全 文 ：川楝子对大鼠肝组织超微结构和原代培养肝细胞的影响
齐双岩１，谷颖敏１，金若敏１，刘红杰１，２，梅彩霞１
（１．上海中医药大学 药物安全评价研究中心，上海 ２０１２０３；
２．暨南大学 医学院 中医系，广州 ５１０６３２）
［摘要］ 目的：研究川楝子对大鼠肝组织超微结构和原代培养肝细胞的影响。方法：大鼠口服川楝子提取液（生药）９０ｇ
·ｋｇ－１，２ｈ后取肝组织，电镜下观察肝组织超微结构变化。分离培养原代大鼠肝细胞，加入川楝子含药血清共同孵育，分别于
１，２，８，２４ｈ时检测培养上清液中ＬＤＨ，ＡＬＴ，ＡＳＴ水平。结果：大鼠口服川楝子提取液后２ｈ，肝细胞体积增大，线粒体肿胀变
性，内质网扩张，胞浆内脂滴比正常组略有增多。５％或１０％川楝子含药血清均可导致肝细胞上清液中ＬＤＨ，ＡＬＴ，ＡＳＴ水平不
同程度的升高（Ｐ＜００５或Ｐ＜００１），在２４ｈ最为显著。结论：川楝子口服能被机体吸收，其原型药物或代谢产物对肝细胞产
生直接的损伤作用。
［关键词］ 川楝子；大鼠；肝组织；超微结构；原代肝细胞
［收稿日期］ ２００９０４１０
［通信作者］ 金若敏，Ｔｅｌ：（０２１）５１３２２４０１，Ｅｍａｉｌ：ｒｍｊ８０１＠
１２６ｃｏｍ
川楝子（《中国药典》２００５年版）为楝科植物川
楝的干燥成熟果实，性味苦寒，有小毒，现代关于川
楝子的实验研究较少，关于其毒性的研究则更少。
已有的研究结果表明，川楝子可致大鼠或小鼠急性
肝损伤，主要表现为血清ＡＬＴ，ＡＳＴ的显著升高［１２］，
其导致肝损伤的机制与炎症反应关系密切［３］，为进
一步明确川楝子致肝毒性的特点，进行本实验研究。
１ 材料
１．１ 药材及制备
药材购于上海养和堂张江分店，产地四川，批号
０６０５２６，０６０８２５，经上海中医药大学中药学院赵志礼
教授鉴定系为楝科植物川楝ＭｅｌｉａｔｏｏｓｅｎｄａｎＳｉｅｂ．ｅｔ
Ｚｕｃｃ．的干燥成熟果实。
川楝子提取液（水提醇沉）：将药物粉碎至颗粒
状，水煎３次，３次加水量与药物质量比分别为３∶１，
２∶１，１∶１。每次先以武火煮沸，再以文火煮３０ｍｉｎ，
过滤，合并３次药液，加９５％乙醇至含量为７０％，４
℃冰箱放置过夜，滤去沉淀，回收乙醇，将上述水提
醇沉液浓缩至１０ｇ·ｍＬ－１，置４℃冰箱，避光保存
备用。临用前，用蒸馏水分别配成所需浓度的溶液
（以下简称“川楝子”）。
１．２ 试剂
Ⅳ型胶原酶，Ｓｉｇｍａ公司，批号 Ｃ５１３８。大豆胰
蛋白酶抑制剂，Ｓｉｇｍａ公司，批号Ｄ４２９１。ＭＥＭ，ＰＡＡ
公司，批号 Ｅ８２５０６１１０５。４９２％Ｆｉｃｏｌ液，ＰＡＡ公
司，批号 Ｊ００４０６１００２。小牛血清，ＰＡＡ公司，批号
Ｂ００１０４０７８６。青霉素链霉素浓缩液，ＰＡＡ公司，批
号Ｋ９２５３９１００８。１６４０培养液，ＧＩＢＣＯ公司，批号
１３８４１３５。乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）试剂，批号 Ｍ６０８２７９；
丙氨酸转移酶（ＡＬＴ）试剂，批号Ｍ６０９１４２；天冬氨酸
转移酶（ＡＳＴ）试剂，批号 Ｍ６０８０７３，均为 ＢＥＣＫＭＡＮ
公司生产。其他试剂均为分析纯，由国药集团化学
试剂有限公司提供。
１．３ 动物
ＳＤ大鼠，雄性，体重１００～１２０ｇ，１８０～２００ｇ及
３００～３５０ｇ，清洁级，上海斯莱克实验动物有限公司
购买，合格证号 ＳＣＸＫ（沪）２００３０００２。上海中医药
大学实验动物中心清洁级环境饲养。
１．４ 仪器
ＴＥＣＮＡＩ１２型透射电镜，荷兰菲利浦公司。
ＬＸＪⅡ离心沉淀机，上海医用分析仪器厂。ＢＸ５１／
ＢＸ５２型正置系统显微镜及图像分析系统，日本奥林
巴斯光学株式会社。５８０４ＲＥｐｐｅｎｄｏｒｆ冷冻离心机，
Ｅｐｅｎｄｏｆ公司。全自动生化仪 ＳＹＮＣＨＲＯＮＬｘｉ７２５
型，ＢＥＣＫＭＡＮ公司。
２ 方法
２．１ 川楝子对肝脏微观病理形态的影响
取ＳＤ大鼠，体重１８０～２００ｇ，分为正常组、川楝
子组，每组３只，实验前禁食不禁水，过夜。单次灌
胃给予川楝子（含生药）９０ｇ·ｋｇ－１，正常组给蒸馏
水后，取正常组及川楝子组大鼠肝组织，按电镜要求
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取材，２５％戊二醛固定，经１％锇酸固定２ｈ，丙酮
乙醇逐级脱水，环氧树脂包埋，醋酸铀和柠檬铅染
色，超薄切片后，透射电镜下观察。
２．２ 川楝子含药血清对原代大鼠肝细胞的直接毒
性作用
２．２．１ 川楝子含药血清的制备［４］ 取 ＳＤ大鼠，体
重３００～３５０ｇ，实验前禁食不禁水，过夜。灌胃给予
川楝子（生药）１５０ｇ·ｋｇ－１，共２次，间隔６ｈ，末次
给药后２ｈ，大鼠麻醉，消毒，打开腹腔，无菌取血后
静置２ｈ，３０００ｒ·ｍｉｎ－１离心１０ｍｉｎ，分离血清；５６
℃灭活３０ｍｉｎ，０２２μｍ微孔滤膜过滤除菌，分装；
－２０℃冰箱保存备用。另取体重３００～３５０ｇ大鼠，
同法制备空白血清（大鼠给等量的蒸馏水）。
２．２．２ 原代肝细胞的分离、培养［５６］ 器械高温消
毒。取体重 １００～１２０ｇ大鼠 １只，禁食不禁水过
夜。处理前禁水４ｈ。麻醉，消毒腹壁，打开腹腔，留
置穿刺针于门静脉，采用两步法灌流肝脏，分离、精
制肝细胞密度约为 ５×１０５个／ｍＬ，以 １６４０培养液
（含Ｌ谷氨酰胺、青霉素链霉素浓缩液、１０％小牛血
清）悬浮，接种于７０ｍｍ培养皿中，每皿２ｍＬ。３７
℃，５％ＣＯ２的环境下，ＣＯ２恒温培养箱中孵育培养。
约２ｈ细胞贴壁，３～５ｈ后换培养液１次，而后２４ｈ
换培养液１次，细胞呈板状成长。
２．２．３ 川楝子含药血清对原代大鼠肝细胞的影响
将２２２培养的肝细胞随机分为空白组（加空白
血清），川楝子５％含药血清组（川楝子含药血清正
常血清１∶１），川楝子１０％含药血清组（仅加川楝子
含药血清），每组３皿，每皿加样２００μＬ。同２２２
法孵育培养１，２，８，２４ｈ后，每皿分别取上清液１００
μＬ，以全自动生化仪检测 ＬＤＨ，ＡＬＴ，ＡＳＴ。该实验
重复２次。
２．３ 统计方法
计量资料以 珋ｘ±ｓ表示，使用 ＳＰＳＳ１３０软件进
行统计处理，两组间比较采用ｔ检验，多组间比较采
用单因素方差分析。Ｐ＜００５为差异有显著性。
３ 结果
３．１ 川楝子对肝脏微观病理形态的影响
大鼠灌胃给予川楝子提取液后２ｈ，肝脏病理组
织学检查结果显示肝细胞水肿或轻度脂肪变性。电
镜下，正常组肝细胞呈多面形，线粒体，内质网等细
胞器丰富，细胞核位于细胞中央，卵圆形，有明显核
仁，核膜清晰，胞浆内偶见脂滴；川楝子组肝细胞体
积增大，线粒体肿胀变性，内质网扩张，胞浆内脂滴
比正常组略有增多（图１）。
Ａ，Ｂ．正常对照组；Ｃ，Ｄ，Ｅ．川楝子组（给药后２ｈ）。
图１ 川楝子对肝脏病理形态的影响
３．２ 川楝子含药血清对原代大鼠肝细胞的直接毒
性作用
与正常组比较，川楝子５％，１０％含药血清均可
导致肝细胞上清液中ＡＬＴ，ＡＳＴ，ＬＤＨ水平不同程度
的升高（Ｐ＜００５或 Ｐ＜００１），１ｈ即显效，在２４ｈ
最为显著，且呈明显的量效关系。结果见表１～３。
４ 讨论
本实验研究川楝子对肝组织的急性毒性作用，
既采用整体实验，也采用了体外的细胞实验。
研究结果显示，在整体实验中，川楝子口服
给药可以造成大鼠急性肝损伤，表现为血清
ＡＬＴ，ＡＳＴ显著升高，肝细胞体积增大，线粒体肿
胀变性，内质网扩张，胞浆内脂滴比正常组略有
增多；体外实验中，川楝子含药血清可使大鼠离
体肝细胞培养上清液中ＡＬＴ，ＡＳＴ，ＬＤＨ水平不同
程度的升高，与文献报道一致［７］，且川楝子含药
血清对大鼠离体肝细胞的损伤呈现一定的量效
关系，即随着药物在血清中浓度的升高，肝细胞
的损伤程度加深，表明川楝子口服经吸收后，其
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表１ 川楝子含药血清不同时间点对大鼠肝细胞ＬＤＨ的影响（珋ｘ±ｓ，ｎ＝３） Ｕ·Ｌ－１
组别 含药血清／％ １ｈ ２ｈ ８ｈ ２４ｈ
正常 － １４５±３１ １１３±６５ １２５±３３ ２３３±９５
川楝子 ５ ２９０±４４２） ３００±７１２） ３７０±１１３２） ３５５±１１５
１０ ５０５±８７２） ４７０±３２２） ６５０±７７２） ６７５±５４２）
注：与正常组比较１）Ｐ＜００５，２）Ｐ＜００１（表２，３同）。
表２ 川楝子含药血清不同时间点对大鼠肝细胞ＡＬＴ的影响（珋ｘ±ｓ，ｎ＝３） Ｕ·Ｌ－１
组别 含药血清／％ １ｈ ２ｈ ８ｈ ２４ｈ
正常 － ４５±０５８ ４３±０５ ４５±０５８ ４８±０９６
川楝子 ５ ５８±１５ ５８±０５２） ５３±０５ ５５±０５８
１０ ６５±０５８２） ６０±００２） ６３±０５２） ７０±０８２１）
表３ 川楝子含药血清不同时间点对大鼠肝细胞ＡＳＴ的影响（珋ｘ±ｓ，ｎ＝３） Ｕ·Ｌ－１
组别 含药血清／％ １ｈ ２ｈ ８ｈ ２４ｈ
正常 － ２１５±３９ ２２５±３９ ２３５±４８ ２７５±３５
川楝子 ５ ２３０±２９ ２４８±３８ ２６０±４１ ２４５±４９
１０ ３１５±４０１） ３１５±３７１） ３４８±５５１） ３７８±４６１）
原型药物或代谢产物可对肝细胞产生直接的损伤作
用。至于川楝子产生肝损伤的物质基础，尚有待于
进一步研究。
［参考文献］
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效关系研究［Ｊ］．江苏中医药，２００８，４０（７）：８３．
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效关系研究［Ｊ］．时珍国医国药，２００８，１９（１１）：２６９４．
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［Ｊ］．中国中药杂志，２００８，１６：２０４５．
［４］ 李仪奎．中药药理实验方法学［Ｍ］．２版，上海：上海科技出版
社，２００６：５０．
［５］ ＳｅｇｌｅｎＰＯ．Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎｏｆｉｓｏｌａｔｅｄｒａｔｌｉｖｅｃｅｌｓ［Ｊ］．ＭｅｔｈｏｄｓＣｅｌ
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［６］ 邓颖，陈杰，毕惠嫦，等．原代肝细胞培养及其在药物代谢和毒
理学研究中的应用［Ｊ］．中国药理学通报，２００６，２２（８）：９００．
［７］ 江和基，杨丽英，陈强，等．复方茵芩制剂血清对小鼠体外肝细
胞损伤的保护作用［Ｊ］．福建农林大学学报：自然科学版，
２００８，３７（１）：８４．
［责任编辑 古云侠］
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