全 文 ：`
l
,国中西医结合杂志 l朔 年 6 少」.互戈19 卷摧础理论研究 i寺生
毛绞股蓝皂试对小鼠脑膜微循环的影响
霍海如 △ 杜力军 于封仁 肖培根
毛绞股蓝皂贰 (哭 )P 是本所化学室首次从毛绞股蓝植物中
提取分离出的有效成分 ,研究发现其皂贰含量 ( 5 . 49 % )高于绞
股蓝 ( 2 . 73 % )川 。 大量的药理实验和临床研究发现绞股蓝皂贰
( G)P 具有广泛的生理活性 `2 一 4 , 本研究观察毛绞股蓝皂贰对小
鼠脑膜微循环的影响 , 并与绞股蓝皂贰作比较 。
材料和方法
l 药物及仪器 毛绞股蓝皂贰和绞股蓝皂贰均为淡黄色
粉末 , 由本所化学室提供 , 临用时 , 用生理盐水配成所需浓度 。
IJ
一
2o 型激光微循环动态分析仪为南开大学产品 。 咪 J 一 1 型
求积仪系哈尔滨光学仪器厂产品 。
2 动物及分组 昆明种小鼠 印 只 ,雌雄各半 ,体重 2 -
26 9
. 购自本院动物所 ,合格证号 :医动字第 01 一 30 2 号 。 将动物
随机分为 4 组 , 即生理盐水对照组 (对照组 ) 、绞股蓝皂贰 50 州
kg组 ( G P 组 ) 、毛绞股蓝皂贰 25 m g/ kg (GS p 小组 )和印 m砂kg ( GS p
大组 )组 。 静脉注射给药体积为 0 . 1而 / 10 9 , 对照组给予同体积
生理盐水。
3 对脑膜血流量的影响 参照文献 ` , .6) 方法 。 取健康昆明
种小鼠 , 腹腔注射水合氯醛 ( 30 111创吨 )麻醉后 ,仰位固定 , 颈部
正中切 口 , 分离双侧颈总动脉 ( CCA ) , 并穿线打活结备用 。 将麻
醉小鼠改为俯卧位固定 ,剪开头部皮肤 ,用手术刀片轻轻刮去颅
骨表面结缔组织 ,使脑膜上的小动脉清晰可见 。 将激光探头固
定于颅骨表面 (大脑皮层运动区 ) 。 测量正常脑膜血流量之后 ,
由尾静脉注射给药 ,记录药物对脑膜血流量的影响之后 ,扎紧
C CA
. 记录脑膜血流量变化 . 再由尾静脉给药 1 次 (剂量同前 ) ,
观察药物对结扎 CC A 所致脑缺血时脑膜血流量的影响 , 分别
按下式计算各项指标 :
血流量升高率 ( % ) 二 (给药后血流量 一 给药前血流址 ) /给
药前血流量 x 10 %
血流量下降率( % ) 二 (结扎前血流量 一 结扎后血流量 ) /结
扎前血流量 x l的 %
血流量下降抑制率 ( % ) = (对照组 下降率 一 给药组下降
率 ) l对照组下降率 x lX() %
4 对红细胞 ( RB )C 运动频率的影响 另取健康昆明种小
鼠 , 手术操作同前 , 记录尾静脉给药前后的 。 〕即le r 图谱各 l 次 ,
观察不同频率带的 BR C 积分值 , 求得曲线下面积 AU (C c时 ) , 按
下式计算给药前后 ACU 比值 :
比值 二 ( 0 一 6 k扭 A UC ) z( 6一 Z k比 A Ue )
5 统计学方法 均数间显著性检验用 t 检验法 )
结 果
1 毛绞股蓝皂贰对正常小鼠脑膜血流量的影响 见表 l。 小鼠
静脉注射毛绞股蓝皂贰后 ,脑膜血流量很快升高 , 2 一俪 n 达高峰。
2 毛绞股蓝皂贰对结扎颈总动脉致全脑缺血小鼠脑膜血
表 1 毛绞股蓝皂贰对小鼠脑膜血流量的影响
组别
对照
G P
SG P (大 )
(小 )
鼠数 剂 量
( n喇kg )
血流量升高率
(%
, 无 士 : )
血流量下降
抑制率 (% )
A UC 比值 ( x 士 , )
给药前 给药后
0.10l 5巧
巧
巧
4
.
30 士 3
.
.
16 土 17
.仅〕 士 17
.
16 士 5 . 8()
16
.
9
24
.
7
2 1
.
5
1
. 砚沁 土 0 . 15
0
.
9 7 土 0
.
15
1
.
02 士 0
.
12
0
.
95 上 0 .的
0
.
9 8 土 0 . 08
0
.月礴 土 0 .的
0
.
42
士 0 . 10
0
.
5 1土 0 . 12
284巧502
注 :与对照组比较 . ’ 尸 < 0 . 01
流量的影响 见表 l 。 结扎 CCA 后 , 脑膜血流量急剧下降。 预
防性给予毛绞股蓝皂贰 ,血流量下降缓慢 (血流图上形成钝角 ) ,
与对照组血流量锐减具有明显区别 , 且血流量下降百分率减少
(尸 < 0 . 05 ) 。 结扎 CCA 后 ,再静脉注射毛绞股蓝皂贰 , 脑膜血流
量未见升高。 结果提示 , 毛绞股蓝皂贰 25 呵kg 和 50 州 kg 可使
正常脑膜血流量升高 ,对急性脑缺血具有保护作用 , 且与等剂量
绞股蓝皂贰作用相当。
3 毛绞股蓝皂成对 R B C 运动频率的影响 见表 l 。 小鼠
静脉注射毛绞股蓝皂贰后 , 可使高频率 BR C 明显增多 , AU C 比
值降低 ( P < 0 . 01 ) 。 结果表明 , 毛绞股蓝皂贰可使 BR C 运动频
率加快 , 与等剂量绞股蓝皂贰作用相当。
讨 论
脑实质的血管可来自软脑膜 , 而且脑实质和软脑膜毛细血
中国协和医科大学 中国医学科学院药用植物研究所 (北京 】O刀并 )
△现在中国中仄研究院中药研究所药理一 室 (北京 l侧” o )
管相互交织成网 。 因此 ,软脑膜微循环变化在一定程度上可反
应脑实质循环的变化(7) 。 本研究表明 ,静脉注射毛绞股蓝皂贰
后 , 正常小鼠脑膜血流量很快明显地升高 ,并且具有量效关系。
预防性给予毛绞股蓝皂贰后 , 可部分拮抗结扎 C以 造成的不完
全性脑缺血 ,提示毛绞股蓝皂贰可提高脑膜血流量 ,提高脑部供
氧及提供能量 ,保护脑缺血性损害。 毛绞股蓝皂贰不仅能扩张
脑膜血管 ,增加脑膜血流量 , 尚可使 BR C运动频率加快 , 这些作
用都有助于改善脑血流循环 ,防止 RB C 的堆积 , 防止血流过缓
而引起的脑栓塞形成 ,为毛绞股蓝皂贰用于防治脑血管性疾病 ,
特别是血管性痴呆提供了药理学依据 。 毛绞股蓝皂贰改善微循
环的作用与纹股蓝皂贰相当 , 可以认为毛绞股蓝皂贰具有 良好
的开发应用前景 。 治疗性给予后 , 尚不足 以使脑膜血流量有所
改善 , 这可能是由于结扎 CCA 造成的脑缺血损伤严重 . 在短时
间内抑制这种缺血 , 毛绞股蓝皂贰尚不具备如此强的效应 毛
绞股蓝皂贰增加脑血流量是直接扩张血管 . 还是通过增强心肌
收缩力 ,进而提高血流灌注压 ,有待进 步研究 。
(本所化学室陈迪华教授 ,常琪 、 矛、瑞绵剐教授提供毛绞股收皂成和
中国中西沃结合杂志 l朔 年 6月第 19 卷从础理论研究特华
绞股蓝皂贰 , 谨表谢意 )
参 考 文 献
1
. 丁树俐 , 朱兆仪 . 绞股蓝及其同属植物的总皂成测定 . 中草药 l卯2 ; 23
( 12 ) : 6 27一 ~ 62 9
.
2
.郭道渊 , 王泉升 .绞股蓝对衰老及其伴生疾病的效应 . 中国老年学杂志
l卯 5 ; 15 ( 2 ) : 125 一 12 7 ,
3
. 肖观莲 , 廖端芳 , 陈剑雄 , 等 .绞股蓝总皂贰对自由基损伤兔主动脉舒
张功能的保护作用 .中国药理学通报 l州 ; 10 ( 2) : 13 6一 13 8 .
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. 魏 石 ,刘礼意 . 郭曦蓉 .绞股蓝总皂成对小鼠血脂及 血液流变性的影
响 . 湖1有以学 l卯 l ; 8 ( 6 ) : 35 8一3 59 .
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.杜力军 , 马丽众 ,砖 狡 , 等 . 二L止血活血机理的研究川不 同剂墩 几
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流量和离体兔主动脉条的作用 .微循环杂志 !如 5 ; 5 ( 3) : 13一 5 .
7
.李仪奎主编 . 中药药理实验方法学 . 1几海 : 卜海科学技术出版社 , !叨 l :
102
.
中药复方更年春对老年雌性大鼠脾细胞雌激素受体
及白细胞介素 2 、 肿瘤坏死因子活性的影响
王文君 俞 瑾 李大金
中药复方更年春 , 原名更年健 ,治疗更年期综合征已取得良
好疗效 ( ’ ) ,且无副作用发现 ,并已证实该药能改善老化机体衰退
的免疫及神经内分泌功能 , 如使绝经妇女辅助性 T 细胞 (侧 )增
加 、及白细胞介素一 2( IL 2) 活性上升川 ,并给老年大鼠灌服该药
后下丘脑 、垂体 、卵巢雌激素受体 ( E )R 水平上升 , 血和下丘脑俘
内啡肤 (卜EP )水平升高 、 P物质水平下降 、 中脑中缝背核内 5 一羚
色胺含量减少 ` , .4) ,为进一步研究更年春对免疫功能的影响是否
与免疫细胞雌激素受体的变化有关 , 以了解更年春对部分神经
内分泌免疫调节网络的影响 ,本研究应用放射配体结合分析法 、
放射免疫法洲n T 法 、细胞毒法观察更年春对老年雌性大鼠(取
巧 、 18 月龄点 )脾细胞 ER 含量 、 血清雌二醇 (玖 )浓度及脾细胞
诱生 几2 活性及肿瘤坏死因子 C州 F )活性的影响 ,并进一步探
讨更年春作用机理 。
材料和方法
1 动物分组和用药 取 3 、 12 、 巧 、 18 月龄雌性 DS 大鼠( 由
上海医科大学实验动物部提供 , 清洁级标准饲养 )随机分为 3
组 ,其中 3 、 12 月龄仅设对照组以测定血 凡 浓度及脾细胞 ER 生
理动态变化 ( 3 月龄者取其动情期 ) ,每组 5 只 ,并分别作以下处
理 : 对照组每天灌服 2耐 生理盐水 ;雌激素组隔天肌肉注射苯甲
酸雌二醇 0 . 05醒 l飞体重` , , ;更年春组每天灌服更年春 2耐 (更
年春方由生地 、 白芍 、 构祀子 、 冤丝子 、 知母 、 黄柏 、 黄连等药组
成 ,由本校药学院制成口服液 ,每毫升含生药 19 ,按成人剂量 /体
重的 加 倍给药 ) 。 各组在处理的第加 天放血处死大鼠 , 血标本
留测 凡 浓度。 取出脾脏 , 一部分叽 干冰速冻 ,液氮保存 ,待测
ER ;另一部分作 压 2 、 NT F诱生 (以 oC nA 作诱生剂 ) , 24 h 后取上
清液 , 一 20 ℃保存 ,待测 nr Z 、 INF 活性 。
2 方法
2
.
1 大鼠脾细胞 ER 测定 采用放射配体结合分析法 (经
基磷灰石吸附分离 ) ~ HAp 法 , 主要参考 C咏 氏法 ( 6) 。 取新鲜冻
存大鼠脾脏 ,去除周围脂肪和结缔组织 ,称重 , 剪碎 , 按 l : 6( 重
量 : 体积 )加入冰冷抽提液 T GM (1 o n 价犯l儿 知 -8 Ha ,州 为 7 . 5 ,
or % lG cy
e
orl
,
3咖犯UML 邪魁, 1 . 5~ 121卫口r A
,
20 mn 犯 UL N灸 M以 ,
1
~
U L MP SF
,
0
.
4om l L K CI )
,高速分散器匀浆 ,匀浆液 于 hl 后
离心 4D 而 n( 4 ℃ , 17 仪刃g ) , 取上清液 , 测定蛋白浓度 , 进行 ’ H一玩
与受体的单点饱和结合分析以比较细胞 ER受体数的多少 。 在
Zo zd 反应体系中 , 加人 以刃才侣 蛋白抽提液及饱和浓度的 ’ H一玛
(巧~ F L
, 饱和浓度根据 亥at hc 词 作图而定 , 据 统at e l幽」作图
Kd : 0
.
36 朋 10 1/ L ; ’ H一乓 为中科院上海原子核所产品 , 放射性 比强
度 73 iC / n加 0 1,放化纯度 > 95 % ) ,测定非特异性结合量另加 2X()
倍, H一残 量的己烯雌酚 , 置 4℃ 1h8 , 再置冰浴 10而 n , 加 印% HAP
0
.
3同 , 置冰浴 巧而 n , 用冰冷洗脱缓冲液抽滤 ,每次 s nU , 共 3 次 ,
烘干膜上羚基磷灰石 ( HA I〕 ) ,放入 5而 闪烁液中 , FJ 一21 05 型液闪
计数仪上计数得 c mP 值 (总结合管 c mP 减去非特异性结合管
c
mP
,得特异结合 c卿 ) , 换算成每毫克蛋白 ( p or )中 E R ofm l 数。
为使实验结果更具可靠性 ,每个标本测定均设 3个复管 。 将同
一样品分成 4 份 , 同时测定 ’ H一凡 的特异结合量 , 平行管间的变
异系数为 6 . 4 % 。
2
.
2 大鼠血清及 浓度测定 由上海市内分泌研究所按放
射免疫法常规方法测定 。 大鼠 玛 放射免疫药盒由世界卫生组
织提供 。
2
.
3 nr Z的活性测定 采用四甲基偶氮哇盐 ( MT r )法 ,参
照 M . ~ 检测法
` , ’改进。 收集生长良好 压 2 依赖性的小鼠 T
杀伤细胞 ( C n J广 2 细胞 , 由中科院上海细胞生物学研究所提
供 ) , 用 川 〕Ml l 6书) 液制成浓度为 1 x l护 /耐 的细胞悬液。 倍比稀
释标准品及待测样品 , 于% 孔平底细胞培养板每孔加 l处 il 上
述细胞悬液 , 另设 4 个对照孔 , 只加 l处 il 细胞悬液和 以为d 培养
液 。 37℃ , 5% e q 培养 36 h ,每孔加 解 r l, 溶液 ( smg/ nlI PBS ) 10 ld ,
震荡 l im n , 37℃孵育 4 h , 各孔加 101 1 酸化异丙醇 ( 0 .以mo ll L
H口 ) , 混匀 , 置数分钟 , 测定 O D 值 ,将待测样品的 OD 值与标准
品 O D值比较后求得待测样品的 I卜 2 活性 。
2
.
4 翎 F 的活性测定 采用细胞毒法 , 参照 K n u几 1犯「检测
法`吕,改进 , 详法参照文献(9) 。
2
.
5 统计学处理 数据处理采用 t 检验及方差分析
结 果
1几海医科大学妇产科医院 (t 几海 20以〕1 1)
l 雌性 SD 大鼠各不同月龄点血清凡 及脾细胞 ER 水平的
比较 见表 l 。 大鼠血清残 及脾细胞 ER 在 3 月龄水平较高 , 12