全 文 ：利用基因芯片分析二氢青蒿素的抗肿瘤作用机制
姚 丽，谢 红，靳秋月，呼文亮，陈立军
（中国人民武装警察部队医学院 生物化学教研室，天津 ３００１６２）
［摘要］ 目的：通过基因芯片对二氢青蒿素处理的 Ｋ５６２细胞基因表达情况的检测，探讨二氢青蒿素抑制
Ｋ５６２增殖的作用机制。方法：配制１×１０－５，４×１０－５，１６×１０－５，６４×１０－５，２５６×１０－５ｍｏｌ·Ｌ－１二氢青蒿素处理
Ｋ５６２细胞２４ｈ，倒置光显微镜和荧光显微镜观察细胞变化，流式细胞仪检测细胞周期，提取总 ＲＮＡ，逆转录成
ｃＤＮＡ与基因芯片杂交，扫描仪检测杂交结果。结果：倒置光显微镜下细胞出现不同程度的皱缩，核分裂相减少，细
胞密度下降。荧光显微镜下染色质高度浓缩、边缘化，凝聚成明亮的团块，即凋亡小体。流式细胞仪Ｇ２期细胞的比
例增加。扫描杂交结果显示有 １３条基因表达有差异，其中 ｃｈｋ１表达上调，ＰＣＮＡ，ｃｙｃｌｉｎＢ１，ｃｙｃｌｉｎＤ１，ｃｙｃｌｉｎＥ１，
ｃｄｋ４，ｃｄｋ２，Ｅ２Ｆ１，ＤＮＡＰＫ，ＤＮＡＴｏｐｏⅠ，ｍｃｌ１，ｊＮＫ，ＶＥＧＦ表达下调。结论：二氢青蒿素可以抑制Ｋ５６２细胞增殖，
作用机制与改变细胞周期某些调控物质的基因表达、诱导Ｋ５６２细胞凋亡等有关。
［关键词］ 基因芯片；二氢青蒿素；细胞周期；细胞凋亡
［中图分类号］Ｒ２８５．５ ［文献标识码］Ａ ［文章编号］１００１５３０２（２００８）１３１５８３０４
［收稿日期］ ２００７０７２０
［基金项目］ 天津市科委课题项目（０５ＹＦＪＭＪＣ０８２００）
［通讯作者］ 陈立军，Ｔｅｌ：（０２２）６０５７８０７６，Ｅｍａｉｌ：ｃｈｅｎｌｉｊｕｎ６７＠
ｅｙｏｕ．ｃｏｍ
二氢青蒿素（ｄｉｈｙｄｒｏａｒｔｅｍｉｓｉｎｉｎ，ＤＨＡ）是青蒿素
（ａｒｔｅｍｉｓｉｎｉｎ）重要的衍生物之一，是目前常用的抗疟
特效药。研究发现二氢青蒿素还具有抗肿瘤活
性［１，２］，可以抑制人的卵巢癌细胞、喉癌细胞、乳腺癌
细胞和肺癌等细胞的生长。作者在前期研究中发现，
二氢青蒿素对 Ｋ５６２细胞生长具有明显的抑制作
用［３］。本研究拟利用基因芯片技术，从基因水平探讨
二氢青蒿素抑制肿瘤细胞周期作用的分子机制。
１ 材料
１．１ 细胞及细胞培养
人红白血病细胞株Ｋ５６２细胞培养于含１０％胎
牛血清、８０Ｕ·Ｌ－１庆大霉素的 ＲＰＭＩ１６４０（ｐＨ
７０）培养基中，３７℃，５％ＣＯ２恒温培养箱中孵育。
试验选取对数生长期的细胞。
１．２ 药物
二氢青蒿素购自四川维康植化有限公司，批号
０５０４１７，纯度９９８％。
１．３ 仪器 二氧化碳培养箱（Ｆｏｒｍａ），倒置相差显微
镜（Ｏｌｙｍｐｕｓ），ＵＮＯＴｈｅｒｍｏｂｌｏｃｋ（Ｂｉｏｍｅｔｒａ），核酸定
量 仪 （ＢＩＯＣＨＲＯ），ＳｐｏｔＡｒａｙＡＳＰ７２０１点 样 仪
（ＰｅｒＫｉｎＥｌｍｅｒ），ＧｅｎｅＰｉｘ４１００Ａ扫描仪（Ａｘｏｎ），ＣＬ－
１０００Ｍ紫外交联仪（ＵＶＰ），ＨＢ－１０００杂交炉（ＵＶＰ）。
２ 方法
２．１ 二氢青蒿素处理Ｋ５６２细胞
配制二氢青蒿素浓度分别为 １×１０－５，４×
１０－５，１６×１０－５，６４×１０－５，２５６×１０－５ｍｏｌ·Ｌ－１。调
整细胞数为１×１０５个／ｍＬ，加入以上药物０５ｍＬ。
其终浓度为１×１０－６，４×１０－６，１６×１０－６，６４×１０－６，
２５６×１０－６ｍｏｌ·Ｌ－１。再把细胞放于３７℃，５％ＣＯ２
培养箱中孵育。分正常对照组和二氢青蒿素组，每
组设平行瓶。
２．２ 细胞形态学观察
二氢青蒿素处理的各瓶细胞置于３７℃，５％ＣＯ２培
养箱中孵育２４ｈ后，倒置光显微镜下观察细胞形态变
化。每个标本收集细胞后用Ｈｏｅｃｈｓｔ３３３４２／ＰＩ双荧光
染色，荧光显微镜观察Ｋ５６２细胞变化。
２．３ 流式细胞仪检测细胞周期变化
收集细胞，预冷的无水乙醇固定细胞，－２０℃
储存，固定的细胞用ＰＢＳ洗１次，加入 ＰＩ终浓度２０
ｍｇ·Ｌ－１和 ＲｎａｓｅＡ终浓度５０ｍｇ·Ｌ－１，３７℃避光
染色３０ｍｉｎ，流式细胞仪进行检测。
２．４ 总ＲＮＡ提取及质控
２．４．１ ＴＲＩｚｏｌ提取总ＲＮＡ 药物作用２４ｈ后分别
收集细胞到离心管中，依次用 ＴＲＩｚｏｌ、氯仿、异丙醇、
７５％乙醇处理后得到总 ＲＮＡ沉淀，加无 ＲＮＡ酶水
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２０μＬ溶解ＲＮＡ沉淀，置于－８０℃保存备用。
２．４．２ 纯化、质控总 ＲＮＡ 总 ＲＮＡ用纯化柱后，
核酸定量仪测定总 ＲＮＡ的浓度和吸光度（Ａ２６０／
Ａ２８０）；变性胶电泳质检总ＲＮＡ。
２．５ 生成ｃＤＮＡ
总ＲＮＡ反转录生成 ｃＤＮＡ，同时直接标记，然
后用纯化柱纯化。
２．６ 构建基因芯片
在ＧｅｎｅＢａｎｋ中查找选取基因的ｍＲＮＡ序列，用
探针合成软件处理这些序列，利用Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｂｌａｓｔ数
据库，从中找出符合探针条件的ｍＲＮＡ序列，用Ｏｌｉｇｏ
６０设计探针。奥科生物有限公司合成探针。探针
溶解与定量后，将探针置于点样仪中，点制芯片。
２．７ 杂交
先预杂交，然后将 ｃＤＮＡ于６５℃烘干，加入１８
μＬ杂交液溶解，混匀，将与芯片一起放入杂交舱中，
４２℃杂交 １６ｈ。取出芯片，放入洗液 Ａ中洗涤 ３
ｍｉｎ，然后放入洗液 Ｂ中洗涤３ｍｉｎ，放入洗液 Ｃ中
洗涤１５ｍｉｎ。自然晾干。芯片放入Ｇｅｎｅｐｉｘ４１００Ａ
扫描仪中，用５３２ｎｍ波长进行扫描。所得图像用
ＧｅｎｅｐｉｘＰｒｏ６０进行数据分析，计算每个探针点的
信号值。根据内参照基因的信号值，对各个杂交阵
进行数据归一化处理。根据归一化的结果，计算出
各个基因的差异表达情况。
３ 结果
３．１ 倒置光显微镜观察Ｋ５６２细胞形态学变化
对照组细胞为悬浮生长类型，胞体圆形，细胞核
居中，细胞膜完整，折光性强，可见大量分裂相。二
氢青蒿素处理的 Ｋ５６２细胞出现不同程度的皱缩，
核分裂相减少，细胞密度下降，漂浮细胞增多，细胞
膜完整但出现发泡现象，细胞内可见多个折光性较
强的圆形小泡样结构和细胞出芽样改变。见图１。
图１ 倒置光显微镜观察Ｋ５６２细胞形态变化（×２００）
Ａ对照组；Ｂ６４×１０－６ｍｏｌ·Ｌ－１二氢青蒿素处理组
３．２ 荧光显微镜观察Ｋ５６２细胞
正常活细胞被染成蓝色，胞膜完整，细胞核结构
正常；死亡的细胞被染成红色，细胞核结构正常；凋
亡细胞被染成蓝色，染色质高度浓缩、边缘化，凝集
成明亮的团块，即凋亡小体。部分细胞形态不规则，
细胞变小，并有核碎裂现象；一些细胞被染成红色，
但可见明显的染色质凝集，即凋亡后继发死亡的细
胞。对照组大部分细胞被染成蓝色，细胞核结构正
常，二氢青蒿素处理的 Ｋ５６２细胞出现明显的细胞
凋亡和死亡细胞。见图２。
图２ 荧光显微镜观察Ｋ５６２细胞形态变化（×２００）
Ａ对照组；Ｂ６４×１０－６ｍｏｌ·Ｌ－１二氢青蒿素处理组
３．３ 流式细胞仪检测结果
１６×１０－６ｍｏｌ·Ｌ－１二氢青蒿素处理的 Ｋ５６２细
胞２４ｈ后的细胞周期分布：Ｇ１２２９７％，Ｓ６２１％，
Ｇ２１５０％；对照组的细胞周期分布：Ｇ１２４９％，Ｓ
７１０％，Ｇ２４１％。经二氢青蒿素处理的 Ｋ５６２细胞
的Ｇ２期细胞数量增多。
３．４ ＴＲＩｚｏｌ试剂提取总ＲＮＡ质控
用紫外分光光度计检测ＲＮＡ的含量（表１），均达
到实验要求，测定ＲＮＡ在２６０ｎｍ和２８０ｎｍ处的Ａ值，
Ａ２６０／Ａ２８０都在１９～２１，纯度较高，基本上没有蛋白质
和ＤＮＡ的污染。电泳分析总ＲＮＡ的完整性，电泳图
上可见清楚的２８Ｓ和１８Ｓ条带，且２８Ｓ∶１８Ｓ大约为２∶１，
表明提取的总ＲＮＡ质量较好。见图３。
表１ 不同浓度二氢青蒿素处理细胞后提取的
总ＲＮＡ的浓度和纯度
二氢青蒿素／ｍｏｌ·Ｌ－１ 总ＲＮＡ／ｇ·Ｌ－１ Ａ２６０／Ａ２８０
１×１０－６ ２３３３０４ ２０１
４×１０－６ １１８３９８ １９３
１６×１０－６ ２９７９７８ １９８
６４×１０－６ ２３４８７６ １９９
２５６×１０－６ １９６７６４ １９９
对照 １１３５９８ １９７
３．５ 构建基因芯片
找到可能与二氢青蒿素抑制肿瘤细胞周期有关
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图３ 不同浓度二氢青蒿素处理细胞后提取的
总ＲＮＡ电泳结果
１．１×１０－６ｍｏｌ·Ｌ－１二氢青蒿素；２．４×１０－６ｍｏｌ·Ｌ－１二氢青
蒿素；３．１６×１０－６ｍｏｌ·Ｌ－１二氢青蒿素；４．６４×１０－６ｍｏｌ·Ｌ－１二
氢青蒿素；５．２５６×１０－６ｍｏｌ·Ｌ－１二氢青蒿素；６．对照组
的基因１６个：ＰＣＮＡ，ｃｙｃｌｉｎＡ１，ｃｙｃｌｉｎＢ１，ｃｙｃｌｉｎＣ，ｃｙ
ｃｌｉｎＤ１，ｃｙｃｌｉｎＤ１，ｃｙｃｌｉｎＥ１，ｃｙｃｌｉｎＧ１，ｃｄｋ４，ｃｄｋ２，
ｃｄｃ２，ｐ１６，ｐ２１，ｐ５３，Ｅ２Ｆ１，ｃｈｋ１，ｃｈｋ２；其他基因 １９
个：参与 ＤＮＡ损伤修复的主要基因：ａｔｍ，ＤＮＡＰＫ，
ＤＮＡＴｏｐｏⅠ，ｈＴＥＲＴ；与细胞凋亡主要相关基因：
ｂｃｌ２，ｔｒａｉｌ，ｍｃｌ１，ｂａｘ，ｂａｋ１，ｂｒｃａ１，ｃａｓｐａｓｅ３；参与信
号转导的主要基因：ｅｒｋ，ｊｎｋ，ｐ３８，ｃｄｃ２５Ａ，ｆｇｄ１，ｒａｃ；
与血管生成相关的主要基因：ｖｅｇｆ；管家基因β
ａｃｔｉｎ。Ｇｅｎｅｂａｎｋ中找出其 ｍＲＮＡ序列，利用 Ｎｕｃｌｅ
ｏｔｉｄｅｂｌａｓｔ数据库，从中找出符合探针条件的 ｍＲＮＡ
序列，用软件Ｏｌｉｇｏ６０设计探针。
３．６ 基因芯片的检测结果
３．６．１ 基因芯片的检测特异性与均一性测定结果
从样品中任选一个总 ＲＮＡ，按标准的操作流程，
重复转录标记、杂交２次，结果显示阳性对照和定位
基因荧光强度均较高，说明均一性较好，阴性对照均
无明显信号，说明特异性较好。
３．６．２ 相关基因芯片的检测重复性的比较 从样
品中任选一个总 ＲＮＡ，按标准的操作流程，重复转
录标记、杂交２次，计算２次杂交结果的相关度。相
关度为０９８７１，结果稳定可靠，重复性较好，已达到
芯片分析的要求。
３．６．３ 差异表达基因的检测 用 βａｃｔｉｎ作为管家
基因对结果扫描后的信号值进行了归一化处理，并
确定同对照信号值比值大于２０或小于０５作为差
异的标准，据此标准，统计药物作用后上调和下调的
基因共１３个。见表２。
４ 讨论
表２ 不同浓度二氢青蒿素处理细胞后表达有变化的基因
二氢青蒿素／ｍｏｌ·Ｌ－１ 下调基因 上调基因
１×１０－６ ＰＣＮＡ（０３４４），ｃｄｋ４（０３８９），ｃｄｋ２（０４５４），ＤＮＡＰＫ（０２６８），ＤＮＡＴｏｐｏＩ（０４３８），ｍｃｌ１（０３９４）
４×１０－６ ｃｙｃｌｉｎＤ１（００６２），ｃｙｃｌｉｎＢ１（０３７２），ｃｄｋ４（０４６９），Ｅ２Ｆ１（０４１１），ＶＥＧＦ（０２３５），ｍｃｌ１（０３１５），
ｊＮＫ（０２０９）
１６×１０－６ ｐｃｎａ（０３３７），ｃｙｃｌｉｎＢ１（０４５３），ｃｙｃｌｉｎＥ１（０４８５），ＤＮＡＰＫ（０３９５），ＥＧＦ（０４９１） ｃｈｋ１（２２１７）
６４×１０－６ ｃｙｃｌｉｎＤ１（０３０６），ＶＥＧＦ（０２５５）
２５６×１０－６ ｃｙｃｌｉｎＢ１（０３９４）
基因芯片又称ＤＮＡ微阵列、ＤＮＡ芯片，通过微
加工技术和微电子技术在固体芯片表面构建成的微
型生物化学分析系统，能够检测基因的丰度来确定
基因的表达模式和表达水平。基因芯片在研究基因
差异表达上与传统方法相比具有无法比拟的优
势［４，５］。本实验中，根据文献选择与二氢青蒿素的
抑癌作用机制密切相关的五类３４个基因，设计、合
成寡核苷酸探针，点制基因芯片，利用该芯片检测经
二氢青蒿素处理的 Ｋ５６２细胞的细胞周期、ＤＮＡ损
伤与修复、细胞凋亡、信号转导和血管生成等基因表
达变化，分析二氢青蒿素抗肿瘤作用的可能机制。
很多研究发现了二氢青蒿素的抗肿瘤作用，林
芳等人发现二氢青蒿素对人乳腺癌 ＭＣＦ７细胞也
有很强的抑制作用［６］。陈卫强等人研究发现二氢
青蒿素对人肺癌细胞也有明显抑制作用，且有剂量
依赖效应［７］。本试验中，Ｋ５６２细胞经二氢青蒿素处
理２４ｈ后，细胞生长受到抑制。荧光显微镜下可见
明显的凋亡小体，芯片检测时发现 ｍｃｌ１基因表达
下调，而ｍｃｌ１基因编码的蛋白具有抗凋亡作用，其
表达下表，可能会引起相应蛋白产物的相对减少，促
进了细胞凋亡。说明二氢青蒿素可以通过诱导
Ｋ５６２细胞凋亡而抑制其增殖。
实验中荧光显微镜下除可见明显细胞凋亡，还有
大量死亡细胞，而且通过流式细胞仪的检测，发现处
在Ｇ２期细胞的比例增加。芯片检测时发现与细胞周
期相关基因有很多表达发生变化，如：ｃｙｃｌｉｎＢ１，ｃｙ
ｃｌｉｎＤ１，ｃｙｃｌｉｎＥ１，ｃｄｋ４，ｃｄｋ２，Ｅ２Ｆ１，ＰＣＮＡ表达下调，
ｃｈｋ１表达上调。ＣｙｃｌｉｎＢ１是 Ｇ２／Ｍ期的重要调控因
素，如果ｃｙｃｌｉｎＢ１下调，其蛋白的表达量可能减少，不
足够与Ｃｄｃ２结合形成ＭＰＦ（ｍａｔｕｒａｔｉｏｎｐｒｏｍｏｔｉｎｇｆａｃ
ｔｏｒ，成熟促进因子），而ＭＰＦ是驱动细胞从Ｇ２期向Ｍ
期运行的重要因素。因为二氢青蒿素的作用，间接使
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ＭＰＦ的生成量减少，所以肿瘤细胞表现出Ｇ２期向Ｍ
期运行受抑制。ｃｙｃｌｉｎＤ１和ＣＤＫ４表达下调，影响了
ＣｙｃｌｉｎＤ１蛋白与 ＣＤＫ４或 ＣＤＫ６的结合。ＣｙｃｌｉｎＤ１
ＣＤＫ４／ＣＤＫ６复合物可磷酸化 Ｒｂ蛋白，使其失去抑
制活性。如果该复合物形成减少则影响了肿瘤细胞
周期的转换。ｃｙｃｌｉｎＥ１和ｃｄｋ２表达下调，抑制了Ｃｙ
ｃｌｉｎＥ１蛋白与ＣＤＫ２蛋白的结合，影响了肿瘤细胞的
Ｇ１／Ｓ期的转换，出现了细胞周期运行受抑制。Ｃｈｋ１
（Ｃｈｅｃｋｐｏｉｎｔｋｉｎａｓｅ１）表达上调，促进 Ｃｈｋ１引起
ＣＤＣ２５的Ｓｅｒ２１６磷酸化，通过抑制 ＣＤＣ２５的活性，抑
制Ｍ期ＣＤＫ的活性，使细胞周期中断。因此推断，二
氢青蒿素可能是通过综合调控这些细胞周期相关基
因的表达来阻滞Ｋ５６２细胞周期正常运行的，从而表
现出对肿瘤细胞生长的抑制。
本实验中还发现 ＤＮＡＰＫ，ｊＮＫ，ＶＥＧＦ表达下
调，说明二氢青蒿素可能通过影响这些基因的表达
来抑制Ｋ５６２细胞的增殖。如 ＤＮＡＰＫ表达下调影
响了 ＤＳＢｓ修复，进而激活细胞周期阻滞机制或发
出细胞死亡信号，从而抑制肿瘤生长。ＶＥＧＦ表达
下调，其蛋白产物不能与内皮细胞跨膜酪氨酸激酶
特异受体ＫＤＲ／ＦＩＫ１充分相互作用，抑制了血管内
皮细胞有丝分裂，降低了血管通透性，使肿瘤细胞得
不到充分的营养，表现出生长受到抑制。
利用基因芯片分析二氢青蒿素抗肿瘤作用机
制，发现该药物可以调节很多与细胞增殖、细胞周
期、细胞凋亡、血管生成密切相关的基因的表达，这
很可能就是二氢青蒿素可以抑制肿瘤生长的重要原
因。但是由于二氢青蒿素作用的复杂性，很多具体
作用机制还需进一步研究。
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ＹＡＯＬｉ，ＸＩＥＨｏｎｇ，ＪＩＮＱｉｕｙｕｅ，ＨＵＷｅｎｌｉａｎｇ，ＣＨＥＮＬｉｊｕｎ
（ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＢｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，ＭｅｄｉｃａｌＣｏｌｅｇｅｏｆｔｈｅＣｈｉｎｅｓｅＰｅｏｐｌｅ＇ｓＡｒｍｅｄＰｏｌｉｃｅＦｏｒｃｅｓ，Ｔｉａｎｊｉｎ３００１６２，Ｃｈｉｎａ）
［Ａｂｓｔｒａｃｔ］ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：ＴｏｕｎｄｅｒｓｔａｎｄｔｈｅａｃｔｉｏｎｍｅｃｈａｎｉｓｍｓｏｆａｒｔｅｓｕｎａｔｅｏｎｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇｌｅｕｋａｅｍｉａｃｅｌｌｉｎｅＫ５６２ｏｎｔｈｅｍｏｌｅｃ
ｕｌａｒｌｅｖｅｌ．Ｍｅｔｈｏｄ：ＴｈｅｇｅｎｅｃｈｉｐｗａｓｕｓｅｄｔｏｄｅｔｅｃｔｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｐａｎｅｌｏｆｇｅｎｅｓｏｆｌｅｕｋａｅｍｉａｃｅｌｌｉｎｅＫ５６２ｔｒｅａｔｅｄｂｙｄｉｈｙｄｒｏａｒｔｅ
ｍｉｓｉｎｉｎ．Ｋ５６２ｃｅｌｓｗｅｒｅｔｒｅａｔｅｄｗｉｔｈ１×１０－５，４×１０－５，１６×１０－５，６４×１０－５，２５６×１０－５ｍｏｌ·Ｌ－１ｄｉｈｙｄｒｏａｒｔｅｍｉｓｉｎｉｎｆｏｒ２４ｈ，
ａｎｄｔｈｅｎｓｔｕｄｉｅｄｔｈｅｍｏｄａｌｉｔｙｃｈａｎｇｅｓｂｙｉｎｖｅｒｔｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ．ＴｈｅｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌｃｈａｎｇｅｓｏｆｔｈｅｎｕｃｌｅｏｎｓｗｅｒｅｏｂｓｅｒｖｅｄｂｙＨｏ
ｅｃｈｓｔ３３３４２／ＰＩｓｔａｉｎｉｎｇ．Ｔｈｅｃｅｌｃｙｃｌｅｗｅｒｅｅｘａｍｉｎｅｄｂｙｆｌｏｗｃｙｔｏｍｅｔｒｙａｎａｌｙｓｉｓ（ＦＣＭ）．ＴｏｔａｌＲＮＡｓａｍｐｌｅｓｗｅｒｅｏｂｔａｉｎｅｄｂｙＴＲＩｚｏｌ
ａｎｄｗｅｒｅｒｅｖｅｒｓｅｔｒａｎｓｃｒｉｂｅｄｔｏｔｈｅｃＤＮＡ．ＴｈｅｃＤＮＡｓａｍｐｌｅｓｗｅｒｅｈｙｂｒｉｄｉｚｅｄｔｏｏｕｒｇｅｎｅｃｈｉｐｓ．Ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎｓｉｇｎａｌｗｅｒｅｃｏｌｅｃｔｅｄ
ａｎｄａｎａｌｙｚｅｄｆｏｌｏｗｉｎｇｓｃａｎｎｉｎｇｂｙＧｅｎｅＰｉｘ４１００Ａ．Ｒｅｓｕｌｔ：Ｔｈｅｎｕｍｂｅｒｓｏｆｄｒｉｆｔｃｅｌｓｗｅｒｅｉｎｃｒｅａｓｅｄａｎｄｔｈｅｄｅｎｓｉｔｙｏｆｃｅｌｓｗａｓｄｅ
ｃｒｅａｓｅｄｕｎｄｅｒｉｎｖｅｒｔｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅａｆｔｅｒＫ５６２ｃｅｌｓｗｅｒｅｔｒｅａｔｅｄｗｉｔｈｄｉｈｙｄｒｏａｒｔｅｍｉｓｉｎｉｎｆｏｒ２４ｈ．Ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌｃｈａｎｇｅｓｏｆｃｅｌａｐｏｐｔｏｓｉｓ
ｓｕｃｈａｓｋａｒｙｏｐｙｋｎｏｓｉｓａｎｄｃｏｎｇｌｏｍｅｒａｔｉｏｎｗｅｒｅｏｂｓｅｒｖｅｄｂｙＨｏｅｃｈｓｔ３３３４２／ＰＩｓｔａｉｎｉｎｇ．Ｆｌｏｗｃｙｔｏｍｅｔｒｉｃａｎａｌｙｓｉｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｃｅｌｓ
ｗｅｒｅａｒｅｓｔｅｄｉｎＧ２ｐｈａｓｅ．Ｔｈｅｒｅｗｅｒｅ１３ｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｌｙｅｘｐｒｅｓｓｅｄｇｅｎｅｓｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ．Ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎａｎａｌｙｓｉｓｓｈｏｗｅｄｕｐｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆｃｈｋ１
ａｎｄｄｏｗｎｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆＰＣＮＡ，ｃｙｃｌｉｎＢ１，ｃｙｃｌｉｎＤ１，ｃｙｃｌｉｎＥ１，ｃｄｋ４，ｃｄｋ２，Ｅ２Ｆ１，ＤＮＡＰＫ，ＤＮＡＴｏｐｏⅠ，ｍｃｌ１，ｊＮＫ，ＶＥＧＦｉｎ
ｔｈｅｄｉｈｙｄｒｏａｒｔｅｍｉｓｉｎｉｎｔｒｅａｔｅｄＫ５６２ｃｅｌｓ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：ＤｉｈｙｄｒｏａｒｔｅｍｉｓｉｎｉｎｃａｎＩｎｈｉｂｉｔｔｈｅｌｅｕｋａｅｍｉａｃｅｌｌｉｎｅＫ５６２ａｎｄｅｘｅｒｔｉｔｓａｎｔｉ
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［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］ ｇｅｎｅｃｈｉｐ；ｄｉｈｙｄｒｏａｒｔｅｍｉｓｉｎｉｎ；ｃｅｌｃｙｃｌｅ；ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ［责任编辑 古云侠］
·６８５１·
第３３卷第１３期
２００８年７月
中 国 中 药 杂 志
ＣｈｉｎａＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭａｔｅｒｉａＭｅｄｉｃａ
Ｖｏｌ．３３，Ｉｓｓｕｅ １３
Ｊｕｌｙ，２００８