全 文 ：收稿日期:2012-04-09; 修订日期:2012-06-11
基金项目:国家自然科学基金( NO: 30772885)
作者简介:胡向阳( 1975-) ，男( 汉族) ，河南鹤壁人，现任中山大学附属第
五医院主治医师，博士学位，主要从事脑血管及代谢性疾病研究工作．
岗梅根水煎液对束缚应激条件下
非酒精性脂肪肝大鼠氧化应激的影响
胡向阳1，李 安1，杨 璇1，马 义2
(1．中山大学附属第五医院，广东 珠海 519000; 2．暨南大学生命科学院，广东 广州 510632)
摘要:目的 观察岗梅根水煎液对束缚应激条件下非酒精性脂肪肝大鼠氧化应激的影响。方法 将 48 只 Wistar雄性大鼠
随机分为 4 组:正常对照组、模型对照组、辛伐他汀组、岗梅根水煎液组，建立高脂饮食性脂肪肝模型，并给予束缚应激负
荷。检测各组大鼠血脂、肝脏指数、T － AOC、GST、MDA 等指标的变化。结果 与正常对照组比较，模型对照组大鼠血清
TC、TG、LDL － C含量均显著升高( P ＜ 0． 01) ，HDL － C 含量降低( P ＜ 0． 01) ，肝指数升高( P ＜ 0． 05) 。与模型对照组比
较，辛伐他汀组、岗梅根水煎液组 TC、TG、LDL － C含量均有不同程度的降低( P ＜ 0． 01 或 P ＜ 0． 05) ，HDL － C、T － AOC、
GST均有不同程度的升高( P ＜ 0． 01 或 P ＜ 0． 05) 。与辛伐他汀组比较，岗梅根水煎液组 TC 含量升高( P ＜ 0． 05) ，MDA
含量降低( P ＜ 0． 05) 。结论 岗梅根水煎液对束缚应激条件下非酒精性脂肪肝大鼠氧化应激有一定干预作用。
关键词:岗梅根; 束缚应激; 非酒精性脂肪肝; 氧化应激
DOI标识:doi: 10． 3969 / j． issn． 1008-0805． 2012． 09． 008
中图分类号:R285． 5 文献标识码:A 文章编号:1008-0805( 2012) 09-2131-02
Effect of Ilex Asprella Roots Decoction on the Oxidative Stress in Restraint Stress and
Nonalcoholic Fatty Liver Disease Rats
HU Xiang-yang1，LI An1，YANG Xuan1，MA Yi2
( 1． The Fifth Affiliated Hosptial of Sun Yetsen University，Zhuhai，Guangdong，519000，China; 2． Life Sciences
College of Jinan University，Guangzhou，Guangdong 510632，China)
Abstract: Objective To observe the effect of Ilex asprella roots decoction on the oxidative stress in restraint stress and nonalco-
holic fatty liver disease rats．Methods 48 male Wistar rats were randomly divided into four groups: normal control group，model
control group，simvastatin group，roots of Ilex asprella group． To establish the model of restraint stress and nonalcoholic fatty liver
disease rats． The serum levels of TC，TG，HDL － C，LDL － C，liver index，T － AOC，GST and MDA in rats were measured． Results
Compared with the normal control group，the levels of serum TC，TG LDL － C and liver index in model control group were in-
creased in various degrees( P ＜ 0． 01 or P ＜ 0． 05) ，the level of serum HDL － C was decreased significantly( P ＜ 0． 01) ． Compared
with the model control group，the levels of serum TC，TG and LDL － C in simvastatin group and root of Ilex asprella group were de-
creased in various degrees( P ＜ 0． 01 of P ＜ 0． 05) ，the serum HDL － C，T － AOC and GST increased in various degrees( P ＜ 0． 01
or P ＜ 0． 05) ． Compared with the simvastatin group，the level of serum TC was increased( P ＜ 0． 05) ，the levels of MDA was de-
creased( P ＜ 0． 05) ． Conclusion The Ilex asprella roots decoction has some protective effects to regulate the oxidative stress in re-
straint stress and nonalcoholic fatty liver disease rats．
Key words: Roots of Ilex asprella; Restraint stress; Nonalcoholic fatty liver disease; Oxidative stress
非酒精性脂肪肝(non － alcoholic fatty liver disease，NAFLD)
是一种无过量饮酒史，与遗传、环境、代谢应激相关性疾病，病理
改变特征为肝实质细胞脂肪变性和脂质贮积。随着我国经济社
会的不断发展，NAFLD 发病率不断提高，并呈低龄化发病趋势，
成为严重威胁人们健康的常见疾病，因此对其所造成的危害及防
治应当引起高度重视［1］。应激在人们的生活中是不可避免的，
从人生大事到日常生活中的小事都有可能成为应激事件。现代
社会生活节奏快，工作压力大，人们所承受的心理性应激强度、时
程明显增加。研究表明，70% ～ 80%的疾病的发生都与应激相
关［2］。中医学认为，多食膏脂之人易于肥胖，情志抑郁引起“肝
郁”，脂肪肝的发病多因嗜食肥甘厚味，体丰痰盛，或情志失常，
忧思郁怒伤肝，致使“痰浊瘀毒”郁结于肝脏。基于中医对
NAFLD的理论认识，笔者认为清热解毒类中药是防治该病的探
索方向。岗梅根是冬青科植物梅叶冬青［Ilex asprella (Hook． f．
Et Arn． )Champ． ex Benth］的根，其味苦性寒，具有清热解毒、生
津活血之功效。岗梅根为岭南地区道地药材，是王老吉凉茶、沙
溪凉茶等的主要原料，现代药理研究表明，岗梅根具有抗炎、抗病
毒、抗菌和抗肿瘤等作用［3，4］。本研究拟观察岗梅根水煎液对应
激 +高脂饮食性脂肪肝大鼠氧化应激的干预作用。
1 材料与仪器
1． 1 动物 Wistar 大鼠，SPF 级，雄性，体质量(200 ± 20)g，由南
方医科大学实验动物中心提供，合格证号:粤检证字 2010B309，
室温适应性饲养 1 周后用于本实验。
1． 2 药物 辛伐他汀(商品名:舒降之) ，杭州默沙东制药有限公
司生产，批准文号 H19990366，20 mg /片，临用前以生理盐水溶解浓
度为 1 mg /ml。岗梅根饮片由广东省中医院提供，水煎液制备:岗
梅根 5． 0 kg，以每克生药加水 6 ml，冷水浸泡 40 min后，开始武火
煎煮，煮沸后用文火慢煎 30 min，趁热过滤。煎煮第二遍按每克生
药加水 4 ml，煎法同上，合并滤液。60℃恒温下旋转蒸发浓缩，浓
缩为含生药 3． 14 g /ml的水煎液，置 4℃冰箱保存备用。
1． 3 试剂与仪器 胆固醇、胆酸钠、丙基硫氧嘧啶(广州天马精细
化工厂) ，胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白胆固醇
(LDL － C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL － C)试剂盒(南京建成生
物试剂公司) ;蛋白定量、总抗氧化能力(T － AOC)、谷胱甘肽 － S
转移酶(GST)、微量丙二醛(MDA)测定试剂盒(浙江伊利康生物
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LISHIZHEN MEDICINE AND MATERIA MEDICA RESEARCH 2012 VOL ． 23 NO． 9 时珍国医国药 2012 年第 23 卷第 9 期
技术有限公司) ;722S可见分光光度计(上海精密科学仪器有限
责任公司) ;AU600 型全自动生化分析仪(日本 OLYMPUS)。
2 方法
2． 1 动物分组 Wistar大鼠 48 只，数字随机分组法分为 4 组，即
正常对照组、模型对照组、辛伐他汀组、岗梅根水煎液组。
2． 2 动物模型制备 各模型组分别给予高脂饮食(3%胆固醇、
0． 5%胆酸钠、0． 2%丙基硫氧嘧啶、5%白糖、10%猪油、81． 3%基础
饲料) ;正常对照组予普通饮食。在此基础上，岗梅根水煎液组灌
服剂量为 9． 15 g·kg －1·d －1，辛伐他汀组灌服剂量为 10mg·kg －1
·d －1;对照组和模型组给予等体积的生理盐水。参照文献［5］方
法，除正常对照组外，其余各组大鼠在给药后 2 h，放进大鼠束缚装
置，束缚应激负荷 8 h /d，束缚应激期间大鼠禁食禁水。连续 8周。
2． 3 指标检测 从造模开始算，第 8 周末当晚大鼠禁食不禁水
12 h，腹腔注射麻醉，打开腹腔，采用真空采血管腹主动脉取血，
血样 4℃静置 2 h后，3 000 r /min离心 10 min，分离血清，分装 EP
管，－ 80℃保存。游离并提取肝脏，4℃生理盐水冲洗，去除薄膜，
称肝湿重，用以计算肝指数，肝指数(%)= 肝湿重 /体重 ×
100%。冰盘上剪取一小块肝叶，剪碎，移入玻璃匀浆器，加入预
冷的生理盐水，用玻璃匀浆器仔细研磨，制备 10%肝组织匀浆，
3 500 r /min离心 10 min，取上清液，－ 20℃保存备用，采用分光光
度法测定 T － AOC、GST、MDA，采用酶比色法在全自动生化分析
仪测定 TC、TG、HDL － C、LDL － C，操作步骤按照试剂盒说明书进
行。
2． 4 统计学处理 使用 SPSS14． 0 统计软件对数据进行重复测量
资料的方差分析，定量指标以 珋x ± s 表示，方差分析，组间两两比
较采用 q检验，P ＜ 0． 05 认为差异有统计学意义。
3 结果
3． 1 各组大鼠血脂、肝指数情况变化 与正常对照组比较，各组
大鼠血清 TC、TG、LDL － C 含量均有不同程度的升高(P ＜ 0． 01
或 P ＜ 0． 05) ;模型对照组 HDL － C含量降低(P ＜ 0． 05) ，肝指数
升高(P ＜ 0． 05)。与模型对照组比较，辛伐他汀组、岗梅根水煎
液组 TC、TG、LDL － C含量均有不同程度的降低(P ＜ 0． 01 或 P ＜
0． 05) ，HDL － C含量升高(P ＜ 0． 05)。与辛伐他汀组比较，岗梅
根水煎液组 TC含量升高(P ＜ 0． 05)。结果见表 1。
表 1 各组大鼠血脂及肝指数比较(珋x ± s)
组别 TG /mmol·L －1 TC /mmol·L －1 HDL － C /mmol·L －1 LDL － C /mmol·L －1 肝指数(%)
正常对照 0． 54 ± 0． 11 2． 41 ± 0． 13 1． 34 ± 0． 10 0． 42 ± 0． 01 2． 53 ± 0． 11
模型对照 2． 36 ± 0． 211) 17． 25 ± 2． 121) 0． 48 ± 0． 021) 5． 26 ± 0． 121) 3． 49 ± 0． 322)
辛伐他汀 0． 62 ± 0． 023) 6． 33 ± 0． 521，3) 0． 71 ± 0． 012，4) 1． 35 ± 0． 111，3) 2． 70 ± 0． 13
岗梅根水煎液 0． 73 ± 0． 103) 8． 17 ± 1． 121，3，5) 1． 02 ± 0． 113) 1． 13 ± 0． 131，3) 2． 62 ± 0． 22
与正常对照组比较，1)P ＜ 0． 01，2)P ＜ 0． 05;与模型对照组比较，3)P ＜ 0． 01，4)P ＜ 0． 05;与辛伐他汀组比较，5)P ＜ 0． 05;n = 12
3． 2 各组大鼠肝组织 T － AOC、GST、MDA 的变化 与正常对照
组比较，模型对照组 T － AOC、GST 含量均显著降低(P ＜ 0． 01) ，
MDA含量显著升高(P ＜ 0． 01)。与模型对照组比较，辛伐他汀
组和岗梅根水煎液组 T － AOC、GST含量均有不同程度的升高(P
＜ 0． 01 或 P ＜ 0． 05)。与辛伐他汀组比较，岗梅根水煎液组
MDA含量降低(P ＜ 0． 05)。见表 2。
表 2 各组大鼠肝组织 T － AOC、GST、MDA比较(珋x ± s)
U·(mgPort)－ 1
组别 T － AOC GST MDA
正常对照 3． 57 ± 0． 02 29． 48 ± 2． 25 0． 56 ± 0． 02
模型对照 0． 46 ± 0． 011) 8． 27 ± 1． 131) 3． 22 ± 0． 111)
辛伐他汀 1． 50 ± 0． 032，4) 14． 33 ± 1． 201，4) 1． 43 ± 0． 032，4)
岗梅根水煎液 2． 38 ± 0． 033) 21． 31 ± 2． 112，4) 0． 72 ± 0． 023，5)
与正常对照组比较，1)P ＜ 0． 01，2)P ＜ 0． 05;与模型对照组比较，3)P
＜ 0． 01，4)P ＜ 0． 05;与辛伐他汀组比较，5)P ＜ 0． 05;n = 12
4 讨论
采用高脂肪饮食建立非酒精性脂肪肝模型，进入肝脏的脂肪
量超过肝脏的脂质和氧化能力，合成的内源性 TG在肝细胞内外堆
积形成脂肪肝。肝细胞内含有较多的超氧化物歧化酶，肝细胞一
旦抗氧化能力低下，致使细胞膜脂质过氧化，促发脂质过氧化的链
式反应，产生的脂质过氧化物可以损伤肝脏中的各种细胞，故肝细
胞膜的脂质过氧化是肝细胞损伤的主要作用机制之一［6］。总抗氧
化能力(T － AOC)是体内酶性和非酶性抗氧化物的总体水平，其活
力的高低直接反映机体的脂质过氧化损伤程度。谷胱甘肽 － S －
转移酶(glutathione － S － transferases，GST)是体内一种重要的抗氧
化酶，具有清除体内脂质过氧化物的功能，因而有抗脂质过氧化，
保护组织抗氧化损伤和保护细胞免受细胞毒性物质重要作用。丙
二醛(malondiadehyde，MDA)能使细胞膜的流动性和通透性发生改
变，它的产生与脂质过氧化相平行，MDA 的量可反映机体内脂质
过氧化的程度，间接的反映出细胞损伤的程度［7，8］。以剥夺身体自
由活动、束缚制动刺激为应激原造成的应激称为束缚应激，束缚应
激模型与当今社会人们精神应激和活动减少的生活方式相近，是
目前实验医学领域最普遍应用的应激原。
本实验中模型大鼠经过长期持续的高脂饮食、束缚应激后，
表现出情绪抑郁、体态肥胖，类似中医的肝郁脾虚证候。本实验
选用辛伐他汀作为对照药物，辛伐他汀是临床上应用广泛的调脂
药，研究发现其还具有抗炎、免疫调节作用、改善血管内皮功能、
稳定和逆转粥样硬化斑块等作用［9］。本实验结果发现:模型对照
组大鼠肝组织 T － AOC、GST 明显降低，MDA、肝指数升高，导致
脂质大量在肝细胞沉积，处于氧化应激状态。岗梅根水煎液能升
高大鼠肝组织 T － AOC、GST，降低 MDA，起到了抗氧化作用，并
且在降低 MDA效果上强于辛伐他汀。基于本实验研究结果，岗
梅根水煎液具有明显的抗氧化作用，并通过其抑制或防止脂质过
氧化，从而减轻肝脏脂肪得沉积。岗梅根水煎液的上述药理效应
可能与其“清热解毒、生津活血”功效相关，契合中医对脂肪肝的
“痰、浊、瘀、毒”郁结于肝脏的理论认识，但其作用或调控机制需
要进一步理论挖掘及实验研究。
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