全 文 :地乌中的三萜皂苷类成分
张兰天1,高石喜久2,张彦文3,段宏泉3
(1.天津大学 药物科学与技术学院,天津 300072;
2.日本国立德岛大学 药学部,日本 德岛 7708505;
3.天津医科大学 基础医学研究中心 药学院,天津 300070)
[摘要] 目的:研究地乌Anemoneflaccida中的化学成分。方法:采用硅胶柱色谱、凝胶柱色谱、反相 HPLC制
备色谱等多种方法分离化合物,采用波谱方法鉴定化合物的结构。结果:从地乌根茎中分离得到12个三萜类化合
物,分别为齐墩果酸(1),齐墩果酸3OβD吡喃葡萄糖(1→2)βD吡喃木糖苷(2),五加苷K(3),齐墩果酸3O
αL吡喃鼠李糖(1→2)βD吡喃木糖苷(4),齐墩果酸3OβD吡喃葡萄糖(1→2)αL吡喃阿拉伯糖苷(5),齐
墩果酸3OβD吡喃葡萄糖醛酸(6),齐墩果酸3OβD吡喃葡萄糖醛酸甲酯(7),齐墩果酸28OαL吡喃鼠李糖
(1→4)βD吡喃葡萄糖(1→6)βD吡喃葡萄糖苷(8),齐墩果酸3OβD吡喃葡萄糖醛酸28OαL吡喃鼠李糖
(1→4)βD吡喃葡萄糖(1→6)βD吡喃葡萄糖苷(9),齐墩果酸3OβD吡喃葡萄糖醛酸甲酯28OαL吡喃鼠
李糖(1→4)βD吡喃葡萄糖(1→6)βD吡喃葡萄糖苷(10),齐墩果酸3OβD吡喃葡萄糖(1→2)βD吡喃木
糖28OαL吡喃鼠李糖(1→4)βD吡喃葡萄糖(1→6)βD吡喃葡萄糖苷(11),齐墩果酸3OαL吡喃鼠李糖
(1→2)αL吡喃阿拉伯糖28OαL吡喃鼠李糖(1→4)βD吡喃葡萄糖(1→6)βD吡喃葡萄糖苷(12)。结论:
化合物5~8,10,12为首次从该植物中分离得到;化合物2,5,11对Hela,BEL7402和HL60细胞具有细胞毒性。
[关键词] 银莲花属;地乌;三萜皂苷;抗癌活性
[中图分类号]R284.1 [文献标识码]A [文章编号]10015302(2008)14169604
[收稿日期] 20080128
[基金项目] 天津医科大学科研基金(2004xk32)
[通讯作者] 段宏泉,Tel:(022)23542838,Email:duanhq@
tijmu.edu.cn
地乌 AnemoneflaccidaFr.Schmidt为毛茛科银
莲属林荫银莲花的根茎,又名地雷、金串珠、蜈蚣三
七,分布于我国东北、华东、西南等地。地乌性温,味
辛微苦,有祛风湿,助筋骨,解毒的功效[1]。有关该
植物化学成分的研究报道不多,文献报道了8个三
萜皂苷成分[24]。作者对地乌的化学成分进行了研
究,从醋酸乙酯 提取物和正丁醇提取物中分离得到
12个化合物,通过波谱方法鉴定了各化合物的结
构,其中6个化合物为首次分离得到。细胞毒试验
数据显示化合物2,5,11对 Hela,BEL7402和 HL
60细胞具有一定的细胞毒作用。
1 仪器、试剂及药材
BrukerAVANCE300instrument(TMS内标);日
本电子JEOLJMS-SX102A;制备高效液相色谱仪
PU-2089(泵),RI-2031和 UV-2075(检测器)
(日本分光公司(JASCO));制备HPLC色谱柱YMC
-packODS-ASH-343-5(20mm×250mm,
YMC);GPC柱GS-31020G(20mm×500mm,Sho
dex)。凝胶色谱柱 ToyopearlHW-40C(Tosoh);柱
色谱和薄层色谱用硅胶均系青岛海洋化工厂生产,
所用试剂均为分析纯;实验所用的标准糖除 βD吡
喃葡萄糖为中生北控生物科技股份有限公司生产
外,其余均为Sigma公司生产。
芬兰 LABSYSTEMSMultiskanMS酶标仪;美国
REVCOCO2培养箱;胎牛血清为Heclone公司产品;
RPM1640为Gibco公司产品;MTT和 DMSO为 Sig
ma公司产品。
人宫颈癌 Hela细胞、人肝癌 BEL7402细胞和
人白血病 HL60细胞均为天津医科大学免疫教研
室提供。
药材采自湖北(2004年12月),由中南民族大
学生 命 科 学 学 院 万 定 荣 教 授 鉴 定,标 本
(D20040905)存放于天津医科大学药学院。
2 提取分离
取自然干燥的地乌根茎45kg,粉碎后用95%
的乙醇加热回流提取3次,每次6h。提取液减压浓
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缩,得浸膏500g,浸膏加水混悬后,分别用石油醚、
醋酸乙酯 、正丁醇进行萃取,得醋酸乙酯提取物
208g,正丁醇提取物230g。醋酸乙酯提取物经反
复硅胶柱色谱、凝胶渗透色谱分离,制备高压液相色
谱纯化得到化合物2(2550mg),3(3300mg),4
(8808mg),6(3761mg)。正丁醇提取物经分离
得到化合物1(260mg),5(384mg),7(58mg),8
(100mg),9(612mg),10(200mg),11(803
mg),12(500mg)。
3 细胞毒试验
研究采用MTT法[5]。取对数生长期的 Hela细
胞、BEL7402细胞和 HL60细胞,用含10%胎牛血
清的RPM1640培养基制成5×104个 /mL的细胞悬
液,按每孔180个/L接种于96孔板中。在37℃,
5% CO2条件下培养24h后每孔加入样品液20μL。
待测样品用DMSO溶解(DMSO体积分数≤01%),
化合物样品质量浓度分别为30,10mg·L-1,每个
浓度平行6孔;样品的每个浓度均设置6孔为空白
对照,每孔加入20μL的 RPMI1640培养液。培养
72h后,吸去上清液,每孔加入无血清培养液新鲜
配置的1mg·L-1的MTT,37℃温育4h,弃去上清
液,每孔加入150μL的DMSO,在490nm处测定吸
光度(A)值。取6孔平均值,按公式:细胞增殖抑制
率=[(1-加药细胞 A值/对照细胞 A值)×
100%],计算每个质量浓度下的细胞增殖抑制率
(表1)。
表1 化合物对肿瘤细胞的抑制率(n=6) %
化合物
Hela
Ⅰ Ⅱ
BEL7402
Ⅰ Ⅱ
HL60
Ⅰ Ⅱ
1 1382 436 -1145 -729 1788 547
2 6041 2054 6292 701 7571 7610
3 2145 -109 526 -426 547-2591
4 1345 436 1883 931 -036-1168
5 3649 2203 5037 332 7700 7610
6 -145 073 057 -576 1022 000
7 1491 1054 -1035 -808 876-1423
8 910 654 -698 769 -255 1095
9 582 945 -847-1239 803 292
10 1745 727 1263 -125 1168 547
11 5959 838 1365 166 7568 7468
12 1345 618 -1244-1407 1569 1131
注:药物质量浓度(Ⅰ)30mg·L-1;(Ⅱ)10mg·L-1
4 结构鉴定
化合物5 白色无定型粉末。ESIMSm/z773
[M+Na]+。1HNMR(Pyridined5,300MHz)δ:084
(3H,s),097(3H,s),101(3H,s),102(3H,s),
105(3H,s),124(3H,s),130(3H,s),549(1H,
brs,H12),497(1H,d,J=54Hz,Ara3,H1),
521(1H,d,J=74Hz,Glu3,H1)。碳谱数据见
表2,3。波谱数据与文献[7]报道的数据一致,化合
物5酸水解所得糖的Rf值与D吡喃葡萄糖和 L吡
喃阿拉伯糖标准品的 Rf值一致。因此鉴定化合物
5为齐墩果酸3OβD吡喃葡萄糖(1→2)αL吡
喃阿拉伯糖苷。
化合物6 白色无定型粉末。mp205~206℃,
ESIMSm/z655[M+Na]+。1HNMR(Pyridined5,
300MHz)δ:086(3H,s),097(3H,s),110(6H,
s),102(3H,s),120(3H,s),133(6H,s),547
(1H,brs,H12),504(1H,d,J=75Hz,GluA3,
H1)。碳谱数据见表2,3。波谱数据与文献[8]报
道的数据一致,化合物6酸水解所得糖的 Rf值与
D吡喃葡萄糖醛酸标准品的 Rf值一致。因此鉴定
化合物6为齐墩果酸 3OβD吡喃葡萄糖醛酸。
化合物7 白色无定型粉末。ESIMSm/z653
[M+Na]+。1HNMR(Pyridined5,300MHz)δ:080
(3H,s),094(3H,s),097(3H,s),098(3H,s),
102(3H,s),123(3H,s),127(3H,s),503(1H,
brs,H12),500(1H,d,J=75Hz,GluA3,H1),
375(3H,s,GluA3,OCH37)。碳谱数据见表2,3。
波谱数据与文献[9]报道的数据一致,化合物7酸
水解所得糖的Rf值与D吡喃葡萄糖醛酸标准品的
Rf值一致。因此鉴定化合物7为齐墩果酸3Oβ
D吡喃葡萄糖醛酸甲酯。
化合物8 白色无定型粉末。ESIMSm/z949
[M+Na]+。1HNMR(Pyridined5,300MHz)δ:085
(3H,s),091(3H,s),196(3H,s),106(3H,s),
015(3H,s),125(6H,s),546(1H,brs,H12)。
626(1H,d,J=80Hz,Glu′28,H1),470(1H,d,
J=78Hz,Glu″28,H1),172(3H,d,J=77Hz,
Rha28,CH36),588(1H,brs,Rha28,H1)。碳
谱数据见表2,3。波谱数据与文献[10]报道的数据
一致,化合物8酸水解所得糖的 Rf值与 D吡喃葡
萄糖和L吡喃鼠李糖标准品的 Rf值一致。因此鉴
定化合物8为齐墩果酸28OαL吡喃鼠李糖(1→
4)βD吡喃葡萄糖(1→6)βD吡喃葡萄糖苷。
化合物 10 白色无定型粉末。ESIMSm/z
1123[M+Na]+。1HNMR(Pyridined5,300MHz)δ:
085(3H,s),091(3H,s),100(3H,s),109(3H,
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表2 化合物5~8,10,12苷元的13CNMR波谱数据
(Pyrd5,75MHz)
No 5 6 7 8 10 12
1 391 391 400 395 391 394
2 269 265 271 286 270 270
3 893 895 897 788 896 892
4 400 400 391 399 400 403
5 562 562 563 563 562 564
6 189 189 189 190 190 190
7 334 338 347 336 336 336
8 400 424 402 404 403 400
9 485 485 485 486 484 485
10 374 374 375 379 374 375
11 241 243 232 239 241 238
12 1230 1230 1229 1234 1233 1233
13 1452 1453 1455 1446 1446 1446
14 426 426 427 426 421 426
15 287 287 287 288 286 286
16 243 243 243 243 238 243
17 471 471 472 475 475 475
18 424 424 425 422 421 421
19 470 469 470 467 466 467
20 314 315 315 312 312 312
21 347 347 342 345 344 345
22 337 338 338 330 329 330
23 287 288 288 293 270 287
24 172 175 174 170 174 174
25 159 159 159 162 160 161
26 178 179 179 180 180 180
27 266 267 267 265 265 265
28 1807 1807 1814 1771 1769 1770
29 336 337 347 335 336 336
30 242 243 243 242 241 236
s),114(3H,s),126(3H,s),131(3H,s),541
(1H,brs,H12),500(1H,d,J=75Hz,GluA3,
H1),375(3H,s,GluA3,OCH37),625(1H,d,
J=76Hz,Glu′28,H1),470(1H,d,J=78Hz,
Glu″28,H1),171(3H,d,J=77Hz,Rha28,CH3
6),588(1H,brs,Rha28,H1)。碳谱数据见表2,
3。波谱数据与文献[9]报道的数据一致,化合物10
酸水解所得糖的 Rf值与 D吡喃葡萄糖、D吡喃葡
萄糖醛酸和L吡喃鼠李糖标准品的 Rf值一致。因
此鉴定化合物10为齐墩果酸3OβD吡喃葡萄糖
醛酸甲酯28OαL吡喃鼠李糖(1→4)βD吡喃葡
萄糖(1→6)βD吡喃葡萄糖苷。
化合物 12 白色无定型粉末。ESIMSm/z
1227[M+Na]+。1HNMR(Pyridined5,300MHz)δ:
091(9H,s),096(3H,s),112(3H,s),118(3H,
s),131(3H,s),543(1H,brs,H12),492(1H,d,
表3 化合物5~8,10,12糖部分的13CNMR波谱数据
(Pyrd5,75MHz)
No 5 6 7 8 10 12
3′1 1054 1078 1077 1077 1053
2 815 760 759 757 764
3 739 786 784 783 745
4 688 737 737 736 691
5 655 777 777 776 651
6 1735 1714 1713
7 526 524
3″1 1065 1022
2 769 732
3 787 730
4 720 744
5 787 700
6 630 190
28′1 961 961 961
2 743 743 758
3 792 792 791
4 713 713 713
5 785 785 785
6 696 696 691
28″1 1053 1053 1053
2 758 758 743
3 770 770 776
4 786 787 787
5 776 776 770
6 618 618 617
281 1033 1033 1032
2 730 730 728
3 732 732 730
4 744 744 742
5 708 707 707
6 193 193 189
J=55Hz,Ara3,H1),165(3H,d,J=60Hz,
Rha3,CH36),615(1H,brs,Rha3,H1),625
(1H,d,J=78Hz,Glc′28,H1),505(1H,d,J=
760Hz,Glc″28,H1),587(1H,brs,Rha28,H
1),172(3H,d,J=61Hz,Rha28,CH36)。碳谱
数据见表2,3。波谱数据与文献[11]报道的数据一
致,化合物12酸水解所得糖的 Rf值与 D吡喃葡萄
糖、L吡喃阿拉伯糖和L吡喃鼠李糖标准品的Rf值
一致。因此鉴定化合物12为齐墩果酸 3OαL吡
喃鼠李糖(1→2)αL吡喃阿拉伯糖28OαL吡喃
鼠李糖(1→4)βD吡喃葡萄糖(1→6)βD吡喃
葡萄糖苷。
化合物1,2,3,4,9,11的氢谱、碳谱及质谱数据
经与文献报道的有机波谱数据对比基本一致,分别
鉴定为齐墩果酸[2],齐墩果酸 3OβD吡喃葡萄糖
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(1→2)βD吡喃木糖苷[2],五加苷 K[6],齐墩果酸
3OαL吡喃鼠李糖(1→2)βD吡喃木糖苷[2],齐
墩果酸 3OβD吡喃葡萄糖醛酸 28OαL吡喃鼠
李糖(1→4)βD吡喃葡萄糖(1→6)βD吡喃葡
萄糖苷[11],齐墩果酸 3OβD吡喃葡萄糖(1→2)
βD吡喃木糖 28OαL吡喃鼠李糖(1→4)βD
吡喃葡萄糖(1→6)βD吡喃葡萄糖苷[3]。
5 结果与讨论
本研究报道了从地乌中分离得到的12个五环
三萜类化合物,均为齐墩果烷型三萜,细胞毒试验表
明,化合物2,5,11对Hela,BEL7402和HL60具有
一定的抑制作用,有必要进一步进行深入研究。
[参考文献]
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StudiesonchemicalconstituentsfromrhizomeofAnemoneflaccida
ZHANGLantian1,TAKAISHIYoshihisa2,ZHANGYanwen3,DUANHongquan3
(1.TheColegeofPharmaceuticalsandBiotechnology,TianjinUniversity,Tianjin300072China;
2.FacultyofPharmaceuticalSciences,UniversityofTokushima,Shomachi178,Tokushima7708505,Japan;
3.BasicMedicalResearchCenter,TianjinMedicalUniversity,Tianjin300070,China)
[Abstract] Objective:TostudythechemicalconstituentsfromAnemoneflaccida.Method:Chemicalconstituentswereisola
tedbyrepeatedcolumnchromatography(silicagel,ToyopearlHW40CandpreparativeHPLC).Thestructureswereelucidatedonthe
basisofspectraldataanalysis.Result:Twelvetriterpeneswereisolatedandtheirstructureswereidentifiedasfolow:oleanolicacid
(1),oleanolicacid3OβDglccopyranosyl(1→2)βDxylopyranoside(2),eleutherosideK(3),oleanolicacid3OαLrham
nopyranosyl(1→2)βDxylopyranoside(4),oleanolicacid3OβDglccopyranosyl(1→2)αLarabinofurnoside(5),oleanolic
acid3OβDglccuronopyranose(6),oleanolicacid3OβDglccuronopyranosemethylester(7),oleanolicacid28OαLrhamnopy
ranosyl(1→4)βDglccopyranosyl(1→6)βDglccopyranosyl(8),oleanolicacid3OβDglccuronopyranose28OαLrhamnopyr
anosyl(1→4)βDglccopyranosyl(1→6)βDglccopyranoside(9),oleanolicacid3OβDglccopyranosylmethylester28OαL
rhamnopyranosyl(1→4)βDglccopyranosyl(1→6)βDglccopyranoside(10),oleanolicacid3OβDglccopyranosyl(1→2)βD
xylopyranosyl28OαLrhamnopyranosyl(1→4)βDglccopyranosyl(1→6)βDglccopyranoside(11),oleanolicacid3OαLrh
amnopyranosyl(1→2)αLarabinopyrnosyl28OαLrhamnopyranosyl(1→4)βDglccopyranosyl(1→6)βDglccopyranoside
(12).Conclusion:compounds58,10,12wereisolatedfromthisplantforthefirsttime.Compounds2,5and11showedpositive
antitumoractivities.
[Keywords] Anemone;Anemoneflaccida;triterpenesaponins;antitumoractivity
[责任编辑 王亚君]
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