beans． Conclusion:Compatibility of Saposhnikoviae Ｒaidix and black beans could reduce to a
large extent contents of three kinds of monoester-alkaloids from Aconiti Ｒadix Cocta， it provided guidance for
revealing attenuated compatibility mechanism of Aconiti Ｒadix Cocta．
［Key words］ aconitum decoction;compatibility;HPLC;monoester-alkaloids from Aconiti Ｒadix Cocta
乌头汤为东汉著名医家张仲景创制的名方，由
黄芪、麻黄、芍药、甘草(炙)、制川乌组成，具有温经
散寒、祛湿镇痛的功效，主治寒湿痹症［1］。方中以
制川乌温经祛湿、散寒镇痛，芍药缓急舒经镇痛，以
利筋骨屈伸［2］。制川乌与麻黄相配，祛痹镇痛之力
较著［3］。名老中医李可在其基础上配伍黑豆、防
风，以达到制约制川乌毒性的目的［4］，防风具有发
表祛风、胜湿止痛之功效，《本草求原》中记载“解乌
头，芫花，野菌诸毒”《本经集注》“杀附子毒”;黑豆
活血利水、祛风解毒，《食疗本草》有云“黑豆煮食
之，杀乌头、附子毒”。制川乌中乌头类生物碱为制
川乌抗炎、镇痛的主要化学成分，也是毒性成分。本
实验通过探究乌头汤不同配伍后 3 种单酯型乌头生
物碱(苯甲酰乌头原碱、苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰
次乌头原碱)含量的变化规律，以揭示乌头汤的减
毒增效配伍机制，为乌头汤的临床应用提供依据。
1 材料
LC-20A型高效液相色谱仪(日本岛津) ，L-530
型台式低速离心机(湖南湘仪公司) ，CP225D 型电
子天平(Sartorius 公司) ，LE-500 型电子天平(佛山
市华天力电子天平厂)。
苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱、苯甲酰新
乌头原碱、新乌头碱对照品(中国药品生物制品检
定所，批号分别为 11794-201102，111796-200901，
111795-200901，110799-200505) ，乌头碱、次乌头碱
对照品(北京恒元启天化工技术研究院，批号分别
为 MUST-11031101，MUST-120210303) ，乙腈为色谱
纯，水为去离子重蒸水，其他试剂均为分析纯。
制川乌(四川江油中坝附子科技发展有限公
司) ，黑豆、防风、黄芪、麻黄、白芍、炙甘草(广州市
杏园春药店) ，均由广州中医药大学赖小平教授鉴
定，分别为毛茛科植物乌头 Aconitum carmichaeli
Debx．的干燥母根的炮制品，豆科植物大豆 Glycine
max (L．)merr． 的干燥种子，伞形科植物防风
Saposhnicovia divaricata (Turcz)Schischk． 的未抽花
茎植株的干燥根，豆科黄芪属植物蒙古黄芪
Astragalus membranaceus (Fish．) Bge． var．
mongholicus (Bge．)Hsiao 干燥的根，麻黄科植物草
麻黄 Ephedra sinica Stapf的干燥草质茎，毛茛科植物
芍药 Paeonia lactiflora Pall．的干燥根，豆科植物甘草
Glycyrrhiz uralensis Fisch．干燥根的蜜制品。
2 方法与结果
2. 1 色 谱 条 件 Inert SustainTM C18 色 谱 柱
(4. 6 mm × 250 mm，5 μm) ，流动相乙腈(A)-0. 04
mol·L －1乙酸铵溶液(B，氨水调 pH 10)梯度洗脱
(0 ～ 33 min，28% ～31% A;33 ～ 42 min，31% ～ 46%
A;42 ～ 52 min，46% ～ 58% A;52 ～ 80 min，58% ～
28%A) ，柱温 30 ℃，流速 0. 8 mL·min －1，检测波长
235 nm，见图 1。
A．苯甲酰新乌头原碱;B．苯甲酰乌头原碱;C．苯甲酰次乌头原碱;
a．样品 6;b．样品 7;c．样品 5;d．样品 4;e．样品 3;
f．样品 2;g．样品 1;i． 6 种酯型乌头生物碱混标;j．阴性
图 3 乌头汤不同配伍 HPLC
2. 2 供试品溶液的制备 精密称取过 60 目筛的制
川乌细粉约 3. 0 g，加 10 倍量水浸泡，静置 30 min，
沸水浴回流提取 2 h，离心(4 000 r·min －1)5 min，加
10 mL水洗涤残渣，离心，合并上清液，加盐酸调 pH
约 2，加乙醚萃取 3 次，每次 50 mL，弃去乙醚液，酸
水层加氨水调 pH 9 ～ 10，加乙醚萃取 3 次，每次
50 mL，合并乙醚液，于 55 ℃蒸干，加 0. 01%盐酸甲
醇溶解并定容于 5 mL量瓶中，作为样品 1 备用。精
密称取过 60 目筛的制川乌、黑豆各 3. 0 g，按上述操
作制备样品 2。精密称取过 60 目筛的制川乌、防风
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各 3. 0 g，按上述操作制备样品 3。精密称取过 60
目筛的制川乌、炙甘草各 3. 0 g，按上述操作制备样
品 4。精密称取过 60 目筛的制川乌、黑豆、防风、炙
甘草各 3. 0 g，按上述操作制备样品 5。精密称取过
60 目筛的制川乌、黑豆、防风、炙甘草、麻黄、黄芪、白
芍各 3. 0 g，按上述操作制备样品 6。精密称取过 60
目筛的制川乌、炙甘草、麻黄、黄芪、白芍各 3. 0 g，按
上述操作制备样品 7。
2. 3 阴性溶液制备 精密称取过 60 目筛黑豆、防
风、炙甘草、麻黄、黄芪、白芍各 3. 0 g，按 2. 2 项下方
法制备供试品溶液。
2. 4 对照品溶液的制备 精密称取苯甲酰乌头原
碱、苯甲酰次乌头原碱 1. 93，1. 67 mg，分别置于
2 mL量瓶中，用 0. 01%盐酸甲醇定容至刻度，作为
母液备用。精密称取苯甲酰新乌头原碱 1. 26 mg 置
于 2 mL量瓶中，分别加入苯甲酰乌头原碱、苯甲酰
次乌头原碱对照品母液 0. 08，0. 1 mL，用 0. 01%盐
酸甲醇定容至刻度，得苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌
头原碱、苯甲酰新乌头原碱质量浓度分别为 38. 60，
41. 75，630. 00 mg·L －1的单酯型生物碱混合对照品
溶液。取乌头碱、次乌头碱、新乌头碱对照品适量于
5 mL 量瓶中，加 0. 01% 盐酸甲醇定容至刻度，取
1 mL置于 2 mL 量瓶中，加入 3 种单酯型生物碱对
照品混合液适量，用 0. 01%盐酸甲醇定容至刻度，
作为单、双酯型生物碱对照品混合液，备用。
2. 5 方法学考察
2. 5. 1 线性范围 将上述单酯型生物碱对照品混
合液过 0. 45 μm微孔滤膜，分别进样 1，2，5，10，15，
20，25 μL，按 2. 1 项下色谱条件测定，以峰面积为纵
坐标，进样量为横坐标，得回归方程 Y苯甲酰乌头原碱 =
1. 978 × 106X － 5. 404 × 103 (r = 1. 000 0) ，
Y苯甲酰次乌头原碱 = 2. 045 × 10
6X － 1. 252 × 104 (r =
0. 999 98) ，Y苯甲酰新乌头原碱 = 1. 463 × 10
6X + 1. 295 ×
105(r = 0. 999 92) ，线性范围依次为 0. 077 ～ 0. 965，
0. 084 ～ 1. 044，1. 260 ～ 15. 750 μg。
2. 5. 2 精密度试验 分别取单酯型生物碱对照品
混合液过 0. 45 μm 微孔滤膜，连续进样 6 次，每次
10 μL，记录峰面积，结果苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次
乌头原碱、苯甲酰新乌头原碱含量的 ＲSD 分别为
0. 32%，1. 36%，1. 39%。
2. 5. 3 重复性试验 精密称取过 60 目筛的制川乌
细粉 6 份，每份 3. 0 g，按 2. 2 项下方法制备供试品
溶液，进样量 20 μL，结果苯甲酰乌头原碱、苯甲酰
次乌头原碱、苯甲酰新乌头原碱含量的 ＲSD分别为
2. 63%，1. 16%，1. 88%。
2. 5. 4 稳定性试验 精密称取过 60 目筛的制川乌
细粉 3. 0 g，按 2. 2 项下方法制备供试品溶液，分别
于 0，2，4，8，12，16，24 h 分别进样 20 μL，结果苯甲
酰新乌头原碱、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱
含量的 ＲSD分别为 0. 51%，1. 34%，0. 64%。
2. 5. 5 加样回收率试验 取已知苯甲酰新乌头原
碱、苯甲酸乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱含量的样
品，精密加入对照品溶液(苯甲酰新乌头原碱、苯甲
酰乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱质量浓度分别为
0. 504，0. 052 8，0. 046 8 g·L －1)各 0. 5 mL，按 2. 2 项
下方法制备供试品溶液，进样，测定，计算苯甲酰新
乌头原碱、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱平均
回收率分别为 98. 56% (ＲSD 1. 53%) ，99. 62%
(ＲSD 2. 55%) ，100. 86%(ＲSD 1. 80%)。
2. 6 乌头汤不同配伍对单酯型乌头生物碱含量的
影响 精密量取适量样品 1 ～ 7，按 2. 1 项下色谱条
件分析，计算苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰乌头原碱、
苯甲酰次乌头原碱及总单酯型乌头生物碱含量，以
样品 1 中 3 种单酯型乌头生物碱含量作为参比，计
算样品 2 ～ 7 中 3 种单酯型乌头生物碱的含量变化，
见表 1。
表 1 乌头汤不同配伍样品中 3 种单酯型乌头生物碱含量测定
样品
苯甲酰乌头原碱 苯甲酰次乌头原碱 苯甲酰新乌头原碱 总酯型生物碱
提取量 /μg·g － 1 减少率 /% 提取量 /μg·g － 1 减少率 /% 提取量 /μg·g － 1 减少率 /% 提取量 /μg·g － 1 减少率 /%
1 110. 24 100 101. 82 100 1 126. 80 100 1 338. 86 100
2 62. 54 43. 27 66. 25 34. 94 551. 22 51. 08 680. 01 49. 21
3 62. 27 43. 52 61. 41 39. 69 543. 91 51. 73 667. 59 50. 14
4 103. 03 6. 54 98. 93 2. 84 998. 41 11. 39 1 110. 37 17. 07
5 56. 49 48. 76 60. 27 40. 81 449. 18 60. 14 565. 94 57. 73
6 29. 67 73. 09 32. 57 68. 01 287. 02 74. 53 349. 26 73. 91
7 36. 77 66. 65 38. 15 62. 53 327. 26 70. 96 402. 18 69. 96
·31·
张言，等:乌头汤不同配伍对单酯型乌头生物碱含量的影响
3 讨论
川乌中主要毒性成分双酯型乌头生物碱经炮制
后分解为单酯型乌头生物碱，单酯型乌头生物碱的
毒性仅为双酯型乌头生物碱毒性的 1 /200，但毒性
依然存在，当制川乌用量加大时，其毒性可对人身体
产生危害。吕志杰等［5］在研究制川乌毒性时发现，
灌服 10 g制川乌的家兔开始出现中毒表现，并随制
川乌质量的增加毒性表现更加明显，为减毒存性，或
者减毒增效，中医临床常采用药物配伍来解决。
何伟等［6］发现川乌与白芍配伍后，乌头碱煎出
量降低，芍药苷煎出量增加，表明配伍后降低了川乌
的毒性。李晋奇等［7］发现制川乌总碱与白芍总苷、
白芍多糖(1∶ 2)配伍可减轻风寒湿证类风湿性关节
炎大鼠关节肿胀和关节疼痛，升高下丘脑 L-ENK 和
β-END含量，降低血浆 SP、血清 IgG、血清 IL-1β、血
清 IL-6 含量，升高血清 IL-2 含量，抑制成纤维样滑
膜细胞分泌功能的异常亢进。李可老中医在乌头汤
基础上加了防风和黑豆，称之为改良乌头汤，以抑制
乌头汤中制川乌的毒性。由表 1 可知，制川乌配伍
防风、黑豆均可明显降低制川乌中单酯型乌头生物
碱含量，改良乌头汤效果优于乌头汤，一定程度上说
明配伍防风、黑豆能有效地降低金匮原乌头汤的毒
性，一起配伍效果更佳。
提取方法考察时，曾尝试采用文献方法，但结果
不理想，对含测成分产生干扰，故水煎液通过调酸乙
醚萃取除杂，水层再调碱乙醚萃取，乙醚层低温蒸
干，以 0. 01%盐酸甲醇为溶剂，可排除干扰，达到预
期目的。
在预试验中，对制川乌在不同煎煮时间下 6 种
酯型乌头生物碱的含量进行考察，结果发现，单酯型
乌头生物碱含量在 0 ～ 6 h 呈上升趋势，6 h 后苯甲
酰新乌头原碱含量呈下降趋势，苯甲酰乌头原碱及
苯甲酰次乌头原碱则仍缓慢上升，在 0 h 仅发现次
乌头碱存在且含量很低，随煎煮时间的增加，次乌头
碱急剧减少，煎煮 2 h未发现次乌头碱的存在，故单
酯型乌头生物碱的煎煮时间定为 2 h。在川乌炮制
过程中，绝大部分双酯型乌头生物碱已转化成毒性
相对较小的单酯型乌头生物碱，若继续加热加压炮
制单酯型乌头生物碱将继续转化成毒性更小的胺醇
类碱［8］。
张帆等［9］发现附子配伍甘草后，酯型生物碱占
总生物碱质量分数从 46% 降至 4. 5%。施旭光
等［10］发现制川乌与炙甘草的交互作用对次乌头碱
和甘草酸的煎出存在较大影响。王峰峰等［11］发现
制川乌随甘草配伍量的增加，煎煮液中单酯型生物
碱总量逐渐降低，降低达单煎的 40%。本实验中制
川乌配伍炙甘草，相对制川乌单煎，单酯型乌头生物
碱含量只是小幅降低，仅 17. 07%，可能与提取时
间、溶媒及样品处理方式有一定联系，或者炙甘草对
制川乌的减毒作用在进入体内后才进一步体现。蓝
娟等［12］研究炙甘草配伍的减毒机理时，发现炙甘草
配伍附子显著降低游离的双酯型乌头类生物碱含量
及肠道吸收率，同时促使各肠段对乌头类生物碱无
差异吸收，以达到其减毒缓释的作用。炙甘草在体
内外均能起到减毒效果，但其减毒机制尚不明确。
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Sep．，2013