全 文 ：丹酚酸 Ｂ对脑缺血小鼠脑能荷和三磷酸腺
苷酶活性的影响
蒋玉凤１，王秋华１，刘智勤２，王 谦１，蔡大勇１，
刘世静１，张 颖１，黄启福１
（１．北京中医药大学 基础医学院 病理教研室，北京１０００２９；
２．河北大学 药学院 药理教研室，河北 保定 ０７１００２）
［摘要］ 目的：从脑缺血小鼠脑组织高能磷酸含量和三磷酸腺苷（ＡＴＰ）酶活性探讨丹酚酸 Ｂ对脑水肿的影
响。方法：将ＮＩＨ小鼠分为假手术组、缺血组、丹酚酸Ｂ治疗组和尼莫地平对照组，复制脑缺血模型。丹酚酸 Ｂ组
尾静脉注射丹酚酸Ｂ（２２５ｍｇ·ｋｇ－１）；尼莫地平组尾静脉注射尼莫地平（００３ｍｇ·ｋｇ－１）；假手术组和缺血组尾静
脉注射等量的生理盐水，３０ｍｉｎ后阻断双侧颈总动脉，观察缺血３０ｍｉｎ脑组织ＡＴＰ、二磷酸腺苷（ＡＤＰ）、一磷酸腺
苷（ＡＭＰ）和磷酸肌酸（ＰＣｒ）的含量并计算能荷（ＥＣ）值；同时测定Ｎａ＋Ｋ＋ＡＴＰ酶和Ｃａ２＋ＡＴＰ酶的活性以及脑含
水量。结果：与缺血组比较，丹酚酸Ｂ组脑组织ＡＴＰ，ＡＤＰ，ＰＣｒ含量和能荷值显著升高（Ｐ＜００１）；Ｎａ＋Ｋ＋ＡＴＰ酶
和Ｃａ２＋ＡＴＰ酶活性显著增强（Ｐ＜００１）；而脑含水量则明显降低（Ｐ＜００５）。结论：丹酚酸 Ｂ减轻脑缺血小鼠脑
含水量的作用机制，可能与其提高高能磷酸含量和增强ＡＴＰ酶活性有关。
［关键词］ 脑缺血；能量代谢；丹酚酸Ｂ；小鼠
［中图分类号］Ｒ２８５．５ ［文献标识码］Ａ ［文章编号］１００１５３０２（２００７）１８１９０３０４
［收稿日期］ ２００６１１２７
［基金项目］ 国家自然科学基金项目（３０４７２２８１）
［通讯作者］ 蒋玉凤，Ｔｅｌ：（０１０）６４２８６９６５，Ｆａｘ：（０１０）６４２８
６８７１，Ｅｍａｉｌ：ｊｉａｎｇｙｆ６６＠ｙａｈｏｏ．ｃｏｍ．ｃｎ
脑缺血属于缺血性脑血管疾病，包括脑血栓形
成、脑梗死和脑血管痉挛，该病占全部脑血管病的
７５％，因此，至今为国内外学者研究的热点之一。丹
参是临床上预防和治疗缺血性心脑血管疾病常用的
中药之一，研究资料证明［１，２］，其主要成分是水溶性
丹酚酸类化合物，而丹酚酸 Ｂ（ＳａｌＢ）为丹参中含量
最高，是治疗缺血性疾病有效活性的单体成分。但
丹酚酸 Ｂ对脑缺血早期能量代谢的作用，国内外尚
未见相关的文献报道。本实验在前期工作的基础
上［３］，复制低血压伴急性脑缺血小鼠模型，观察丹
酚酸Ｂ对脑高能磷酸化合物含量和ＡＴＰ酶的活性，
研究其改善能量代谢以及对脑水肿的作用。
１ 材料
１．１ 动物与药品 雄性 ＮＩＨ小鼠（中国药品生物
制品检定所实验动物中心），１２周龄，ＳＰＦ级，许可
证：ＳＣＸＫ（京）２００５０００４。丹酚酸Ｂ（中国药品生物
制品检定所，批号 １１１５６２２００４０３，纯度 １００％）；尼
莫地平注射液（德国拜尔医药保健股份公司，批号
ＢＸＢＴ７Ｊ１）；硝普钠（北京双鹤现代医药技术有限公
司，批号０６０５１６）。
１．２ 试剂与仪器 Ｎａ＋Ｋ＋ＡＴＰａｓｅ和 Ｃａ２＋ＡＴ
Ｐａｓｅ试剂盒（南京建成生物工程研究所，批号
２００６０３１５）。高速离心机（上海安亭科学仪器厂，
ＴＧＬ－１６Ｇ型）；真空干燥泵（上海一恒科技有限公
司，ＤＺＦ－６０５０型）；高效液相仪（ＨＰＬＣ，美国安捷
伦公司，１１００型）；紫外分光光度计（ＢＥＣＫＭＡＮ，美
国，ＤＵ－８００）。
２ 方法
２．１ 模型复制 ＮＩＨ小鼠随机分为假手术组、缺血
组、丹酚酸 Ｂ治疗组（丹酚酸 Ｂ组）、尼莫地平对照
组（尼莫地平组）。丹酚酸Ｂ组：尾静脉注射丹酚酸
Ｂ（２２５ｍｇ·ｋｇ－１），３０ｍｉｎ后，水合氯醛（３５０ｍｇ·
ｋｇ－１）腹腔注射麻醉，颈正中切口，分离双侧颈总动
脉，穿一号丝线备用，然后在腹腔注射硝普纳（３２５
ｍｇ·ｋｇ－１）的同时迅速拉紧丝线，阻断双侧颈总动
脉血流３０ｍｉｎ后处死小鼠取脑皮质。尼莫地平组
尾静脉注射尼莫地平（００３ｍｇ·ｋｇ－１），假手术组和
缺血组尾静脉分别注射等量的生理盐水，３组实验
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方法同丹酚酸 Ｂ组，唯假手术组腹腔不注射硝普
钠，双侧颈总动脉不结扎。
２．２ ＡＴＰ，ＡＤＰ，ＡＭＰ，ＰＣｒ含量的测定及ＥＣ的计算
用预冷的生理盐水将脑组织制成２０％的匀浆，加
４％的高氯酸 ０５ｍＬ沉淀蛋白，３０００ｒ·ｍｉｎ－１，４
℃离心１０ｍｉｎ，取上清液 ０５ｍＬ加 ２０％ ＫＯＨ５３
μＬ，样品用ＨＰＬＣ仪梯度洗脱，测定ＡＴＰ，ＡＤＰ，ＡＭＰ
及ＰＣｒ的含量。色谱柱：ＬｉｃｈｒｏｓｏｒｂＣ１８（４６ｍｍ×
１５０ｍｍ）（大连依利特公司）。流动相 Ａ液：００５
ｍｏｌ·Ｌ－１ＫＨ２ＰＯ４Ｋ２ＨＰＯ４缓冲液（ｐＨ７０）；Ｂ液：
为含１０％甲醇的 Ａ液。共运行１０ｍｉｎ。流速：０８
ｍＬ·ｍｉｎ－１。检测波长２５４ｎｍ。柱温：室温。根据
ＡＴＰ＋０５ＡＤＰ／（ＡＴＰ＋ＡＤＰ＋ＡＭＰ）计算脑能荷
值。
２．３ Ｎａ＋Ｋ＋ＡＴＰ酶和Ｃａ２＋ＡＴＰ酶的测定 样品
处理按照试剂盒说明书进行操作，紫外分光光度计
测定脑组织中 Ｎａ＋Ｋ＋ＡＴＰ酶和 Ｃａ２＋ＡＴＰ酶的活
性。
２．４ 脑含水量的测定 按文献［４］操作，依据公式
（湿重－干重）／湿重×１００％计算脑含水量。
２．５ 统计学处理 采用ＳＰＳＳ１１０数据统计软件。
各组实验数据以 珋ｘ±ｓ表示，组间数据比较采用单因
素方差分析。
３ 结果
３．１ 丹酚酸 Ｂ对脑缺血小鼠高能磷酸含量和能荷
值的影响 从表１可知，与假手术组相比，缺血组的
ＡＴＰ，ＡＤＰ，ＰＣｒ含量和能荷值显著降低（Ｐ＜００１）；
分别用丹酚酸 Ｂ和尼莫地平组治疗，两者的 ＡＴＰ，
ＡＤＰ，ＰＣｒ含量和能荷值显著升高（Ｐ＜００１）。
表１ 丹酚酸Ｂ对高能磷酸含量和能荷的影响（珋ｘ±ｓ，ｎ＝８）
组别
剂量
／ｍｇ·ｋｇ－１
ＡＴＰ
／μｍｏｌ·ｇ－１
ＡＤＰ
／μｍｏｌ·ｇ－１
ＡＭＰ
／μｍｏｌ·ｇ－１
能荷值
ＰＣｒ
／μｍｏｌ·ｇ－１
假手术 － ４３０５４±１２６２１ ３１６２１±４０７０ ３５６９９±１４３２ ０５６８±００１５ ９９３９６±９８１０
缺血 － ２３４９０±８０２４２） ２２１１０±４３９３２） ３８４９６±３９４２ ０４６５±００３７２） ８１６１４±９９１９２）
丹酚酸Ｂ ２２５ ４１１１０±１８１８７４） ３０４４１±５５４２４） ３６５９５±３１３６ ０５２０±００３４４） ９８３４４±１３２４９４）
尼莫地平 ００３ ４２０７５±７２１３４） ３０５９３±６８２４４） ３６３５４±１５６５ ０５２７±００３２４） ９９２８０±４６８４４）
注：与假手术比较２）Ｐ＜００１；与缺血组比较４）Ｐ＜００１
３．２ 丹酚酸Ｂ对脑缺血小鼠ＡＴＰ酶活性的影响
表２显示，缺血组 Ｎａ＋Ｋ＋ＡＴＰ酶和 Ｃａ２＋ＡＴＰ酶
的活性显著降低，与假手术组相比有显著性差异
（Ｐ＜００１）；而丹酚酸Ｂ组Ｎａ＋Ｋ＋ＡＴＰ酶和 Ｃａ２＋
ＡＴＰ酶的活性明显增强并接近正常组，与缺血组相
比有显著性差异（Ｐ＜００１）；尼莫地平对照组的
Ｎａ＋Ｋ＋ＡＴＰ酶和 Ｃａ２＋ＡＴＰ酶的活性分别与缺血
组相比差异亦显著（Ｐ＜００５，Ｐ＜００１）。
表２ 丹酚酸Ｂ对Ｎａ＋Ｋ＋ＡＴＰ酶和Ｃａ２＋ＡＴＰ
酶活性的影响（珋ｘ±ｓ） Ｕ·ｍｇ－１
组别 ｎ
剂量
／ｍｇ·ｋｇ－１
Ｎａ＋Ｋ＋ＡＴＰ酶 Ｃａ２＋ＡＴＰ酶
假手术 ８ － ０６８５±００７ ００４８４±００６２
缺血 ７ － ０２４４±００６５２） ０３２１±００８６２）
丹酚酸Ｂ ８ ２２５ ０５９３±００１３４） ０４８４±００５３４）
尼莫地平 ７ ００３ ０５２８±００６３４） ０４４１±００７６３）
注：与假手术组比较２）Ｐ＜００１；与缺血组比较３）Ｐ＜００５，４）Ｐ＜
００１
３．３ 丹酚酸 Ｂ对脑缺血小鼠脑含水量的影响 与
假手术组相比，缺血组脑含水量明显增加（Ｐ＜
００５）；用丹酚酸 Ｂ和尼莫地平治疗可显著降低脑
含水量（Ｐ＜００５），见表３。
表３ 丹酚酸Ｂ对脑含水量的影响（珋ｘ±ｓ，ｎ＝１０）
组别 剂量／ｍｇ·ｋｇ－１ 脑含水量／％
假手术 － ３７０±００４５
缺血 － ４４１±００８５１）
丹酚酸Ｂ ２２５ ３８１±００６６３）
尼莫地平 ００３ ３７５±００３１３）
注：与假手术组比较 １）Ｐ＜００５；与缺血组比较３）Ｐ＜００５
４ 讨论
中医认为，缺血性脑血管病属中风病的范畴，其
病机为本虚标实，病位在脑。中老年由于精气虚衰，
机体内环境失调，终致风、火、痰、瘀相互为患，瘀塞脑
络阻于经脉而发生中风。鉴于血瘀是缺血性中风的
基本病机，故应用活血化瘀、疏通络脉可取得较好的
疗效。临床上最常用的中药丹参，具有活血化瘀、通
经活络之功效。从丹参中提取的丹酚酸Ｂ能透过血
脑屏障，因其含有酚羟基，具有很强的抗氧化作用，所
以是治疗缺血性脑病有效的代表性化合物［２，５］。
能量［６］是细胞进行各种生理功能的物质保证，
神经细胞能量的供应主要来自血液中的葡萄糖，由
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于脑组织几乎不贮存糖原，一旦发生脑缺血，血流中
断而神经细胞缺血缺氧，必将导致葡萄糖有氧氧化
和氧化磷酸化障碍，其最直接的后果是高能磷酸化
合物ＡＴＰ生成减少以及ＰＣｒ的耗竭。
本实验复制低血压伴急性脑缺血老年小鼠模
型，从高能磷酸含量和ＡＴＰ酶活性的变化探讨脑缺
血早期丹酚酸Ｂ对脑含水量的影响。结果显示，当
脑缺血３０ｍｉｎ时，脑组织 ＡＴＰ和ＡＤＰ含量减少，而
ＡＭＰ含量增高，这种病生改变又导致细胞内能荷水
平以及磷酸肌酸显著下降；同时 Ｎａ＋Ｋ＋ＡＴＰ酶和
Ｃａ２＋ＡＴＰ酶活性降低；脑含水量增多。分别应用丹
酚酸Ｂ、尼莫地平治疗急性脑缺血，可明显提高脑组
织ＡＴＰ含量、能荷水平和磷酸肌酸的储备；提高
Ｎａ＋Ｋ＋ＡＴＰ酶和Ｃａ２＋ＡＴＰ酶的活性；并降低了脑
含水量。尼莫地平是一种钙拮抗剂，易通过血脑屏
障并可改善微循环，是临床上治疗缺血性心脑血管
疾病的常用药物。本实验结果亦证明，尼莫地平具
有改善脑缺血能量代谢的水平，减轻脑水肿的作用。
丹酚酸 Ｂ是丹参中提取的有效单体成分，具有活血
行血，化瘀通络之功效［５］。本研究结果表明，丹酚
酸Ｂ可改善急性脑缺血早期的能量代谢，推测其治
疗效应可能与能量的合成、分解和利用３个环节有
关，一是提高线粒体氧化磷酸化过程［７，８］中能量的
转化提高能量的生成；二是提高 ＡＴＰ酶的活性，促
进ＡＴＰ水解为ＡＤＰ和Ｐｉ的速度加快，使 ＡＤＰ进入
线粒体增多而氧化磷酸化增强；三是促进 ＡＴＰ酶对
能量的利用，调节平衡细胞内外离子的浓度，维持细
胞渗透压和细胞膜电位平衡，减轻缺血性脑水肿。
以上结果提示，在急性脑缺血早期，丹酚酸 Ｂ
具有提高脑组织高能磷酸含量和增强 ＡＴＰ酶活性
的功能，可能是减轻小鼠缺血性脑水肿的作用，但对
其作用机制课题组将进一步深入研究。
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ｂｒａｉｎｖｅｓｓｅｌｏｃｃｌｕｓｉｏｎ［Ｊ］．ＢｒａｉｎＲｅｓ，１９９９，８３０（２）：３２０．
ＥｆｅｃｔｓｏｆｓａｌｖｉａｎｏｌｉｃａｃｉｄＢｏｎｃｅｒｅｂｒａｌｅｎｅｒｇｙｃｈａｒｇｅａｎｄ
ａｃｔｉｖｉｔｙｏｆＡＴＰａｓｅｉｎｍｉｃｅｗｉｔｈｃｅｒｅｂｒａｌｉｓｃｈｅｍｉａ
ＪＩＡＮＧＹｕｆｅｎｇ１，ＷＡＮＧＱｉｕｈｕａ１，ＬＩＵＺｈｉｑｉｎ２，ＷＡＮＧＱｉａｎ１，ＣＡＩＤａｙｏｎｇ１，
ＬＩＵＳｈｉｊｉｎｇ１，ＺＨＡＮＧＹｉｎｇ１，ＨＵＡＮＧＱｉｆｕ１
（１．ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＰａｔｈｏｌｏｇｙ，ＢｅｉｊｉｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅ，Ｂｅｉｊｉｎｇ１０００２９，Ｃｈｉｎａ；
２．ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＰｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，ＨｅｂｅｉＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｂａｏｄｉｎｇ０７１００２，Ｃｈｉｎａ）
［Ａｂｓｔｒａｃｔ］ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：ＴｏｏｂｓｅｒｖｅｔｈｅｅｆｅｃｔｏｆｓａｌｖｉａｎｏｌｉｃａｃｉｄＢ（ＳａｌＢ）ｏｎｈｉｇｈｅｎｅｒｇｙｐｈｏｓｐｈａｔｅａｎｄａｃｔｉｖｉｔｙｏｆＡＴＰａｓｅｏｆ
ｃｅｒｅｂｒａｌｉｓｃｈｅｍｉａｉｎｍｉｃｅ，ａｎｄｔｏｓｔｕｄｙｔｈｅｒｏｌｅｏｆＳａｌＢｏｎｈｙｄｒｏｃｅｐｈａｌｕｓｆｕｒｔｈｅｒ．Ｍｅｔｈｏｄ：ＮＩＨｍｉｃｅｗｅｒｅｄｉｖｉｄｅｄｉｎｔｏｆｏｕｒｇｒｏｕｐｓ
ｒａｎｄｏｍｌｙ：Ｓｈａｍｏｐｅｒａｔｅｄｇｒｏｕｐ，ｃｅｒｅｂｒａｌｉｓｃｈｅｍｉａｇｒｏｕｐ，ＳａｌＢｔｒｅａｔｅｄｇｒｏｕｐａｎｄＮｉｍｏｄｉｐｉｎｅ（Ｎｉｍ）ｃｏｌａｔｅｄｇｒｏｕｐ．ＩｎＳａｌＢｔｒｅａｔｅｄ
ｇｒｏｕｐ，ｍｉｃｅｗｅｒｅｉｎｊｅｃｔｅｄｗｉｔｈＳａｌＢ（２２５ｍｇ·ｋｇ－１）ｉｎｖｅｎａｃａｕｄａｌｉｓａｔ３０ｍｉｎｂｅｆｏｒｅｔｈｅｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ．ＩｎＮｉｍｃｏｌａｔｅｄｇｒｏｕｐ，Ｎｉｍ
（００３ｍｇ·ｋｇ－１）ｗａｓｉｎｊｅｃｔｅｄｉｎｔｏｔａｉｌｖｅｉｎａｔｔｈｅｓａｍｅｔｉｍｅ，ｗｈｉｌｅｔｈｅｍｉｃｅｉｎＳｈａｍｏｐｅｒａｔｅｄｇｒｏｕｐａｎｄｃｅｒｅｂｒａｌｉｓｃｈｅｍｉａｇｒｏｕｐ
ｗｅｒｅｉｎｊｅｃｔｅｄｔｈｅｓａｍｅｖｏｌｕｍｅｎｏｒｍａｌｓａｌｉｎｅ．Ｔｈｅａｃｕｔｅｃｅｒｅｂｒａｌｉｓｃｈｅｍｉａｍｏｄｅｌｗａｓｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄｂｙｌｉｇａｔｉｎｇｂｉｌａｔｅｒａｌｃｏｍｍｏｎｃａｒｏｔｉｄ
ａｒｔｅｒｉｅｓｆｏｒ３０ｍｉｎｉｎｍｉｃｅ，ｔｈｅｎｔｈｅｍｉｃｅｗｅｒｅｋｉｌｅｄａｎｄｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔｏｆａｄｅｎｏｓｉｎｅｔｒｉｐｈｏｓｐｈａｔｅ（ＡＴＰ），ａｄｅｎｏｓｉｎｅｄｉｐｈｏｓｐｈａｔｅ
（ＡＤＰ），ａｄｅｎｏｓｉｎｅｍｏｎｏｐｈｏｓｐｈａｔｅ（ＡＭＰ），ｐｈｏｓｐｈｏｃｒｅａｔｉｎｅ（ＰＣｒ）ｗｅｒｅｏｂｓｅｒｖｅｄ，ａｎｄｔｈｅｃｅｒｅｂｒａｌｅｎｅｒｇｙｃｈａｒｇｅ（ＥＣ）ｗａｓｃｏｍｐｕ
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ＣｈｉｎａＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭａｔｅｒｉａＭｅｄｉｃａ
Ｖｏｌ．３２，Ｉｓｓｕｅ １８
Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ，２００７
ｔｅｄ．Ａｔｔｈｅｓａｍｅｔｉｍｅ，ａｃｔｉｖｉｔｙｏｆＮａ＋Ｋ＋ＡＴＰａｓｅａｎｄＣａ２＋ＡＴＰａｓｅ，ｃｏｎｔｅｎｔｏｆｗａｔｅｒｉｎｂｒａｉｎｔｉｓｓｕｅｗｅｒｅｍｅａｓｕｒｅｄ．Ｒｅｓｕｌｔ：Ｃｏｍ
ｐａｒｅｄｗｉｔｈｃｅｒｅｂｒａｌｉｓｃｈｅｍｉａｇｒｏｕｐ，ＥＣａｎｄｃｏｎｔｅｎｔｏｆＡＴＰ，ＡＤＰ，ＰＣｒｉｎＳａｌＢｔｒｅａｔｅｄｇｒｏｕｐｈｅｉｇｈｔｅｎｅｄｅｖｉｄｅｎｔｌｙ（Ｐ＜００１）．Ｍｏｒｅ
ｏｖｅｒ，ａｃｔｉｖｉｔｙｏｆＮａ＋Ｋ＋ＡＴＰａｓｅａｎｄＣａ２＋ＡＴＰａｓｅｉｎＳａｌＢｔｒｅａｔｅｄｇｒｏｕｐｈａｄａｒｅｍａｒｋａｂｌｅｉｎｃｒｅａｓｅ（Ｐ＜００１）．Ｂｕｔｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔｏｆ
ｗａｔｅｒｉｎｂｒａｉｎｔｉｓｓｕｅｄｅｃｒｅａｓｅｄｍａｒｋｅｄｌｙ（Ｐ＜００５）．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：ＴｈｅｍｅｃｈａｎｉｓｍｔｈａｔＳａｌＢｃａｎｒｅｌｉｅｖｅｃｏｎｔｅｎｔｏｆｗａｔｅｒｉｎｂｒａｉｎｔｉｓ
ｓｕｅｏｆｃｅｒｅｂｒａｌｉｓｃｈｅｍｉａｉｎｍｉｃｅ，ｍａｙｂｅａｓｓｏｃｉａｔｅｄｗｉｔｈｉｍｐｒｏｖｉｎｇｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔｏｆｈｉｇｈｅｎｅｒｇｙｐｈｏｓｐｈｏｒｉｃａｃｉｄｃｏｍｐｏｕｎｄｓａｎｄｅｎｈａｎ
ｃｉｎｇｔｈｅａｃｔｉｖｉｔｙｏｆＡＴＰａｓｅ．
［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］ ｃｅｒｅｂｒａｌｉｓｃｈｅｍｉａ；ｅｎｅｒｇｙｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ；ｓａｌｖｉａｎｏｌｉｃａｃｉｄＢ；ｍｉｃｅ
［责任编辑 古云侠］
［收稿日期］ ２００６０５２０
［基金项目］ 山东省自然科学基金（Ｙ２００５Ｃ５７）
［通讯作者］ 李贵海，Ｔｅｌ：（０５３１）８２９４９８０３，Ｆａｘ：（０５３１）８２９６
８４７３，Ｅｍａｉｌ：ｇｕｉｈａｉ９９＠１６３．ｃｏｍ
黄连解毒汤醇提物预防给药对
ＭＤＲ模型小鼠相关基因表达产物的影响
李贵海１，孙付军１，陈 锋２，杨书斌１，张 军１
（１．山东省中医药研究院，山东 济南 ２５００１４；２．山东省肿瘤防治研究院，山东 济南 ２５０１１７）
［摘要］ 目的：观察黄连解毒汤７０％醇提物预防给药对小鼠多药耐药（ＭＤＲ）基因表达产物 Ｐ１７０、肺耐药蛋
白（ＬＲＰ）和拓扑异构酶Ｉ（ＴＯＰＯＩ）的影响，探讨其干预ＭＤＲ的分子生物学基础，指导临床应用以预防ＭＤＲ的产
生。方法：小鼠随机分为非耐药模型组、耐药模型组、黄连解毒汤７０％醇提物１００，５０ｍｇ·ｋｇ－１组，模拟临床ＰＦＣ方
案，建立小鼠Ｓ１８０肿瘤细胞多药耐药在体模型，同时给予黄连解毒汤７０％醇提物４周，流式细胞仪荧光检测Ｐ１７０，
ＬＲＰ，ＴＯＰＯＩ。结果：黄连解毒汤７０％醇提物明显降低化疗诱导后耐药细胞 Ｐ１７０，ＬＲＰ的表达率和 ＲＯＰＯＩ活性。
结论：黄连解毒汤７０％醇提物可通过对相关生物活性物质的调节，干预和逆转化疗诱发的肿瘤ＭＤＲ的产生。
［关键词］ 黄连解毒汤７０％醇提物；肿瘤多药耐药；小鼠；Ｐ１７０；ＬＲＰ；ＴＯＰＯＩ
［中图分类号］Ｒ２８５．５ ［文献标识码］Ａ ［文章编号］１００１５３０２（２００７）１８１９０６０３
黄连解毒汤原载于《外台秘要》，主要由黄连、
黄芩、黄柏和栀子４味药组成，为清热解毒代表方。
现代药物学研究证实，该方含有小檗碱（ｂｅｒｂｅｒｉｎｅ）、
黄连碱（ｃｏｐｔｉｓｉｎｅ）、甲基黄连碱（ｗｏｒｅｎｉｎｅ）、药根碱
（ｊａｔｒｏｒｈｉｚｉｎｅ）、黄柏碱（ｐｈｅｌｏｄｅｄｒｉｎｅ）、掌叶防己碱
（ｐａｌｍａｔｉｎｅ）、蝙蝠葛碱（ｍｅｎｉｓｐｅｒｉｎｅ）等多种生物
碱［１］。本研究在建立了小鼠 Ｓ１８０肿瘤多药耐药在
体模型的基础上［２，３］，观察了黄连解毒汤７０％醇提
物对小鼠Ｓ１８０肿瘤细胞多药耐药相关分子生物活
性物质表达或活性的影响，以探讨其干预化疗多药
耐药的作用和作用机制。
１ 材料
１．１ 药品 黄连解毒汤７０％醇提物由本院植化室
杨书斌教授协助制备。制备方法：黄连６ｇ，黄柏６
ｇ，黄芩６ｇ，栀子６ｇ粉碎，７０％乙醇回流提取２次，
每次１５ｈ，４０℃旋转蒸发得干膏５７ｇ，含小檗碱
６０６％，黄芩苷６４３％，栀子苷５４８％，研磨为细粉
配成１％和０５％的混悬液备用；注射用顺铂：山东
齐鲁制药厂产品，批号０１１１１６１１；环磷酰胺：上海华
联制药有限公司产品，批号０３０７０３；５氟尿嘧啶（５
ＦＵ）：天津金耀氨基酸有限公司产品。
１．２ 动物 昆明种小鼠，由山东大学实验动物中心
提供，合格证号：鲁动质字２００２１００２３；小鼠 Ｓ１８０腹
水型瘤种鼠：由山东医科大学药物所药理室提供。
１．３ 试剂 碘化嘧啶 ＰＩ：Ｃ２７Ｈ３４Ｎ４Ｉ２，编号
［２５５３５１６４］，美国Ｓｉｇａｒｍ公司产品，批号２４７０８１
０；ＭＤＲ表达产物 Ｐ１７０（Ｐ糖蛋白，Ｐｇｐ），ＴＯＰＯＩ，
ＬＲＰ，异硫氢酸荧光素（ＦＩＴＣ）标记的单克隆抗体
ＩｇＧ１及免疫阴性对照品ＩｇＧ１ＦＩＴＣ均为美国Ｐｈａｒｍ
ｉｎｇｅｎ公司产品，由北京岳泰生物公司提供。
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第３２卷第１８期
２００７年９月
中 国 中 药 杂 志
ＣｈｉｎａＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭａｔｅｒｉａＭｅｄｉｃａ
Ｖｏｌ．３２，Ｉｓｓｕｅ １８
Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ，２００７