全 文 ：复方中成药保济丸的 ＨＰＬＣＤＡＤ指纹图谱研究
王祥红１，谢培山，田润涛１，黄晓丹２，郑荣波２，秦春梅２，余琼希１
（１．珠海科曼中药研究有限公司，广东 珠海 ５１９０８５；
２．广州王老吉药业股份有限公司，广东 广州 ５１０４５０）
［摘要］ 目的：用逆向回溯方式试验研究保济丸高效液相色谱指纹图谱，缩短试验周期，提高工作效率，建立
整体特征的质量评价方法。方法：采用ＨＰＬＣＤＡＤ检测，ＺｏｒｂａｘＳＢＣ１８色谱柱，以乙腈０５％冰醋酸为流动相在３０
℃柱温下进行非线性梯度洗脱，从成品的指纹图谱回溯确认相关的药材在指纹图谱中的归属。结果：建立的高效
液相色谱指纹图谱中可检出４４个特征峰，其中３５个色谱峰分别溯源到葛根、化橘红、厚朴、菊花等１０味药材，２２
个色谱峰可明确化学成分的归属，色谱的整体构建了保济丸的指纹图谱。结论：建立的 ＨＰＬＣＤＡＤ指纹图谱表达
了保济丸可测组分的整体特征，提高了对中药复方制剂质量控制的专属性，在鉴别和评价商品内在质量方面的作
用远大于任选１，２种指标成分测定含量的作用。逆向回溯的研究模式扩展了大复方中药质量研究的思路。
［关键词］ 保济丸；大复方中药制剂；液相色谱；指纹图谱质量评价
［中图分类号］Ｒ２８４．１ ［文献标识码］Ａ ［文章编号］１００１５３０２（２００７）１７１７４８０４
［收稿日期］ ２００６１２１４
［通讯作者］ 谢培山，Ｔｅｌ：（０７５６）６１２０１６８，Ｅｍａｉｌ：ｐｓｘｉｅ１６３＠
１６３．ｃｏｍ
保济丸创自清末１８９６年（光绪二十二年），由
葛根、菊花、厚朴、苍术、广藿香、化橘红、白芷、木香
等１６味中药组成的大复方产品。主要用于胃肠道
功能低下引起的消化不良、胃胀不适，感冒伴有泄
泻、呕吐等症，是广东地区乃至东南亚华人家庭常备
药品之一。本品为传统的小丸剂，现行质量标准及
文献报道［１４］只选择易于鉴别的单味药材进行定性
鉴别或含量测定，难以有效地综合评价复方制剂的
内在质量。作者根据本品为大复方中成药的特点，
尝试用逆向研究的模式，首先将成品当成一个整体，
用实验室模拟样品作为标样，优化色谱条件，用获得
的色谱，逆向回溯与各原料药材的相关性，再进一步
优化微调色谱条件，确定成品中大多数色谱峰的归
属，完善方法学验证数据，建立本品的“参照用”指
纹图谱，以此检测成品及市场商品的指纹图谱，从而
为有效评价成品质量、监控工艺成败、比较剂型优
势、指引老药改造、引领新药开发提供重要参考。作
者主要报道保济丸指纹图谱的实验、构建、解析以及
利用指纹图谱分析和评价商品样品的真伪优劣。
１ 仪器与试药
Ａｇｉｌｅｎｔ１１００Ｓｅｒｉｅｓ高效液相色谱仪（包括四元
梯度泵、在线脱气机、自动进样器、柱温箱、ＤＡＤ检
测器、ＡｇｉｌｅｎｔＣｈｅｍＳｔａｔｉｏｎ化学工作站）。超声清洗
器（３５ｋＨｚ，３６０Ｗ，德国 Ｅｌｍａ公司）。指纹图谱分
析软件：ＣｈｒｏｍａｆｉｎｇｅｒＳｏｌｕｔｉｏｎ２００５（珠海科曼中药
研究有限公司；开发者田润涛）。
甲醇、冰醋酸等均为分析纯（广州化学试剂
厂），乙腈为色谱纯（Ｍｅｒｃｋ），水为超纯水。对照品
原儿 茶 酸 （１１０８０９２００５０３）、绿 原 酸 （１１０７５３
２００２１２）、咖啡酸（１１０８８５２００１０２）、葛根素（０７５２
２００２０９）、柚 皮 苷 （１１０７２２２００３０９）、大 豆 苷 元
（１１１５０２２００４０２）、木犀草素（１１０５２０２００５０４）、欧前
胡素 （１１０８２６２００３０８）、异 欧 前 胡 素 （１１０８２７
２００２０６）、厚 朴 酚 （１１０７２９２００３０９）、和 厚 朴 酚
（１１０７３０２００３０７）、木香烃内酯（１１１５２４２００４０２）、去
氢木香烃内酯（１５２５２００００１）等购自中国药品生物
制品检定所；大豆苷、染料木苷、芹菜素７ＯβＤ葡
萄糖苷、金合欢素７ＯβＤ葡萄糖苷、苍术素等由国
家中医药管理局提供；４，５Ｏ二咖啡酰基奎宁酸
（ＤＣＱ），１，３ＤＣＱ，３，５ＤＣＱ，３，４ＤＣＱ，野漆树苷等
由云南生物谷灯盏花药业医药研究院提供。
２ 方法
２．１ 色谱条件 ＺｏｒｂａｘＳＢＣ１８色谱柱（４６ｍｍ×
２５０ｍｍ，５μｍ）；流动相乙腈０５％冰醋酸水溶液，
非线性梯度洗脱；柱温３０℃；流速１０ｍＬ·ｍｉｎ－１；
检测波长２５０，２８３ｎｍ；记录时间１５０ｍｉｎ。
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２．２ 供试品溶液的制备 通过对１０批以上各原料
药材的指纹图谱分析，选取有代表性的药材，按照处
方混合、粉碎过三号筛，精密称取此样品粉末７５ｇ
（４‰制剂处方量），置三角瓶中，加甲醇５０ｍＬ超声
提取１５ｍｉｎ，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇溶解，并用
甲醇定容１０ｍＬ，摇匀，通过孔径为０４５μｍ的微孔
滤膜，为参照供试品溶液。样品进样量１０μＬ。生
产的成品及市场同类商品的供试品溶液依法制备。
２．３ 对照品溶液的制备 分别精密称取各对照品
适量，加甲醇制成每１ｍＬ含０１ｍｇ的溶液，即得。
３ 结果与分析
３．１ 指纹图谱的方法学验证 实验条件的优化：由
于处方较大，成分复杂，优化的目的是尽量将不同极
性的成分简化在一张色谱图中得到较好的分离，试
验了甲醇乙腈０５％冰醋酸、乙腈０５％冰醋酸、乙
腈０１％磷酸不同梯度下的色谱图，比较了 Ｚｏｒｂａｘ
ＳＢ，Ａｌｔｉｍａ，Ｌｕｎａ，Ｄｉａｍｏｎｓｉｌ，ＹＷＧ等不同牌号的色
谱柱的分离效果，并对检测波长和柱温等参数进行
了优化，最终确定了２．１所述色谱条件。
供试品溶液的制备方法比较了提取方法、提取
时间、提取次数等条件。结果以甲醇超声提取 １５
ｍｉｎ即可达到指纹图谱测定的要求。
精密度试验：取同一份供试品溶液，连续进样６
次，结果直观分析各次进样色谱图完全一致，各共有
峰保留时间及相对峰面积的 ＲＳＤ均低于５％；说明
仪器精密度良好。
稳定性试验：取同一份供试品溶液，在４８ｈ内
不同时间点进行检测，结果直观观察指纹图谱的全
貌无明显变化，各共有峰保留时间及相对峰面积的
ＲＳＤ均低于５％，表明供试品溶液稳在４８ｈ内稳定。
重复性试验：取同一批号的供试品５份，如法检
测，结果直观观察指纹图谱的全貌无明显变化，各共
有峰保留时间及相对峰面积的 ＲＳＤ均低于５％，表
明本品指纹图谱重复性良好。
３．２ 色谱指纹图谱的构建与解析 保济丸参照样品
指纹图谱可检出４４个特征峰，经与化学对照品的色
谱行为比较确认，可确定其中２２个色谱峰所代表的
化合物的名称。为便于分析，将指纹图谱分为Ａ，Ｂ，
Ｃ，Ｄ４个区，Ａ区包含１１个色谱峰（１～１１号），保留
时间范围约为０～３６ｍｉｎ，主要体现方中葛根、菊花、
钩藤的特征；Ｂ区包含１６个色谱峰（１２～２７号），保留
时间范围约为３６～７５ｍｉｎ，主要体现方中化橘红、菊
花和葛根的特征；Ｃ区包含２个特征峰（２８和２９号
峰），保留时间范围约为７５～９５ｍｉｎ，该区以基线略为
凸起、包含众多密集的未达基线分离的色谱峰为特
征；Ｄ区包括１５个色谱峰（３０～４４号），保留时间范
围为９５～１５０ｍｉｎ，主要体现方中厚朴、白芷、木香、苍
术等含挥发性成分药材的特征，见图１。
图１ 保济丸典型指纹图谱（上：２５０ｎｍ，下：２８３ｎｍ）
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３．３ 成品与各原料药材的相关性及特征峰归属 依
照２．２供试品溶液制备方法，分别制备处方中各药材
（按照处方量比例的４‰制剂处方量）供试品溶液，在
保济丸指纹图谱条件下分别测定与成品相应量各药
材的指纹图谱，将获得的成品、药材和相应药材的阴
性色谱以及已知的对照品色谱叠加、对比，从而确认
成品指纹图谱各特征峰的归属。
结果成品指纹图谱中３５个特征峰可以找到明确
归属，葛根、菊花、化橘红、白芷、苍术、木香、厚朴等７
味药材的特征峰无干扰，钩藤、广藿香、薄荷３味药材
的特征也能在保济丸指纹图谱体现（对某些峰有贡
献，但阴性有干扰）。方中天花粉、谷芽、蒺藜、薏苡仁
在该条件下基本检不出特征，处方中的“广东神曲”处
方量很低（７３％），而且本身由６０余味药材制成的
“曲剂”，各成分含量极低而复杂，且与其他药材多有
重复，对成品指纹图谱基本没有专属性贡献（图１）。
３．４ 指纹图谱考察商品保济丸质量 共收集了不同
厂家的市场商品保济丸（包括香港生产的处方基本相
同的“普济丸”）共２８批，按确定的条件分析其指纹
图谱，根据所得指纹图谱的整体特征，可将样品分为
６类，第１类与本文参照图谱比较接近，可认为是质
量较好的商品，此类商品为少数；第２类与第１类接
近，但从积分数据看，保留的有效成分总量较少，质量
稍差，这类样品较多；第３类是普济丸，其主要特点是
厚朴的特征成分厚朴酚与和厚朴酚含量特别高，Ｂ区
的特征峰强度较低是其特点（Ｂ区的特征峰强度较低
是因为普济丸方中使用野菊花，而保济丸方中使用菊
花，菊花药材在Ｂ区的特征较野菊花丰富）；第４类样
品的特征是Ｂ区的特征丰富，在２８３ｎｍ下较参照图
谱可多检出３个强峰，且经色谱峰归属研究发现该３
个峰是各处方药材中均不含有的成分，推测可能有处
方外的药材成分；第５类样品指纹图谱的特点是Ｂ区
与第四类相同，Ｄ区特征峰强度较少，厚朴酚与和厚
朴酚及苍术的特征峰含量低，甚至未能检出，第４类
和第５类样品均属异常样品，在所测定样品也占少
数；第６类样品仅一批市场商品标示为香港产的“普
济丸”，但指纹图谱显示与正常样品明显不同，如菊
花、化橘红、厚朴、白芷、木香、苍术等药材的特征均未
能检出，因此该批样品应属假冒伪劣产品（图２）。
相似度分析，以参照用指纹图谱为准，其他样品
图２ 不同类型保济丸样品指纹图谱（２８３ｎｍ，示不同产品的质量差异）
与之相比，夹角余弦计算，第１类样品的相似度大于
０９５，第２类样的相似度差异较大，在０４１～０９５，第
３类样品的相似度约为０５，第四类和第五类样品相
似度约为０２５，第６类样品相似度仅为０１３。从指纹
图谱的表达可见目前不同厂家生产的商品保济丸的
指纹图谱的差异很大，提示内在质量的不一致。
４ 结论与讨论
保济丸处方复杂，在一个波长下难以体现所有成
分的特征。利用 ＤＡＤ检测数据，对２５０～４００ｎｍ波
段的指纹图谱进行分析（由于流动相中使用冰醋酸，
２５０ｎｍ波长以下梯度洗脱时基线漂移，未加分析），
结合色谱峰个数和峰强度综合考察。结果在２５０ｎｍ
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下，葛根素、木香烃内酯、去氢木香内酯、欧前胡素及
异欧前胡的峰强度较大，而在２８３ｎｍ下的色谱图中
木香烃内酯、去氢木香内酯不能检出，但柚皮苷等峰
强度较高，二者结合，可以比较完整地体现保济丸的
指纹图谱特征，故选择２５０ｎｍ和２８３ｎｍ作为指纹图
谱的检测波长。
需要指出的是，本实验所用指纹图谱的记录时间
较长，色谱图的重现性是一个不可忽视的问题，但本
课题从条件的确定至结题，前后大约经历一年时间，
期间曾使用过不同的仪器，同一型号的不同色谱柱，
如果完全按正文条件进行测定，其重现性结果满意。
对大复方多药味中药制剂的色谱指纹图谱研究，
按照正向思维从每１味药材起始试验将耗费大量时
间和精力，作者以保济丸为例，采取“逆向思维”的设
计思路，从成品制剂起始向前追溯相关药材的指认，
在经优化后的ＨＰＬＣ指纹图谱中可检出成品指纹图
谱中４４个特征峰，３５个特征峰可以明确相应的药材
归属，并用对照品鉴定出２３个化合物，明显缩短了试
验周期，提高了效率。建立的指纹图谱专属性强，重
现性好，可有效地鉴别和评价商品保济丸的真伪和质
量优劣，优质的保济丸可以利用指纹图谱显示产品质
量稳定和批间产品质量的一致，增强市场竞争力。
［参考文献］
［１］ 张 柳，罗干明，霍永昌．高效液相色谱法测定保济丸中厚朴酚
和和厚朴酚的含量［Ｊ］．中国药业，２００３，１２（１０）：３７．
［２］ 杨定乔，姚春风，曾和平，等．高效液相色谱法（ＨＰＬＣ）测定中成
药保济丸中木香挥发油的含量［Ｊ］．华南师范大学学报（自然科
学版），２００２，２：２２．
［３］ 曾和平，陈泽宇，曾 志，等．中成药保济丸中葛根素含量分析
［Ｊ］．华南师范大学学报（自然科学版），２００２，２：９０．
［４］ 中国药典［Ｓ］．一部．２００５：５３８．
ＳｔｕｄｙｏｆＨＰＬＣＤＡＤｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔｏｎｃｏｍｐｌｅｘｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅｍｅｄｉｃｉｎｅ
ｐｒｏｐｒｉｅｔａｒｙｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎＢａｏｊｉｐｉｌｓ
ＷＡＮＧＸｉａｎｇｈｏｎｇ１，ＸＩＥＰｅｉｓｈａｎ１，ＴＩＡＮＲｕｎｔａｏ１，ＨＵＡＮＧＸｉａｏｄａｎ２，ＺＨＥＮＧＲｏｎｇｂｏ２，ＱＩＮＣｈｕｎｍｅｉ２，ＹＵＱｉｏｎｇｘｉ１
（１．ＺｈｕｈａｉＣｈｒｏｍａｐＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＨｅｒｂａｌＭｅｄｉｃｉｎｅＲｅｓｅａｒｃｈ，Ｚｈｕｈａｉ５１９０８５，Ｃｈｉｎａ；
２．ＧｕａｎｇｚｈｏｕＷａｎｇｌａｏｊｉＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＣｏ．Ｌｔｄ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ５１０４５０，Ｃｈｉｎａ）
［Ａｂｓｔｒａｃｔ］ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｂａｓｅｄｏｎ‘Ｂａｃｋｔｒａｃｋｉｎｇ’ｍｅｔｈｏｄ，ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎａｎｄｑｕａｌｉｔｙｅｖａｌｕａｔｉｏｎｏｆｃｏｍｐｌｅｘｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅ
ｍｅｄｉｃｉｎｅ（ＴＣＭ）ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎｏｆＢａｏｊｉｐｉｌｓ（ＢＪＰ）ｗｅｒｅｃａｒｉｅｄｏｕｔｂｙＨＰＬＣｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔａｎａｌｙｓｉｓ．Ｍｅｔｈｏｄ：ＨＰＬＣＤＡＤｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔｏｆＢＪＰ
ｗａｓｃｏｎｄｕｃｔｅｄｗｉｔｈＺｏｒｂａｘＳＢＣ１８ｃｏｌｕｍｎａｎｄｎｏｎｌｉｎｅａｒｅｌｕｔｉｏｎｗｉｔｈｔｈｅｍｏｂｉｌｅｐｈａｓｅｃｏｎｓｉｓｔｅｄｏｆａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅ０．５％ ｇｌａｃｉａｌａｃｅｔｉｃａｃｉｄ
ａｔｃｏｌｕｍｎｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ３０℃ ａｎｄｄｅｔｅｃｔｉｖｅｗａｖｅｌｅｎｇｔｈｓｏｆ２５０ｎｍａｎｄ２８３ｎｍ．ＦｒｏｍｔｈｅｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｉｃｐａｔｅｒｎｏｆＢＪＰ，
ｔｒａｃｋｂａｃｋｗａｒｄｔｏｔｈｅｃｏｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇｃｒｕｄｅｈｅｒｂａｌｄｒｕｇｓｉｎｔｈｅｆｏｒｍｕｌａ，ａｔｒｉｂｕｔｉｏｎｏｆｍｏｓｔｐｅａｋｓｉｎｔｈｅＢＪＰｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔｃａｎｂｅｄｉｓｃｌｏｓｅｄ．
Ｒｅｓｕｌｔ：ＴｈｅＢＪＰＨＰＬＣｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔｃｏｎｓｉｓｔｅｄｏｆ４４ｐｅａｋｓａｍｏｎｇｗｈｉｃｈ３５ｐｅａｋｓｗｅｒｅａｓｓｉｇｎｅｄｂｙｐａｒａｌｅｌｃｏｍｐａｒｉｓｏｎｗｉｔｈｔｈｅｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔ
ｏｆｔｈｅ１０ｃｏｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇｃｒｕｄｅｄｒｕｇｓｉｎｔｈｅｆｏｒｍｕｌａｓｕｃｈａｓｐｕｅｒａｒｉａ，ｐｕｍｍｅｌｏｐｅｅｌ，ａｎｄｍａｇｎｏｌｉａｂａｒｋ，ｅｔｃ．ａｎｄ２２ｐｅａｋｓｗｅｒｅｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ
ｂｙｃｏｍｐａｒｉｓｏｎｗｉｔｈｔｈｅｃｈｅｍｉｃａｌｒｅｆｅｒｅｎｃｅｓｕｂｓｔａｎｃｅｓ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：ＴｈｅｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄＨＰＬＣｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔｒｅｐｒｅｓｅｎｔｓｔｈｅｗｈｏｌｅｃｈａｒａｃｔｅｒｏｆ
ＢＪＰ，ｗｈｉｃｈｅｎｈａｎｃｅｄｔｈｅｓｐｅｃｉａｌｔｙｆｏｒｃｏｎｔｒｏｌａｎｄａｓｓｅｓｓｍｅｎｔｏｆｔｈｅｐｒｏｄｕｃｔｑｕａｌｉｔｙ．Ｉｔｅｘｅｍｐｌｉｆｉｅｄｍｕｃｈｍｏｒｅｅｆｅｃｔｉｖｅｆｏｒｑｕａｌｉｔｙｃｏｎｔｒｏｌ
ｔｈａｎｓｅｌｅｃｔｉｎｇａｎｙｍａｒｋｅｒｆｏｒｑｕａｌｉｔａｔｉｖｅｏｒｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅｔｅｓｔｉｎｇｔａｒｇｅｔ．ＡｎｄｔｈｅＢａｃｋｔｒａｃｋｉｎｇ’ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌｍｅｔｈｏｄｅｘｔｅｎｄｅｄｔｈｅｓｔｕｄｙ
ｍｅｎｔａｌｉｔｙｆｏｒｃｏｍｐｌｅｘｆｏｒｍｕｌａＴＣＭｐｒｏｄｕｃｔｓｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｉｃｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔｉｎｇａｎａｌｙｓｉｓ．
［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］ ＢａｏｊｉＰｉｌｓ（ＢＪＰ）；ｃｏｍｐｌｅｘｆｏｒｍｕｌａＴＣＭｐｒｏｐｒｉｅｔａｒｙｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ；ＨＰＬＣｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔａｎａｌｙｓｉｓ
［责任编辑 鲍 雷］
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