全 文 ：忍冬组织培养体系的建立和优化
向增旭 t3 o高山林 u
ktq南京农业大学 园艺学院 中药材研究所 o江苏 南京 utss|x~
uq中国药科大学 中药学院 o江苏 南京 utssv{l
≈收稿日期   ussz2su2st
≈通讯作者   3 向增旭 oר¯}ksuxl{wv|yx|to∞2°¤¬¯}½¬¬¬¤±ªƒ
±­¤∏q §¨∏q¦±
金银花是我国常用中药材 o具清热 !解毒 !抗菌
等功效 ≈t  ∀忍冬科植物忍冬 Λονιχερα ϕαπονιχα
׫∏±¥q是中药材金银花的基原植物 o以干燥花蕾入
药 ∀忍冬属药用植物种类很多 ≈u  o已有关于北京忍
冬 ≈v  !灰毡毛忍冬 ≈wox  !金花忍冬 ≈y 组织培养方面的
报道 ∀但经作者重复文献试验 o所报道的金银花组
织培养方案繁殖系数不高或试管苗生长不旺盛 ∀本
研究对 ussx年版药典收载的金银花来源植物忍冬
Λ. ϕαπονιχα进行组织培养的研究 o旨在为进一步采
用生物技术进行多倍体育种作好技术准备 ∀
1 材料与方法
研究材料取自中国药科大学药用植物园内
usst年引种的山东蒙花品系金银花 ∀经中国药科
大学中药学院高山林教授鉴定为忍冬 Λ. ϕαπονιχα∀
2 试验方法
2q1 外植体的灭菌
在田间取长势好的金银花的顶芽和侧芽 o剥去叶
片 o用洗衣粉洗去表面尘土 o自来水冲洗 t «o然后进行
表面灭菌 ∀分别采用升汞 !次氯酸钠及漂白精粉 v种
灭菌剂 o进行不同灭菌剂的消毒效果试验 ∀经过表面
灭菌处理的芽用无菌水冲洗 x次 o剥去外层叶片 o接种
于 …x n…„ u1s °ª# pt nŽ× s1x °ª# pt n Œ„„ s1x
°ª# pt培养基 ∀培养基含蔗糖 s1vh o³‹ x1{∀
2q2 不同外植体愈伤组织的诱导
外植体材料叶片 !茎段 !幼芽 ∀消毒后分别接种
于 …x n …„ u1s °ª# pt n Ž× s1x °ª# pt n Œ„„
s1x °ª# pt的培养基上 ∀
2q3 组织培养技术的优化
2q3q1 金银花丛生芽诱导培养基的优化 实验设计
见表 to三因素三水平正交实验 ∀将金银花愈伤接种
于含蔗糖 vh o³‹ x1{的 …x培养基中 ∀每个处理 ts
瓶 o每瓶 v块愈伤组织 ∀ vs §后测出芽数和生长率 ∀
表 t 丛生芽诱导培养基优化因素水平 °ª# pt
水平
Α Β Χ
…„ Ž× Œ„„
t t1x s1ux s1ux
u u1s s1xs s1xs
v u1x s1zx s1zx
2q3q2 生根培养基的优化 实验设计见表 uo三因
素三水平正交实验 ∀将在繁殖培养基中继代培养
vs §的试管苗 o切成 u ¦°左右的小段 o接种于含
vh o³‹ x1{的附加激素的 tru ≥培养基中 ∀每个
处理 ts瓶 o每瓶 ts节 ∀ us §后测定生根率 ∀
表 u 生根培养基优化激素水平 °ª# pt
水平
Α Β Χ
Œ„„ „…× °°vvv
t s1t s1sx s1u
u s1v s1ts s1w
v s1x s1tx s1y
2q3 培养条件
以上试验的培养条件均为每天光照 ty «o光强
t sss ¬o培养温度 kux ? tl ε ∀
3 结果与分析
3q1 外植体的灭菌消毒
对 x种消毒程序进行了比较 ∀消毒方法和灭菌
效果见表 v∀在选择消毒方案时既要考虑能杀死附
着在植物表面的微生物 o降低污染 o又要尽量降低对
外植体的伤害 ∀综合以上实验结果可以看出 o外植
体用洗衣粉洗去表面灰尘和部分细菌 o流水冲洗 t
«os1th升汞浸泡 z °¬±o无菌水冲洗 w ∗ x次 o是比
较理想的消毒方案 ∀
3q2 不同外植体愈伤组织的诱导
实验结果见表 w∀从表 w中可以看出 o茎 !叶 !
芽诱导形成愈伤组织能力各不相同 o顶芽的脱分化
能力最强 ∀实验结果表明金银花芽和叶片是比较理
想的诱导愈伤组织外植体 ∀
#uyyu#
第 vu卷第 uw期
ussz年 tu月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλοφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯qvuo Œ¶¶∏¨ uw
⁄ ¦¨¨°¥¨ µo ussz
表 v 不同药剂及灭菌方法效果比较 k接种 vs §l
编号 消毒药剂及方法 接种数 污染数 污染率 rh 存活数 存活率 rh
t zxh乙醇 vs ¶n s1th升汞 x °¬± tx s s s s
u s1th升汞 z °¬± tx x vs { xv
v s1th升汞 ts °¬± tx s s x vv
w uh次氯酸钠 w °¬± n s1th升汞 z °¬± tx tu {s v us
x 漂白精粉饱和溶液 ts °¬± tx tx s s s
表 w 金银花不同部位愈伤组织的诱导
外植体 接种量 诱导数 诱导率 rh
茎 us tu yv
叶 us ty {s
芽 us us tss
3q3 丛生芽的诱导
试验结果及数据统计见表 x∀三因素极差分别
为 x1wyou1wyot1|to因素 Αk…„浓度 l的极差最大 o
其水平改变时对试验指标的影响最大 o因此 o因素 „
是要考虑的主要因素 o它的 v个水平所对应的出芽
个数平均值分别为 z1vxotu1{tott1tto以第二水平
所对应的数值 tu1{t为最大 o所以取它的第 u水平
为最好 ~依此 o因素 Β取第 v水平 ~因素 Χ第 t水
平 ∀最好的方案应当是 Αu ΒvΧt ∀筛选出丛生芽诱
导培养基为 …x n …„ u1s °ª# pt n Ž× s1zx °ª#
pt n Œ„„ s1ux °ª# pt ∀
表 x 不同激素配比诱导丛生芽效果
‘²q …„ Ž× Œ„„ 芽数
t t t t x1{v
u t u u {1y|
v t v v z1xw
w u t u tu1vw
x u u v tt1uy
y u v t tw1{x
z v t v {1zz
{ v u t tu1yw
| v v u tt1|v
3q4 生根培养基的优化
表 y可见 o三因素极差分别为 vsoz1toy1yo因
素 ΑkŒ„„浓度 l的极差最大 o说明因素 Α的水平改
变时对生根的影响最大 o它的 v个水平所对应的生
根个数平均值分别为 uv1wowu1xoxv1wo所以取它的
第 v水平为最好 ~依此 o因素 Β取它的第一水平 ~因
素 Χ取它的第 t水平 ∀单个因素对试验指标 k出
芽 l的影响按大小次序来说应当是 ΑkŒ„„浓度 l 
Βk„…×浓度 l  Χk°°vvv浓度 l∀最佳方案是 Αv Βt Χt ∀
即筛选出生根诱导培养基为 tru ≥ n Œ„„ s1x °ª#
pt n „…× s1t °ª# pt n °°vvv s1u °ª# pt ∀
表 y 不同激素配比诱导生根效果
‘²q Œ„„ „…× °°vvv 根数
t t t t vv1s
u t u u ty1w
v t v v ut1s
w u t u xt1u
x u u v v{1w
y u v t v{1s
z v t v wz1{
{ v u t yw1s
| v v u xy1w
4 讨论
关于金银花组织培养的文献报道不多 o且均以
 ≥培养基为基本培养基 ≈tou  ∀作者重复文献的方
法发现 o在  ≥培养上虽然也能不同程度的诱导出
愈伤组织 o但是愈伤的生长状况较差 ∀ …x培养基的
主要特点是铵含量较低 o因铵可能对某些生长物有
抑制生长的作用 ∀作者以 …x培养基作为基本培养
基 o以叶片 !茎段及顶芽做为外植体 o结果诱导出愈
伤组织生长旺盛 o愈伤经过 u至 v次继代培养 o不同
程度的诱导出了丛生芽 o尤其以顶芽做为外植体诱
导丛生芽效果最为理想 ∀但 …„激素质量浓度大于
u1x °ª# pt时 o诱导出的丛生芽有较为严重的玻璃
化现象 o…„减低到 u1s °ª# pt后 o玻璃化现象消
失 o丛生芽生长良好 ∀
≈参考文献  
≈t  王天志 o李永梅 q金银花研究进展 ≈ q华西药学杂志 ousssotx
kwl}u|uq
≈u  石 钺 o石任兵 o陆蕴如 q我国药用金银花资源 !化学成分及药
理研究进展 ≈ q中国中药杂志 ot|||ovwkttl}zuwq
≈v  黄守印 o张 福 o邢路军 o等 q北京忍冬的组织培养试验 ≈ q河
北林业科技 ousswow}vq
≈w  唐效蓉 o李午平 o彭晓锋 q灰毡毛忍冬的组织培养与快速繁殖
≈ q植物生理学通讯 oussxowtkxl}wyuq
≈x  王晓明 o易霭琴 o宋庆安 o等 q灰毡毛忍冬新品种组织培养的无
菌体系建立 ≈ q经济林研究 oussxouvkwl}twq
≈y  李景刚 o孙满枝 q良种金银花的组培快繁技术研究 ≈ q山东林
业科技 ousswoz}vyq
≈责任编辑 张宁宁  
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