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A new cycloartane triterpene saponin from rhizome of Actaea asiatica

绿升麻中1个新环阿屯烷型三萜皂苷



全 文 :绿升麻中1个新环阿屯烷型三萜皂苷
卢 滨1,范云双2,段宏泉1
(1.天津医科大学 药学院,天津 300070;
2.天津工业大学 中空纤维膜过程教育部重点实验室,天津 300160)
[摘要] 目的:研究绿升麻中对肿瘤细胞有细胞毒活性的化学成分。方法:以硅胶柱、凝胶等多种柱色谱分
离,制备高效液相色谱纯化,以各种波谱鉴定化合物结构。结果:分离得到1个环阿屯烷型三萜类化合物,鉴定其
结构为(23R)16β,23∶23α,26∶24α∶25triepoxy9,19cyclolanost7en3OβDxylopyranoside。结论:化合物1是新化
合物,命名为(23R)26deoxycimicifugoside。化合物1对宫颈癌细胞(Hela)和小鼠成纤维细胞(L929)具有一定的
细胞毒作用,IC50分别为7224,5597mg·L
-1。
[关键词] 绿升麻;环阿屯烷型三萜皂苷;肿瘤细胞毒活性
[中图分类号]R284.1 [文献标识码]A [文章编号]10015302(2008)13155804
[收稿日期] 20080128
[基金项目] 天津医科大学科研基金(2004xk32)
[通讯作者] 段宏泉,Tel:(022)23542838,Email:duanhq@
tijmu.edu.cn
  绿升麻为毛茛科植物类叶升麻 Actaeaasiatica
Hara的根茎,主要分布在我国东北,内蒙古、河北、
山西、陕西、甘肃、青海、湖北、四川、云南及西藏东
部。作为湖北省土家族传统药物,应用历史悠久。
绿升麻味辛、微苦,性平,具有散风热,祛风湿,透疹,
解毒的作用,在湖北省鄂西地区土家族民间用于治
疗风热头痛,咽喉肿痛,风湿疼痛,风疹块,麻疹不
透,百日咳,子宫脱垂,犬咬伤等[1,2]。同属其他植
物化学成分研究较多,绿升麻的化学成分研究较少,
已报道的化合物以环阿屯烷型三萜皂苷和色原酮类
化合物为主。本研究报道从绿升麻醋酸乙酯提取物
中分离鉴定的1个新三萜皂苷类化合物。
1 仪器和试药
BrukerAVANCE300型核磁共振波谱仪,吡啶
d5(pyd5)为溶剂,三甲基硅烷(TMS)为内标;日本
分光公司(JASCO)高效液相色谱仪,PU-1580型
泵,RI-1530和 UV-1575型检测器;YMCPack
ODSASH3435色谱柱(20mm×250mm,5μm),
C18HS40M16211(BiotageInc.USA),Toyopearl
HW-40C(Tosoh);液质联用色谱仪 Aliance2695,
QuatroMicroTMESI(Waters);红外光谱仪 NICO
LET380FT-IR(ThermoElectronCorporation);柱色
谱和薄层色谱用硅胶均系青岛海洋化工厂生产,所
用试剂均为分析纯。
药材于2004年9月采自湖北省鹤峰县,由中南
民族大学生命科学院万定荣教授鉴定为绿升麻 A.
asiatiea,标本(D20040901)存放于天津医科大学药
学院。
2 提取分离
绿升麻根茎26kg粉碎后用95%的乙醇加热
回流提取3次,每次6h。提取液减压浓缩至浸膏
600g,浸膏加水混悬后,分别用石油醚、醋酸乙酯、
正丁醇萃取,得石油醚萃取物41g,醋酸乙酯萃取物
210g和正丁醇萃取物31g。醋酸乙酯萃取物经硅
胶柱色谱,以石油醚醋酸乙酯梯度洗脱,得50个组
分。组分25经C-18中压色谱柱(甲醇水8∶2)和
ToyopearlHW-40C(氯仿甲醇,2∶1)分离,进一步
经反相半制备高效液相色谱柱(YMCPackODSA,
甲醇水8∶2,3mL·min-1,254nm)纯化,得到化合
物1(175mg)。
3 结构鉴定
化合物1 白色无定型粉末。[α]25D -816(c
105,吡啶);HRESIMSm/z6813615[M+Na]+,
确定其分子式为 C37H54O10。IR(KBr)cm
-1:3423
(羟基),1733(羰基)。1HNMR谱显示1对特征的
环丙烷上质子信号[δH057,108(each1H,d,J=
36Hz)];5个甲基[δH103,107,134,141,148
(each3H,s)]和1个裂分的甲基[δH095(d,3H,
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    中 国 中 药 杂 志
ChinaJournalofChineseMateriaMedica
       
Vol.33,Issue 13
July,2008
J=55Hz)];1个乙酰基[δH221(3H,s)];1个糖
的端基质子[δH486(d,1H,J=74Hz)];1个烯质
子[δH516(1H,d,J=64Hz)];1个与氧相连的次
甲基质子[δH347(dd,1H,J=115,38Hz)]。
13CNMR和 DEPT谱显示化合物1有37个碳
原子,除去 1个木糖基[δC1079(C1′),760(C
2′),791(C3′),716(C4′),675(C5′)]和 1个
乙酰基(δC,1713,214),该化合物骨架具有30个
碳原子,包括1个双键(δC1482,1145),4个与氧
相连的次甲基碳[δC882(C3),771(C12),735
(C16),636(C24)];1个与氧相连的亚甲基碳 δC
692(C26)和季碳637(C25),以及1个缩醛季
碳δC1063(C23)。根据以上氢谱与碳谱数据,结
合文献报道的升麻属中存在的环阿屯烷型三萜皂苷
类化合物,推测化合物1为具有缩酮结构的环阿屯
烷型三萜皂苷类化合物。
化合物1的 HMBC谱显示 H7(δH516)与次
甲基碳δC427(C5)、亚甲基碳 δC218(C6)和2
个季碳δC217(C9),498(C14)相关,表明双键
位置在7,8位。δH221(3H,s,Ac)和 δH523(H
12)均与羰基碳δC1711(C12)相关,表明乙酰基与
C12相连。糖端基质子 δH486(H1′)与 δC882
(C3)有 HMBC远程相关,表明化合物1的糖基连
接在C3位。经三氟醋酸水解,并与糖标准品 TLC
比较,鉴定糖基为 D木糖,其端基氢[δH486(1H,
d,J=74Hz,H1′)]的偶合常数较大,表明糖基的
构型为β构型。
  将化合物1与已知化合物26deoxycimicifugoside
的碳谱数据[3]比较,仅 C20,21,24,25位区别较大,
推测与26deoxycimicifugoside的C23位立体构型不
同,参考陈绍农等[4]报道,当C23位为R构型时 H
20的化学位移在δH180左右,C20的化学位移在δC
260左右;当C23位为S构型时H20的化学位移在
δH225左右,C20的化学位移在 δC235左右。同
时,化合物1的NOESY谱显示H22β(δH217)与H
24(δH 370)呈现 NOE相关,结合相同骨架化合
物———23epi26deoxyactein[4]的单晶衍射结构,确定
化合物1的C23为R构型。综上,鉴定化合物1的
结构为(23R)16β,23∶23α,26∶24α∶25triepoxy9,19
cyclolanost7en3βOβDxylopyranoside,结构式见
图1。
图1 化合物1的结构式
  化合物1 白色无定型粉末,[α]25D -816(c=
105,吡啶);HRESIMSm/z6813615[M+Na]+。
IR(KBr)cm-1:3423,2962,2876,1733,1456,
1378,1244,1045。1H和13CNMR波谱数据见表1。
表1 化合物1和26deoxycimicifugoside的NMR数据(pyd5)
No.
化合物11)
δC δH
26deoxycimicifugoside[3]
δC δH
1 306 119,164(m) 302 115,160
2 299 125,220(m) 295 188,225
3 882 347(dd,115,38) 879 343(dd,42,115)
4 408 - 404 -
5 428 120 425 118
6 222 158,196 218 148,180
7 1145 516(d,64) 1141 511(dd,12,75)
8 1482 - 1477 -
9 217 - 213 -
10 287 - 283 -
11 369 298(dd,160,90) 366 125(d,163),294dd
12 771 523(d,87) 768 523(d,87)
13 485 - 481 -
14 510 - 505 -
15 428 196,217(m) 431 208,213
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续表1
No.
化合物11)
δC δH
26deoxycimicifugoside[3]
δC δH
16 735 460(qlike,75) 745 433
17 572 183(m) 566 178
18 152 148(s) 148 149(s)
19 292 057,108(d,35) 289 052(d,40),106(d,40)
20 261 183 231 225
21 221 095(d,55) 214 102(d,66)
22 371 175,220(m) 373 146,160
23 1063 - 1059 -
24 636 370(s) 624 365(s)
25 637 - 624 -
26 692 393(q,12) 682 362(d,102),405(d,102)
27 142 141(s) 142 147(s)
28 272 107(s) 269 105(s)
29 262 134(s) 257 130(s)
30 146 103(s) 143 099(s)
1′ 1079 486(d,74) 1074 483(d,760)
2′ 760 406(m) 756 401(dd,76,83)
3′ 791 417(t) 786 413(dd,83,85)
4′ 716 422(m) 712 420(ddd,50,85,100)
5′ 676 393(m),431(dd,36,102) 671 371dd
OAc 1711 - 1707 -
  214 221(s) 216 217s
  注:1)1HNMR(300MHz);13CNMR(75MHz)
4 抗肿瘤活性实验[5]
MTT法测定化合物对宫颈癌细胞(Hela)和小
鼠成纤维细胞(L929)细胞毒作用,IC50值分别为
7224,5597mg·L-1,表明化合物对肿瘤细胞的生
长具有一定的抑制作用,有必要深入研究。
[参考文献]
[1] 万定荣湖北省土家族常用植物药(毛茛科)[J].中药材,
1990,13(3):13.
[2] 国家中医药管理局中华本草编委会.中华本草.第3卷[M].
上海:上海科技出版社,1999.
[3] KusanoA,TakahiraM,ShibanoM.Studiesontheconsitituents
ofcimicifugaspecies.Twelvenewcyclolanostanolglycosidesfrom
theundergroundpartsofCimicifugasimplexWormsk[J].Chem
PharmBul,1999,47(4):511.
[4] ChenSN,LiW K,FaricantDS.Isolation,structureelucida
tion,andabsoluteconfigurationof26deoxyacteinfromCimicifuga
racemosaandclarificationofnomenclatureassociatedwith27de
oxyactein[J].JNatProd,2002,65(4):601.
[5] GaoWY,ZhangR,JiaW,etal.Immunosuppressivediterpenes
fromVeronicastrumsibiricum[J].ChemPharmBul,2004,52
(1):136.
AnewcycloartanetriterpenesaponinfromrhizomeofActaeaasiatica
LUBin1,FANYunshuang2,DUANHongquan1
(1.SchoolofPharmaceuticalSciences,TianjinMedicalUniversity,Tianjin300070,China;
2.KeyLaboratoryofHolowFiberMembraneMaterialandMembraneProcesofMinistryofEducation,
TianjinPolytechnicUniversity,Tianjin300160,China)
[Abstract] Objective:ToisolateandelucidatethechemicalconstituentswiththecytotoxicityactivityfromtherhizomeofAct
aeaasiatica.Method:Thechemicalconstituentswereisolatedbyrepeatedcolumnchromatography(ToyopearlHW40Candprepara
tiveHPLC)andthestructureofcompound1waselucidatedbyspectraldataanalysis.Result:Acycloartanetriterpenesaponincom
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poundwasisolatedandidentifiedtobe(23R)16β,23∶23α,26∶24α∶25triepoxy9,19cyclolanost7en3βOβDxylopyranoside.
Conclusion:Compound1wasanewcompoundandnamed(23R)26deoxycimicifugoside.TheIC50valuesofcompound1forcel
growthinhibitionofHelaandL929cellineswere7224and5597mg·L-1,respectively.
[Keywords] Actaeaasiatica;cycloartanetriterpene;cytotoxicityactivity
[责任编辑 王亚君]
[收稿日期] 20081028
[基金项目] 香港研究资助局(RGC)课题(CUHK4316/03M)
[通讯作者]  赵明,Tel(0852)31634087,Fax:(0852)
26037203,Email:zzhzhaoming@yahoo.com
狭叶红景天的化学成分及其抑制结核分枝
杆菌生长活性的研究
黄英俊1,赵 明1,宗玉英1,陈超杨2,车镇涛1
(1.香港中文大学 中医学院,香港;2.香港中文大学 微生物学系,香港)
[摘要] 目的:研究狭叶红景天的化学成分;评价狭叶红景天提取物及其化学成分体外抗结核分枝杆菌
(ATCC27294)活性。方法:运用硅胶,SephadexLH-20,RP-18等柱色谱及半制备液相色谱对狭叶红景天的化学
成分进行分离纯化,并利用核磁共振、质谱等技术,鉴定它们的化学结构;通过测试体外最低抑制浓度(minimalin
hibitoryconcentrations,MIC)和最低杀菌浓度(minimalbactericidalconcentrations,MBC)来评价有关物质的抗结核
分枝杆菌活性。结果:分离、纯化并鉴定了12个化合物,分别为β谷甾醇(βsitosterol,1),酪醇(tyrosol,2),反式对
羟基肉桂酸(trans4hydroxycinnamicacid,3),香叶醇 β吡喃葡萄糖苷(geranylβglucopyranoside,4),橙花醇 β吡喃
葡萄糖苷(nerylβglucopyranoside,5),正己醇β吡喃葡萄糖苷(hexylβglucopyranoside,6),没食子酸(galicacid,7),
表没食子儿茶素3没食子酸酯[(-)epigalocatechingalate,8],棉皮素7Oα吡喃鼠李糖苷(rhodiolgin,9),异落
叶松树脂醇9Oβ吡喃葡萄糖苷(isolariciresinol9Oβglucopyranoside,10),正辛醇α吡喃阿拉伯糖(1→6)β吡喃
葡萄糖苷(rhodiooctanoside,11),和橙花醇α吡喃阿拉伯糖(1→6)β吡喃葡萄糖苷(sacranosideB,12)。结论:化合
物3,6,9~12为首次从狭叶红景天中发现,化合物4,5为首次从红景天属植物中分得;狭叶红景天80%乙醇提取
物、醋酸乙酯萃取物以及化合物7,8,对结核分枝杆菌具有一定抑制和杀灭活性。
[关键词 ] 狭叶红景天;化学成分;体外抗结核分枝杆菌活性
[中图分类号]R284.1 [文献标识码]A [文章编号]10015302(2008)13151105
  狭叶红景天Rhodiolakirilowi(Regel)Maxim.是
景天科 Crassulaceae红景天属植物,多年生草本,生
于海拔2000~5600m的山地多石草地或石坡上,
主产于我国西藏、云南、四川、新疆、青海、甘肃、陕
西、山西、河北等省,缅甸也有分布[1]。其根茎药
用,可清热退烧、解毒、防瘟,治肺炎、腹泻、四肢肿胀
等[2]。现代药理研究发现,狭叶红景天具有预防高
原反应[3,4]、活血化瘀、提高耐缺氧能力[5]、辐射保
护[6]、改善心血管系统功能等作用[7]。有关狭叶红
景天的化学成分研究,始于20世纪80年代,从中发
现的成分主要有苯乙醇苷类:红景天苷[812]和酪
醇[911];酚苷类 rodiolinozide[11]和熊果苷[12];黄烷3
醇衍生物类 表没食子儿茶素3没食子酸酯[11,12],
3,3′digaloylproprodelphinidinB2(rhodisin),3,3′di
galoylprocyanidinB2,表没食子儿茶素,表儿茶素,
表儿茶素3没食子酸酯[11];黄酮类 木犀草素和三
粒小麦黄酮(3′,4′,5′,5,7五羟基黄酮,trice
tin)[11];植物甾醇类 β谷甾醇[9]和胡萝卜苷[10];生
氰糖苷百脉根苷[10,12];非生氰糖苷 rhodiocyanoside
A[12];以及蔗糖[10],没石子酸[11]和 β吡喃果糖(1
→4)β吡喃葡萄糖[12]等。作者从甘肃产狭叶红景
天Rhodiolakirilowi中分离、鉴定了12个化合物,并
发现狭叶红景天 80%乙醇提取物、醋酸乙酯萃取
物、没食子酸(7)和表没食子儿茶素3没食子酸酯
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