红花系菊科植物红花Carthamus tinctorius L.的干燥花，药用始载于《开宝本草》，至今各版药典均有收载。红花的有效成分为查耳酮类、脂肪酸、多糖等化合物。其中红花多糖能促进淋巴细胞转化，增加脾细胞对羊红细胞空斑形成的细胞数量，对抗强的松龙的免疫抑制作用等，是一种新的、值得进一步研究的免疫调节剂。目前，人们正深入研究红花多糖的其他药用价值，本实验观察红花多糖对H22荷瘤小鼠的抑瘤作用。
全 文 ：红花多糖对 Ｈ２２荷瘤小鼠的抑瘤作用及
瘤细胞 ＶＥＧＦ，Ｋｉ６７表达的影响
何素芳１，王志刚２，任爱农２，高 燃１
（１．江苏大学 药学院，江苏 镇江 ２１２００１；
２．江苏省中医药研究院，江苏 南京 ２１００２８）
［收稿日期］ ２００８０８０５
［通信作者］ 任爱农，Ｔｅｌ：１３７７６５０００１８，Ｅｍａｉｌ：ｌｙｙｙ０＠１６３．ｃｏｍ
红花系菊科植物红花 ＣａｒｔｈａｍｕｓｔｉｎｃｔｏｒｉｕｓＬ．的
干燥花，药用始载于《开宝本草》，至今各版药典均
有收载。红花的有效成分为查耳酮类、脂肪酸、多糖
等化合物。其中红花多糖能促进淋巴细胞转化，增
加脾细胞对羊红细胞空斑形成的细胞数量，对抗强
的松龙的免疫抑制作用等，是一种新的、值得进一步
研究的免疫调节剂。目前，人们正深入研究红花多
糖的其他药用价值，本实验观察红花多糖对 Ｈ２２荷
瘤小鼠的抑瘤作用。
１ 材料
１．１ 药品和试剂
红花多糖由江苏省中医药研究院自制，浅黄色
粉末，纯度５５９０％，批号２００８０４０１；血管内皮细胞
增长因子（ＶＥＧＦ）试剂盒为浓缩液，批号 ＦＭＫ００１４，
鼠抗人工作液浓度比为１∶１００，ＤＡＫＯ公司产品；增
殖细胞相关抗原（Ｋｉ６７）单克隆抗体（即用型），鼠抗
人，ＤＡＫＯ公司产品。
１．２ 动物和瘤株
清洁级ＫＭ小鼠雌雄各半，体重１８～２２ｇ，上海
斯莱克实验动物有限公司，合格证号 ＳＣＸＫ（沪）
２００７０００５。小鼠饲养环境，恒温 ２２～２５℃、恒湿
（５５±５）％，所有食物和水均灭菌后使用。Ｈ２２荷
瘤细胞（江苏省中医院临床研究所提供）。
１．３ 仪器
电热恒温干燥箱（上海精武实验设备有限公
司），高速离心机（日立 ＣＲ２１Ｇ），电子天平（日本岛
津），ＩＸ５０型倒置显微镜（日本ＯＬＹＭＰＵ）。
２ 方法
２．１ 红花多糖对Ｈ２２荷瘤小鼠的抑瘤作用
小鼠４８只，随机分为６组，每组８只，雌雄各
半，分别为正常组、模型组、阳性药组及红花多糖高、
中、低剂量组。除正常组外，各小鼠均于右前肢腋部
皮下接种１∶４稀释的Ｈ２２瘤细胞液０２ｍＬ／只。模
型组灌胃生理盐水１０ｍＬ·ｋｇ－１，阳性药组肌肉注
射５氟尿嘧啶（５Ｆｕ）３０ｍｇ·ｋｇ－１，红花多糖高、中、
低剂量组分别灌胃 １３５，４５，１５ｍｇ·ｋｇ－１的药液，给
药量均为１０ｍＬ·ｋｇ－１，连续给药１０ｄ。给药结束
各鼠脱臼处死，取肿瘤组织，剔除脂肪，称取湿重，计
算瘤重系数和抑瘤率，然后经１０％中性缓冲福尔马
林固定，用于免疫组织化学染色。另称取脾脏和胸
腺湿重，计算脏器指数。
抑瘤率 ＝（模型组瘤重 －给药组瘤重／模型组瘤
重×１００％
脏器指数＝脏器质量／体重
２．２ 红花多糖对肿瘤细胞ＶＥＧＦ和Ｋｉ６７表达的影
响
２．２．１ ＶＥＧＦ和Ｋｉ６７染色方法 肿瘤组织标本常
规石蜡包埋，制成４μｍ组织切片，经二甲苯脱蜡，
梯度乙醇脱水后蒸馏水洗２次，每次 ３ｍｉｎ，ＥＤＴＡ
微波修复，室温下自然冷却至室温后取出切片蒸馏
水洗，然后按试剂盒方法进行 ＶＥＧＦ和 Ｋｉ６７染色，
染色后，切片常规脱水，透明，封片。
２．２．２ 结果判定 ＶＥＧＦ和 ｋｉ６７阳性染色为细胞
浆中出现的棕黄颗粒，每张切片选取２个视野，在高
倍镜（×２００）下计数每个视野１００个细胞中的阳性
细胞，取其平均值为细胞阳性率。结果判定：按照
Ｆｒｏｍｏｗｉｔｚ综合计分法进行判定［１］，总分等于阳性细
胞比例分值 ＋染色强度分支。染色强度评定标准
为：阴性为０分；染色虽弱但明显强于阴性对照者为
１分，染色强度中等者为２分；染色强者为３分。染
色阳性细胞比例评定标准：阳性细胞数，５％者为０
分，５％～２５％为１分，２６％～５０％者为２分，５０％～
７５％者为３分，＞７５％者为４分。按以上两项之和
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判断结果：０分为阴性（－），１～２分为弱阳性（＋），
３～４分为中度阳性（），５～７为强阳性（）。按
综合评分的等级来评价切片指标变化情况。
２．３ 统计学方法 实验数据用ＳＰＳＳ１１５统计软件
进行分析，所有测定数值以 珋ｘ±ｓ表示，采用方差分
析法进行分析，Ｐ＜００５为有显著性差异。
３ 结果
３．１ 红花多糖对Ｈ２２荷瘤小鼠肿瘤生长的影响
３．１．１ 对Ｈ２２荷瘤小鼠抑瘤率的影响 红花多糖
３个剂量组的抑瘤率分别为 ３０４３％，２０３２％，
１１６２％。与模型组比较，５Ｆｕ组和红花多糖高剂
量组抑瘤率均明显降低（Ｐ＜００５或 Ｐ＜００１）。
中、低剂量组虽有一定的降低趋势，但与模型组比较
无显著差异（表１）。
表１ 红花多糖对各组Ｈ２２荷瘤小鼠肿瘤质量及抑瘤率的影响（珋ｘ±ｓ，ｎ＝８）
组别 剂量／ｍｇ·ｋｇ－１ 体重／ｇ 瘤重／ｇ 瘤重系数／ｍｇ·ｇ－１ 抑瘤率／％
模型 － ２３４±３３ １２６５±０３３５ ５４７±１３２ －
５Ｆｕ ３０ ２２３±１９ ０６８０±１０４０ ３０６±０６７ ４６２５２）
红花多糖 １３５ ２２６±２５ ０８８０±０１１３ ３９３±０７２ ３０４３１）
４５ ２２８±２６ １００８±０２５０ ４５２±１２６ ２０３２
１５ ２３０±２６ １１１８±０３２５ ４９６±１０７ １１６２
注：与模型组比较１）Ｐ＜００５，２）Ｐ＜００１（表２，３同）。
３．１．２ 对Ｈ２２荷瘤小鼠脾脏和胸腺指数的影响
与对照组比较，模型组脾脏和胸腺指数均下降。与
模型组比较，５Ｆｕ组和红花多糖高、低剂量组荷瘤
小鼠脾脏质量和系数均明显提高，差异显著（Ｐ＜
００５或Ｐ＜００１），中剂量组未见显著性变化。５Ｆｕ
组和红花多糖高剂量组胸腺质量和指数均明显提
高，差异显著（Ｐ＜００５或Ｐ＜００１）。中、低剂量组
未见显著变化（表２）。
表２ 各组Ｈ２２荷瘤小鼠脾脏系数和胸腺系数结果（珋ｘ±ｓ，ｎ＝８）
组别
剂量
／ｍｇ·ｋｇ－１
脾脏质量
／ｇ
脾脏指数
／ｍｇ·ｇ－１
胸腺质量
／ｇ
胸腺指数
／ｍｇ·ｇ－１
正常 － ０１２８±００１４ ０５５７±０１２７ ００４３±００２６ ０１７４±０１４０
模型 － ０１０２±００４０ ０４４５±０１０２ ００３２±００１０ ０１４０±００３５
５Ｆｕ ３０ ０１６７±００７１１） ０７４２±０３３２１） ００５１±００１５２） ０２２８±００４３１）
红花多糖 １３５ ０１３５±００２４１） ０６０１±０１６１１） ００４４±００１１１） ０１９６±００５３１）
４５ ０１２７±００２５ ０５６１±０１６３ ００３２±００１０ ０１４２±００６５
１５ ０１４９±００３３２） ０６４７±０１５８１） ００３７±００１９ ０１６２±００４５
３．２ 对肿瘤组织ＶＥＧＦ和Ｋｉ６７表达的影响
结果可见，与模型组比较，５Ｆｕ组和红花多糖
各剂量组肿瘤组织 ＶＥＧＦ和 Ｋｉ６７阳性着色细胞均
减少（图 １，２）。各组小鼠肿瘤组织细胞 ＶＥＧＦ和
Ｋｉ６７均呈阳性表达，但表达程度不同，５Ｆｕ组及红
花多糖高、中剂量组ＶＥＧＦ表达水平明显降低（Ｐ＜
００５）。低剂量组与模型组比较，无显著变化。５Ｆｕ
组及红花多糖中剂量组 Ｋｉ６７表达水平明显降低
（Ｐ＜００５），高、低剂量组与模型组比较，无显著变
化（表３）。
４ 讨论
肿瘤的病因学、发病学及其防治均为我国肿瘤
Ａ．模型组；Ｂ．５Ｆｕ组；Ｃ．红花多糖１３５ｍｇ·ｋｇ－１组；Ｄ．红花多糖４５ｍｇ·ｋｇ－１组；Ｅ．红花多糖１５ｍｇ·ｋｇ－１组（图２同）。
图１ 各组Ｈ２２荷瘤小鼠肿瘤组织中ＶＥＧＦ的表达（免疫组化，×２００）
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图２ 各组Ｈ２２荷瘤小鼠肿瘤组织中Ｋｉ６７的表达（免疫组化，×２００）
表３ 红花多糖对Ｈ２２荷瘤小鼠肿瘤组织ＶＥＧＦ和
Ｋｉ６７表达（染色评分）的影响（珋ｘ±ｓ，ｎ＝８）
组别
剂量
／ｍｇ·ｋｇ－１
ＶＥＧＦ Ｋｉ６７
模型 － ３１０±１５１ ３３５±１３８
５Ｆｕ ３０ １１４±８６１） ２６８±１０４１）
红花多糖 １３５ ２２１±１５８１） ２８８±１７６
４５ ２６２±４４１） ２２６±２０４１）
１５ ３２４±１３５ ３６１±２３３
研究的重点，寻找高效低毒的抗癌药物以及抗癌辅
助药物是当前肿瘤研究的重要内容。中药多糖作为
抗肿瘤药物近来有许多研究，其抗肿瘤作用可通过
免疫增强，抑制肿瘤细胞增殖，诱导分化，诱导细胞
凋亡，直接杀伤癌细胞等多途径多环节体现［２］。本
实验以Ｈ２２荷瘤小鼠为模型，观察红花多糖抗肿瘤
作用，进一步深入探讨其作用机制。
ＶＥＧＦ是特异性刺激内皮细胞增殖的一种细胞
因子［３４］，可以被多种因素刺激活化，影响细胞生长、
分化、存活及凋亡，具有重要的生理和病理作用。大
多数恶性肿瘤的生长和转移依赖于血管生成。
ＶＥＧＦ被认为是肿瘤组织中促血管生长的最主要的
血管生长因子之一，其表达受许多外部因子调控。
诱导ＶＥＧＦ转录活性的增强和表达增加，在肿瘤细
胞的能量代谢、新血管生成、促进肿瘤增殖和转移中
起重要作用。Ｋｉ６７为细胞增殖的一种标记［５］，在除
了Ｇ０期的所有细胞周期中都表达。随着上皮细胞
损伤程度增加，细胞增殖核抗原Ｋｉ６７表达率也明显
升高。Ｋｉ６７蛋白是反应细胞增殖状态的指标，在恶
性肿瘤中常呈高表达状态。其表达程度的高低反映
了细胞增生状态，广泛应用于评估肿瘤细胞的增殖
活性。
本实验结果显示，红花多糖对 Ｈ２２荷瘤小鼠有
一定的抑瘤作用，抗肿瘤作用呈现量效关系。红花
多糖各剂量组均增加荷瘤小鼠脾脏和胸腺质量，且
高剂量组能明显提高荷瘤小鼠胸腺和脾脏指数以增
强机体免疫功能。红花多糖可以下调荷瘤机体内
ＶＥＧＦ，Ｋｉ６７表达水平，说明红花多糖可以减少肿瘤
细胞因子的分泌，增强机体抗肿瘤作用。本试验表
明红花多糖在抗肿瘤活性方面有潜在的开发利用价
值，值得进一步研究。
［参考文献］
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［责任编辑 古云侠］
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