全 文 ：健胎液对胚泡着床障碍小鼠雌 !孕激素
及其受体的影响
刘艳娟 3 o黄光英 o杨明炜 o陆付耳 o龚 萍
k华中科技大学 同济医学院 附属同济医院 中西医结合科 o湖北 武汉 wvssvsl
≈摘要  目的 }探讨健胎液促进胚泡着床障碍小鼠子宫内膜发育的机制 ∀方法 }采用米非司酮诱导的小鼠胚泡
着床障碍模型 o予健胎液进行干预 o于妊娠第 {天处死小鼠 o留取血清及子宫标本 o采用放免法检测血清和子宫局
部雌二醇k∞ul o孕酮k°l含量 o采用免疫组化技术检测子宫雌 o孕激素受体k∞• o°• l表达 ∀结果 }各组血清和子宫组
织 ∞u o°含量无显著差异k Ё s1sxl ~中药组子宫内膜腺体 !间质 ∞• o°• 表达范围和强度均较模型组显著增高k Π
s1sxl o与正常组无差异k Ё s1sxl ∀结论 }健胎液通过促进胚泡着床障碍小鼠子宫内膜腺体 !间质的 ∞• o°• 表达 o
改善子宫内膜的发育 o利于胚泡着床 ∀
≈关键词  健胎液 ~胚泡着床 ~子宫内膜 ~雌激素受体 ~孕激素受体
≈中图分类号  • u{x1x ≈文献标识码  „ ≈文章编号  tsst2xvsukussxlsx2svzv2sw
≈收稿日期  ussw2sw2s{
≈基金项目  国家自然科学基金资助项目kvstztt|vl
≈通讯作者  3 刘艳娟 oר¯ }ksuzl{vyyvvz| o∞2°¤¬¯}·­¼­¯¬∏ƒ «²·2
°¤¬¯q¦²°
移植胚泡着床障碍是制约体外受精2胚泡移植
kιν ϖιτρο ©¨µ·¬¯¬½¤·¬²±2 °¨¥µ¼²·µ¤±¶©¨µoŒ∂ƒ2∞×l技术发展
的瓶颈 o子宫内膜容受性差是造成胚泡着床障碍的
主要原因之一≈t  o临床研究发现健胎液能显著提高
施行 Œ∂ƒ2∞×的不孕患者的临床妊娠率≈u  ∀
为了明确其作用机理 o本课题组成功地建立了
以米非司酮k°¬©¨³µ¬¶·²±¨ o• ˜w{yl诱导的胚泡着床障
碍小鼠模型≈v  o并将健胎液用于胚泡着床障碍小鼠 ∀
结果表明 }健胎液能提高模型小鼠的着床率 o促进子
宫内膜发育 o改善子宫内膜容受性≈w  ∀但该方促进
子宫内膜发育的机制尚不清楚 o本研究拟通过观察
健胎液对胚泡着床障碍小鼠雌 !孕激素及其受体的
影响 o初步探讨其作用机制 ∀
1 材料与方法
111 材料
11111 动物 清洁级性成熟 o雌性未孕昆明小鼠 o
体重kvu ? wl ªo雄性小鼠kws ? wl ªo由湖北省卫生
防疫站实验动物中心提供k湖北省实验动物合格证
号 }医动字第 t|2s{u号l ∀
11112 药物 健胎液k同济医院中西医结合研究
所中药制剂室提供l }桑寄生 t{ ªo黄芪 tw ªo丹参 |
ªo当归 | ªo川芎 | ªo采用水煎醇沉工艺制成 tww h
无菌煎剂 o分装于无菌小瓶中 ∀米非司酮片
k• ˜w{y o北京第三制药厂生产 o批号 stswtvl研碎后
溶解于丙二醇k国产分析纯试剂l中 o配制成 s1{ °ª#
°pt米非司酮溶液 ∀
11113 试剂 雌二醇 !孕酮放射免疫试剂盒k天津德
普公司lo∞• 兔ŒªŠ多克隆抗体 !°• 兔ŒªŠ多克隆抗体
k≥¤±·¤≤µ∏½¨ 公司l o≥°免疫组化试剂盒k…Œ公司l∀
112 方法
将雌 !雄小鼠分笼适应性饲养 v §后 o于每日
tz }ss以雌雄 uΒt的比例合笼 o次日 { }ss检查雌鼠
阴道后再分笼 o发现阴栓计为妊娠第 t天 ∀将妊娠
鼠随机分为正常组 !模型组和中药组 o每组各 ty只 ∀
正常组为未经任何处理的妊娠鼠 o模型组和中药组
均于妊娠第 w天皮下注射 s1t °的 • ˜w{y造模≈v  o
中药组再每天以 uw ª#®ªpt体重中药灌胃 o而模型组
每天以等体积生理盐水灌胃 ∀于妊娠第 {天处死所
有小鼠 ∀
113 检测指标
11311 胚泡着床率 于妊娠第 {天 | }ss摘眼球取
血 o用颈椎脱臼法处死 o迅速剖腹 o取出子宫检查 o记
录孕鼠数 ∀
11312 血清和子宫组织中雌二醇k∞ul !孕酮k°l含
量 各组取其中 ts只小鼠的血清和子宫标本 ∀分
离血清 o置 p us ε 贮存 ~子宫标本经 °…≥清洗后 o匀
#vzv#
第 vs卷第 x期
ussx年 v月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂²¯1vs oŒ¶¶∏¨ x
¤µ¦«oussx
浆 o离心 o取上清 o置 p us ε 贮存 ∀采用放射免疫法
测定 ∞u o° o按试剂盒提供的步骤进行操作 ∀
11313 子宫组织雌激素受体k∞• l !孕激素受体
k°• l表达 各组取其中 y只小鼠的子宫组织制作
石蜡切片 o按照试剂盒提供的实验步骤 o采用过氧化
物酶标记的链霉卵白素免疫组化法染色k≥°法l检
测子宫内膜 ∞• o°• 的含量 ∀免疫组化分析结果判
断 }∞• o°• 的阳性表达为细胞质呈棕黄色 o主要位
于子宫内膜腺体 !间质细胞内 ∀选用同批染色切片 o
每张切片在光镜下k ≅ wsl随机取 x个不同的视野 o
以每张切片染色的背景作对照 o经 ‹°Œ„≥2tsss病理
图文分析系统k同济医学院千屏音像公司l分析 o分
别测定并计算子宫内膜腺体 !间质的阳性信号所占
的各自面积比和平均光度 o表示阳性信号的表达范
围和表达强度 ∀以 °…≥代替 ´抗做阴性对照 ∀
11314 数据处理 实验数据用 cξ ? σ表示 o经 ≥°≥≥
tt1s软件处理 o组间比较采用 Φ检验和 θ检验 ∀
2 结果
211 健胎液对胚泡着床障碍小鼠胚泡着床的影响
由表 t可见 o模型组胚泡着床率较正常组显著
降低k Π s1sxl o而中药组的着床率较模型组显著
提高 k Π  s1sxl o与正常组无显著性差异 k Π 
s1sxl ∀
212 健胎液对胚泡着床障碍小鼠血清和子宫组织
中 ∞u o°含量的影响
表 u显示 o正常组 !模型组和中药组血清中 ∞u o
°的含量均无显著性差异k Ё s1sxl o各组子宫局部
∞u o°的含量也无显著性差异k Ё s1sxl ∀
表 t 健胎液对胚泡着床障碍小鼠胚泡着床的影响
组别 • ˜w{y造模剂
量r°ªr只
中药剂量
rª#®ªpt
孕鼠数
r受试鼠数
着床率
r h
正常组 p p txrty |v1zxul
模型组 s1s{ p wrty uxtl
中药组 s1s{ uw ttrty y{1zxul
注 }与正常组相比tl Π s1sx o与模型组相比ul Π s1sxk表 v ow同l
表 u 健胎液对胚泡着床障碍小鼠血清和子宫组织中 ∞u o°含量的影响kcξ ? σoν € tsl
组别
剂量
rª#®ªpt
血清
∞ur³°²¯#pt °r±°²¯#pt
子宫组织
∞ur³°²¯#pt °r±°²¯1pt
正常组 p tuw1yu ? yt1|v ts{1xz ? u{1wz {|1{u ? |1{{ tx1s| ? y1xv
模型组 p twt1y{ ? wt1ux {|1xx ? wy1yv tss1{s ? t{1{x tt1ts ? |1tv
中药组 uw tvs1|x ? ys1wv {s1zw ? wy1xs ||1wt ? tx1tu t{1ty ? ts1{w
213 健胎液对胚泡着床障碍小鼠子宫内膜 ∞• 表
达的影响
∞• 免疫反应为棕黄色颗粒 o主要位于细胞胞核
内 ∀正常组 !模型组 !中药组的子宫内膜腺上皮细
胞 !间质细胞的细胞核内均可见棕黄色颗粒k图 tl ∀
阴性对照片细胞核内未见棕黄色颗粒 ∀中药组腺
体 !间质 ∞• 阳性信号的表达范围和表达强度均较
模型组显著增高k Π s1sxl o与正常组无显著性差
异k Π  s1sxl o而模型组显著低于正常组 k Π 
s1sxl ∀计算机图象分析结果见表 v ∀
图 t ∞• 在 v组小鼠子宫内膜的表达情况k ≅ ussl
„1 正常组 ~…1 模型组 ~≤1 中药组
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¤µ¦«oussx
214 健胎液对胚泡着床障碍小鼠子宫内膜 °• 表达
的影响
°• 免疫反应为棕黄色颗粒 o主要位于细胞胞核
内 ∀正常组 !模型组 !中药组的子宫内膜腺上皮细胞 !
间质细胞的细胞核内均可见棕黄色颗粒k图ul∀阴性
对照片细胞核内未见棕黄色颗粒 ∀中药组腺体 !间质
°• 阳性信号的表达范围和表达强度均显著高于模型
组kΠ s1sxl o与正常组无显著性差异k Ё s1sxl o而
模型组的表达范围和表达强度均显著低于正常组
kΠ s1sxl∀计算机图象分析结果见表 w∀
表 v 健胎液对胚泡着床障碍小鼠子宫内膜 ∞• 表达的影响kcξ ? σo ν € yl
组别
剂量
rª#®ªpt
腺体
平均光度 面积比
间质
平均光度 面积比
正常组 p s1uxt ? s1svxul s1swx ? s1ss|ul s1uyy ? s1swxul s1sz| ? s1swxul
模型组 p s1uu| ? s1svytl s1stz ? s1ss|tl s1uvv ? s1sv|tl s1suw ? s1syztl
中药组 uw s1uwy ? s1svvul s1swt ? s1sszul s1uxs ? s1svuul s1sxs ? s1svvul
图 u °• 在 v组小鼠子宫内膜的表达情况k ≅ ussl
„1 正常组 ~…1 模型组 ~≤1 中药组
表 w 健胎液对胚泡着床障碍小鼠子宫内膜 °• 表达的影响kcξ ? σoν € yl
组别
剂量
rª#®ªpt
腺体
平均光度 面积比
间质
平均光度 面积比
正常组 p s1vyw ? s1tsvul s1sxz ? s1st|ul s1vzz ? s1sztul s1tzv ? s1sxvul
模型组 p s1vxt ? s1sz|tl s1svz ? s1stztl s1vwz ? s1syztl s1twv ? s1sxxtl
中药组 uw s1vxz ? s1syzul s1sxw ? s1stzul s1vyy ? s1sz|ul s1tzt ? s1swwul
3 讨论
不孕症的患病率显著升高 o占已婚夫妇的 tx h
左右 o虽然以体外受精2胚泡移植为代表的现代助孕
技术的迅速发展给不孕夫妇带来了希望 o但由于移
植胚泡着床障碍 o孕育成功率依然不高 o约 us h ∗
vs h ≈t  o子宫内膜容受性差是造成胚泡着床障碍的
主要原因 o因此 o改善子宫内膜容受性 o提高着床率
是提高人工助孕技术孕育成功率的关键 ∀
雌 !孕激素通过与雌 !孕激素受体结合作用于子
宫内膜 o其中 o雌激素启动子宫内膜增殖反应 o孕酮
使增殖的子宫内膜及时转化为分泌型子宫内膜 o促
进蜕膜形成和发育 o使子宫内膜由非黏附状态进入
黏附状态 o呈可容受状态 o为胚泡顺利着床提供良好
的微环境 o因此 o雌 !孕激素及其受体是影响子宫内
膜容受性的关键 o其中任一环节表达失常都可能影
响子宫内膜的发育 o导致子宫内膜容受性差而使着
床失败≈x oy  ∀这与本研究观察所见是一致的 }模型
组血液及子宫局部的 ∞u o°含量虽正常 o但子宫内膜
腺上皮细胞 !间质细胞中 ∞• o°• 表达降低 o使其介
导的 ∞u o°的作用减弱 o子宫内膜不能及时对 ∞u o°
的变化做出相应的反应 o导致发育被抑制 o子宫内膜
容受性差而胚泡难以着床 ∀经健胎液治疗后 o子宫
内膜 ∞• o°• 表达范围及强度均较模型组增高 o与正
常组无差异 o∞• o°• 的正常表达有助于雌 !孕激素
正常生物活性的发挥 o改善了子宫内膜的发育 o使其
与胚泡发育同步而利于胚泡着床 ∀因此 o健胎液可
#xzv#
第 vs卷第 x期
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中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂²¯1vs oŒ¶¶∏¨ x
¤µ¦«oussx
能通过调节子宫内膜 ∞• o°• 的表达 o达到促进子宫
内膜发育 !改善子宫内膜容受性 !促进胚泡着床的作
用 ∀
长期以来 o我国传统医学在防治不孕症方面积
累了丰富的经验并形成了独特的理论 ∀中医理论认
为 o生殖有赖于肾气2天癸2冲任2胞宫之间的平衡协
调作用 o所以对不孕症的治疗多围绕着/肾主生殖0 !
/肝为女子先天0的理论而进行 ∀肾为精之本 o肝为
血之源 o肝肾不足 o天癸匮乏 o冲任虚衰 o脉络不通 o
胞脉失养 o精血凝聚 o瘀结胞中 o主要表现为肾虚 !血
瘀证候 o而不能摄精成孕 ∀健胎液由桑寄生 !丹参 !
当归 !黄芪 !川芎组成 o其中桑寄生补肾气以生精 o丹
参 !川芎理气活血 o当归 !黄芪益气活血 o全方共奏补
肾益气活血之功效 ∀因此 o本研究结果充分体现了
中医的整体观念以及肾2天癸2冲任2胞宫的辨证思维
体系 o即肾气旺盛 o精血充沛 o则天癸充盈 o任通冲
盛 o胞脉得养而受孕 ∀这不仅为中医/肾主生殖0理
论赋予了科学内涵 o也为中药与人工助孕技术相结
合而提高不孕患者的孕育成功率提供了实验依据 ∀
≈参考文献 
≈t  黄荷凤 q现代辅助生育技术 q北京 }人民军医出版社 oussv q
w q
≈u  张明敏 o黄光英 o陆付耳 q补肾益气活血汤对多次助孕技术失
败患者结局的影响 q微循环学杂志 oussu otukul }ts q
≈v  刘艳娟 o黄光英 o陆付耳 o等 q小鼠胚泡着床障碍模型的建
立 q中国药理学通报 oussv ot|kttl }tvtx q
≈w  刘艳娟 o黄光英 o陆付耳 o等 q健胎液对胚泡着床障碍小鼠胚
泡着床作用的研究 q上海中医药杂志 oussw ov{kwl }wy q
≈x  Š¤µ¦¬¤ ∞o…²∏¦«¤µ§° o⁄¨ …µ∏¬o ετ αλq˜¶¨ ²©¬°°∏±²¦¼·²¦«¨ °¬¶·µ¼
²©³µ²ª¨¶·¨µ²±¨ ¤±§ ¶¨·µ²ª¨ ± µ¨¦¨³·²µ¶©²µ ±¨§²° ·¨µ¬¤¯ §¤·¬±ªq ϑ Χλιν
Ενδοχρινολ Μεταβ , t|{{ oyz }{s q
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²∏··«¨ ° ±¨¶·µ∏¤¯ ¦¼¦¯¨q ϑ Χλιν Ενδοχρινολ Μεταβ , t|{{ oyz }vvw q
Εφφεχτσ οφ ϑιανται λιθυιδ ον τηε εξπρεσσιον οφ εστρογεν/ προγεστερονε ρεχεπτορσιν
εµ βρψο ιµ πλαντατιον δψσφυνχτιον µιχε ενδοµετριυµ
Œ˜ ≠¤±2­∏¤±o ‹˜„‘Š Š∏¤±ª2¼¬±ªo ≠„‘Š ¬±ª2º ¬¨o˜ ƒ∏2 µ¨o Š’‘Š °¬±ª
( ∆επαρτµεντ οφ Ιντεγρατεδ Τραδιτιοναλ Χηινεσε & Ωεστερν Μεδιχινε , Τονγϕι Ηοσπιταλ, Τονγϕι Μεδιχαλ Χολλεγε ,
Ηυαζηονγ Υνιϖερσιτψ οφ Σχιενχε & Τεχηνολογψ, Ωυηαν wvssvs , Χηινα)
[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε : ײ ¬¨³¯²µ¨ ·«¨ ° ¦¨«¤±¬¶° ²©¬¤±·¤¬¯¬´∏¬§²±·«¨ ±¨§²° ·¨µ¬∏° §¨√¨¯²³° ±¨·²© °¨¥µ¼²¬°³¯¤±·¤·¬²± §¼¶©∏±¦·¬²±
°¬¦¨ q Μετηοδ : ׫¨ °²§¨¯ ²© °¨¥µ¼²¬°³¯¤±·¤·¬²± §¼¶©∏±¦·¬²± °¬¦¨ º¤¶¬±§∏¦¨§¥¼ °¬©¨ ³µ¬¶·²±¨ ¤±§·µ¨¤·¨§¥¼ ¬¤±·¤¬ ¬¯´∏¬§q „¯¯ ¤±¬°¤¯¶
º µ¨¨ ¶¤¦µ¬©¬¦¨§²± §¤¼ { ²©³µ¨ª±¤±¦¼q∞¶·µ¤§¬²¯ ¤±§³µ²ª¨¶·¨µ²±¨ ¦²±¦¨±·µ¤·¬²±¶¬± ¶¨µ∏° ¤±§ ±¨§²° ·¨µ¬∏°·¬¶¶∏¨ «²°²ª¨ ±¤·¨¶º µ¨¨ ° ¤¨¶∏µ¨§
¥¼µ¤§¬²¬°°∏±²¤¶¶¤¼ ° ·¨«²§o·«¨ ±¨§²° ·¨µ¬¤¯ ¬¨³µ¨¶¶¬²±¶²© ¶¨·µ²ª¨ ± µ¨¦¨³·²µk∞• l¤±§³µ²ª¨¶·¨µ²±¨ µ¨¦¨³·²µk°• l¤¶¶¨¶¶¨§¥¼ ¬°°∏±±²«¬¶2
·²¦«¨ °¬¦¤¯ ≥° ° ·¨«²§q Ρεσυλτ : ׫¨ µ¨ º µ¨¨ ±²¶¬ª±¬©¬¦¤±·¯¼ §¬©©¨µ¨±¦¨¶¬±·«¨ ¶¨·µ¤§¬²¯ ¤±§³µ²ª¨¶·¨µ²±¨ ¦²±¦¨±·µ¤·¬²±¶¬± ¶¨µ∏° ¤±§∏·¨µ∏¶·¬¶2
¶∏¨ «²°²ª¨ ±¤·¨¶¤°²±ª·«µ¨¨ªµ²∏³¶k Ё s qsxl q „¥¶²µ¥¨ ±¦¼ ¤±§¤µ¨¤µ¤·¨ ²© ∞• o°• ¬± °²§¨¯ ªµ²∏³. ¶ª¯¤±§¤±§¶·µ²°¤ º µ¨¨ «¬ª«¨µ·«¤±
·«²¶¨ ¬± °²§¨¯ªµ²∏³k Π s qsxl oº«¬¦« º¤¶¶¬°¬¯¤µº¬·«·«¨ ¦²±·µ²¯ ªµ²∏³k Ё s qsxl q Χονχλυσιον }¬¤±·¤¬¯¬´∏¬§¬±¦µ¨¤¶¨ ·«¨ ¬°³¯¤±·¤·¬²±
µ¤·¨ ¤±§¬°³µ²√¨·«¨ ±¨§²° ·¨µ¬¤¯ §¨ √¨¯²³° ±¨·¥¼ ¬±¦µ¨¤¶¬±ª·«¨ ¬¨³µ¨¶¶¬²±¶²© ∞• o °• ¬± ±¨§²° ·¨µ¬∏° ²© °¨¥µ¼²¬°³¯¤±·¤·¬²± §¼¶©∏±¦·¬²±
°¬¦¨ q
[ Κεψ ωορδσ] ¬¤±·¤¬¯¬´∏¬§~ °¨¥µ¼²¬°³¯¤±·¤·¬²±~ ±¨§²° ·¨µ¬∏° ~ ¶¨·µ²ª¨ ± µ¨¦¨³·²µ~³µ²ª¨¶·¨µ²±¨ µ¨¦¨³·²µ
≈责任编辑 古云侠 
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第 vs卷第 x期
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