全 文 ：ＨＰＬＣ测定白及中 ｍｉｌｉｔａｒｉｎｅ含量
何迅１，王爱民１，李勇军１，王永林１，周树勇２
（１．贵阳医学院 药学院，贵州 贵阳 ５５０００４；
２．贵州正安县绿野科技产业有限责任公司，贵州 正安 ５６３４００）
［摘要］ 目的：建立白及药材中双［４（βＤ吡喃葡萄糖氧）苄基］２异丁基苹果酸酯的含量测定方法，为其质量控制提供
科学依据。方法：采用ＨＰＬＣ直接测定，色谱柱为ＳｙｍｍｅｔｒｙＣ１８柱，保护柱为ＳｅｃｕｒｉｔｙＧｕａｒｄＣ１８柱，流动相为甲醇水（３７∶６３），检
测波长２２３ｎｍ。结果：测定了１２批不同产地市售的白及药材，双［４（βＤ吡喃葡萄糖氧）苄基］２异丁基苹果酸酯的含量在
１４５％～３３２％。结论：该法方便、快速、准确、重复性好，可以控制该药材的质量。
［关键词］ 白及；双［４（βＤ吡喃葡萄糖氧）苄基］２异丁基苹果酸酯；高效液相色谱法
［收稿日期］ ２００９０１０６
［通信作者］ 王永林，Ｔｅｌ：（０８５１）６９０８８９９，Ｅｍａｉｌ：ｇｙｗｙｌ＠
ｇｕｍｅｄｕｃｎ
白及为兰科植物白及 Ｂｌｅｔｉｌａｓｔｒｉａｔａ（Ｔｈｕｎｂ．）
Ｒｅｉｃｈｂ．ｆ．的干燥块茎，性苦、甘、涩，未微寒，
具有收敛止血、消肿生肌之功能，临床用于治疗咯
血吐血，外伤出血，溃疡病出血等，为 《中国药
典》２００５年版一部收载品［１］，全国大多省份均有
分布［２］。在 《中国药典》２００５年版中仅有性状和
薄层色谱鉴别，没有白及相关指标成分的含量测
定，难以控制其质量，国内未见白及相关含量测定
的报道。根据文献资料［２３］，白及中主要含有淀粉、
葡萄糖、黏液质及蒽醌类等化合物，另外还含有大
黄素甲醚、咖啡酸等成分，作者对其中的可测成分
进行了含量测定研究，结果含量均在１／１万以下，
不宜作为质量控制指标。为此对白及化学成分进行
了研究，从中分离出含量较高的双 ［４（βＤ吡喃
葡萄糖氧）苄基］２异丁基苹果酸酯 （ｍｉｌｉｔａ
ｒｉｎｅ）。并以此作为质量控制指标，对白及药材中
ｍｉｌｉｔａｒｉｎｅ的含量测定方法进行了研究，为控制和
评价白及质量提供科学依据。
１ 材料
岛津 ＬＣ１０Ａｖｐ高效液相色谱系统，包括二
元梯度泵、紫外可见光检测器、７７２５ｉ手动进样
阀、ＷＭＬ色谱工作站（广西威玛龙色谱科技公
司）；岛津 ＵＶ２４０１ＰＣ紫外可见光分光光度计；
ＴＣＱ２５０超声波清洗器（北京医疗设备二厂，功
率２５０Ｗ；频率 １９～３３ｋＨｚ）等。１２批白及药材，
分别采收至贵州正安白及药材种植基地和购自
贵州、广西、云南，经贵阳医学院生药教研室龙庆
德副教授鉴定为 Ｂ．ｓｔｒｉａｔａ的干燥块茎；ｍｉｌｉｔａｒｉｎｅ
对照品由贵阳医学院中药民族药研究开发中心
制备，批号 ２００７０１３１，经１ＨＮＭＲ，１３ＣＮＭＲ，ＭＳ，
ＵＶ，ＩＲ等波谱鉴定，化学结构见图１，采用 ＨＰＬＣ
ＤＡＤ在多个波长检测其峰面积归一化结果均大
于９８％；甲醇为色谱纯（美国 ＴＥＤＩＡ公司）、水为
纯净水。
图１ ｍｉｌｉｔａｒｉｎｅ结构式
２ 方法和结果
２．１ 色谱条件 ＷａｔｅｒｓＳｙｍｍｅｔｒｙＣ１８色谱柱（４６
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第３４卷第１６期
２００９年８月
Ｖｏｌ．３４，Ｉｓｓｕｅ １６
Ａｕｇｕｓｔ，２００９
ｍｍ×１５０ｍｍ，５μｍ），保护柱为ＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘＳｅｃｕｒｉｔｙ
ＧｕａｒｄＣ１８（４０ｍｍ×３ｍｍ，５μｍ）；流动相甲醇水
（３７∶６３）；流速１ｍＬ·ｍｉｎ－１；柱温４０℃；检测波长
２２３ｎｍ。理论板数按 ｍｉｌｉｔａｒｉｎｅ峰计算应不低于
５０００，样品中ｍｉｌｉｔａｒｉｎｅ与相邻峰达到基线分离。见
图２。
Ａ．对照品；Ｂ．白及样品；１．ｍｉｌｉｔａｒｉｎｅ。
图２ 白及的ＨＰＬＣ图
２．２ 对照品溶液的制备 精密称取 ｍｉｌｉｔａｒｉｎｅ对照
品适量，加甲醇溶液制成每１ｍＬ含０１５ｍｇ的对照
品溶液。
２．３ 供试品溶液制备 取本品粉末０２ｇ，精密称
定，精密加入甲醇５０ｍＬ，称重，加热回流２ｈ，放冷，
用甲醇补足减失重，摇匀，滤过，取续滤液作为供试
品溶液。
２．４ 线性关系考察 精密称取 ｍｉｌｉｔａｒｉｎｅ对照品，
加甲醇制成每 １ｍＬ含 ０７０４８ｍｇ的对照品储备
液，分别精密量取对照品储备液０５，１，２，４，８ｍＬ置
１０ｍＬ量瓶中，分别加甲醇溶液稀释至刻度，摇匀。
分别精密吸取５μＬ，注入液相色谱，以峰面积（Ｙ）为
纵坐标，进样浓度（Ｘ）为横坐标，绘制工作曲线计算
回归方程Ｙ＝７６８×１０６Ｘ＋６１０×１０３，ｒ＝０９９９９。
结果表明ｍｉｌｉｔａｒｉｎｅ进样量在０１８～２８μｇ直线关
系良好。
２．５ 精密度试验 取同一批次白及药材９份，分别
按０１５，０２，０２５ｇ各取３份，精密称定，照２．３项
下方法制备供试液分别测定，ｍｉｌｉｔａｒｉｎｅ平均含量为
２６６４％，ＲＳＤ１３％（ｎ＝９），表明方法的重复性良
好。另以在不同日期、以不同实验人员按上述方法
制备９份供试品溶液，分别测定。第一次测定的平
均值为２６１５％，ＲＳＤ０３％（ｎ＝９）；第二次测定的
平均值为２６４１％，ＲＳＤ１２％（ｎ＝９），说明方法的
中间精密度良好。
２．６ 稳定性试验 取同一供试品溶液，分别于０，
１，２，４，８ｈ进样结果 ｍｉｌｉｔａｒｉｎｅ峰面积平均值的
ＲＳＤ为０７％，表明供试品溶液在８ｈ内稳定。另取
样品粉末按２．３项下方法制备供试液，分别以不同
品牌的色谱柱进行测定，结果 ＤｉａｍｏｎｓｉｌＣ１８柱（４６
ｍｍ×２５０ｍｍ，５μｍ）分析的结果为 ２６５７％，ＲＳＤ
０６％（ｎ＝３）；ＨｙｐｅｒｓｉｌＣ１８柱（４６ｍｍ×１５０ｍｍ，５
μｍ）分析的结果为２６２７％，ＲＳＤ１１％（ｎ＝３）。另
还考察了流动相比例、色谱柱温度、检测波长作较小
变化时对测定结果的影响，实验结果表明，色谱条件
较小变化对测定结果影响不大，说明方法的耐用性
较好。
２．７ 回收率试验 分别精密称取已测定含量的白
及药材（２６６４％）样品 ９份，分别精密称取 ｍｉｌｉｔａ
ｒｉｎｅ对照品适量，用甲醇制备成每 １ｍＬ含
００２８８２，００５７１２和 ００８６４８ｍｇ３种浓度的溶
液，分别以上述溶液为提取溶剂，按供试品溶液制备
方法制备供试液，测定，结果见表１。
表１ ｍｉｌｉｔａｒｉｎｅ加样回收率
称样量
／ｍｇ
样品中量
／ｍｇ
加入量
／ｍｇ
测得量
／ｍｇ
回收率
／％
平均值
／％
ＲＳＤ
／％
１０６３ ２８３１８ １４４１ ４３１２８ １０２８０
１０１８ ２７１２０ １４４１ ４１３６９ ９８８８
１０４５ ２７８３９ １４４１ ４１９６２ ９８０１
１０８２ ２８８２４ ２８５６ ５８４５２ １０３７０
１０５５ ２８１０５ ２８５６ ５６０２３ ９７７５ １００２ ２１
１０２４ ２７２７９ ２８５６ ５６３５４ １０１８０
１０３９ ２７６７９ ４３２４ ７０８１８ ９９７７
１００４ ２６７４７ ４３２４ ６９６４５ ９９２１
１０３２ ２７４９２ ４３２４ ７０６９９ ９９９２
２．８ 样品测定 取不同产地白及药材，按２．３项下
方法制备供试液，同时制备对照液，分别进样，记录
色谱，测定峰面积，计算药材含量，结果见表２。
３ 讨论
通过紫外光谱扫描，ｍｉｌｉｔａｒｉｎｅ甲醇溶液在 ２２３
ｎｍ处有最大吸收，故选择２２３ｎｍ为检测波长。
在供试品溶液制备中分别考察了不同提取溶剂
及不同提取方法对含量测定的影响，结果以５０％～
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第３４卷第１６期
２００９年８月
Ｖｏｌ．３４，Ｉｓｓｕｅ １６
Ａｕｇｕｓｔ，２００９
表２ １２批不同产地白及药材中ｍｉｌｉｔａｒｉｎｅ含量测定
（ｎ＝３）
产地 批号
含量
／％
ＲＳＤ
／％
贵州正安 ２００６１１０９ ２８７ １８
２００６１２１０ ２６６ １５
２００７０６２０ ３３２ １８
２００８０５１３ ２９９ １０
贵州施秉 ２００７１１１０ ２２１ １２
２００８０３１７ １９２ １１
２００８０４２２ ２７６ １２
广西河池 ２００６０９２８ ２１２ １０
２００６１２０４ １７４ １２
２００７０７１８ ２６９ １１
云南曲靖 ２００７０６０８ １８２ １２
２００７０９２１ １４５ １５
１００％甲醇提取的结果基本一致，由于白及药材多糖
含量较高，用含水量较高的甲醇溶液制备的供试品
溶液黏度较大，滤过较困难，而采用甲醇作溶剂制备
供试品溶液较为简便，故采用甲醇作为提取溶剂。
本研究对市售的１２批白及药材进行了含量测定
研究，结果表明，市售药材含量差别较大，以贵州正安
产白及药材含量较高，最高者达３３２％，可能是受气
候、土壤、生长期、采收季节等因素的影响有关。
［参考文献］
［１］ 中国药典．一部［Ｓ］．２００５：６７．
［２］ 肖培根．新编中药志．第１卷［Ｍ］．北京：化学工业出版社，
２００１：３２０．
［３］ 王立新，韩广轩，舒莹，等．中药白及化学成分的研究［Ｊ］．中国
中药杂志，２００１，２６（１０）：６９０．
［４］ 韩广轩，王立新，王麦莉．中药白及化学成分的研究［Ｊ］．药学
实践杂志，２００１，１９（６）：３６０．
ＤｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｍｉｌｉｔａｒｉｎｅｉｎＲｈｉｚｏｍａＢｌｅｔｉｌａｅｂｙＨＰＬＣ
ＨＥＸｕｎ，ＷＡＮＧＡｉｍｉｎ，ＬＩＹｏｎｇｊｕｎ，ＷＡＮＧＹｏｎｇｌｉｎ，ＺＨＯＵＳｈｕｙｏｎｇ
（１．ＳｃｈｏｏｌｏｆＰｈａｒｍａｃｙ，ＧｕｉｙａｎｇＭｅｄｉｃａｌＣｏｌｅｇｅ，Ｇｕｉｙａｎｇ５５０００４，Ｃｈｉｎａ；
２．ＬｖｙｅＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙＩｎｄｕｓｔｒｙＣｏ．Ｌｔｄ，Ｚｈｅｎ′ｇａｎ５６３４００，Ｃｈｉｎａ）
［Ａｂｓｔｒａｃｔ］ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：ＴｏｄｅｖｅｌｏｐａｎＨＰＬＣｍｅｔｈｏｄｆｏｒｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｍｉｌｉｔａｒｉｎｅｉｎＲｈｉｚｏｍａＢｌｅｔｉｌａｅ．Ｍｅｔｈｏｄ：Ａｎａｌｙｓｉｓ
ｗａｓｃａｒｉｅｄｏｕｔｏｎａＳｙｍｍｅｔｒｙＣ１８ａｎａｌｙｔｉｃａｌｃｏｌｕｍｎ，ａｎｄａＣ１８ｇｕａｒｄｃｏｌｕｍｎｅｌｕｔｅｄｗｉｔｈｍｏｂｉｌｅｐｈａｓｅｃｏｎｓｉｓｔｅｄｏｆａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅａｎｄ
ｗａｔｅｒ（３７∶６３）ｍｉｌｉｔａｒｉｎｅｔｈｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎｗａｖｅｌｅｎｇｔｈｗａｓｓｅｔａｔ２４４ｎｍ．Ｒｅｓｕｌｔ：Ｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔｓｏｆｉｎ１２ｓａｍｐｌｅｓｏｆＲｈｉｚｏｍａＢｌｅｔｉｌａｅｉｎ
ｍａｒｋｅｔｗｅｒｅｉｎｔｈｅｒａｎｇｅｓｏｆ１４５％３３２％．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｔｈｅｍｅｔｈｏｄｉｓｓｉｍｐｌｅ，ａｃｃｕｒａｔｅａｎｄｒｅｐｒｏｄｕｃｉｂｌｅ，ａｎｄｉｓｓｕｉｔａｂｌｅｆｏｒｔｈｅ
ｑｕａｌｉｔｙｃｏｎｔｒｏｌｏｆＲｈｉｚｏｍａＢｌｅｔｉｌａｅ．
［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］ ＲｈｉｚｏｍａＢｌｅｔｉｌａｅ；ｍｉｌｉｔａｒｉｎｅ；ＨＰＬＣ
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