全 文 ：采用聚酰胺除辛芍冻干粉针中赤芍提取物
鞣质的工艺研究
苏 红，兰燕宇，马 琳，黄 勇，王爱民，王永林
（贵阳医学院 药学院，贵州 贵阳 ５５０００４）
［摘要］ 目的：研究注射用辛芍冻干粉针聚酰胺法除鞣质工艺。方法：以有效成分芍药苷转移率、鞣质检查、
局部刺激性和小鼠异常毒性试验为评价指标，通过聚酰胺除鞣质吸附、解析工艺优化，比较传统除鞣质法和聚酰胺
除鞣质法除鞣质效果。结果：聚酰胺法能有效去除样品中的鞣质，芍药苷的转移率明显高于其他方法，而且异常毒
性显著降低，制剂的安全性得到有效保证。结论：聚酰胺法除鞣质为中药注射剂除鞣质技术提供了实验依据。
［关键词］ 注射用辛芍冻干粉针；聚酰胺法；除鞣质工艺
［中图分类号］Ｒ２８３ ［文献标识码］Ａ ［文章编号］１００１５３０２（２００８）０６０６３２０４
［收稿日期］ ２００７０６１５
［基金项目］ 国家科技部科技支撑计划项目（２００６ＢＡＩ０６Ａ０１
０３）；贵州省中药现代化科技产业研究开发专项基金项目（黔科合农
字［２００５］５００１０２）；贵州省省长基金（［２００５］２９６号）
［通讯作者］ 王永林，Ｔｅｌ：（０８５１）６９０８８９９，ＥｍａｉＬ：ｇｙｗｙｌ＠
ｇｍｃ．ｅｄｕ．ｃｎ
注射用辛芍是由赤芍、灯盏细辛经现代制剂技
术提取、精制纯化后采用冷冻干燥工艺制得的冻干
粉针剂，具有活血化瘀，通经活络之功效，临床用于
治疗中风瘀血阻络证，能迅速改善脑缺血临床症状，
对急性脑缺血、缺氧具有良好的治疗作用。本方的
主要原料赤芍为毛茛科植物川赤芍 Ｐａｅｏｎｉａｖｅｉｔｃｈｉ
Ｌｙｎｃｈ的干燥根，文献资料和试验结果表明赤芍含
有大量的鞣质［１］，在研究制备赤芍半成品工艺过程
中发现，按照传统除鞣质工艺，不能有效将鞣质去
除，影响注射剂的质量。作者采用聚酰胺除鞣质工
艺与传统的除鞣质法进行了比较研究，对聚酰胺除
鞣质工艺的吸附、解析过程进行了优化，并以活性成
分芍药苷［２，３］转移率、鞣质检查、局部刺激性和小鼠
异常毒性试验为指标对聚酰胺除鞣质工艺进行评
价，聚酰胺法除鞣质效果好，操作简单，重复性好，可
作为注射用辛芍除鞣质的一种有效方法。
１ 仪器与材料
高效液相色谱仪（岛津 ＬＣ－１０Ａｖｐ系列）、
Ｒｈｅｏｄｙｎｅ７７２５ｉ型进样器；旋转蒸发仪（ＢＵＣＨＩＢ－
４９０）；梅特勒１／１０万电子天平（ＡＥ２４０）。赤芍饮片
（产地四川绵阳）购于贵州省药材公司，经本院生药
学教研室龙庆德副教授鉴定为川赤芍Ｐ．ｖｅｉｔｃｈｉ；芍
药苷对照品（中国药品生物制品检定所，供含量测
定用，批号１１０７３６２００２２０）；聚酰胺（中国医药上海
化学试剂公司，批号Ｆ２００１０７０２）；甲醇、甲酸为分析
纯，水为重蒸水。清洁级昆明种小鼠，体重１７～２０ｇ
［合格证号 ＳＣＸＫ（黔）２００２０００１，贵阳医学院实验
动物中心提供］。家兔，体重２～３ｋｇ，雌雄兼用［使
用许可证号苏ＳＣＸＫ（沪）２００３０００３，由上海斯莱克
实验动物责任有限提供］。
２ 方法与结果
２．１ 芍药苷含量测定
２．１．１ 色谱条件 ＤｉａｍｏｎｓｉｌＣ１８色谱柱（４６ｍｍ×
２５０ｍｍ，５μｍ），流动相甲醇０１％甲酸（４０∶６０），柱
温４０℃，流速１０ｍＬ· ｍｉｎ－１，检测波长２３０ｎｍ。
２．１．２ 对照品溶液的制备 精密称取经五氧化二
磷减压干燥器中干燥３６ｈ的芍药苷对照品适量，用
甲醇制成００６ｍｇ·ｍＬ－１的溶液，即得。
２．１．３ 供试品溶液的制备 分别吸取样品溶液以
５０％乙醇稀释至适宜浓度，用０４５μｍ的微孔滤膜
滤过，进样测定。
２．１．４ 测定 别吸取对照品溶液和供试品溶液各
１０μＬ，注入色谱仪，即得。
２．２ 鞣质检查方法
照《中国药典》２００５年版一部附录Ⅸ Ｓ“注射剂
有关物质检查法”取注射液１ｍＬ，加新配制的１％
鸡蛋清的生理氯化钠溶液５ｍＬ，摇匀，放置１０ｍｉｎ，
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观察溶液浑浊或沉淀情况。
２．３ 异常毒性检查
异常毒性检查是注射剂安全性评价的指标之
一［４］，文献资料报道小鼠的致死浓度相当于人用剂
量的６０倍时，药物的毒性较小［５］。故以小鼠致死浓
度相当于人用剂量的倍数作为安全性指标指标，按
《中国药典》２００５年版一部附录ⅩⅧ Ｂ“中药注射剂
安全性检查法应用指导原则”项下“异常毒性检查
法”，取体重１７～２０ｇ的健康昆明种小鼠依法试验，
对各工艺样品进行安全性检查。
２．４ 家兔股四头肌的刺激性试验
取健康家兔９只，分为３组，每组３只。分别于
家兔一侧股四头肌处以无菌操作方法注射样品溶液
１ｍＬ，另侧相应部位同法注射等容积灭菌生理盐水作
为对照，正常供应饲料和水。４８ｈ后放血处死家兔，
解剖股四头肌，纵向切开，观察注射部位肌肉的刺激
反应，参照文献方法［６］换算成相应的反应分值。
２．５ 赤芍提取物制备
取赤芍１２００ｇ加８倍量水煎煮３次，每次１ｈ，
滤过，合并滤液，减压浓缩至相对密度１０６～１０８
（５０℃），加乙醇使含醇量达６０％，搅拌均匀，静置
１２ｈ，抽滤，滤液减压回收乙醇并浓缩至相对密度
１１８～１２０（５０℃），用１／２倍量水饱和的正丁醇提
取４次，合并正丁醇液，用１／８倍量水洗１次，减压
回收正丁醇，减压干燥，粉碎，得赤芍提取物，备用。
２．６ 聚酰胺除鞣质工艺优化
２．６．１ 吸附容量的考察 取赤芍提取物３１０ｇ（相
当于生药７２ｇ），加４５％乙醇溶解至１２０ｍＬ（约０６
ｇ生药／ｍＬ），分别各取２０ｍＬ加入已处理好聚酰胺
１，２，３，４，５，６ｇ，不时搅拌，静态吸附３ｈ，滤过，滤液
水浴挥至近干，残渣加水适量溶解，调 ｐＨ７～７５，
加水定容至１０ｍＬ，滤过，取滤液１ｍＬ，加新配制的
１％鸡蛋清５ｍＬ，摇匀，放置１０ｍｉｎ，观察溶液浑浊
或沉淀情况［７］。聚酰胺加入量为１ｇ时有浑浊或沉
淀；加入量２ｇ时不明显浑浊；加入量３～６ｇ时，无
浑浊或沉淀。结果表明，聚酰胺吸附容量小于每１ｇ
吸附４ｇ生药时，可有效吸附样品中的鞣质，吸附容
量 ＝上柱液中生药量／聚酰胺干重。为保证产品的
质量，规定吸附容量为每３ｇ生药使用１ｇ聚酰胺。
２．６．２ 吸附流速考察 取赤芍提取物若干份，每份
３１０ｇ，加４５％乙醇溶解至１２０ｍＬ，上已处理好的
聚酰胺柱（２４ｇ，径高比：１∶６），分别以０５，１，１５，
２，２５，３ｍＬ·ｍｉｎ－１的流速进行动态吸附。补加
４５％乙醇液洗脱，自下口流出有色液时收集洗脱液
１２０ｍＬ。取洗脱液２０ｍＬ，水浴挥至近干，残渣加水
适量溶解，调ｐＨ７～７５，加水定容至１０ｍＬ，滤过，
取滤液依法进行鞣质检查。试验结果表明，吸附流
速小于１５ｍＬ·ｍｉｎ－１时，鞣质被聚酰胺有效吸附，
吸附流速大于１ＢＶ· ｈ－１（２ｍＬ·ｍｉｎ－１，ＢＶ湿柱
体积）时，流穿液中鞣质检查不合格，为保证产品质
量，吸附流速应控制在０５ＢＶ·ｈ－１。
２．６．３ 洗脱条件的选择 根据预试验结果，用乙醇
进行洗脱，乙醇的浓度、用量、洗脱流速３个因素对
本品的吸附影响较大。因此，采用Ｌ９（３
４）正交实验
设计安排试验，见表１，测定上柱液、流穿液及洗脱
液中芍药苷量，计算芍药苷转移率。结果见表２，３。
表１ 因素水平
水平
Ａ
乙醇／％
Ｂ
用量／ｍＬ
Ｃ
洗脱流速／ｍＬ·ｍｉｎ－１
１ ３０ ２４０ １
２ ４５ ３６０ ２
３ ６０ ４８０ ３
表２ 正交试验结果
Ｎｏ． 芍药苷转移率／％ Ｎｏ． 芍药苷转移率／％
１ ９４０１ ６ ９７２１
２ ９５４３ ７ ９４４６
３ ９５０６ ８ ９７２５
４ ９５０３ ９ ９８０３
５ ９６１４
表３ 芍药苷转移率方差分析表
方差来源 离均差平方和 自由度 均方 Ｆ Ｐ
Ａ ４９２９ ２ ２４６ ２３０３３ ＜００５
Ｂ ８５２６ ２ ４２６ ３９８４１ ＜００５
Ｃ １７６７ ２ ０８８ ８２５７
Ｄ（误差） ０２１０ ０１１
注：Ｆ００５（２，２）＝１９００
从表２，３中的结果分析，Ａ，Ｂ因素对芍药苷的
转移率有显著性差异（Ｐ＜００５），最佳工艺条件为
Ａ３Ｂ３Ｃ２，在Ａ，Ｂ因素中最佳工艺和次佳工艺的极差
较小，次佳工艺为 Ａ２Ｂ２Ｃ２，以最佳工艺工艺 Ａ３Ｂ３Ｃ２
和次佳工艺Ａ２Ｂ２Ｃ２进行验证试验。试验结果表明，
两工艺芍药苷平均转移率 分 别 为 ９７９６％，
９７５７％，两者之间无明显差异，从省工省时、降低能
耗的角度，选择次佳工艺进行试验。即用３ＢＶ４５％
乙醇洗脱，流速为１ＢＶ·ｈ－１。
２．７ 试验样品制备
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２．７．１ 明胶过滤法 取赤芍提取物适量，加水溶解
至１００ｍＬ，滴加５％明胶溶液至上清液不出现沉淀
为止，静置１ｈ，滤过，加入乙醇使含醇量为７５％，放
置过夜，滤过，滤液回收乙醇至无醇味。加适量水稀
释溶解，调 ｐＨ７０～７５，加水稀释至每１ｍＬ相当
于２ｇ生药，煮沸３０ｍｉｎ，放冷，冷藏２４ｈ，取上清液
用０４５μｍ微孔滤膜滤过，分装，灭菌，备用。
２．７．２ 碱性醇沉淀法 取赤芍提取物适量，用
８０％乙醇溶解，再用１０％ＮａＯＨ调 ｐＨ８～８５，放置
过夜，过滤，滤液回收乙醇至无醇味。以下同上法操
作制得供试品溶液。
２．７．３ 聚酰胺法 取赤芍提取物适量，用４５％乙醇
溶解，以０５ＢＶ· ｈ－１流速上聚酰胺柱，用３ＢＶ４５％
乙醇１ＢＶ·ｈ－１流速洗脱，收集流穿液和洗脱液，回
收乙醇至无醇味。以下同上法操作制得供试品溶液。
２．８ 不同除鞣质工艺评价［７］
以芍药苷动态转移率、鞣质检查、局部刺激性和
小鼠异常毒性试验为评价指标，比较不同除鞣质工
艺的除鞣质效果，见表４。试验结果表明，聚酰胺法
明显优于传统除鞣质方法，不仅除鞣质效果好，而且
指标成分损失少，芍药苷转移率达９５％以上，家兔
注射部位肌肉均未见明显红肿、充血等现象，小鼠的
致死浓度达１２０倍以上，远高于明胶法（３０倍）与碱
性醇沉法（６０倍），有效地提高了制剂的安全性。
表４ 不同工艺除鞣质效果的比较（ｎ＝３）
工艺
除鞣质
检查
芍药苷
转移率
／％
异常毒性检查
（小鼠致死浓度
的倍数）
局部刺激性
检查
（反应分值）
明胶法 ± ８０９７ ３０ １４
碱性醇沉法 ± ７１３３ ６０ ２１
聚酰胺法 － ９５３９ １２ ００
３ 讨论
目前常用的除鞣质方法主要有热处理冷置法、
明胶沉淀法、聚酰胺法、酸性及碱性醇沉法、铅盐沉
淀法［８］，可根据具体情况灵活选用。聚酰胺除鞣质
方法研究虽多但未见有应用于工业化生产的报道。
根据试验结果，本实验用明胶沉淀法、碱性醇沉法和
聚酰胺法进行除鞣效果比较，成功地将聚酰胺法除
鞣质应用于中药注射剂“注射用辛芍冻干粉针”的
工业化生产。
《中国药典》２００５年版一部中赤芍药材含量测
定采用甲醇００５ｍｏＬ·Ｌ－１ＫＨ２ＰＯ４溶液（４０∶６５）为
流动相，由于盐系统 ＫＨ２ＰＯ４操作繁琐，为简化色谱
条件，以甲醇０１％甲酸（４０∶６０）为流动相进行含量
测定，并对含量测定的方法学进行了研究。芍药苷
的线性范围为０２４～２４μｇ，ｒ＝０９９９９，平均回收
率为９９８％，ＲＳＤ２１％。该法操作简便，重复性
好，芍药苷与其他组分峰均能达到基线分离，分离度
大于１５，阴性对照溶液无干扰。
鞣质为多元酚化合物，易被聚酰胺吸附，且吸附
力极强，不易被醇洗脱，因此，利用单萜苷和小分子
酚酸类物质在醇溶液中不易被聚酰胺吸附，而鞣质
在醇溶液中仍能被吸附的性质与鞣质分离。由于聚
酰胺树脂法除鞣质的影响因素较多，本实验利用聚
酰胺在碱性溶剂中吸附能力最弱的性质对聚酰胺再
生利用进行了研究。试验结果表明，聚酰胺反复使
用１２次，芍药苷转移率没有明显的变化，符合工艺
要求。同时，按《中国药典》２００５年版一部附录Ⅰ Ｕ
“注射剂”、附录ⅩⅧ Ｂ“中药注射剂安全性检查法
应用指导原则”项下的规定，分别对制剂的蛋白质、
鞣质、异常毒物、溶血试验、过敏试验、刺激性试验、
不溶性微粒、可见异物、热原、有机溶剂残留等安全
性评价指标进行试验，结果均符合规定。
在异常毒性试验中，发现残留鞣质对小鼠的毒
性较大。通过聚酰胺除鞣质，可以使小鼠的异常毒
性明显降低，小鼠致死浓度的倍数从传统除鞣质方
法的３０倍增加到１２０倍，说明本品用聚酰胺去除鞣
质的方法可行。
［参考文献］
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Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙｏｆｅｌｉｍｉｎａｔｉｎｇｔａｎｎｉｎｗｉｔｈｐｏｌｙａｍｉｄｅａｄｓｏｒｐｔｉｏｎｆｏｒ
ｐｒｅｐａｒｉｎｇＸｉｎｓｈａｏｌｙｏｐｈｉｌｉｚａｔｉｏｎ
ＳＵＨｏｎｇ，ＬＡＮＹａｎｙｕ，ＭＡＬｉｎ，ＨＵＡＮＧＹｏｎｇ，ＷＡＮＧＡｉｍｉｎｇ，ＷＡＮＧＹｏｎｇｌｉｎ
（ＳｃｈｏｏｌｏｆＰｈａｒｍａｃｙ，ＧｕｉｙａｎｇＭｅｄｉｃａｌＣｏｌｅｇｅ，Ｇｕｉｙａｎｇ５５０００４，Ｃｈｉｎａ）
［Ａｂｓｔｒａｃｔ］ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：ＴｏｓｔｕｄｙｔｈｅｐｒｏｃｅｓｓｏｆｅｌｉｍｉｎａｔｉｎｇｔａｎｎｉｎｗｉｔｈｐｏｌｙａｍｉｄｅａｄｓｏｒｐｔｉｏｎｆｏｒｐｒｅｐａｒｉｎｇＸｉｎｓｈａｏｌｙｏｐｈｉｌｙｚａ
ｔｉｏｎ．Ｍｅｔｈｏｄ：Ｔｈｅｔｒａｎｓｆｅｒｒａｔｅｏｆｐａｅｏｎｉｆｌｏｒｉｎ，ｔａｎｎｉｎｅｘａｍｉｎａｔｉｏｎ，ｔｈｅｔｅｓｔｏｆｔｈｅｌｏｃａｌｓｔｉｍｕｌｕｓａｎｄａｂｎｏｒｍａｌｔｏｘｉｃｉｔｙｏｎｍｉｃｅｗｅｒｅ
ａｄｏｐｔｅｄａｓｉｎｄｅｘｅｓｔｏｏｐｔｉｍｉｚｅｔｈｅｐｒｏｃｅｓｓｏｆｔａｎｎｉｎａｄｓｏｒｐｔｉｏｎａｎｄｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎｏｆｐｏｌｙａｍｉｄｅａｄｓｏｒｐｔｉｏｎ，ａｎｄｔｈｅｅｆｅｃｔｏｆｅｌｉｍｉｎａｔｉｎｇｔａｎ
ｎｉｎｏｆｐｏｌｙａｍｉｄｅａｄｓｏｒｐｔｉｏｎｗａｓｃｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌｍｅｔｈｏｄｓ．Ｒｅｓｕｌｔ：Ｔｈｅｅｆｅｃｔｏｆｅｌｉｍｉｎａｔｉｎｇｔａｎｎｉｎｗｉｔｈｐｏｌｙａｍｉｄｅａｄｓｏｒｐｔｉｏｎ
ｗａｓｇｏｏｄ，ａｎｄｔｈｅｔｒａｎｓｆｅｒｒａｔｅｏｆｐａｅｏｎｉｆｌｏｒｉｎｗｉｔｈｐｏｌｙａｍｉｄｅａｄｓｏｒｐｔｉｏｎｗａｓｓｕｐｅｒｉｏｒｔｏｔｈｅｏｔｈｅｒｍｅｔｈｏｄｓ．Ｆｕｒｔｈｅｒｍｏｒｅ，ｔｈｅａｂｎｏｒｍａｌ
ｔｏｘｉｃｉｔｙｄｅｃｒｅａｓｅｄｅｖｉｄｅｎｔｌｙａｎｄｔｈｅｓｅｃｕｒｉｔｙｏｆｔｈｅｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎｗａｓｅｎｓｕｒｅｄ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｔｈｅｍｅｔｈｏｄｏｆｐｏｌｙａｍｉｄｅａｄｓｏｒｐｔｉｏｎｐｒｏｖｉｄｅｓ
ａｕｓｅｆｕｌｒｅｆｅｒｅｎｃｅｔｏｔｈｅｔｅｃｈｎｉｑｕｅｏｆｅｌｉｍｉｎａｔｉｎｇｔａｎｎｉｎｉｎｔｈｅｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅｍｅｄｉｃｉｎｅｉｎｊｅｃｔｉｏｎｓ．
［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］ Ｘｉｎｓｈａｏｌｙｏｐｈｉｌｉｚａｔｉｏｎ；ｐｏｌｙａｍｉｄｅａｄｓｏｒｐｔｉｏｎ；ｅｌｉｍｉｎａｔｉｎｇｔａｎｎｉｎ ［责任编辑 鲍 雷］
［收稿日期］ ２００７０７０４
［基金项目］ 天津市科技攻关项目（０６ＹＦＧＰＳＨ０２９００）
［通讯作者］ 周晶，Ｅｍａｉｌ：ｚｈｏｕｊｉｎｇ＠ｔｉｊｍｕ．ｅｄｕ．ｃｎ
氨液水解法用于提高黄芪中黄芪甲苷
含量的工艺研究
刘 玫，周 晶，张庆伟，刘 芳
（天津医科大学 药学院，天津 ３０００７０）
［摘要］ 目的：探讨氨试液水解法用于提高黄芪甲苷含量的最佳工艺条件；比较氨解前后黄芪总皂苷的含量
差异。方法：采用正交设计试验对影响氨解程度的主要因素进行考察，以黄芪甲苷含量为指标，用高效液相色谱法
测定其含量。采用大孔吸附树脂比色法测定氨解前后黄芪总皂苷的含量。结果：浓氨试液与药材的配比对氨解程
度的影响最为显著。最佳氨解工艺参数为：浓氨试液与药材配比１∶５，氨试液浓度为２％时，于９０℃水浴回流 ２ｈ，
黄芪甲苷含量较原药材提高约１６倍。比色法结果显示氨解前后黄芪总皂苷含量无统计学差异。结论：氨解法可
显著提高黄芪药材中黄芪甲苷的含量，且氨解过程并未影响黄芪总皂苷的含量。说明该法可使其他类型的皂苷转
化为黄芪甲苷，具有较高实用价值，可为工业生产提供参考依据。
［关键词］ 氨试液水解；黄芪甲苷；总皂苷；蒸发光散射检测；大孔吸附树脂法
［中图分类号］Ｒ２８４．１ ［文献标识码］Ａ ［文章编号］１００１５３０２（２００８）０６０６３５０４
黄芪为豆科植物蒙古黄芪Ａｓｔｒａｇａｌｕｓｍｅｍｂｒａｎａ
ｃｅｕｓ（Ｆｉｓｃｈ．）Ｂｇｅ．ｖａｒ．ｍｏｎｇｈｏｌｉｃｕｓ（Ｂｇｅ．）Ｈｓｉａｏ或
膜荚黄芪Ａ．ｍｅｍｂｒａｎａｃｅｕｓ（Ｆｉｓｃｈ．）Ｂｇｅ．的干燥根，
主要含皂苷类、黄酮类、多糖类及氨基酸类成分等。
黄芪总皂苷具有免疫调节、清除多种自由基等作
用［１３］，其中黄芪甲苷为主要有效成分，具有抗应激、
抗生物氧化、抗炎、利尿、强心、提高肌体免疫等功效。
本研究利用氨液水解法，采用正交实验设计对氨解工
艺进行优化以确定最佳氨解条件，以期使黄芪药材中
其他皂苷类成分转化为生物活性较强的黄芪甲苷，为
充分利用黄芪药材资源及工业生产提供依据。
１ 仪器与试药
Ａｇｉｌｅｎｔ１１００型 高 效 液 相 色 谱 仪，Ａｌｔｅｃｈ
２０００ＥＳ型ＥＬＳＤ检测器，日本岛津ＵＶ－２４０分光光
度计，ＡＢ－８型大孔吸附树脂，乙腈为色谱纯，水为
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第３３卷第６期
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Ｍａｒｃｈ，２００８