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Vol. 34，Issue 1
January，2009
第 34卷第 1期
2009年 1月
中药九节茶提取物对应激负荷小鼠免疫
功能的改善作用
何蓉蓉 1，王 敏 2，李怡芳 2，戴 毅 2，段营辉 1，姚新生 1,2*，栗原博 2*
（1．沈阳药科大学 中药学院，辽宁 沈阳 110016；
2．暨南大学 中药及天然药物研究所，广东 广州 510632）
[摘要] 目的：研究中药九节茶对束缚应激小鼠免疫功能的改善作用。方法：实验将雄性 C57BL/6 小鼠分为正常对照
组，应激对照组，125，500 mg·kg-1九节茶提取物给药组，制备脾脏淋巴细胞悬液，流式细胞术分析 T 淋巴细胞亚群、NK
细胞和 NKT细胞比例及数目。结果：与应激对照组相比，中药九节茶可以提高束缚应激小鼠脾脏淋巴细胞总数，改善 T淋
巴细胞亚群比例，同时增加脾脏 NK细胞和 NKT细胞比例及数目。结论：中药九节茶可以改善应激负荷小鼠淋巴细胞数目
及淋巴细胞亚群比例。
[关键词] 九节茶；束缚应激；T淋巴细胞亚群；NK细胞；NKT细胞
16近年来随着生活方式的改变，现代人更多是在
面对环境变化、生活习惯改变及物理化学等各种应
激原带给人们的身心疲劳。因此，逐渐增多的亚健
康状态及应激性疾病已成为人们关注的话题。应激
是机体受到应激原负荷时出现的防御反应及适应
过程，涉及到神经、内分泌及免疫等多方面生理功
能。迄今为止的研究确认限制小鼠自由运动的束缚
应激负荷可以诱发动物的烦躁和焦虑来模拟心理
应激状态，是目前被广泛采用的一种模拟心理压力
的应激模型。同时，人们也发现束缚应激负荷能明
显影响机体的免疫功能，显著改变免疫细胞数目和
活性[1]。研究应激反应，寻找预防、缓解及消除应
激性疾病的有效药物是目前急待解决的社会问题。
在探讨和寻找抗应激药物的过程中，一些传统
药物和天然产物因其安全性较高的特点受到人们
的关注，传统中药九节茶是其中之一。九节茶又名
肿节风、接骨金粟兰、草珊瑚、接骨木，为多年生
常绿草本或亚灌木，为金粟兰科植物草珊瑚

[收稿日期] 2008-09-20
[基金项目] 广州市中药现代化研究重大科技专项（2004Z1-E5011）
[通信作者] *栗原博，Tel：(020)33033306，E-mail：Hiroshi_Kurihara@163.
com；*姚新生，Tel：(020)85225849，E-mail：yaoxinsheng@vip. tom.com
[作者简介] 何蓉蓉，博士，主要从事中药及天然药物药理作用及物质
基础研究，Tel：(020)85227791，E-mail：rongronghe66@163. com

Sarcandra glabra（Thunb.）Nakai 的干燥全草，药
用茎叶，分布于中国长江流域地区和广东、广西等
地，以及日本和东南亚部分地区[2]，主要化学成分
为黄酮、香豆素、内酯、挥发油、有机酸、酚类、
鞣质。九节茶味苦辛、性平、有小毒，有祛风通络、
活血散瘀、止血止痛、接骨续筋等作用，在民间用
于治疗跌打损伤、关节风湿以及炎症感染等疾病。
一些药理研究证明九节茶提取物及其活性成分可
以促进免疫细胞的吞噬功能[3]，临床也常用于抗炎、
抗感染、抗肿瘤等与免疫有关的疾病的治疗。但迄
今为止有关九节茶免疫活性的研究，多数来源于体
外细胞试验的结果，尚未见到有关于九节茶对应激
性免疫功能损伤的保护作用的研究，基于上述原因
本实验利用束缚应激小鼠模型探讨中药九节茶的
免疫赋活作用，旨在为九节茶的应用提供有益的实
验依据。
1 材料与方法
1.1 动物 7周龄雄性 C57BL/6小鼠，购自南方医
科大学实验动物中心，动物许可证号 SCXK （粤）
2004-0011，饲养温度（23±2） ℃，适应性饲养 1
周后用于本实验。
1.2 药品及化学试剂 九节茶 S. glabra（批号
Z03107），由广州敬修堂制药有限公司提供。500 g
干燥药材粉碎后，添加 10倍量水 100 ℃提取 2次，


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每次 2 h，合并提取液经滤过后，回收浓缩至干浸
膏。九节茶提取物（SGE）经 HPLC分析建立指纹
图谱确认其主要化学成分为咖啡酸、异秦皮吡啶、
迷迭香酸[4]，实验前将提取物制成水溶液，稀释后
用于灌胃给药。FITC标记抗小鼠 CD3单克隆抗体，
PE 标记抗小鼠 CD4 单克隆抗体，PE 标记抗小鼠
CD8 等单克隆抗体均购自美国 Beckman 公司；PE
标记抗小鼠 NK1.1 单克隆抗体购自美国 eBscience
公司。
1.3 仪器 Coulter XL 流式细胞仪（Beckman，
USA），荧光显微镜（Leika，Japan），3-18K型台式
高速冷冻离心机（Sartorius，Germany），BS210S
电子分析平 （Sartorius，Germany），WH-861型漩
涡混合器（太仓市科教器材）及 pH S-25型酸度计
（上海伟业仪器厂）。
1.4 分组及给药 实验将小鼠随机分为正常对照
组、束缚应激对照组、125，500 mg·kg-1 九节茶提
取物给药组，每组 7只。实验组每天灌胃给药 1次，
连续给药 5 d后测定相关实验指标，正常组与束缚
应激对照组给予等容量蒸馏水。除正常组外，其余
各组小鼠给药后第 2 d束缚应激负荷 12 h。小鼠束
缚装置[5]为通风良好的 50 mL尖底聚丙烯塑料离心
管，束缚应激期间小鼠不能进食饮水，正常组小鼠
为非拘束禁食禁水小鼠。
1.5 免疫器官指数的测定 实验小鼠给药第 5 d，
称重后拉颈处死，取出脾脏称重，按公式免疫器官
指数 =免疫器官重（g） / 小鼠体重（g） ×100%，
计算免疫器官指数。
1.6 小鼠脾细胞悬液制备 将脾脏置于玻璃匀浆
器中后添加 PBS溶液研磨，200目不锈钢网过滤，
取样计数细胞。4 ℃ 1 000 r·min-1离心 5 min，弃上
清液，加入红细胞裂解液 1 mL，混匀，静置 2 min
后加 PBS 溶液 3 mL 终止裂解反应，4 ℃ 1 000
r·min-1离心 5 min，弃上清液，用 PBS溶液洗 2次
后，PBS溶液调整脾淋巴细胞悬液浓度。
1.7 小鼠脾脏T淋巴细胞亚群和NK细胞亚群分析
■调整脾脏淋巴细胞数为 5×106 个/mL，取流式细
胞分析专用管，每管加入细胞悬液 100 μL。每个样
本制备 3管，进行 FITC/PE双色荧光抗体标记。第
1管加入 2 μL PE标记抗 CD3抗体和 1 μL FITC标
记抗 CD4抗体，第 2管加入 2 μL PE标记抗 CD3
抗体和 3 μL PE标记抗 CD8抗体，第 3管加 2 μL PE
标记抗 CD3抗体和 2 μL PE标记抗 NK1.1抗体，室
温避光孵育 20 min后各管加入 500 μL PBS溶液，
振荡混匀后上机分析，记录各管 CD3+%，
CD3+CD4+%， CD3+CD8+%，NK1.1+%， NK1.1+
CD3+%及 NK1.1+CD3+%。
1.8 数据统计与分析 数据以 sx ± 表示，采用
SPSS 软件，利用 ANOVA 检验进行统计学处理，
P<0.05有统计学意义。
2 结果
2.1 九节茶提取物对应激负荷小鼠脾脏指数的影
响各组间小鼠体重无明显差异。与正常组相比，束
缚应激负荷明显降低小鼠脾脏指数（P<0.01）。与束
缚应激组相比，125，500 mg·kg-1 九节茶提取物灌
胃给药均能明显改善因束缚应激降低的小鼠脾脏
指数（P<0.01）（表 1）。
表 1 九节茶提取物（SGE）对应激小鼠免疫器官
指数和脾细胞数的影响（ ±x s，n=7）
组别 剂量/mg·kg-1 脾脏指数 脾细胞数（×107）
正常 － 0.37±0.031） 11.7±0.71）
束缚应激 － 0.30±0.02 9.3±0.3
SGE 125 0.41±0.031） 11.2±0.2 1）
500 0.44±0.041） 11.5±0.5 1）
注：与束缚应激组相比 1
）P <0.01。

2.2 九节茶提取物对应激负荷小鼠脾脏淋巴细胞
总数的影响 与正常组相比，小鼠束缚应激负荷后
脾脏淋巴细胞总数下降 20.5%（P<0.05）。与束缚应
激负荷组相比，125，500 mg·kg-1 九节茶提取物灌
胃给药均能明显提高小鼠脾脏淋巴细胞总数
（P<0.01）（表 1）。
2.3 九节茶提取物对应激负荷小鼠脾脏 T 淋巴细
胞亚群的影响 流式细胞术荧光双色法是根椐细
胞表面荧光标记的不同分析 T淋巴细胞亚群，以 PE
和 FITC 2种荧光的强度 FL1LOG/FL2LOG作图，
可将检测细胞分为 4群，D1区为 CD3-CD4+细胞，
D2 区为 CD3+CD4+细胞即 Th 细胞亚群，D3 区为
CD3-CD4-细胞，D4区为 CD3+CD4-细胞。与正常组
相比，束缚应激负荷小鼠脾脏淋巴细胞中总 T淋巴
细胞（CD3+）比率略有下降，Th（CD3+ CD4+）淋
巴细胞的比例明显地下降（P<0.01），而 Ts（CD3+
CD8+）淋巴细胞的比例明显上升（P<0.01），显示


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束缚应激负荷改变了小鼠脾脏T淋巴细胞亚群的比
例。与束缚应激负荷组相比，125，500 mg·kg-1 九
节茶提取物可明显提高小鼠脾脏 T 淋巴细胞中的
Th/Ts（P<0.01），使应激负荷小鼠脾脏中的免疫细
胞比值趋于正常状态，且呈一定的剂量依赖性。此
外，125，500 mg·kg-1 九节茶提取物灌胃给药增加
了脾脏 T淋巴细胞（CD3+）总数（P<0.01）（表 2）。
表2 九节茶提取物（SGE）对应激小鼠脾脏T淋巴细胞
亚群的影响（ ±x s，n = 7） %
组别
剂量
/mg·kg-1
T
（CD3+）
Th
（CD3+CD4+）
Ts
（CD3+CD8+）
正常 29.2±3.2 19.8±1.12） 9.4±1.22）
束缚应激 28.2±2.1 16.6±1.2 12.9±1.6
SGE 125 30.9±2.6 19.4±1.52） 9.8±1.31）
500 31.5±2.8 20.5±1.22） 10.5±1.72）
注：与束缚应激组相比 1
）P<0.05，2）P<0.01（表 3同）。
2.4 九节茶提取物对应激负荷小鼠脾脏 NK 和
NKT 细胞比率及数目的影响 流式细胞术荧光双
色法以 PE-CD3 和 FITC-NK1.1 2 种荧光的强度
FL1LOG/FL2LOG作图，可将检测细胞分为 4群，
G1 区为 NK（CD3-NK1.1+）细胞，G2 区为 NKT
（CD3+NK1.1+）细胞，G3 区为 CD3-CD4-细胞，
G4区为 CD3+CD4-细胞。应激负荷使小鼠脾脏淋巴
细胞中 NK（CD3- NK1.1+）细胞的比率略有上升，
但 NKT（ CD3+NK1.1+）细胞比率显著下降
（P<0.01），灌胃给药九节茶提取物明显改善应激
负荷小鼠脾脏 NKT 细胞比率。此外，与应激负荷
减少小鼠脾脏淋巴细胞中 NK 和 NKT 细胞总数相
比，125，500 mg·kg-1 九节茶提取物灌胃给药均显
著增加 NK和 NKT细胞总数（P<0.01）（表 3）。
表 3 九节茶提取物 （SGE） 对应激小鼠脾脏 NK细胞比例和数目的影响（ sx ± ，n = 7）
组别 剂量/mg·kg-1 NK比例/% NKT比例/% NK数/×106个 NKT数/×106个
正常 － 6.7±2.01） 2.0±0.4 2） 7.8±0.09 1） 2.2±0.122）
束缚应激 － 7.4±1.8 1.2±0.3 7.6±0.08 1.2±0.10
SGE 125 6.3±1.1 1） 1.9±0.31） 7.7±0.09 2.2±0.152）
500 6.6±2.11） 2.1±0.5 2） 8.3±0.12 2） 2.7±0.20 2）
3 讨论
本研究在发现束缚应激显著降低小鼠脾脏指
数和减少脾脏淋巴总数的同时，确认连续 5 d灌胃
给药九节茶提取物可明显改善应激负荷小鼠的上
述指标，提示九节茶提取物具有一定的免疫赋活作
用。迄今为止的研究证明束缚应激能明显影响机体
的免疫功能，可能部分起因于内源性糖皮质激素增
多，直接损伤免疫细胞的结果[7]。前期研究结果认
为，束缚应激小鼠显示的免疫功能低下与应激诱发
免疫细胞内过量自由基产生，继发过氧化应激状态
相关[8]。Zheng 等人的研究确认中药九节茶中富含
咖啡酸、异嗪吡啶及迷迭香酸等具有较强抗氧化作
用的酚酸类化合物[8]，因此九节茶对应激负荷小鼠
免疫功能的改善作用可能部分来自提高免疫细胞
内的抗氧化能力。
人们知道淋巴细胞亚群变化直接影响机体的
免疫反应状态，其中 CD4+/CD8+ T细胞亚群对于稳
定和调节免疫系统的生理功能及免疫反应强度起
着重要作用。本实验发现九节茶提取物可以明显提
高应激负荷小鼠脾脏 T 淋巴细胞中的 Th/Ts
（P<0.01），使应激负荷小鼠的细胞免疫细胞亚群
比值趋向正常状态，且呈一定的剂量依赖性关系。
九节茶提取物的这种作用可能通过改善应激负荷
诱发的免疫细胞损伤，或促进小鼠脾脏 T淋巴细胞
增殖实现影响 T淋巴细胞亚群比值的变化。
本实验还发现，束缚应激 12 h小鼠在恢复 3 d
后，相对增加脾脏中 NK细胞比例的同时，却显著
减少了整个脾脏中的 NK细胞总数量。与束缚应激
负荷组相比，九节茶提取物给药不仅可以明显提高
束缚应激负荷小鼠脾脏中 NK 和 NKT 细胞比例，
同时也显著增加脾脏中的 NK和 NKT细胞总数量。
一般认为 NK细胞参与机体的抗肿瘤、抗感染等生
理过程，是机体重要的免疫细胞。本实验使用 NK
细胞及 NKT 淋巴细胞共同表达的 NK1.1抗原用于
分析 NK细胞总数，由于 NKT细胞是一种既表达 T
细胞 CD3 又带有 NK细胞的 NK1.1 表面抗原的免
疫细胞群，因此本实验采用流式 NK1.1-FITC 和
CD3-PE 双标法排除 NK1.1+CD3+细胞，分析


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NK1.1+CD3-细胞的比例。前期研究结果表明，小鼠
束缚应激后第 3天时脾脏淋巴细胞数和 NK细胞活
性下降到最低值[9]，因此本实验采用束缚应激 12 h
恢复 3 d时的免疫状态为指标评价九节茶提取物的
免疫赋活作用，结果表明中药九节茶提取物不仅可
以缓解应激诱发的免疫细胞亚群紊乱，同时也显著
的改善脾脏细胞中 T 淋巴细胞亚群 Th/Ts、自然杀
伤细胞比率及数目，显示良好的抗应激作用。实验
证明，中药九节茶可能在抗应激及改善因应激负荷
引起的免疫低下等临床症状的药物、健康食品及食
品添加剂等领域有着较广泛的应用前景。
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Effects of Sarcandra glabra extract on immune activity in restraint
stress mice

HE Rongrong1，WANG Min2，LI Yifang2，DAI Yi2，DUAN Yinghui1，YAO Xinsheng1，2*，
KURIHARA Hiroshi2*
（1.School of Traditional Chinese Materia Medica，Shenyang Pharmaceutical University，Shenyang 110016，China；
2. Institute of Traditional Chinese Medicine and Natural products，Ji′nan University，Guangzhou 510632，China）

[Abstract] Objective：To study the protective effect of Sarcandra glabra extract （SGE） on immune system in restrained
mice. Method：The male C57BL/6 mice were randomly divided into normal control group，stress control group，125，500 mg·kg-1
SGE group. The spleen lymphocyte suspensions of each group were prepared. The parameters of spleen T cells subsets，NK cell and
NKT cell proportion and number was detected by Flow cytometry. Result：SGE regulated the balance of T cell subsets，increased the
percent of NK cells and NKT cell proportion and number in restrained mice. Conclusion：SGE has immunologic protective effect in
restrained mice probably via the amelioration of immune cells proportion and number.
[Key words] Sarcandra glabra；restrained stress；lymphocyte subsets；NK cell；NKT cell
[责任编辑 刘 ]


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