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[ Κεψ ωορδσ] ≤«¬±¨ ¶¨ ·µ¤§¬·¬²±¤¯ «¨µ¥¶~ • °‹ µ¤·¶~ • „≥ ~µ¨±¤¯ ·¬¶¶∏¨¶³¤·«²¯²ª¼
≈责任编辑 方文贤 
一种对阿尔茨海默病模型小鼠认知和记忆功能
具有明显改善作用的中药方剂
孙 华u o胡 愉t o张建民t o栗世铀t o何 维t
kt q中国医学科学院 基础医学研究所 中国协和医科大学 基础医学院 o北京 tssssx ~
u q中国医学科学院 协和医科大学 协和医院 中医科 o北京 tsszvsl
≈摘要  目的 }探索对阿尔茨海默病k„⁄l病人认知和记忆能力具有明显改善作用的中药方剂 ∀方法 }通过
…¤¯¥r¦小鼠侧脑室微量注射聚集态 Β2淀粉样多肽kΒ2„°ux2vxl o建立模拟 „⁄的小鼠动物模型 o并通过行为学实验和
脑组织组织化学检测 o研究了中医经典药方柴胡加龙骨牡蛎汤 !当归芍药散和作者自己研制的两种中药复方 ≤ ‹° Œ
和 ≤ ‹° µ对该小鼠模型认知和记忆能力的疗效作用 ∀同时 o以西药脑复康做对照 ∀结果 }≤ ‹° µ对 „⁄模型小鼠
的认知和记忆能力具有明显的改善 ∀结论 }本研究提示从中药中寻找治疗 „⁄的药物具有较好的前景 ∀
≈关键词  Β2淀粉样多肽 ~„⁄模型小鼠 ~认知 ~记忆 ~中药 ~
≈中图分类号  • u{x qx ≈文献标识码  „ ≈文章编号  tsst2xvsukussvls{2szxt2sw
阿尔茨海默病k„⁄l是一种进行性神经变性痴
呆症 o主要临床表现为进行性记忆减退和认知障碍 ∀
其主要的神经病理学特征是脑组织内细胞外 „Β淀
粉样蛋白的沉积 o形成分散的老年斑和淀粉样血管
病 ∀ „Β淀粉样蛋白是 „⁄患者脑内老年斑的主要
成分 ∀最近研究发现细胞外 „Β淀粉样蛋白的沉积
在 „⁄的发生发展过程中起着关键性的作用 o而 „Β
淀粉样蛋白中对神经元具有毒性作用的部分位于第
ux ∗ vx 位氨基酸残基之间 o称此肽段为 „Βux2vx ∀本
研究通过小鼠侧脑室微量注射聚集态 Β淀粉样多肽
k„Βux2vxl o成功构建模拟 „⁄的小鼠模型 o经行为学
和病理学实验证实该模型有类似 „⁄的病理特征 ∀
国际上缺乏治疗 „⁄的有效药物 ∀脑复康是一种目
前比较常用和已被广泛接受的治疗脑损伤的药物 o
我们以它作为对照研究了几种益智中药方剂柴胡加
龙骨牡蛎汤 !当归芍药散和我们自己研制的两种中
≈收稿日期  ussu2ts2ut
≈基金项目  美国中华医学基金会k≤  …l资助k||2y||l
≈通讯作者  何 维 ר¯ }kstsl yxu|ywxu ƒ¤¬}kstsl
yxuw|ux| ∞2°¤¬¯}«¨ º ¬¨°∏ƒ ³∏¥¯¬¦q¥·¤q±¨ ·q¦±
药复方 ≤ ‹° Œ和 ≤ ‹° µ对该小鼠模型认知和记忆
能力的疗效作用 ∀
1 材料和方法
1 q1 动物与分组
tvy只 …¤¯¥r¦雄性小鼠 ots ∗ tt周龄 o由中国
医学科学院实验动物研究所提供 ∀小鼠随机分为
ts组 o分别为假手术生理盐水对照组 !„⁄模型对照
组 !脑复康组 !柴胡加龙骨牡蛎汤组 !当归芍药散小
剂量组 !当归芍药散大剂量组 !≤ ‹° ´小剂量组 !
≤ ‹° ´大剂量组 !≤ ‹° µ小剂量组 !≤ ‹° µ大剂量
组 ∀其中生理盐水对照组和 „⁄模型对照组各为 us
只 o其余各组均为 tu只 ∀
1 q2 中药方剂与剂量
柴胡加龙骨牡蛎汤和当归芍药散属于经典药
方 o≤ ‹° ´方剂的主要成分包括熟地 !何首乌等 tu
味中药 o≤ ‹° µ方剂的主要成分包括枸杞 !石菖蒲
等 z味中药 ∀所有方剂通过煎制后过滤制成药液 ∀
大剂量组用于煎制的原药是小剂量组的 v倍 ∀所有
中药均购于同仁堂中药店 ∀西药脑复康购于协和医
院 o由天津金世制药有限公司生产 ∀
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第 u{卷第 {期
ussv年 {月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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„∏ª∏¶·oussv
1 q3 „⁄模型小鼠的建立
用 s qu °s qw h 戊巴比妥钠麻醉小鼠 o将小鼠
固定在定位仪上 o剪开头顶部皮肤 o酒精棉擦拭 o暴
露出前囟 ∀采用右侧脑室定位 o自前囟向后 u °° o
矢状缝旁开 t qx °° 处 o即为侧脑室的体表部位 ∀
用微量注射器在此位置穿一小孔 o深度为颅骨表面
向下 u °°处 o每只小鼠以 u ˏ# °¬±p t恒速注射 v
ˏ„Βux2vxkt ª#ptl≈v  ∀生理盐水组小鼠注入 s qv
ˏ生理盐水代替 „Βux2vx ∀术后 uw «开始各组分别
给予药物治疗 o按每天每只小鼠 s qu °药液灌胃 o
生理盐水对照组为 s qu °生理盐水 ∀
1 q3 跳台回避试验
动物给药 vs §后进行跳台回避试验 ∀首先 o将
小鼠放入跳台仪反应箱内 o适应环境 v °¬±o然后通
以 vy ∂ 交流电 o小鼠受到电击后多数跳上跳台逃避
电击 ∀小鼠可能再次或多次跳至铜栅上 o后又跳回
平台 o如此训练 x °¬±o记录小鼠错误次数 o以此作为
学习成绩 ∀uw «后重新测试 o记录小鼠触电潜伏期 o
并记录 x °¬±内的错误次数≈x  ∀
1 q4 被动避暗法试验
动物给药 vv §后进行避暗试验 ∀先将小鼠背
向洞口放入明室 o适应环境 v °¬±o然后通电 v °¬±o
记录小鼠进入暗室受到电击的潜伏期 ∀uw «后重新
测试 o记录 v °¬±内小鼠进入暗室受到电击的次数
和触电潜伏期≈y  ∀
1 q5 脑组织化学检测
小鼠麻醉后行心脏灌注术 o剥离脑组织后放入
w h多聚甲醛2°…中固定 ∀常规石蜡包埋 o石蜡切片
vs Λ° o贴片后 vz ε 温箱中过夜备用 ∀按照本室常
规方法进行组织化学尼氏染色 ∀
1 q6 统计学处理
数据以均值 ? 标准差表示 o组间比较用 ≥·∏2
§¨ ±·. ¶τ检验和方差分析 ∀
2 结果
2 q1 „⁄模型小鼠的鉴定
2 q1 q1 „⁄模型小鼠脑组织学改变 在侧脑室注射
聚合态 Β2„°kux2vxl ut §后 o分别取生理盐水对照
组和 „⁄模型组 {只小鼠的脑组织 o尼氏染色组织
学检测脑组织内淀粉样蛋白的沉积 ∀发现生理盐水
对照组小鼠的注射部位及周围无明显的神经元损
伤 o小鼠海马细胞数量多 !密度高 !细胞圆且细胞核
大 ~内嗅皮层细胞数量多 !密度高 !层次多且厚 !细胞
直径大 !细胞核清晰k图 tl ∀ „⁄模型组小鼠的脑组
织切片显示 „⁄小鼠模型组海马神经元分布较稀
疏 !出现着色深的皱缩细胞 o其中海马的细胞数量减
少最为明显 ~内嗅皮层细胞数明显减少 o细胞直径变
小 !细胞核不清晰k图 ul ∀
图 t 生理盐水对照组小鼠的脑组织海马神经元尼氏染色
图 u „⁄模型小鼠的脑组织海马神经元尼氏染色
2 q2 干预试验各组 „⁄模型小鼠的行为学检测
2 q2 q1 干预试验各组 „⁄模型小鼠的跳台试验
如表 t所示 o模型组小鼠的下台潜伏期明显低于手
术对照组k Π s qstl o而错误率也明显高于生理盐
水对照组k Π s qsxl ∀柴胡加龙骨牡蛎汤组和当归
芍药散小剂量组的下台潜伏期虽然比模型对照组略
有延长 o但是无明显地统计学差异 ∀脑复康组 !当归
芍药散大剂量组 !≤ ‹° ´大剂量组 !≤ ‹° ´小剂量
组 !≤ ‹° µ大剂量组 !≤ ‹° µ小剂量组的下台潜伏
期均明显地比模型对照组延长 ∀其中 o≤ ‹° ´大剂
量组和 ≤ ‹° µ小剂量组与模型对照组之间的统计
学差异最明显k Π s qstl o而且二者的下台潜伏期
也明显地长于生理盐水对照组 k Π  s qsxl !脑
复康组k Π  s qsxl !归芍药散组大剂量组k Π 
s qsxl !当归芍药散小剂量组k Π s qstl ∀ ≤ ‹° ´
大剂量组与 ≤ ‹° ´小剂量组之间也有显著性差异
k Π s qsxl o而 ≤ ‹° µ大剂量组与 ≤ ‹° µ小剂量
组之间无显著性差异k Ё s qsxl ∀
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第 u{卷第 {期
ussv年 {月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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表 t 干预实验各组 „⁄模型小鼠的跳台实验结果
k ξ ? σ, ν € tul
组别 潜伏期r¶ 错误率r h
„⁄模型对照组 {w q{v ? zt qy {v qv
生理盐水组 t{z qt{ ? tus qyxul yw qv
脑复康组 tw{ q|u ? ttt qwttl yt qx
柴胡加龙骨牡蛎汤组 tsy qty ? tu| quv wy qu
当归芍药散小剂量组 |{ q|u ? tut quw z{ qy
当归芍药散大剂量组 tvt qs| ? tsx q|utl ut qw
≤ ‹° ´小剂量组 utz q{v ? tsx qwtu ovl xv q{
≤ ‹° ´大剂量组 u{| qx{ ? u| qswu ow ox oy oz o{l uv qt
≤ ‹° µ小剂量组 uyw qtz ? zt qx{u ow ox oy ozl vs q{
≤ ‹° µ大剂量组 t|| qvv ? tuv qtzu ovl xv q|
注 }与 „⁄模型对照组比较 tl Π s .sx u) Π s .st 与脑
复康组比较 v) Π s .sx w) Π s .st 与生理盐水组比较 x) Π
s .sx 与当归芍药散大剂量组比较 y) Π s .sx 与当归芍药散小
剂量组比较 z) Π s .st 与当归芍药散小剂量组比较 {) Π s qsx
2 q2 q2 干预试验各组 „⁄模型小鼠的回避试验
如表 u所示 o模型组小鼠的下台潜伏期明显低于手
术对照组k Π s qstl o而错误次数明显高于生理盐
水对照组k Π s qstl ∀柴胡加龙骨牡蛎汤组 !当归
芍药散小剂量组和当归芍药散大剂量组与模型对照
组之间无明显的统计学差异 ∀脑复康组 !≤ ‹° ´大
剂量组 !≤ ‹° ´小剂量组 !≤ ‹° µ大剂量组和 ≤ ‹°
µ小剂量组的潜伏期明显地比模型对照组延长 ∀其
中 ≤ ‹° µ小剂量组与模型对照组之间的统计学差
异最显著k Π s qstl ∀
表 u 干预实验各组 „⁄模型小鼠的回避实验结果
k ξ ? σ, ν € tul
组别 潜伏期r¶ 错误率r h
„⁄模型对照组 tsy qwu ? zt q|t yt qx
生理盐水组 tzv q{v ? us qwxul ut qw
脑复康组 twy qx ? yx qt{tl v{ qx
柴胡加龙骨牡蛎汤 |y qux ? {s quv yw qv
当归芍药散小剂量组 ttx q|u ? zx qy| wy qu
当归芍药散大剂量组 tsu qwu ? {s qtw yt qx
≤ ‹° ´小剂量组 tx| q{w ? wx qw|tl vs q{
≤ ‹° ´大剂量组 tzv qtz ? tz qutul wy qu
≤ ‹° µ小剂量组 t{s ? sul s
≤ ‹° µ大剂量组 tyv qwu ? ws qwvtl uv qt
注 }与 „⁄模型对照组相比较 tl Π s .sx u) Π s qst
3 讨论
认知障碍和记忆进行性减退是 „⁄患者的主要
临床症状 ∀通过行为学指标检测各种药物制剂对
„⁄的治疗作用是目前国际上较通用的检测手段 ∀
从 „⁄模型小鼠的行为学检测结果显示 o„⁄模型小
鼠的认知和记忆功能明显低于生理盐水对照组 ~从
脑组织化学检测结果显示 o„⁄模型小鼠脑组织内形
成 „⁄样病理改变 ∀由此证明 o我们成功地构建了
„⁄模型小鼠 ∀
本研究通过构建 „⁄模型小鼠 o采用跳台实验
和避暗实验检测了中医经典药方柴胡加龙骨牡蛎
汤 !当归芍药散和作者自己研制的两种中药复方
≤ ‹° ´和 ≤ ‹° µ对该小鼠模型认知和记忆能力的
疗效作用 ∀同时 o以西药脑复康做对照 ∀结果显示 o
脑复康组在跳台和避暗试验中的潜伏期明显长于
„⁄模型小鼠对照组 o表明脑复康对 „⁄模型小鼠的
认知和记忆功能具有明显的改善作用 ∀而柴胡加龙
骨牡蛎汤和当归芍药散小剂量对 „⁄模型小鼠没有
明显的治疗作用 o当归芍药散只有在大剂量时才表
现一定的疗效作用 ∀ ≤ ‹° ´和 ≤ ‹° µ在大 !小剂
量组对 „⁄模型小鼠的认知和记忆功能均具有明显
的改善作用 ∀由于 ≤ ‹° µ所含的单味药成分少于
≤ ‹° ´ o所以 o我们认为疗效最佳的是 ≤ ‹° µ小剂
量组 ∀
中医学认为老年性痴呆为本虚标实之症 o临床
上虚实夹杂为病 o或以正虚为主 o邪实为辅 ~或以邪
实为主 o正虚为辅 ∀同时认为学习记忆功能减退不
外/虚0 !/瘀0 !/痰0v个方面≈z  ∀我们在组方时充分
考虑老年患者年高脏腑精髓亏虚的现实 o在组方中
给予大量补肾填精k或益气养血l的中药 o同时针对
标实k瘀血 !痰浊 !心火 !肝阳等l给予治疗 ∀采用纯
中药内服 o以填精补脑 o活血开窍益智之功效 o治疗
„⁄∀本研究为研发治疗 „⁄的中药制剂提供了中
药的依据 o同时提示有可能从中药中找出对 „⁄病
人认知和记忆功能有明显改善作用的药物 ∀
≈参考文献 
≈t  Š¬²√¤±±¨ ¯¯¬o≤¤¶¤° ±¨·¬ƒ o≥¦¤¯¬≤ q⁄¬©©¨ µ¨±·¬¤¯ ∞©©¨ ¦·¶²© „°¼2
²¯¬§° ³¨·¬§¨¶Β2kt2wsl ¤±§Β2kux2vxl Œ±­¨¦·¬²±¶¬±·²·«¨ • ¤·‘∏2
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⁄¼¶©∏±¦·¬²±q…µ¤¬± • ¶¨¨¤µ¦«ot||y ozsy }t{t q
≈w  赵 一 o孙瑞元 q计量估换计算 q中药药理研究方法学 q北京 }
人民卫生出版社 ot||w qvv q
≈x  裘 月 o杜冠华 o屈志伟 o等 q小鼠暂时性脑缺血引起学习记忆
障碍模型的制备及人参皂甙的保护作用 q中国药理学通报 o
t||x ottkwl }u|| q
≈y  张均田 o管林初 q行为药理实验方法与技术 q现代药理实验方
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第 u{卷第 {期
ussv年 {月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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„∏ª∏¶·oussv
法 q北京 }北京医科大学 协和医科大学联合出版社 ot||{ q
tsut q
≈z  蔡永春 o李凤文 q中药及其复方对小鼠学习记忆影响的研究进
展 q中国中医基础医学杂志 ot||{ owk{l }x{ q
Εφφεχτσ οφ Ονε Χηινεσε Ηερβσ ον Ιµ προϖινγ Χογνιτιϖε Φυνχτιον
ανδ Μεµ ορψ οφ Αλζηειµερ. σ ∆ισεασε Μουσε Μοδελσ
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[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε: ײ¬±√ ¶¨·¬ª¤·¨ ≤«¬±¨ ¶¨ «¨ µ¥¶º¬·«·«¨ ©¨©¨ ¦·²±¶¬ª±¬©¬¦¤±·¯¼¬°³µ²√¬±ª·«¨ ¦²ª±¬·¬√¨©∏±¦·¬²± ¤±§µ¨·¨±2
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§¨·¨¦·¬²± ²© ¥¨ «¤√¬²µ¤¯ ¤±§«¬¶·²¦«¨ °¬¦¤¯ ·¨¶·¶o º¬·« ³¬µ¤¦¨·¤° ¶¨µ√¬±ª¤¶¦²±·µ²¯ q Ρεσυλτ : ≤ ‹° ŒŒ «¤¶³µ²©²∏±§¦∏µ¤·¬√¨ ©¨©¨ ¦·¶²±
¬°³µ²√¬±ª·«¨ °¨°²µ¼ ¤±§¦²ª±¬·¬√¨©∏±¦·¬²± ²© „⁄2¯¬®¨ ¤±¬°¤¯ °²§¨¯qΧονχλυσιον : × «¨ ³µ¨¶¨±·¶·∏§¼¬±§¬¦¤·¨¶·«¤·¬·«¤¶¤¶¤·¬¶©¤¦2
·²µ¼ ³µ²¶³¨¦··²¶¨ ®¨ ±¨ º §µ∏ª¶©µ²° ≤«¬±¨ ¶¨ «¨ µ¥¶·²·µ¨¤·„⁄q
[ Κεψ ωορδσ] Β2¤°¼¯ ²¬§³¨ ³·¬§¨ ~ „⁄ °²∏¶¨ °²§¨¯~¦²ª±¤·¬²±~µ¨·¨±·¬²± ~≤«¬±¨ ¶¨ «¨ µ¥¶~ „ ½¯«¨¬° µ¨. ¶§¬¶¨¤¶¨
≈责任编辑 方文贤 
益心酮调控细胞膜钙通道的实验研究
李思成t o黄 华u o郑飞鸣t o温德良t o莫尚武v
kt q太极集团 o重庆 wsssts ~
u q重庆医科大学 附属第一医院 o重庆 wsssty ~
v q四川大学 o四川 成都 ytsstsl
≈摘要  目的 }观察中药益心酮片调控细胞膜钙通道的特性 o从细胞和亚细胞水平探讨其改善心肌缺血再灌
注损伤的作用机理 ∀方法 }采用大鼠主动脉平滑肌细胞模型 o用放射性wx ≤¤跨膜流动测定技术分别观察益心酮片
对溢流钙通道k≤l !受体调控钙通道k• ’≤l和电压依赖钙通道k°⁄≤l ≤¤u n内流的影响 ∀结果 }益心酮片对 ≤
≤¤u n内流无明显影响 o对 • ’≤ 和 °⁄≤ ≤¤u n内流有明显抑制作用 ∀结论 }益心酮可以抑制慢通道 ≤¤u n内流 o且抑制
作用呈现剂量依赖关系 ∀
≈关键词  益心酮 ~钙通道 ~溢流钙通道 ~受体钙通道 ~电压依赖钙通道
≈中图分类号  • u{x qx ≈文献标识码  „ ≈文章编号  tsst2xvsukussvls{2szxw2sv
益心酮片由山楂叶提取的总黄酮制成 o其山楂
叶黄酮的含量为 yz q{ h ∀本品具有宣通心脉 !理气
舒 络 的 功 效 o临 床 中 主 要 用 于 冠 心 病 !
≈收稿日期  ussu2sx2su
≈通讯作者  ר¯ }ksuvl{|{{x||w ƒ¤¬}ksuvl{|{{x|xy ∞2
°¤¬¯}¯¶¬¦«¨ ±ªƒ ¼¤«²²q¦²°
脑动脉供血不足等疾病 ∀国内外对山楂叶黄酮的药
理和临床研究证实 o山楂叶黄酮具有降血压 !扩冠 !
强心 !抗心肌缺血等作用 ∀为了在细胞和亚细胞水
平探索其作用机理 o本实验研究了益心酮对心血管
平滑肌细胞膜 ≤¤u n通道的作用特性 o为其药效学特
性提供进一步的实验和理论依据 ∀
1 材料和方法
#wxz#
第 u{卷第 {期
ussv年 {月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯ qu{ oŒ¶¶∏¨ {
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